技术领域
本发明涉及菠萝育苗技术领域，尤其涉及一种MD2菠萝生根培养基及其组培苗快繁方法。
背景技术
MD2金菠萝果重一般1-2公斤，圆筒形，叶缘无刺，叶片细长表面光滑，且叶片数量比其他品种多10％，果皮薄，花腔浅。果肉金黄，肉质细致，纤维中，口感绵密，入口即化，风味浓郁，口感佳。特别是皮较薄而且去皮不用切沟，甜味重无需泡盐水，去皮就可以直接食用，食用非常方便。MD2金菠萝芳香多汁，贮存期长，如果在7.5摄氏度条件下，可保存长达25天，因此是目前大宗鲜果贸易的主要外销品种。
传统的MD2菠萝繁殖主要靠各种营养体芽苗如顶芽、托芽、腋芽和块茎芽进行无性繁殖，这些种苗需要在采果后对菠萝植株施肥，等新芽长出3～4月后采收各种营养体进行种植。如今有一些其他菠萝品种组织培养的报道，但是由于不同品种之间基因型有较大差异，不同的品种之间的组织培养方法存在较大的差异。MD2菠萝靠传统的营养体繁殖方法其生长速度慢，繁殖系数低，短时间内无法满足规模化种植种苗的需求，各营养体之间生长差异较大，优良遗传性状不稳定，且容易将母株病虫害带给下一代。因此，为了缓解市场MD2菠萝种苗紧缺现状，急需提供一种MD2菠萝组培快繁技术，解决上述技术问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种MD2菠萝生根培养基及其组培苗快繁方法，所述MD2菠萝生根培养基的生根培养效果优异，通过组织培养的方式使MD2菠萝种苗得到快速繁殖。
本发明采用的技术手段如下：一种MD2菠萝生根培养基，所述MD2菠萝生根培养基中含有多效唑。
进一步的，所述MD2菠萝生根培养基包括1/2MS+IBA0.5～1.0mg/L+多效唑1.0～2.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.0～7.0g。
本发明还提供一种MD2菠萝组培苗快繁方法，首先选择MD2菠萝吸芽、消毒，然后对其进行预培养、增殖培养、生根培养、移栽，所述生根培养基为1/2MS+IBA0.5～1.0mg/L+多效唑1.0～2.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.0～7.0g，pH值为5.5～6.0。
进一步的，所述生根培养的人工光照条件为：置于25～30℃每天光照12h，光强2000～3000lx。
进一步的，所述生根培养的自然光照条件为：置于25～30℃的室内自然光照培养。
进一步的，所述MD2菠萝吸芽消毒条件为：用0.1％的氯化汞溶液消毒15～20min。
进一步的，所述预培养的培养基为MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0～7.0g固体培养基，pH值为5.5～6.0，置于25～30℃培养10～15天，每天光照12～14h，光强2000～3000lx。
进一步的，所述增殖培养的培养基为MS+6-BA1.0～2.0mg/L+IBA0.1～0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0～7.0g，pH值为5.5～6.0，置于25～30℃每天光照12h，光强2000～3000lx，随培养时间的增加，在叶腋周围形成大量从生芽，30天转接一次。
进一步的，所述室外移栽的具体操作为：将经过生根培养15天的苗置于室外自然光下炼苗15～20天，然后开盖1～3天，洗净根部培养基并移栽到沙床中假植，保持一定的空气湿度并逐渐增加光照，1周后施肥，当组培苗长至较健壮时移栽到大田中。
进一步的，所述室外移栽的具体操作为：将经过自然光照生根培养30～45天后的苗，开盖1～3天，洗净根部培养基并移栽到沙床中假植，保持一定的空气湿度并逐渐增加光照，1周后施肥，当组培苗长至较健壮时移栽到大田中。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明通过组织培养的方式使MD2菠萝种苗得到快速繁殖，繁殖速度快、数量多，可解决MD2菠萝栽培生产过程中种苗短缺问题，避开由于使用营养体直接繁殖各种弊端，而且不受季节和气候条件影响。本发明在生根培养中加入多效唑后生根更整齐，根更粗壮，根吸收营养更好；叶片光合作用得到增强，心叶厚度和硬度增加，在移栽后能更好地保持叶片水分，抵抗细菌真菌的侵害，增强了组培苗抗逆性，移栽成活率也得到较大提高，并且可以使用自然光照进行生根培养，节省了电能，在自热光照下培养的生根苗可直接移栽到苗圃假植，节约了炼苗的人工成本。
