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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610501285.6 (22)申请日 2016.06.30 (71)申请人 深圳福山生物科技有限公司 地址 518057 广东省深圳市南山区高新中 一道10号生物孵化器2-315 (72)发明人 李晓龙 朱志鹏 罗永平 李欣 (51)Int.Cl. A61K 31/7016(2006.01) A61K 31/702(2006.01) A61K 31/7028(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A23L 33/10(2016.01) (54)发明名称。
2、 萝 卜硫苷组合物及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种包含萝 卜硫苷和功能性低 聚糖的组合物。 本发明还涉及所述组合物在制备 用于癌症化学预防和/或治疗的产品中的用途。 权利要求书1页 说明书7页 附图1页 CN 105963310 A 2016.09.28 CN 105963310 A 1.一种组合物, 其包含: (1) 萝 卜硫苷; 和 (2) 功能性低聚糖。 2.根据权利要求1的组合物, 其中所述功能性低聚糖选自低聚果糖、 大豆低聚糖、 低聚 半乳糖、 低聚木糖、 低聚异麦芽糖、 低聚乳果糖、 环糊精、 壳寡糖、 菊粉及其组合。 3.根据权利要求1或2的组合物, 其中所述功能性低聚糖。
3、选自低聚果糖、 低聚木糖、 低聚 半乳糖、 低聚乳果糖和低聚异麦芽糖。 4.根据权利要求1或2的组合物, 其中所述功能性低聚糖是低聚木糖。 5.根据权利要求1至4中任一项的组合物, 其为药物组合物或食品组合物, 还另外含有 可药用赋形剂或载体或者食品上可接受的添加剂。 6.一种增加萝 卜硫苷体内向萝 卜硫素转化的方法, 包括向萝 卜硫苷中添加功能性低聚糖。 7.权利要求1至5中任一项的组合物在制备用于治疗或预防癌症的产品中的用途。 8.根据权利要求7的用途, 其中所述产品是药品或食品。 9.根据权利要求7或8的用途, 其中所述产品是选自以下的食品: 食品增补剂、 保健食 品、 饮料、 搅合饮料。
4、、 焙烤产品、 茶、 汤、 谷类、 色拉、 三明治、 色拉味调料、 酱油、 咖啡、 乳酪、 酸 乳酪、 能量食品, 及其混合物。 10.根据权利要求7或8的用途, 其中所述产品是选自以下的形式: 软胶囊、 硬胶囊、 滴 丸、 片剂、 颗粒、 丸剂、 注射液、 口服液、 粉剂、 酒剂、 硬糖、 软糖、 茶剂。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 105963310 A 2 萝 卜硫苷组合物及其应用 技术领域 0001 本发明提供了一种包含萝 卜硫苷和功能性低聚糖的组合物。 本发明还涉及所述组 合物在制备用于癌症化学预防和治疗的产品中的用途。 背景技术 0002 根据世界卫生组织2014年度。
5、报告, 癌症是全球发病和死亡的主要原因, 对人民生 命健康造成巨大威胁, 给社会发展带来了沉重的经济负担。 在对抗癌症的漫长过程中, 人们 于1976年提出了癌症化学预防的概念, 是指利用天然的或者合成的化学物质来预防、 减缓 或逆转癌症发生发展的策略。 萝 卜硫素 (Sulforaphane, SFN) , 又称莱菔硫烷, 化学名为1-异 硫氰酸-4-甲磺酰基丁烷, 属于异硫氰酸酯类, 是迄今为止蔬菜中发现的最强的抗癌成分。 针对萝 卜硫素的分子作用机理研究及细胞实验结果进一步显示, 萝 卜硫素通过调控II相酶活 性对I相酶代谢物或外来物进行代谢脱毒等多种途径起到与癌症化学预防相同或相似的作。
