技术领域
本发明涉及医用微针贴片领域，尤其涉及一种可溶性紫草素微针贴片及其制备方法。
背景技术
如今人们越来越重视皮肤的护养，痘痘、暗疮、粉刺、色斑、毛孔粗大等皮肤问题很常见也很困扰。而针对这些皮肤问题的治疗通常有效成分很难完全被肌肤吸收，进入表皮基底层，发挥修复作用。
中药紫草在治疗皮肤病方面存在很多优势，尤其是中药复方的运用，临床和实验研究均证实紫草具有抗炎、抑菌、止痒及修复等功效，其在伤口的愈合和修复上，效果很好。紫草素在美容上有很大的利用价值，适合各种肤质，能促进伤口的愈合，达到去除暗疮、痘印、淡化色斑疤痕的作用。
透明质酸作为高效保湿成分，滋润保湿皮肤，维持皮肤修复环境。
维生素E中蕴含的生育酚分子可渗透入表皮，甚至可达皮下组织。维生素E的侧链直接参与巯基的氧化还原过程，从而抑制酪氨酸酶活性，减少黑色素的形成。维生素E还具有扩张末梢血管，改善血管微循环的作用，能促进营养成分的输送以及体内代谢垃圾的排泄，从而也有利于“斑”的祛除。外用维生素E能加快皮肤新陈代谢，促进血液循环，加速细胞修复和再生，同时还能产生抗自由基成分，抑制脂质过氧化反应，保持组织间联系，使皮肤光滑、有弹性。由于维生素E能保护细胞膜免受自由基的氧化损伤，所以能帮助修复并巩固肌肤的天然保护屏障，锁住肌肤内水分，提供由内而外的深层滋养。
尿囊素具有促进细胞生长，加快伤口愈合，软化角质蛋白等生理功能，是皮肤创伤的良好愈合剂和抗溃疡药剂。其能结合多种物质形成复盐，具有避光、杀菌防腐、止痛、抗氧化作用，能使皮肤保持水份，滋润和柔软。
甘草酸二钾有抗炎、抗过敏、保湿等功效，能有效防止过敏，减轻皮肤炎症。
以上成分在皮肤修复上有均一定的功效作用，在改方面能相互促进，具有协同作用。
微针是直径为几十微米、长度在100μm以上的针状结构。因为微针的尺寸小，在刺入皮肤中不会到达真皮层，不易触及痛觉神经而产生疼痛感，可使有效成分沿微针形成的微通道到达表皮深层，扩散入真皮，使有效成分得到充分的吸收，发挥疗效。
目前采用的微针多为生物不可降解实心微针，例如微针滚轮、硅微针、金属微针等这类微针很细小，在插入皮肤的过程中自身发生断裂破碎是可能的，尽管制备微针的材料选用的都是生物相容性好的金属和硅。但很难说这些材料长时间留在皮肤内不会造成任何不良反应。空心微针可将各种药物溶液注入角质层下，大大提高活性成分的应用，但很难保证空心微针不会堵塞，应用起来不方便。
可溶性微针贴片，采用生物可溶性高分子材料制备而成，若能将紫草素活性成分、透明质酸、甘草酸二钾、尿囊素等有效成分与可溶性微针贴片结合起来进行研究，当刺入皮肤后可溶性微针在液体作用下溶解留于皮肤内，不仅活性成分也得到大大的利用，结合上述化合物的协同作用，将会解决上述问题。
目前也有一些相关的微针贴片的研究，例如中国专利CN104921961A一种多效修复的可降解生物微针贴，公开了一种不同释放梯度的多效修复的可降解生物微针贴，所述的生物微针贴，包括基底，以及位于基底上表面的实心第一微针阵列、第二微针阵列以及背敷层。其制备方法复杂，且活性成分直接涂层在微针上，载药量少，且在肌肤中并不能保证活性成分能很好地被肌肤所吸收。
发明内容
发明目的：为了克服现有技术中存在的问题，本发明提出了一种使用舒适度高、安全性能高、生物相容性能佳，不引起皮肤任何创伤、疼痛和刺激，提高活性成分利用率的可溶性紫草素微针贴片及其制备方法。
技术方案：为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：
一种可溶性紫草素微针贴片，以重量计算包括以下制备原料：紫草素0.05％～0.15％、γ-环糊精0.5％～1.5％、透明质酸0.05％～0.5％、甘草酸二钾0.05％～0.5％、维生素E 0.05％～1％、尿囊素0.1％～1％、增溶剂0.5％～5％、助溶剂0.5％～10％、生物可溶性高分子材料25％～40％，以及余量的去离子水。
为了获得更优异的消炎抑菌效果，所述紫草素纯度不低于80％。
所述紫草素纯度不低于80％；所述紫草素的提取工艺为:
