技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种法氏囊疫苗免疫效果的评价方法。
背景技术
鸡传染性法氏囊病是呼肠弧病毒引起的一种雏鸡急性、接触性传染病。由于该病发病突然、病程短、死亡率高，且可引起鸡体免疫抑制，目前仍然是养鸡业的主要传染病之一。
现在市场上法氏囊病毒的免疫有活疫苗和灭活疫苗两类疫苗。活疫苗毒力弱的免疫效果差，毒力较强的对法氏囊有伤害且影响免疫效果；灭活疫苗保留了完整的病毒结构在不影响免疫效果的同时大大提高了安全性能，但对小日龄鸡的使用效果有一定限制。如何准确的评价一种疫苗的免疫效果是成功免疫的关健。在现行标准中，活疫苗通过测定病毒含量来检验病毒效力，灭活疫苗通过中和抗体测定来检验疫苗是否合格，采用这两种方法检验合格甚至效价很高的疫苗在临床使用上效果却不理想。如何准确的评价疫苗的免疫效果，使免疫动物能得到确实的免疫效果是一个难点。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种法氏囊疫苗免疫效果的评价方法，该方法能更为准确的评价疫苗的免疫效果。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种法氏囊疫苗免疫效果的评价方法，其包括以下步骤：
1)准备若干只7～30日龄鸡作为实验鸡，将实验鸡分为活疫苗组、灭活疫苗组和对照组，每组各10只以上；
2)用待检测的法氏囊疫苗对实验鸡进行免疫，所述法氏囊疫苗包括法氏囊活疫苗和法氏囊灭活疫苗；
活疫苗组：用法氏囊活疫苗对活疫苗组的鸡进行免疫，免疫方法按照法氏囊活疫苗的使用说明；
灭活疫苗组：用待检测的法氏囊灭活疫苗对灭活疫苗组的鸡进行免疫，免疫方法按照法氏囊灭活疫苗的使用说明；
对照组：对照组的鸡不进行免疫；
3)免疫14～30天后，活疫苗组、灭活疫苗组和对照组的每只鸡口服传染性法氏囊病病毒BC6-85株0.2mL或用当地流行毒株进行攻毒；
4)攻毒72小时后对所有鸡进行法氏囊剖检，观察法氏囊病变情况；
法氏囊不出现病变，则法氏囊疫苗免疫效果合格；
法氏囊出现病变，则法氏囊疫苗免疫效果不合格；
所述法氏囊病变是指法氏囊出现发黄、肿大、萎缩或呈胶冻状。
所述步骤2)，活疫苗组的每只鸡口服1羽份法氏囊活疫苗，灭活疫苗组的每只鸡皮下注射0.25mL法氏囊灭活疫苗。
所述传染性法氏囊病病毒BC6-85株含2×104.0BID，BID是指法氏囊感染量。
进一步的，用传染性法氏囊病病毒BC6-85株攻毒后观察每只鸡的饮食、饮水、粪便及精神状态，
如果攻毒72小时后法氏囊不出现病变，并且和攻毒前比较，鸡的饮食、饮水、精神状态以及粪便颜色、软硬、形态均无明显变化，则法氏囊疫苗免疫效果合格并且具有优良的免疫效果；
如果攻毒72小时后法氏囊不出现病变，和攻毒前比较，鸡的饮食量下降、饮水量异常、精神状态不佳，粪便颜色、软硬、形态异常，则法氏囊疫苗免疫效果合格，但法氏囊抗体水平还未达到使免疫鸡不产生反应(副作用)的抗体水平。
优选的，所述步骤1)，选择7日龄鸡作为实验鸡。
所述步骤3)，免疫14天后，活疫苗组、灭活疫苗组和对照组的每只鸡口服传染性法氏囊病病毒BC6-85株0.2mL。
本发明所述传染性法氏囊病病毒BC6-85株，基础种子购买自中国兽医药品监察所。
本发明采用以上技术方案，用法氏囊活疫苗和法氏囊灭活疫苗对分别对活疫苗组和灭活疫苗组的鸡进行免疫，并设对照组，再让所有鸡口服传染性法氏囊病病毒BC6-85株进行攻毒，攻毒72小时后，剖检法氏囊，观察法氏囊是否病变，从而评价疫苗免疫效果。
现有技术中，法氏囊活疫苗的合格标准为病毒含量效价≥103.0ELD50(鸡胚半数致死量)为合格，但合格的疫苗与免疫效果好坏无直接关系。