6、 用 (参考文献Myzak MC, Dashwood RH. Cancer Lett., 2006, 233:208-18.) 。 0003 萝 卜硫素作为一种异硫氰酸酯类, 化学性质不稳定、 易降解。 为了方便储存、 运输和 使用, 通常萝 卜硫素以其前体形式萝 卜硫苷进行产品化开发和利用。 多种十字花科植物中 含有萝 卜硫苷, 其中芸薹属甘蓝种变种西兰花 (Brassica oleracea L .var .italic Planch.) 的芽苗中萝 卜硫苷含量远高于其他植物以及自身成熟组织 (参考文献Fahey JW, Zhang Y, Talalay P. Proc Natl Acad。
7、 Sci U S A., 1997, 94:10367-72.) , 常作为植物 提取来源。 在植物体中, 作为前体形式的萝 卜硫苷存在于液泡中, 与位于特定蛋白体中的 - 硫苷酶被生物膜系统分隔。 植物组织细胞在提取或加工时被破坏后, 萝 卜硫苷与酶接触就会 启动硫苷快速水解, 得到包含萝 卜硫素、 萝 卜硫腈在内的多种生物分解产物 (参考文献Latt KP, Appel KE, Lampen A. Food Chem Toxicol., 2011, 49:3287-309.) 。 因此, 为了防止 酶降解损失, 现有技术中通常在加工工艺对植物中的 -硫苷酶进行灭活处理以减少萝 卜硫 苷的损。
8、失。 0004 虽然对植物中的 -硫苷酶进行灭活有利于产品中萝 卜硫苷的保存, 但是萝 卜硫苷在 生物体内需要转化为萝 卜硫素才能发挥出防癌抗癌活性。 根据文献报道, 萝 卜硫苷主要通过 人体肠道中保加利亚杆菌、 双歧杆菌等肠道益生菌群所含有的-硫苷酶黑芥子酶 (myrosinase) 转化为萝 卜硫素, 进而被人体吸收并继而发挥一系列作用。 本发明人在研究中 意外发现, 由于个体差异性, 萝 卜硫苷的体内转化效率并不理想而且差异较大, 通常可在 10%-50%左右变化, 大部分萝 卜硫苷并未能转化为萝 卜硫素被吸收。 因此, 如果能提高肠道中 萝 卜硫苷向萝 卜硫素转化的效率, 可能有助于更。
9、好地发挥其抗癌和防癌作用。 0005 为了防止萝 卜硫苷在体外提取工艺中被降解损失, 现有技术在提取富集之前往往 需要采取灭酶处理; 另一方面, 对于提取富集的萝 卜硫苷产品, 又需要考虑如何保证其在体 内有效地发挥生物活性。 中国申请200810210355.8提出采取添加外源性 -硫苷酶及其酶活 化剂 (如抗坏血酸) 的手段, 直接增加肠道中 -硫苷酶的总量并辅以活化 -硫苷酶, 促使产 品中萝 卜硫苷在体内高效转化为萝 卜硫素。 然而, -硫苷酶作为一种酶先天就具有不稳定性, 说 明 书 1/7 页 3 CN 105963310 A 3 室温条件下易失去活性。 因此酶的提取和相应储存运输。
10、需要的条件较为苛刻, 导致含酶产 品成本较高且储运不便, 难以广泛应用。 0006 因此, 现有技术迫切需要提供一种能保证萝 卜硫苷体内有效转化和利用的产品和 方法。 发明内容 0007 本发明人在长期研究中发现: 萝 卜硫苷在肠道内向萝 卜硫素的转化效率并不理想而 且差异较大, 这会影响萝 卜硫苷体内生物作业的有效发挥, 这是之前人们并未注意到的问 题。 为了解决此问题, 本发明人尝试了多种办法, 但是效果都不够理想。 在实验中, 发明人偶 然发现混入了功能性低聚糖的萝 卜硫苷在肠道内向萝 卜硫素的转化有明显提高。 经过多次进 一步实验和验证, 上述问题有了令人满意的解决方案。 0008 为。