(1)酶解：将紫草粉碎至20～40目，分散于10～16倍质量的水中，加入紫草质量0.2％～0.8％的复合酶制剂进行酶解6-15h；酶解的温度35～55℃；所述复合酶制剂以质量百分比计组成为50％～80％的纤维素15％～30％的酶果胶酶以及余量的木聚糖酶；所述复合酶制剂的平均酶活为10000～50000单位；
(2)碱水提取：酶解后向体系中加入氢氧化钠进行提取1～2h，得紫草萃取物；氢氧化钠在体系中的终浓度为0.2～0.5M；
(3)分离纯化：将所述的紫草素萃取物过滤后经氧化铝柱层析、甲醇解析、浓缩、干燥得到紫草素粗品，紫草素粗品经乙醇结晶，过滤并干燥后得所述的紫草素。
更为优选的，所述的增溶剂为泊洛沙姆系列、聚氧乙烯氢化蓖麻油系列中的至少一种。
更为优选的，所述助溶剂为甘油、丙二醇、1，3-丁二醇、聚乙二醇、山梨醇中的至少一种。
更为优选的，所述生物可溶性高分子材料为聚乙烯醇、聚维酮、羧甲基纤维素、聚谷氨酸、聚乙二醇中的至少一种；上述材料具有安全性能高，相容性好的特性。
更为优选的，所述生物可溶性高分子材料的分子量为10KDa～25KDa。
本发明还公开了上述可溶性紫草素微针贴片的制备方法，包括如下步骤：
a)首先按照配比要求称取各原料；
b)将紫草素用γ-环糊精进行包埋处理，具体的将紫草素用1～5mL乙酸乙酯溶解，与γ-环糊精混合，35～55℃下减压浓缩干燥成粉末得紫草素包埋物；
c)将透明质酸、甘草酸二钾、维生素E、尿囊素、增溶剂、助溶剂、生物可溶性高分子材料、步骤b)所得紫草素包埋物溶于去离子水中，搅拌均匀，脱气泡得注膜液；
d)将注膜液浇铸在特定结构的微针模板模具里，35～55℃下真空干燥5～12小时，待固化完全后，剥离模具，即得基底上立有微针阵列的可溶性紫草素微针贴片。
更为优选的，步骤d)中所述微针阵列长度为100～1000μm。
有益效果：本发明提供的一种可溶性紫草素微针贴片及其制备方法，采用紫草素、γ-环糊精制备成包埋物后与透明质酸、甘草酸二钾、维生素E、尿囊素、增溶剂、助溶剂、生物可溶性高分子材料一起溶于去离子水制备成注膜液浇铸在特定结构的微针模板里，固化后分离得到可溶性紫草素微针贴片。与现有技术相比具有以下优点：包裹在可溶性微针里的药物随着可溶性高分子材料在皮肤里溶解逐渐释放出来，具有更好的生物相容性及更大的载药量；所用的材料为高分子生物可溶性材料，安全性高；且制备方法简单，制备条件温和，能很好地保持活性成分的稳定性，有效成分含量高，温和，多种有效成分协同作用，达到更佳的皮肤问题的疗效。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明：
实施例1：
一种可溶性紫草素微针贴片，以重量计算包括以下制备原料：紫草素0.05％、γ-环糊精0.5％、透明质酸0.1％、甘草酸二钾0.05％、维生素E 0.05％、尿囊素0.2％、泊洛沙姆188 1％、丙二醇2％、聚乙烯醇25％，余量为去离子水。
上述可溶性紫草素微针贴片的制备方法，具体包括如下步骤：
a)首先按照配比要求称取各原料；
b)将紫草素用γ-环糊精进行包埋处理，具体的将紫草素用3mL乙酸乙酯溶解，与γ-环糊精混合，45℃下减压浓缩干燥成粉末得紫草素包埋物；
c)将透明质酸、甘草酸二钾、维生素E、尿囊素、泊洛沙姆188、丙二醇、聚乙烯醇、步骤b)所得紫草素包埋物溶于去离子水中，搅拌均匀，脱气泡得注膜液；
d)将注膜液浇铸在特定结构的微针模板模具里，45℃下真空干燥8h，待固化完全后，剥离模具，即得基底上立有微针阵列的可溶性紫草素微针贴片；所述微针阵列长度为100～1000μm。
实施例2：
一种可溶性紫草素微针贴片，以重量计算包括以下制备原料：紫草素0.08％、γ-环糊精0.8％、透明质酸0.5％、甘草酸二钾0.2％、维生素E 0.8％、尿囊素0.2％、泊洛沙姆188 5％、丙二醇10％、聚维酮30％，余量为去离子水。
上述可溶性紫草素微针贴片的制备方法，具体包括如下步骤：
a)首先按照配比要求称取各原料；
b)将紫草素用γ-环糊精进行包埋处理，具体的将紫草素用1mL乙酸乙酯溶解，与γ-环糊精混合，35℃下减压浓缩干燥成粉末得紫草素包埋物；
