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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710212793.7 (22)申请日 2017.04.01 (71)申请人 武汉爱民制药股份有限公司 地址 436070 湖北省鄂州市葛店经济开发 区创业大道10号 (72)发明人 石召华 关小羽 李群 叶利春 张晓存 杜文杰 (74)专利代理机构 武汉开元知识产权代理有限 公司 42104 代理人 徐绍新 (51)Int.Cl. A61K 9/06(2006.01) A61K 9/127(2006.01) A61K 31/704(2006.01) A61K 47/32(。
2、2006.01) A61K 47/18(2006.01) A61K 47/10(2006.01) A61P 29/00(2006.01) (54)发明名称 七叶皂苷A脂质体凝胶及其制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种七叶皂苷A脂质体凝胶， 它由七叶皂苷A、 大豆磷脂、 胆固醇、 卡波姆、 三乙 醇胺、 EDTA2Na、 薄荷脑等成分组成。 本发明还 公开了制备方法， 包括制备脂质体和制备脂质体 凝胶两个步骤。 与普通凝胶剂相比， 本发明公开 的脂质体凝胶不仅具有更好的透皮吸收效果， 而 且具有缓控释作用， 能够以一定速率缓慢释放， 从而在皮肤内形成恒定的血药浓度， 有利于延长 药物的治疗时。
3、间， 本发明还能减少皮肤刺激反应 的发生率。 权利要求书1页 说明书12页 CN 106943339 A 2017.07.14 CN 106943339 A 1.一种七叶皂苷A脂质体凝胶， 其特征在于由以下重量配比的成分组成： 2.如权利要求1所述的七叶皂苷A脂质体凝胶， 其特征在于由以下重量配比的成分组 成： 3.一种制备权利要求1或2所述七叶皂苷A脂质体凝胶的方法， 其特征在于包括以下步 骤： 1)脂质体的制备： 取七叶皂苷A、 大豆磷脂和胆固醇， 加入无水乙醇， 5565搅拌使溶 解， 将所得的乙醇溶液通过蠕动泵以5-30ml/min的速度注入到已恒温至5565的纯化水 中， 搅拌103。
4、0min， 制成脂质体混悬液； 然后将脂质体混悬液置于脂质体挤出仪中， 依次经 过孔径为200nm和100nm的PC滤膜各挤出24次； 最后采用膜透析的方法， 将挤出液加纯化 水稀释， 透析23次， 除去挤出液中的乙醇， 得含七叶皂苷A的脂质体； 2)脂质体凝胶的制备： 取卡波姆加纯化水溶胀， 得到重量浓度为13的卡波姆溶液， 然后加入三乙醇胺、 薄荷脑、 EDTA2Na， 搅拌均匀， 制得空白凝胶基质； 最后将含七叶皂苷A 的脂质体加入到空白凝胶剂基质中， 边加边搅拌直至均匀混合， 即得七叶皂苷A脂质体凝 胶。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106943339 A 2 七叶皂苷A。
5、脂质体凝胶及其制备方法 技术领域 0001 本发明属于制药领域， 具体涉及一种七叶皂苷A脂质体凝胶及其制备方法。 背景技术 0002 七叶皂苷又称七叶皂苷酸， 为从七叶树科七叶树属植物种子提取得到的总皂苷、 -七叶皂苷或异七叶皂苷等的总称， 属于三萜皂苷类。 七叶皂苷的水溶解度较差， 为增加其 溶解度， 常将其制成钠盐， 研究证明， 七叶皂苷钠中含量较高的成分为七叶皂苷A、 B、 C、 D。 七 叶皂苷钠能降低病理性毛细血管通透性增高， 增加静脉张力， 减少炎性物质渗出， 具有抗 炎、 消肿、 止痛、 改善血液循环、 促进急性闭合性软组织损伤恢复等作用。 0003 七叶皂苷钠口服生物利用度不高。