11、此, 在本发明的第一个方面, 提供了一种组合物, 其包含: (1) 萝 卜硫苷; 和 (2) 功能性低聚糖。 0009 本发明人出乎意料地发现: 添加了功能性低聚糖之后的萝 卜硫苷产品在服用后于 肠道中可以高效率地转化成萝 卜硫素。 0010 功能性低聚糖是那些不能被人体胃肠道消化吸收、 能完整进入大肠的非消化性低 聚糖。 功能性低聚糖的非限定性实例包括但不限于低聚果糖、 大豆低聚糖、 低聚半乳糖、 低 聚木糖、 低聚异麦芽糖、 低聚乳果糖、 环糊精、 壳寡糖、 菊粉及其组合。 0011 不受理论限制, 申请人猜测, 有可能功能性低聚糖因为不能被人体分解利用但是 可能被肠道益生菌选择性利用, 。
12、因而不排除其影响肠道益生菌数量和活力的可能, 益生菌 数量和活力的变化进而间接提高人体肠道内将萝 卜硫苷转化为萝 卜硫素的能力。 即便如此, 上述设想仍是根据本发明实验结果的事后推测。 事实上, 由于体内环境的复杂性, 要分析功 能性低聚糖对肠道益生菌的影响是非常困难的。 0012 在本发明的组合物中, 所述功能性低聚糖优选选自低聚果糖、 低聚木糖、 低聚半乳 糖、 低聚乳果糖和低聚异麦芽糖。 在更优选的实施方案中, 所述功能性低聚糖是低聚木糖或 低聚果糖; 在更优选的实施方案中, 所述功能性低聚糖是低聚木糖。 0013 在本发明的组合物中, 萝 卜硫苷可以以单一化合物的形式与所述功能性低聚糖。
13、组 成组合物; 萝 卜硫苷也可以以植物粉末或植物提取物的形式与所述功能性低聚糖组成组合 物。 所述植物粉末或植物提取物是来自含有萝 卜硫苷的植物的粉末或其提取物。 优选地, 所 述植物是十字花科植物, 特别是芸薹属蔬菜。 这些植物的实例包括西兰花、 结球甘蓝、 羽衣 甘蓝、 白菜、 花椰菜、 芥菜、 球茎甘蓝、 抱子甘蓝、 芜菁、 辣根等。 更优选地, 萝 卜硫苷可以以西 兰花芽苗提取物或西兰花芽苗 (粉) 的形式存在于本发明的组合物中。 0014 本发明的组合物还可以另外含有黑芥子酶活化剂。 所述黑芥子酶活化剂是本领域 已知的, 包括但不限于维生素C (抗坏血酸) 、 锌离子。 优选黑芥子酶。
14、活化剂是维生素C。 0015 在本发明的另一个方面, 提供了一种药物组合物或食品组合物, 所述组合物除了 萝 卜硫苷和功能性低聚糖外, 还可以另外含有可药用赋形剂或载体或者食品上可接受的添 加剂。 0016 本发明的组合物可以存在于适合的产品形式中, 包括但不限于药物、 食品、 功能性 说 明 书 2/7 页 4 CN 105963310 A 4 食品和保健食品等。 特别地, 对于食品而言, 产品形式可以是选自以下的食品: 食品增补剂、 保健食品、 饮料、 搅合饮料、 焙烤产品、 茶、 汤、 谷类、 色拉、 三明治、 色拉味调料、 酱油、 咖啡、 乳酪、 酸乳酪、 能量食品, 及其混合物。 0。
15、017 在本发明的又一个方面, 提供了一种增加萝 卜硫苷体内向萝 卜硫素转化的方法, 包 括体外向萝 卜硫苷产品中添加功能性低聚糖。 0018 在本发明的又一个方面, 提供了本发明的组合物在制备用于治疗或预防癌症的产 品中的用途。 所述癌症选自选自脑癌、 乳癌、 结肠癌、 直肠癌、 皮肤癌、 头颈癌、 宫颈癌、 肾癌、 肺癌、 肝癌、 卵巢癌、 胰腺癌、 前列腺癌、 甲状腺癌、 胃癌、 白血病、 淋巴瘤、 肉瘤和黑素瘤。 所 述产品可以是药品或食品的形式, 所述食品包括保健食品、 功能性食品等形式。 具体而言, 所述食品可以是选自以下具体形式的食品: 食品增补剂、 保健食品、 饮料、 搅合饮料。