法氏囊灭活疫苗免疫效果测定方法为使用28～35日龄SPF鸡进行免疫后采血测中和抗体或免疫攻毒，中和抗体效价≥1：5000或免疫攻毒保护率在70％以上为合格。但中和抗体合格却并不能直接反应疫苗的免疫效果，另攻毒保护合格的疫苗在小日龄鸡或商品鸡上使用效果不明确。
而本发明方法在于对鸡品种的选择不是按国家标准(国家标准用的鸡均是SFP鸡)而是根据实际使用对象设定，鸡的日龄也不是按国家标准的日龄进行，而是根据实际所需进行选择。本方法根据实际需求选择鸡的品种、日龄与使用中的数据一致，所以更能准确的评价疫苗在实际使用对象中的免疫效果。
具体实施方式
一种法氏囊疫苗免疫效果的评价方法，其包括以下步骤：
1)准备若干只7～30日龄鸡作为实验鸡，将实验鸡分为活疫苗组、灭活疫苗组和对照组，每组各10只以上；
2)用待检测的法氏囊疫苗对实验鸡进行免疫，所述法氏囊疫苗包括法氏囊活疫苗和法氏囊灭活疫苗；
活疫苗组：用法氏囊活疫苗对活疫苗组的鸡进行免疫，免疫方法按照法氏囊活疫苗的使用说明；一般为每只鸡口服1羽份法氏囊活疫苗；
灭活疫苗组：用待检测的法氏囊灭活疫苗对灭活疫苗组的鸡进行免疫，免疫方法按照法氏囊灭活疫苗的使用说明；一般为每只鸡皮下注射0.25mL法氏囊灭活疫苗，如为成年鸡则免疫0.5ml；
对照组：对照组的鸡不进行免疫；
3)免疫14～30天后，活疫苗组、灭活疫苗组和对照组的每只鸡口服传染性法氏囊病病毒BC6-85株0.2mL或用当地流行毒株进行攻毒，所述BC6-85株含2×104.0BID；攻毒后观察每只鸡的饮食、饮水、粪便及精神状态；
4)攻毒72小时后对所有鸡进行法氏囊剖检，观察法氏囊病变情况；
法氏囊不出现病变，则法氏囊疫苗免疫效果合格；
法氏囊出现病变，则法氏囊疫苗免疫效果不合格；
所述法氏囊病变是指法氏囊出现发黄、肿大、萎缩或呈胶冻状。
进一步，如果攻毒72小时后法氏囊不出现病变，并且和攻毒前比较，鸡的饮食、饮水、精神状态以及粪便颜色、软硬、形态均无明显变化，则法氏囊疫苗免疫效果合格并且具有优良的免疫效果；
如果攻毒72小时后法氏囊不出现病变，和攻毒前比较，鸡的饮食量下降、饮水量异常、精神状态不佳，粪便颜色、软硬、形态异常，则法氏囊疫苗免疫效果合格，但法氏囊抗体水平还未达到使免疫鸡不产生反应的抗体水平。
疫苗免疫效果评价表：
备注：本表以法氏囊观察结果为评价疫苗免疫效果的主要指标，精神、食欲、饮欲、粪便情况为附带观察。
实施例1
一种法氏囊疫苗免疫效果的评价方法，其包括以下步骤：
1)准备30只7日龄鸡作为实验鸡，将实验鸡分为活疫苗组、灭活疫苗组和对照组，每组各10只；
2)用待检测的法氏囊疫苗对实验鸡进行免疫，所述法氏囊疫苗包括法氏囊活疫苗和法氏囊灭活疫苗；
活疫苗组：用法氏囊活疫苗对活疫苗组的鸡进行免疫，免疫方法按照法氏囊活疫苗的使用说明；
灭活疫苗组：用待检测的法氏囊灭活疫苗对灭活疫苗组的鸡进行免疫，免疫方法按照法氏囊灭活疫苗的使用说明；
对照组：对照组的鸡不进行免疫；
3)免疫14天后，活疫苗组、灭活疫苗组和对照组的每只鸡口服传染性法氏囊病病毒BC6-85株0.2mL，所述BC6-85株含2×104.0BID；攻毒后观察每只鸡的饮食、饮水、粪便及精神状态；
4)攻毒72小时后对所有鸡进行法氏囊剖检，观察法氏囊病变情况；
①法氏囊出现病变，则法氏囊疫苗免疫效果不合格；
②法氏囊不出现病变，并且和攻毒前比较，鸡的饮食、饮水、精神状态以及粪便颜色、软硬、形态均无明显变化，则法氏囊疫苗免疫效果合格并且具有优良的免疫效果；
③法氏囊不出现病变，和攻毒前比较，鸡的饮食量下降、饮水量异常、精神状态不佳，粪便颜色、软硬、形态异常，则法氏囊疫苗免疫效果合格，但法氏囊抗体水平还未达到使免疫鸡不产生副作用的抗体水平。
疫苗免疫效果评价结果：
本实施例，活疫苗组的鸡法氏囊均正常，所有鸡的精神、食欲、饮欲均正常，8/10鸡粪便正常，2/10鸡粪便稀软，说明该活疫苗免疫效果合格，但法氏囊抗体水平还未达到使免疫鸡不产生副作用的抗体水平，对部分鸡有轻微的影响。