c)将透明质酸、甘草酸二钾、维生素E、尿囊素、泊洛沙姆188、丙二醇、聚维酮、步骤b)所得紫草素包埋物溶于去离子水中，搅拌均匀，脱气泡得注膜液；
d)将注膜液浇铸在特定结构的微针模板模具里，55℃下真空干燥5h，待固化完全后，剥离模具，即得基底上立有微针阵列的可溶性紫草素微针贴片；所述微针阵列长度为100～1000μm。
实施例3：
一种可溶性紫草素微针贴片，以重量计算包括以下制备原料：紫草素0.1％、γ-环糊精1％、透明质酸0.15％、甘草酸二钾0.5％、维生素E 0.3％、尿囊素0.8％、PEG-60氢化蓖麻油3％、丙二醇5％、羧甲基纤维素33％，余量为去离子水。
上述可溶性紫草素微针贴片的制备方法，具体包括如下步骤：
a)首先按照配比要求称取各原料；
b)将紫草素用γ-环糊精进行包埋处理，具体的将紫草素用5mL乙酸乙酯溶解，与γ-环糊精混合，55℃下减压浓缩干燥成粉末得紫草素包埋物；
c)将透明质酸、甘草酸二钾、维生素E、尿囊素、PEG-60氢化蓖麻油、丙二醇、羧甲基纤维素、步骤b)所得紫草素包埋物溶于去离子水中，搅拌均匀，脱气泡得注膜液；
d)将注膜液浇铸在特定结构的微针模板模具里，35℃下真空干燥12h，待固化完全后，剥离模具，即得基底上立有微针阵列的可溶性紫草素微针贴片；所述微针阵列长度为100～1000μm。
实施例4：
一种可溶性紫草素微针贴片，以重量计算包括以下制备原料：紫草素0.12％、γ-环糊精1.2％、透明质酸0.15％、甘草酸二钾0.3％、维生素E 0.2％、尿囊素0.2％、泊洛沙姆188 2％、聚乙二醇-400 5％、聚维酮35％，余量为去离子水。
按照以上配比，按实施例1的制备方法进行可溶性紫草素微针贴片的制备。
实施例5：
一种可溶性紫草素微针贴片，以重量计算包括以下制备原料：紫草素0.15％、γ-环糊精1.5％、透明质酸0.15％、甘草酸二钾0.3％、维生素E 0.2％、尿囊素0.5％、泊洛沙姆407 3％、1，3-丁二醇5％、聚乙烯醇40％，余量为去离子水。
按照以上配比，按实施例1的制备方法进行可溶性紫草素微针贴片的制备。
实施例1-实施例5中紫草素的提取方法具体如下：
(1)酶解：将紫草粉碎至20目，分散于12倍质量的水中，加入相当于紫草质量0.4％的复合酶制剂进行酶解；酶解时间10小时，酶解温度45℃，酶解过程中不断搅拌；所述复合酶制剂以质量百分比计算组成为：60％的纤维素酶、25％的果胶酶，其余为木聚糖酶，复合酶制剂的平均酶活为45000单位。
(2)碱水提取：酶解后向体系中加入质量分数为20％的氢氧化钠进行提取，至氢氧化钠终浓度为0.3M，室温搅拌2h提取紫草素，得到紫草素萃取物；
(3)分离纯化：将萃取物过滤后经6倍量氧化铝柱层析、3倍柱体积的甲醇解析、浓缩、干燥得到紫草素粗品；紫草素粗品经乙醇三次结晶，过滤并干燥后得纯度98.5％的紫草素纯品，收率为84.6％。
具体的，将萃取物过滤后加入到填料为氧化铝的层析柱中，然后用3倍柱体积的甲醇进行洗脱，洗脱下来的溶液进行浓缩、干燥得到紫草素粗品，其中，6倍量是指柱体积为上样量的六倍。
应用临床试验：
1)实施方法：选取脸上长有痘痘现象的患者，观察使用效果。随机选取70名患者；10名患者为一组，共分为实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、对照组、空白组七组；其中实施例1-5采用实施例1-5制备的微针贴片，一周使用两次，待微针完全溶解，揭除即可；对照组使用市售微针痘痘贴，一周使用两次，待完全吸收；空白组不使用任何内用外用治疗用品。
2)测试结果：一周后，结果如表1所示：
表1实施例1-5与对照组以及空白组疗效对比临床观察结果
从表1所显示的数据可以看出，本发明实施例1-实施例5的治愈+明显缓解比例为100％；治愈比例为40％-80％；而对照组仅仅治愈20％，20％无效果，空白组治愈仅10％，70％无效果，本发明实施例1-5制备的可溶性紫草素微针贴片相比于对照组、空白组来说具有明显的优势疗效。
应当指出，以上具体实施方式仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。