16、、 焙烤产 品、 茶、 汤、 谷类、 色拉、 三明治、 色拉味调料、 酱油、 咖啡、 乳酪、 酸乳酪、 能量食品, 及其混合 物。 所述药品或食品可以是以下的形式: 软胶囊、 硬胶囊、 滴丸、 片剂、 颗粒、 丸剂、 注射液、 口 服液、 粉剂、 酒剂、 硬糖、 软糖、 茶剂。 0019 在本发明的组合物中, 所述功能性低聚糖相对于萝 卜硫苷的用量比例 (基于重量 比) 可以为1:100至100:1, 优选为1:50至50:1, 1:30至30:1, 更优选为1:10至10:1、 1:5至5: 1, 特别优选1:3至3:1。 0020 在本方面的组合物中, 萝 卜硫苷占组合物总重量的百分比可以。
17、为0.1%至90%, 0.5% 至70%、 1%至50%, 优选2%至30%, 更优选3%至20%。 0021 本发明组合物的一般用量可以根据实际需要和目的而确定。 例如, 可以为每日剂 量保证摄入0.1 mg至500mg的萝 卜硫苷或0.2mg至200mg的萝 卜硫苷, 优选0.5mg至100mg的萝 卜 硫苷或1mg至50mg的萝 卜硫苷, 更优选1mg至30mg的萝 卜硫苷, 1mg至20mg的萝 卜硫苷或2mg至 10mg的萝 卜硫苷。 0022 在本发明的组合物中, 还可以优选地含有黑芥子酶活化剂, 例如抗坏血酸或锌离 子。 活化剂抗坏血酸或锌离子的用量可以根据一般需要和实际应用情况。
18、来确定, 例如, 本发 明组合物中抗坏血酸的用量可以占组合物总重量的0.01%至5%或0.02%至2%, 优选0.05%至 1%, 更优选0.05%至0.5%。 0023 附图说明 0024 图1是表明本发明的组合物A、 B、 C与空白对照组相比在在模拟肠液中萝 卜硫素水平 随时间变化的情况。 0025 具体实施方式 0026 术语 “治疗” 定义为为了对抵抗疾病、 病症或障碍 (例如统称为 “癌症” 的多种类型 病症中的一种) 而对患者进行的处理和护理, 其包括施用本发明的组合物以预防症状或并 发症的发作、 或者减轻症状或并发症、 或者治愈或消除疾病、 病症或障碍。 0027 术语 “预防”。
19、 指通过施用药物来阻止、 减缓或逆转疾病的发生, 它可以被应用于疾 病发生之前的任何阶段。 说 明 书 3/7 页 5 CN 105963310 A 5 0028 在本发明上下文中的 “治疗” 意指减轻与病症或疾病相关的症状, 或者抑制这些症 状的进一步发展或恶化, 或者防止或预防所述疾病或病症。 类似地, 本文中使用的本发明化 合物的 “有效量” 或 “治疗有效量” 指完全或部分减轻与所述病症或状况相关的症状、 或者停 止或减缓这些症状的进一步发展或恶化, 或者预防或提供对所述病症或状况之预防的化合 物的量。 0029 本文中使用的术语 “癌症” 指任何恶性实体肿瘤、 转移性瘤或其中细胞分裂。
20、不受控 制和细胞丧失分化的其它病症。 0030 本发明的药物组合物可以通过常规技术制备, 例如在Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第19版, 1995中所描述的方法, 其通过引用并入本文。 所述组 合物可以以常规形式出现, 例如胶囊、 片剂、 气雾剂、 溶液剂、 混悬剂或局部施用形式。 0031 典型的组合物包含本发明化合物和赋形剂或载体。 例如, 活性化合物通常与载体 混合, 或者被载体稀释, 或者被密封在可以为安瓿、 胶囊、 小药囊、 纸或其它容器形式的载体 内。 当将活性化合物与载体混合时, 或者当载体充当稀释剂时, 所述载。