6、， 注射对血管刺激性较大， 而外部用药使药物通 过皮肤的渗透作用到达机体内部， 具有如下优点： 可避免肝脏的首过效应和药物在胃肠 道内的降解， 药物吸收不受胃肠道因素的影响， 减少用药的个体差异； 一次给药可以长时 间使药物以恒定的速率进入体内， 减少给药次数， 延长给药间隔； 避免了口服给药引起的 血药浓度峰谷现象， 降低了毒副反应。 0004 目前已有七叶皂苷钠软膏、 气雾剂、 搽剂等外用剂型问世， 现有七叶皂苷钠外用制 剂具有以下缺点： 1.七叶皂苷钠盐水溶性很好， 油水分配系数很低， 透皮吸收效果差； 2.七 叶皂苷钠成分复杂， 性质不稳定， 制成的外用剂型稳定性较差； 3.七叶皂苷钠。
7、外用制剂对皮 肤刺激性较大。 发明内容 0005 本发明的目的是针对现有七叶皂苷钠外用制剂透皮吸收效果差， 皮肤刺激性大等 问题， 提供一种以七叶皂苷A为活性成分的脂质体凝胶及其制备方法。 0006 本发明提供的七叶皂苷A脂质体凝胶， 它由以下重量配比的成分组成： 0007 0008 0009 优选地， 所述的七叶皂苷A脂质体凝胶， 它由以下重量配比的成分组成： 说 明 书 1/12 页 3 CN 106943339 A 3 0010 0011 本发明提供的制备方法包括以下步骤： 0012 1)脂质体的制备： 取七叶皂苷A、 大豆磷脂和胆固醇， 加入无水乙醇， 5565搅拌 使溶解， 将所得的。
8、乙醇溶液通过蠕动泵以5-30ml/min的速度注入到已恒温至5565的纯 化水中， 搅拌1030min， 制成脂质体混悬液； 然后将脂质体混悬液置于脂质体挤出仪中， 依 次经过孔径为200nm和100nm的PC滤膜各挤出24次； 最后采用膜透析的方法， 将挤出液加 纯化水稀释， 透析23次， 除去挤出液中的乙醇， 得含七叶皂苷A的脂质体； 0013 2)脂质体凝胶的制备： 取卡波姆加纯化水溶胀， 得到重量浓度为13的卡波姆 溶液， 然后加入三乙醇胺、 薄荷脑、 EDTA2Na， 搅拌均匀， 制得空白凝胶基质； 最后将含七叶 皂苷A的脂质体加入到空白凝胶剂基质中， 边加边搅拌直至均匀混合， 即得。
9、七叶皂苷A脂质 体凝胶。 0014 本发明的有益效果是： 0015 1)本发明提供的脂质体凝胶具有更好的透皮吸收效果， 七叶皂苷A总透过率明显 高于七叶皂苷A凝胶， 而且具有缓控释作用， 能够以一定速率缓慢释放， 从而在皮肤内形成 恒定的血药浓度， 有利于延长药物的治疗时间。 0016 2)本发明提供的脂质体凝胶具有较好的质量稳定性。 0017 3)本发明提供的脂质体凝胶具有更好的安全性， 能够减少皮肤刺激反应的发生 率。 0018 4)本发明提供的脂质体凝胶具有更好的抗炎、 抗渗出效果。 具体实施方式 0019 以下通过实施例对本发明进行详细地说明。 0020 实施例1 0021 原料处方：。
10、 说 明 书 2/12 页 4 CN 106943339 A 4 0022 0023 制备工艺： 0024 1)脂质体的制备： 取七叶皂苷A 5g、 大豆磷脂20g和胆固醇5g， 加入无水乙醇50g， 60搅拌使溶解， 将所得的乙醇溶液通过蠕动泵以15ml/min的速度注入到已恒温至60的 250g纯化水中， 搅拌30min， 制成脂质体混悬液； 然后将脂质体混悬液置于脂质体挤出仪中， 依次经过孔径为200nm和100nm的PC滤膜各挤出4次,得到挤出液285g； 最后采用膜透析的方 法， 先向挤出液中加入200g纯化水稀释， 再透析3次， 以除去挤出液中的乙醇， 得七叶皂苷A 脂质体420g。