另外，本发明的MD2菠萝生根培养基利用1.0～2.0mg/L多效唑，结合1/2MS+IBA0.5～1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.0～7.0g，生根更整齐，根系更粗壮，叶色浓绿，叶片光合作用得到增强，心叶厚度和硬度增加；本发明的人工光照生根培养条件能使增殖培养后生长较弱小的组培苗较自然光照培养生根更良好；本发明的自然光照生根培养条件温度范围为一般室内温度范围，保持了较好的培养效果，又减少了空调使用时间；本发明只使用0.1％的氯化汞溶液消毒15～20min，即能将污染率控制在较低水平，减少了使用其他去污剂和消毒液对外植体的损伤；本发明的经预培养步骤，污染的外植体即可被筛选出来，较高的6-BA预培养为增殖培养做准备；利用本发明的增殖培养的培养基以及培养条件，随培养时间的增加，在叶腋周围形成大量从生芽，30天转接一次，MD2组培苗的数量以指数级增长，种苗达到了快繁的目的。
具体实施方式
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
一种MD2菠萝生根培养基，所述MD2菠萝生根培养基包括1/2MS+IBA0.5mg/L+多效唑1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.0g。
利用上述MD2菠萝生根培养基的MD2菠萝组培苗快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择和消毒：于晴朗天气选取生长健壮的MD2菠萝吸芽，去除顶端分生组织周围叶片，用0.1％的氯化汞溶液震荡消毒15min，然后用无菌水冲洗3次，并用干燥无菌纸巾吸干表面残留水分。
(2)吸芽预培养：将步骤(1)的顶端分生组织纵切为均匀的2块，接种于MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g固体培养基，pH值调节为5.5，置于25℃培养10d，每天光照12h，光强2000lx。
(3)增殖培养：将步骤(2)的分生组织再均分为二，转接到MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g，调节pH值为5.5，置于25℃每天光照12h，光强2000lx，随培养时间的增加，在叶腋周围形成大量从生芽，30d转接一次。
(4)生根培养：将步骤(3)得到的2cm以上的无菌苗转接到1/2MS+IBA0.5mg/L+多效唑1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.0g，pH值为5.5，置于25℃每天光照12h，光强2000lx。
(5)室外移栽：将经过步骤(4)培养15天的苗置于室外自然光下炼苗15天，然后开盖1天，洗净根部培养基并移栽到沙床中假植，保持一定的空气湿度并逐渐增加光照，移栽3d即在根部长出大量的根毛，1周后施肥，当组培苗长至较健壮时移栽到大田中。
实施例2
一种MD2菠萝生根培养基，所述MD2菠萝生根培养基包括1/2MS+IBA1.0mg/L+多效唑2.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂7.0g。
利用上述MD2菠萝生根培养基的MD2菠萝组培苗快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择和消毒：于晴朗天气选取生长健壮的MD2菠萝吸芽，去除顶端分生组织周围叶片，用0.1％的氯化汞溶液震荡消毒20min，然后用无菌水冲洗5次，并用干燥无菌纸巾吸干表面残留水分。
(2)吸芽预培养：将步骤(1)的顶端分生组织纵切为均匀的2块，接种于MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g固体培养基，pH值调节为6.0，置于30℃培养15d，每天光照14h，光强3000lx。
(3)增殖培养：将步骤(2)的分生组织再均分为二，转接到MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g，调节pH值为6.0，置于约30℃每天光照12h，光强3000lx，随培养时间的增加，在叶腋周围形成大量从生芽，30d转接一次。
(4)生根培养：将步骤(3)得到的2cm以上的无菌苗转接到1/2MS+IBA1.0mg/L+多效唑2.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂7.0g，pH值为6.0，置于约30℃每天光照12h，光强3000lx。
(5)室外移栽：将经过步骤(4)培养15d的苗置于室外自然光下炼苗20d，然后开盖3天，洗净根部培养基并移栽到沙床中假植，保持一定的空气湿度并逐渐增加光照，移栽3d即在根部长出大量的根毛，1周后施肥，当组培苗长至较健壮时移栽到大田中。
实施例3
一种MD2菠萝生根培养基，所述MD2菠萝生根培养基包括1/2MS+IBA0.8mg/L+多效唑1.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g。