21、体可以为充当活性化 合物的载体、 赋形剂或介质的固体、 半固体或液体材料。 所述活性化合物可以吸附在颗粒状 固体载体上 (例如容纳在小药囊中) 。 合适的载体的一些实例为水、 盐溶液、 醇、 聚乙二醇、 聚 羟基乙氧基化蓖麻油、 花生油、 橄榄油、 明胶、 乳糖、 白土、 蔗糖、 糊精、 碳酸镁、 糖、 环糊精、 直 链淀粉、 硬脂酸镁、 滑石、 明胶、 琼脂、 果胶、 阿拉伯胶、 硬脂酸或纤维素的低级烷基醚、 硅酸、 脂肪酸、 脂肪酸胺、 脂肪酸甘油单酯和甘油二酯、 季戊四醇脂肪酸酯、 聚氧乙烯、 羟甲基纤维 素和聚乙烯吡咯烷酮。 类似地, 所述载体或稀释剂可以包括任何本领域已知的持续释放材。
22、 料, 例如单独的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯或者其与蜡的混合物。 0032 所述制剂可以与不和活性成分发生有害反应的辅助剂混合。 这些添加剂可以包括 润湿剂、 乳化剂和助悬剂、 影响渗透压的盐、 缓冲剂和/或着色物质、 防腐剂、 甜味剂或调味 剂。 如果需要, 还可以对所述组合物进行灭菌。 0033 施用途径可以是将本发明活性化合物有效地转运到适当的或期望的作用部位的 任何途径, 例如口服、 经鼻、 肺部、 口含、 皮下、 皮内、 透皮或肠胃外途径, 例如直肠、 贮库、 皮 下、 静脉内、 尿道内、 肌内、 鼻内、 眼用溶液或软膏剂的途径, 口服途径是优选的。 0034 如果使用固体载体用。
23、于口服施用, 则该制剂可以是压片的, 以粉剂或小丸形式置 于硬明胶胶囊中, 或者其可以是糖锭或锭剂的形式。 如果使用液体载体, 则所述制剂可以是 糖浆剂、 乳剂、 软明胶胶囊或无菌可注射液体的形式, 例如水性或非水性液体混悬剂或溶液 剂。 0035 可注射的剂型通常包括水性混悬剂或油性混悬剂, 其可以使用合适的分散剂或润 湿剂和助悬剂来制备。 可注射的形式可以是在溶液相中或者是用溶剂或稀释剂制备的混悬 剂的形式。 可接受的溶剂或载体包括无菌水、 林格溶液或等渗盐水溶液。 或者, 可以应用无 菌油作为溶剂或助悬剂。 优选地, 所述油或脂肪酸是不挥发性的, 包括天然油或合成油、 脂 肪酸、 甘油单。
24、酯、 甘油二酯或甘油三酯。 0036 对于注射而言, 所述制剂还可以是适于用上述的合适溶液重构的粉末。 这些的实 例包括但不限于冷冻干燥的、 旋转干燥的或喷雾干燥的粉末, 无定形粉末、 颗粒、 沉淀物或 微粒。 对于注射剂而言, 所述制剂可以任选地包含稳定剂、 pH调节剂、 表面活性剂、 生物利用 度调节剂和这些试剂的组合。 可以将所述化合物配制为用于通过注射进行胃肠外施用, 例 说 明 书 4/7 页 6 CN 105963310 A 6 如通过推注或连续输注。 用于注射的单位剂型可以在安瓿中或多剂量容器中。 0037 本发明的组合物在宽的剂量范围都是有效的。 取决于所用用途 (例如预防或治。
25、 疗) , 本发明的组合物可以在宽泛的范围内进行调整。 如前所述, 组合物的用量可以根据萝 卜 硫苷的日摄入量确定, 例如, 可以基于下述每日摄入剂量确定组合物的用量: 0.1 mg至 500mg的萝 卜硫苷或0.1mg至200mg的萝 卜硫苷, 优选0.5mg至100mg的萝 卜硫苷或1mg至50mg的 萝 卜硫苷, 更优选1mg至30mg的萝 卜硫苷, 1mg至20mg的萝 卜硫苷或2mg至10mg的萝 卜硫苷。 0038 通常, 可以将本发明组合物分配在单位剂型中, 其每单位剂量包含有效量的萝 卜硫 苷和可药用载体。 0039 通常, 适于口服、 经鼻、 肺部或透皮施用的剂型包括有效量的。