11、； 0025 按照文献方法检测脂质体的包封率和粒径， 包封率为89， 平均粒径为350nm。 0026 2)凝胶剂的制备： 取卡波姆8g， 加入400g纯化水， 40条件下搅拌使充分溶胀， 得 到浓度为2的卡波姆溶液， 然后向卡波姆溶液中加入三乙醇胺8g、 薄荷脑20g、 EDTA2Na 0.1g， 搅拌均匀， 制得空白凝胶基质436g； 最后将含七叶皂苷A的脂质体420g加入到空白凝 胶剂基质436g中， 边加边搅拌直至均匀混合， 即得七叶皂苷A脂质体凝胶856g。 0027 经计算， 所述七叶皂苷A脂质体凝胶中， 各成分的理论含量为： 0028 0029 实施例2 0030 原料处方： 说。
12、 明 书 3/12 页 5 CN 106943339 A 5 0031 0032 制备工艺： 0033 1)脂质体的制备： 取七叶皂苷A 3g、 大豆磷脂25g和胆固醇10g， 加入无水乙醇 100g， 60搅拌使溶解， 将所得的乙醇溶液通过蠕动泵以25ml/min的速度注入到已恒温至 60的300g纯化水中， 搅拌30min， 制成脂质体混悬液； 然后将脂质体混悬液置于脂质体挤 出仪中， 依次经过孔径为200nm和100nm的PC滤膜各挤出4次,得到挤出液350g； 最后采用膜 透析的方法， 先向挤出液中加入300g纯化水稀释， 再透析3次， 以除去挤出液中的乙醇， 得七 叶皂苷A脂质体49。
13、0g； 0034 按照文献方法检测脂质体的包封率和粒径， 包封率为82， 平均粒径为500nm。 0035 2)凝胶剂的制备： 取卡波姆5g， 加入400g纯化水， 40条件下搅拌使充分溶胀， 得 到浓度为1.25的卡波姆溶液， 然后向卡波姆溶液中加入三乙醇胺5g、 薄荷脑15g、 EDTA 2Na 0.2g， 搅拌均匀， 制得空白凝胶基质425g； 最后将含七叶皂苷A的脂质体490g加入到空 白凝胶剂基质425g中， 边加边搅拌直至均匀混合， 即得七叶皂苷A脂质体凝胶915g。 0036 经计算， 所述七叶皂苷A脂质体凝胶中， 各成分的理论含量为： 0037 0038 实施例3 0039 原。
14、料处方： 说 明 书 4/12 页 6 CN 106943339 A 6 0040 0041 制备工艺： 0042 1)脂质体的制备： 取七叶皂苷A 8g、 大豆磷脂15g和胆固醇4g， 加入无水乙醇30g， 60搅拌使溶解， 将所得的乙醇溶液通过蠕动泵以5ml/min的速度注入到已恒温至60的 150g纯化水中， 搅拌30min， 制成脂质体混悬液； 然后将脂质体混悬液置于脂质体挤出仪中， 依次经过孔径为200nm和100nm的PC滤膜各挤出4次,得到挤出液175g； 最后采用膜透析的方 法， 先向挤出液中加入150g纯化水稀释， 再透析3次， 以除去挤出液中的乙醇， 得七叶皂苷A 脂质体2。
15、90g； 0043 按照文献方法检测脂质体的包封率和粒径， 包封率为86， 平均粒径为420nm。 0044 2)凝胶剂的制备： 取卡波姆7.5g， 加入300g纯化水， 40条件下搅拌使充分溶胀， 得到浓度为2.5的卡波姆溶液， 然后向卡波姆溶液中加入三乙醇胺6g、 薄荷脑10g、 EDTA 2Na 0.1g， 搅拌均匀， 制得空白凝胶基质323g； 最后将含七叶皂苷A的脂质体290g加入到空 白凝胶剂基质323g中， 边加边搅拌直至均匀混合， 即得七叶皂苷A脂质体凝胶613g。 0045 经计算， 所述七叶皂苷A脂质体凝胶中， 各成分的理论含量为： 0046 0047 实施例4 0048 。