利用上述MD2菠萝生根培养基的MD2菠萝组培苗快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择和消毒：于晴朗天气选取生长健壮的MD2菠萝吸芽，去除顶端分生组织周围叶片，用0.1％的氯化汞溶液震荡消毒18min，然后用无菌水冲洗4次，并用干燥无菌纸巾吸干表面残留水分。
(2)吸芽预培养：将步骤(1)的顶端分生组织纵切为均匀的2块，接种于MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g固体培养基，pH值调节为5.8，置于28℃培养10d，每天光照13h，光强2500lx。
(3)增殖培养：将步骤(2)的分生组织再均分为二，转接到MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g，调节pH值为5.8，置于28℃每天光照12h，光强2500lx，随培养时间的增加，在叶腋周围形成大量从生芽，30d转接一次。
(4)生根培养：将步骤(3)得到的2cm以上的无菌苗转接到1/2MS+IBA0.8mg/L+多效唑1.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g，pH值为5.8，置于约28℃每天光照12h，光强2500lx。
(5)室外移栽：将经过步骤(4)培养15d的苗置于室外自然光下炼苗18d，然后开盖2天，洗净根部培养基并移栽到沙床中假植，保持一定的空气湿度并逐渐增加光照，移栽3d即在根部长出大量的根毛，1周后施肥，当组培苗长至较健壮时移栽到大田中。
实施例4
一种MD2菠萝生根培养基，所述MD2菠萝生根培养基包括1/2MS+IBA0.5mg/L+多效唑1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.0g。
利用上述MD2菠萝生根培养基的MD2菠萝组培苗快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择和消毒：于晴朗天气选取生长健壮的MD2菠萝吸芽，去除顶端分生组织周围叶片，用0.1％的氯化汞溶液震荡消毒15min，然后用无菌水冲洗3次，并用干燥无菌纸巾吸干表面残留水分。
(2)吸芽预培养：将步骤(1)的顶端分生组织纵切为均匀的2块，接种于MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g固体培养基，pH值调节为5.5，置于25～30℃培养10d，每天光照12h，光强2000lx。
(3)增殖培养：将步骤(2)的分生组织再均分为二，转接到MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g，调节pH值为5.5，置于25℃每天光照12h，光强2000lx，随培养时间的增加，在叶腋周围形成大量从生芽，30d转接一次。
(4)生根培养：将步骤(3)得到的2cm以上的无菌苗转接到1/2MS+IBA0.5mg/L+多效唑1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.0g，pH值为5.5，置于25～30℃的室内自然光照培养30d。
(5)室外移栽：将经过步骤(4)培养生根苗，开盖1天，洗净根部培养基并移栽到沙床中，保持一定的空气湿度并逐渐增加光照，移栽3d即在根部可长出大量的根毛，1周后施肥，当组培苗长至较健壮时移栽到大田中。
实施例5
一种MD2菠萝生根培养基，所述MD2菠萝生根培养基包括1/2MS+IBA1.0mg/L+多效唑2.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂7.0g。
利用上述MD2菠萝生根培养基的MD2菠萝组培苗快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择和消毒：于晴朗天气选取生长健壮的MD2菠萝吸芽，去除顶端分生组织周围叶片，用0.1％的氯化汞溶液震荡消毒20min，然后用无菌水冲洗5次，并用干燥无菌纸巾吸干表面残留水分。
(2)吸芽预培养：将步骤(1)的顶端分生组织纵切为均匀的2块，接种于MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g固体培养基，pH值调节为6.0，置于30℃培养10d，每天光照14h，光强3000lx。
(3)增殖培养：将步骤(2)的分生组织再均分为二，转接到MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g，调节pH值为6.0，置于30℃每天光照12h，光强3000lx，随培养时间的增加，在叶腋周围形成大量从生芽，30d转接一次。