26、萝 卜硫苷与可药用载 体或稀释剂。 0040 剂型可以是每日一次、 或每日一次以上例如每日两次或每日三次施用。 或者, 剂型 可以根据需要以少于每日一次的频率施用, 例如每隔一天或每周一次施用。 0041 药物组合物可以是片剂、 胶囊、 粉剂、 颗粒剂、 锭剂、 液体或胶状物的形式。 供口服 的片剂和胶囊可以适于单位剂量用药的形式, 并且可以含常规的赋形剂, 这些例子有: 结合 剂如糖浆、 阿拉伯树胶、 凝胶、 山梨醇、 黄著胶、 聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) ; 填料如乳糖、 糖类、 玉 米粉、 磷酸钙、 山梨醇或甘氨酸; 片剂润滑剂如硬脂酸镁、 二氧化硅、 滑石、 聚乙二醇或二氧 化硅; 崩。
27、解剂如马铃薯淀粉; 可接受的润滑剂如月桂基硫酸钠。 片剂可按照已知的常规制药 实践中的方法进行包衣。 口服液体制剂可以使水状或油状悬浮液、 溶液、 乳剂、 糖浆或酊剂, 也可制成一种干物质, 在使用之前再用水或其它合适的载体重新调制。 这些液体制剂可含 有常规的添加剂, 例如悬浮剂 (如: 山梨醇、 糖浆、 甲基纤维素、 葡萄糖浆、 明胶、 经氢化的食 用油脂) 。 乳化剂 (如孵磷脂, 山梨醇单油酸盐或阿拉伯树胶) , 非水相载体 (包括食用油如杏 仁油、 精馏的椰子油、 油脂如甘油、 丙二醇或乙醇) ,防腐剂 (如甲基或丙基对羟基苯甲酸或 山梨酸) , 如果需要也可含有常规的风味剂或着色剂。
28、。 0042 本发明药物组合物中活性物质的百分比是可变的, 因为必须使药物调剂制成一定 合适比例的剂量, 以获得理想的疗效。 总之, 本发明的药物制剂经口服或注射给药应按每 70kg体重每天1至15毫克活性物质。 以下说明性的而不是限制性的给出一些实施实施例。 0043 下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明, 下述实施例中所用原料如无特殊说 明, 即为普通市售, 所述百分比无特殊说明, 即为重量百分比。 0044 实施例1: 富含萝 卜硫苷的西兰花芽苗提取物组合物 (组合物A) 的制备 (1) 混合: 将1800 g西兰花芽苗提取物 (含萝 卜硫苷16.0%) 与200 g低聚果糖混合均。
29、匀, 得到2 kg西兰花芽苗提取物组合物, 其中萝 卜硫苷占14.4%。 0045 (2) 装袋产品: 将上述富含萝 卜硫苷的西兰花芽苗提取物组合物按每袋2 g的重量 分装进小袋包装中, 得到粉剂产品。 0046 实施例2: 富含萝 卜硫苷的西兰花芽苗提取物组合物 (组合物B) 的制备 (1) 混合: 将2 kg西兰花芽苗提取物 (含萝 卜硫苷16.0%) 与1 kg低聚木糖混合均匀, 得到 说 明 书 5/7 页 7 CN 105963310 A 7 3 kg富含萝 卜硫苷的西兰花芽苗提取物组合物, 其中萝 卜硫苷占10.7%。 0047 (2) 装袋产品: 将上述富含萝 卜硫苷的西兰花芽苗。
30、提取物组合物按每袋2 g的重量 分装进小袋包装中, 得到粉剂产品, 其中萝 卜硫苷占10.7%。 0048 实施例3: 富含萝 卜硫苷的西兰花芽苗粉和西兰花芽苗提取物的组合物 (组合物C) 的制备 (1) 混合: 将200 g西兰花芽苗粉提取物 (含萝 卜硫苷16%) 、 800 g西兰花芽苗粉 (含萝 卜硫 苷5%) 、 250 g壳寡糖、 250 g低聚果糖、 250 g低聚木糖、 250 g低聚异麦芽糖、 10 g抗坏血酸 混合均匀, 得到2.01 kg富含萝 卜硫苷的西兰花芽苗粉和西兰花芽苗提取物组合物, 其中萝 卜 硫苷占3.58%。 0049 (2) 装袋产品: 将上述富含萝 卜硫。
31、苷的西兰花芽苗粉和西兰花芽苗提取物组合物按 每袋2 g的重量分装进小袋包装中, 得到粉剂产品, 其中萝 卜硫苷占3.58%。 0050 实施例4: 肠道模拟液中萝 卜硫素转化水平测定 试剂与供试品: 肠道模拟液: 按2015版 中国药典 二部附录方法配制人工肠液, 取40 mL人工肠液加入 对数期的保加利亚乳杆菌、 长型双歧杆菌、 地衣芽孢杆菌、 嗜热链球菌与酪酸梭菌各2107 (各菌种事先在缓冲GAM 肉汤(pH 7.0)中37 培养48 h, 参考文献Cheng DL, Hashimoto K, Uda Y. Food Chem Toxicol., 2004, 42:351-7.) , 3。