16、原料处方： 说 明 书 5/12 页 7 CN 106943339 A 7 0049 0050 制备工艺： 0051 1)脂质体的制备： 取七叶皂苷A 2.4g、 大豆磷脂16g和胆固醇9.6g， 加入无水乙醇 80g， 60搅拌使溶解， 将所得的乙醇溶液通过蠕动泵以15ml/min的速度注入到已恒温至60 的250g纯化水中， 搅拌30min， 制成脂质体混悬液； 然后将脂质体混悬液置于脂质体挤出 仪中， 依次经过孔径为200nm和100nm的PC滤膜各挤出4次,得到挤出液310g； 最后采用膜透 析的方法， 先向挤出液中加入210g纯化水稀释， 再透析3次， 以除去挤出液中的乙醇， 得七叶。
17、 皂苷A脂质体404g； 0052 按照文献方法检测脂质体的包封率和粒径， 包封率为87， 平均粒径为400nm。 0053 2)凝胶剂的制备： 取卡波姆6.4g， 加入360g纯化水， 40条件下搅拌使充分溶胀， 得到浓度为1.8的卡波姆溶液， 然后向卡波姆溶液中加入三乙醇胺6.4g、 薄荷脑24g、 EDTA2Na 0.16g， 搅拌均匀， 制得空白凝胶基质396g； 最后将含七叶皂苷A的脂质体404g加 入到空白凝胶剂基质396g中， 边加边搅拌直至均匀混合， 即得七叶皂苷A脂质体凝胶800g。 0054 经计算， 所述七叶皂苷A脂质体凝胶中， 各成分的理论含量为： 0055 0056 。
18、试验例 0057 1.透皮吸收实验 0058 取SD大鼠， 采用10Na2S水溶液褪除背部毛， 次日断颈处死， 立即剪下背部皮肤， 剔除皮下组织和脂肪， 生理盐水反复冲洗干净后， 剪成适当大小， 检查皮肤完整性。 采用改 说 明 书 6/12 页 8 CN 106943339 A 8 良Franz立式双室扩散池(有效面积为2.9cm2)， 将处理好的大鼠皮肤固定于扩散池的两室 之间， 角质层面向供给室。 将实施例14制备的七叶皂苷A脂质体凝胶和对照药(按常规方 法制得的七叶皂苷A普通凝胶)精密取0.5mL置于供给室， 向接收室中加入7mL接收液， 接收 液为PBS缓冲液(0.01M， pH7.。
19、4)。 设定恒温水浴为32， 以150r/min磁力搅拌。 分别于0.5、 1、 2、 4、 6、 8、 12、 24h取0.5mL接收液， 同时补充0.5mL PBS缓冲液， 经0.45 m滤膜过滤后， 取20 L 进样测定七叶皂苷A峰面积， 计算药物浓度。 0059 HPLC色谱条件如下： 固定相为Ultimate C18(5 m， 4.6250mm)， 流动相为乙腈： 0.55磷酸水溶液(38： 62)， 检测波长220nm， 流速1mL/min， 柱温35， 进样量20 L。 0060 体外透皮实验显示： 0061 七叶皂苷A凝胶在4小时的累积透过率达到了32， 而且随着时间延长透过率。
20、变化 不大， 12小时的累积透过率为36； 0062 实施例1的脂质体凝胶在4小时的累积透过率为25， 随后逐渐增加， 12小时的累 积透过率达到45； 0063 实施例2的脂质体凝胶在4小时的累积透过率为22， 随后逐渐增加， 12小时的累 积透过率达到37； 0064 实施例3的脂质体凝胶在4小时的累积透过率为24， 随后逐渐增加， 12小时的累 积透过率达到38； 0065 实施例4的脂质体凝胶在4小时的累积透过率为27， 随后逐渐增加， 12小时的累 积透过率达到41。 0066 从以上结果可以看出， 本发明不仅可以提高七叶皂苷A的透皮吸收效果， 总透过率 明显高于七叶皂苷A凝胶， 而。