(4)生根培养：将步骤(3)得到的2cm以上的无菌苗转接到1/2MS+IBA1.0mg/L+多效唑2.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂7.0g，pH值为6.0，置于25～30℃的室内自然光照培养45d。
(5)室外移栽：将经过步骤(4)培养生根苗，开盖3天，洗净根部培养基并移栽到沙床中，保持一定的空气湿度并逐渐增加光照，移栽3d即在根部可长出大量的根毛，1周后施肥，当组培苗长至较健壮时移栽到大田中。
实施例6
一种MD2菠萝生根培养基，所述MD2菠萝生根培养基包括1/2MS+IBA0.8mg/L+多效唑1.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g。
利用上述MD2菠萝生根培养基的MD2菠萝组培苗快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择和消毒：于晴朗天气选取生长健壮的MD2菠萝吸芽，去除顶端分生组织周围叶片，用0.1％的氯化汞溶液震荡消毒18min，然后用无菌水冲洗4次，并用干燥无菌纸巾吸干表面残留水分。
(2)吸芽预培养：将步骤(1)的顶端分生组织纵切为均匀的2块，接种于MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g固体培养基，pH值调节为5.8，置于28℃培养12d，每天光照12h，光强2500lx。
(3)增殖培养：将步骤(2)的分生组织再均分为二，转接到MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g，调节pH值为5.8，置于28℃每天光照12h，光强2500lx，随培养时间的增加，在叶腋周围形成大量从生芽，30d转接一次。
(4)生根培养：将步骤(3)得到的2cm以上的无菌苗转接到1/2MS+IBA0.8mg/L+多效唑1.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g，pH值为5.8，置于25～30℃的室内自然光照培养40d。
(5)室外移栽：将经过步骤(4)培养生根苗，开盖2天，洗净根部培养基并移栽到沙床中，保持一定的空气湿度并逐渐增加光照，移栽3d即在根部可长出大量的根毛，1周后施肥，当组培苗长至较健壮时移栽到大田中。
实施例7
本实施例与实施例3的区别在于，所述MD2菠萝生根培养基为1/2MS+IBA0.8mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g。
实施例8
本实施例与实施例6的区别在于，所述MD2菠萝生根培养基为1/2MS+IBA0.8mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g。
实施例9
本实施例与实施例3的区别在于，所述MD2菠萝生根培养基包括1/2MS+IBA1.2mg/L+多效唑2.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g。
实施例10
本实施例与实施例3的区别在于，所述MD2菠萝生根培养基包括1/2MS+IBA0.3mg/L+多效唑0.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g。
实施例1～6以及对比例1的MD2菠萝组培苗繁殖的结果如下：
通过上表，实施例1～6的MD2菠萝种苗繁殖速度快，生根快、根长齐时间较短，根粗，心叶厚、硬，移栽成活率高，培养效果优异。而实施例7～8生根慢、根长齐时间慢，根细，心叶薄、软，移栽成活率较低，人工/自然光照生根培养效果较差。本发明在生根培养中加入多效唑后生根更整齐，根更粗壮，根吸收营养更好；叶片光合作用得到增强，心叶厚度和硬度增加，在移栽后能更好地保持叶片水分，抵抗细菌真菌的侵害，增强了组培苗抗逆性，移栽成活率也得到较大提高，并且可以使用自然光照进行生根培养，节省了电能，在自热光照下培养的生根苗可直接移栽到苗圃假植，节约了炼苗的人工成本。
实施例9与实施例3对比，实施例9的MD2菠萝种苗生根慢，根长齐时间长，虽然根系粗度增加，但是生根率和移栽成活率下降；实施例10与实施例3对比，实施例10的MD2菠萝种苗生根慢，根长齐时间长，根粗降低，生根率和移栽成活率也下降。表明生根培养基中IBA、多效唑的添加量对生根培养效果有较大的影响，本发明利用1/2MS+IBA0.5～1.0mg/L+多效唑1.0～2.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.0～7.0g的MD2菠萝生根培养基，生根更整齐，根系更粗壮，叶色浓绿，叶片光合作用得到增强，心叶厚度和硬度增加，极大促进了MD2菠萝组培苗的快速繁殖。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。