32、7 保温备用。 0051 空白组: 西兰花芽苗提取物, 其中萝 卜硫苷含量为16%。 0052 组合物A组: 以西兰花芽苗提取物 (萝 卜硫苷含量为16%) : 低聚果糖=9: 1混合而成, 其中萝 卜硫苷含量为14.4%。 0053 组合物B组: 以西兰花芽苗提取物 (萝 卜硫苷含量为16%) : 低聚木糖= 2: 1混合而成, 其中萝 卜硫苷含量为10.7%。 0054 组合物C组: 以西兰花芽苗混合物 (西兰花芽苗提取物和西兰花芽苗粉按1:4混合, 其萝 卜硫苷含量为7.2%) : 低聚糖混合物: 维生素C = 100: 100: 1混合而成, 其中萝 卜硫苷含量 为3.58 %。 00。
33、55 低聚糖混合物: 按低聚果糖: 低聚木糖: 壳寡糖: 低聚异麦芽糖=1: 1: 1: 1直接混合 制成。 0056 操作处理: (1) 空白组: 取空白组0.251 g (含有萝 卜硫苷40.1 mg) , 加入到20 mL肠道模拟液中, 于 37 保温, 分别于0.5 h、 1 h和2 h时取样通过HPLC测定其中萝 卜硫素含量, 计算萝 卜硫素生 成率。 0057 (2) 组合物A组: 取组合物A组0.278 g (含有萝 卜硫苷40.1 mg) , 加入到20 mL肠道模 拟液中, 于37 保温, 分别于0.5 h、 1 h和2 h时取样通过HPLC测定其中萝 卜硫素含量, 计算 萝。
34、 卜硫素生成率。 0058 (3) 组合物B组: 取组合物B组0.375 g (含有萝 卜硫苷40.1 mg) , 加入到20 mL肠道模 拟液中, 于37 保温, 分别于0.5 h、 1 h和2 h时取样通过HPLC测定其中萝 卜硫素含量, 计算 说 明 书 6/7 页 8 CN 105963310 A 8 萝 卜硫素生成率。 0059 (4) 组合物C组: 取组合物C组1.12 g (含有萝 卜硫苷40.1 mg) , 加入到20 mL肠道模 拟液中, 于37 保温, 分别于0.5 h、 1 h和2 h时取样通过HPLC测定其中萝 卜硫素含量, 计算 萝 卜硫素生成率。 0060 萝 卜硫。
35、素的HPLC测定方法: 取样品溶液, 过0.45 m滤膜, 进行HPLC分析。 HPLC条件: 色谱柱: 华普公司Unitary C18 (4.6 mm250 mm, 5 m) ; 柱温: 30 ; 流动相: 70%水-30%乙 腈; 流速: 0.8 mL/min; 进样量: 10 L; 紫外检测波长: 245 nm。 0061 实验结果见下表1和图1。 0062 表1. 空白组和组合物A、 B、 C组样品溶液中萝 卜硫素的相对含量 (色谱峰面积) 从实验结果可见, 富含萝 卜硫苷的空白组和组合物组在模拟肠道液中的微生物菌群的 帮助下, 都产生了萝 卜硫素, 并且萝 卜硫素的生成量随着时间的延长而增加, 在反应4小时后, 空白组的转化率达到了7%, 而添加了功能性低聚糖的组合物B和C中萝 卜硫苷的转化率显著 增高, 其中组合物C组中的萝 卜硫苷的转化率增加最显著, 达到了67%, 相对于空白对照组提 高了近9倍。 显然, 在添加了功能性低聚糖之后, 萝 卜硫苷在肠道环境中向萝 卜硫素的转化率 明显提高。 说 明 书 7/7 页 9 CN 105963310 A 9 图1 说 明 书 附 图 1/1 页 10 CN 105963310 A 10 。