21、且具有缓控释作用， 能够以一定速率缓慢释放， 从而在皮肤内 形成恒定的血药浓度， 有利于延长药物的治疗时间。 0067 2.稳定性试验 0068 参考药物稳定性试验指导原则， 将药物置称量瓶中， 摊成5mm厚的薄层， 开展了 本发明的高温、 高湿和强光的稳定性试验研究， 以下为具体的实验结果。 0069 (1)高温试验供试品置密封洁净容器中， 在60条件下放置10天， 于0、 5、 10天取样 检测。 0070 表1高温试验测定结果 说 明 书 7/12 页 9 CN 106943339 A 9 0071 0072 0073 (2)高湿试验供试品置恒湿设备中， 于25、 RH92.55条件下放。
22、置10天， 在0、 5、 10天取样检测。 0074 表2高湿试验测定结果 说 明 书 8/12 页 10 CN 106943339 A 10 0075 0076 (3)强光照射试验供试品置装有日光灯的光照箱或其它适宜的光照容器内， 于照 度为4500lx500lx条件下放置10天， 在0、 5、 10天取样检测。 0077 表3强光试验测定结果 0078 说 明 书 9/12 页 11 CN 106943339 A 11 0079 0080 3.皮肤刺激性实验 0081 取健康家兔(2.00.2kg)20只， 随机分为5组， 每组雌雄各半， 考察实施例14制 备的脂质体凝胶和按常规方法制备的。
23、七叶皂苷A普通凝胶的皮肤刺激性。 于给药前24h， 用 10硫化钠溶液将动物脊柱两侧毛脱掉， 每侧去毛范围约3cm3cm， 不可损伤表皮。 试验采 用同体左右侧自身对照法。 左、 右侧去毛区分别给予脂质体凝胶和水。 每天2次， 连续给药一 周， 于第8天用温水洗去残留受试药物。 分别于去除药物后1、 6、 12、 24h观察给药部位有无红 斑及水肿情况， 无红斑或水肿定为0级， 有红斑或水肿则按由轻到重定为1-4级。 0082 表4家兔皮肤刺激性实验结果(n5) 0083 说 明 书 10/12 页 12 CN 106943339 A 12 0084 0085 从以上试验可以看出， 本发明皮肤。
24、刺激反应发生率较低， 仅有轻度红斑或水肿出 现， 且停药后能在24小时内完全消除， 不影响治疗， 而七叶皂苷A普通凝胶的皮肤刺激反应 发生率较高， 且症状更为严重， 好转较慢， 24小时仍各有1例有轻微红斑和水肿， 说明本发明 的安全性比普通凝胶更好。 0086 4.抗肿胀/抗渗出试验 0087 采用小鼠耳肿胀模型， 设空白组、 七叶皂苷A脂质体凝胶组、 七叶皂苷A普通凝胶 组、 七叶皂苷钠普通凝胶组， 每组10只动物， 涂药后测定肿胀度， 结果见表5。 0088 表5抗肿胀作用试验结果 0089 0090 将3、 4组进行比较， 结果表明， 七叶皂苷A和七叶皂苷钠均能降低小鼠耳肿胀模型 的肿。
25、胀度， 两组结果没有显著性差异， 表明采用单一七叶皂苷A进行抗炎治疗的方案可行。 0091 将2、 3组进行比较， 结果表明， 七叶皂苷A脂质体凝胶的抗肿胀能力明显优于七叶 皂苷A普通凝胶， 二者有显著差异(P0.05)。 0092 采用对大鼠急性巴豆油肉芽肿的影响的动物模型， 设空白组、 七叶皂苷A脂质体凝 说 明 书 11/12 页 13 CN 106943339 A 13 胶组、 七叶皂苷A普通凝胶组、 七叶皂苷钠普通凝胶组， 每组10只动物， 涂药后测定渗出量， 结果见表6。 0093 表6抗渗出作用试验结果 0094 组别剂量急性渗出量(ml) 1阴性对照组/6.173.50 2七叶皂苷A脂质体凝胶组5mg/kg3.782.02 3七叶皂苷A普通凝胶组5mg/kg4.782.02 4七叶皂苷钠普通凝胶组5mg/kg4.262.07 0095 结果表明， 七叶皂苷A和七叶皂苷钠均能降低小鼠耳肿胀模型的渗出量且二者没 有显著差异； 七叶皂苷A脂质体凝胶的抗渗出能力明显优于七叶皂苷A普通凝胶， 二者有显 著差异(P0.05)。 说 明 书 12/12 页 14 CN 106943339 A 14 。