灭活疫苗组的鸡法氏囊均正常，鸡精神、食欲、饮欲、粪便均正常，说明该灭活疫苗免疫效果合格，并且具有良好的免疫效果。
对照组的鸡没有进行免疫，因此鸡法氏囊出现病变。
实施例2
一种法氏囊疫苗免疫效果的评价方法，其包括以下步骤：
1)准备30只30日龄鸡作为实验鸡，将实验鸡分为活疫苗组、灭活疫苗组和对照组，每组各10只；
2)用待检测的法氏囊疫苗对实验鸡进行免疫，所述法氏囊疫苗包括法氏囊活疫苗和法氏囊灭活疫苗；
活疫苗组：用法氏囊活疫苗对活疫苗组的鸡进行免疫，免疫方法按照法氏囊活疫苗的使用说明；
灭活疫苗组：用待检测的法氏囊灭活疫苗对灭活疫苗组的鸡进行免疫，免疫方法按照法氏囊灭活疫苗的使用说明；
对照组：对照组的鸡不进行免疫；
3)免疫30天后，活疫苗组、灭活疫苗组和对照组的每只鸡口服传染性法氏囊病病毒BC6-85株0.2mL，所述BC6-85株含2×104.0BID；攻毒后观察每只鸡的饮食、饮水、粪便及精神状态；
4)攻毒72小时后对所有鸡进行法氏囊剖检，观察法氏囊病变情况；
①法氏囊出现病变，则法氏囊疫苗免疫效果不合格；
②法氏囊不出现病变，并且和攻毒前比较，鸡的饮食、饮水、精神状态以及粪便颜色、软硬、形态均无明显变化，则法氏囊疫苗免疫效果合格并且具有优良的免疫效果；
③法氏囊不出现病变，和攻毒前比较，鸡的饮食量下降、饮水量异常、精神状态不佳，粪便颜色、软硬、形态异常，则法氏囊疫苗免疫效果合格，但法氏囊抗体水平还未达到使免疫鸡不产生反应的抗体水平。
疫苗免疫效果评价结果：
本实施例，活疫苗组的鸡法氏囊均正常，所有鸡的精神、食欲、饮欲均正常，6/10鸡粪便正常，4/10鸡粪便稀软，说明该活疫苗免疫效果合格，但法氏囊抗体水平还未达到使免疫鸡不产生副作用的抗体水平，对部分鸡有轻微的影响。
灭活疫苗组的鸡法氏囊均正常，鸡精神、食欲、饮欲、粪便均正常，说明该灭活疫苗免疫效果合格，并且具有良好的免疫效果。
对照组的鸡没有进行免疫，因此鸡法氏囊出现病变。
实施例3
一种法氏囊疫苗免疫效果的评价方法，其包括以下步骤：
1)准备45只15日龄鸡作为实验鸡，将实验鸡分为活疫苗组、灭活疫苗组和对照组，每组各15只；
2)用待检测的法氏囊疫苗对实验鸡进行免疫，所述法氏囊疫苗包括法氏囊活疫苗和法氏囊灭活疫苗；
活疫苗组：用法氏囊活疫苗对活疫苗组的鸡进行免疫，免疫方法按照法氏囊活疫苗的使用说明，每只鸡口服1羽份法氏囊活疫苗；
灭活疫苗组：用待检测的法氏囊灭活疫苗对灭活疫苗组的鸡进行免疫，免疫方法按照法氏囊灭活疫苗的使用说明，每只鸡皮下注射0.25mL法氏囊灭活疫苗；
对照组：对照组的鸡不进行免疫；
3)免疫20天后，活疫苗组、灭活疫苗组和对照组的每只鸡口服传染性法氏囊病病毒BC6-85株0.2mL，所述BC6-85株含2×104.0BID；攻毒后观察每只鸡的饮食、饮水、粪便及精神状态；
4)攻毒72小时后对所有鸡进行法氏囊剖检，观察法氏囊病变情况；
①法氏囊出现病变，则法氏囊疫苗免疫效果不合格；
②法氏囊不出现病变，并且和攻毒前比较，鸡的饮食、饮水、精神状态以及粪便颜色、软硬、形态均无明显变化，则法氏囊疫苗免疫效果合格并且具有优良的免疫效果；
③法氏囊不出现病变，和攻毒前比较，鸡的饮食量下降、饮水量异常、精神状态不佳，粪便颜色、软硬、形态异常，则法氏囊疫苗免疫效果合格，但法氏囊抗体水平还未达到使免疫鸡不产生反应的抗体水平。
疫苗免疫效果评价结果：
本实施例，活疫苗组，9/10鸡法氏囊正常，1/10鸡法氏囊出现病变，该活疫苗免疫效果评价为9分，鸡的精神、食欲、饮欲、粪便情况观察显示，法氏囊抗体水平还未达到使免疫鸡不产生副作用的抗体水平，对部分鸡有轻微的影响。
该疫苗免疫对部分鸡有轻微的影响。
灭活疫苗组，9/10鸡法氏囊正常，1/10鸡法氏囊出现病变，该灭活疫苗免疫效果评价为9分，鸡的精神、食欲、饮欲、粪便情况观察显示，法氏囊抗体水平还未达到使免疫鸡不产生副作用的抗体水平，对部分鸡有轻微的影响。
对照组的鸡没有进行免疫，因此鸡法氏囊出现病变。