技术领域
本发明涉及一种灵芝的栽培方法，属于中草药的种植领域。
背景技术
灵芝为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体。灵芝是祖国中医药宝库中的珍品，素有“仙草”之誉。研究表明，灵芝的子实体和孢子粉有强烈的药理学活性，有止痛、镇静、解毒的作用，可以抗肿瘤、调节免疫力、降低血糖，具有滋补强身、延年益寿的功效。
目前，市场上对灵芝的需求日益增加，而野生灵芝资源相对匮乏，因此全国多地都开始进行灵芝的人工培养和栽培。但现在的灵芝栽培技术多是以木屑、麦麸或椴木作为培养基，在大棚内进行栽培。而大棚内种植的灵芝，由于农药化肥的大量使用，在食品安全方面存在巨大的隐患。而且，由于采用人工的控温控湿技术，灵芝的生长较快，灵芝的品质不高，灵芝中的有效成分含量较低。因此，大棚内种植的灵芝存在，灵芝的食用不安全，品质不高，有效成分含量较低的问题。
为提高灵芝的品质，研究人员将灵芝接种后，放置在野生树林中进行培养，如中国专利CN104488541A和CN104145718A所述，将带有灵芝菌种的椴木，移植在野生衫木林、杂木林或竹林中，经过一段时间的生长，即可将灵芝收割。这样收割得到的灵芝，在品质方面有了较大的提高，但由于野生树林复杂的生态系统，对灵芝种植后的管理产生较大的困难，而且灵芝的产量也得不到保障，对灵芝的规模化种植带来不利影响。因此，野生树林种植的灵芝存在，灵芝种植后的管理较困难，产量得不到保障，不适合规模化种植的问题。
综上，现有的灵芝种植，既存在灵芝食用不安全，品质不高，有效成分含量较低的问题，又存在灵芝种植后的管理较困难，产量得不到保障，不适合规模化种植的问题。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种灵芝的栽培方法。本发明得到的灵芝食用安全，品质较高，有效成分含量较高，本发明具有病虫害较少，种植后的管理较容易，产量能够得到保障，适合规模化种植的特点。
本发明的技术方案：一种灵芝的栽培方法，包括以下步骤，
（1）菌种培养：将灵芝菌种接种到菌种培养基中，培养后得到培育的灵芝菌种；
（2）椴木发菌：将培育的灵芝菌种接种在椴木培养基中，将接种的椴木培养基进行培养，得到发菌的椴木；
（3）椴木移栽：将发菌的椴木移植到红豆杉林中。
上述的灵芝的栽培方法中，所述步骤（1）为；将南韩灵芝或武芝8号作为灵芝菌种，接种到菌种培养基中，在培养室内培养20～30天后得到培育的灵芝菌种。
前述的灵芝的栽培方法中，所述培养室内的温度控制在24～26℃，空气相对湿度控制在70%以下。
前述的灵芝的栽培方法中，所述的菌种培养基；按以下重量份的原料制成，
硬杂木屑70～80份，玉米粉20～30份，蔗糖1～2份，石膏粉1～2份，水50～60份。
前述的灵芝的栽培方法中，所述步骤（2）为；将培育的灵芝菌种接种在椴木培养基中，将接种的椴木培养基在发菌室内进行培养，培养60～70天，得到发菌的椴木。
前述的灵芝的栽培方法中，所述发菌室内的温度控制在25～30℃，空气相对湿度控制在70%以下。
前述的灵芝的栽培方法中，所述的椴木培养基，按以下步骤获得，
a 、选取阔叶树作为原木；
b 、将原木截成长度为25～35厘米的木段，装袋；
c 、在原木的底部和表面放木屑培养料，扎口；
d 、在80～110℃下维持8～12小时，得到椴木培养基。
前述的灵芝的栽培方法中，所述的阔叶树为桦木、柞木或青冈木。
前述的灵芝的栽培方法中，所述将发菌的椴木移植到红豆杉林中，包括以下步骤，
1 ）在红豆杉林间挖15～25cm深的沟，埋入发菌的椴木，椴木与椴木间的间隙为4～5cm；
2 ）在椴木移栽处覆盖一层2～3cm的细砂。
前述的灵芝的栽培方法中，所述红豆杉林，是人工种植的红豆杉林。
与现有技术相比，本发明是将灵芝菌种接种到菌种培养基中，在培养室内培养后得到培育的灵芝菌种，再将培育的灵芝菌种接种在椴木培养基中，将接种的椴木培养基放于发菌室内培养后，得到发菌的椴木，再将发菌的椴木移植到红豆杉林中，由于红豆杉本身具有一定的防治病虫害能力，因此红豆杉林中栽培的灵芝基本上没有病虫害的威胁，具有病虫害较少的特点；因病虫害较少，进而最大限度地减少了农药化肥的使用，保证了灵芝食用的安全性；本发明中灵芝是在红豆杉林中自然生长，生长周期较长，品质较高，灵芝中的有效成分含量较高。本发明移植到人工种植的红豆杉林中，经过人工管理可以使红豆杉林的生长处于一种最适合灵芝栽培的状态，灵芝在规范的、整齐的红豆杉林中种植，种植后更容易管理，灵芝的产量能够得到保障，更适用于灵芝的规模化种植。本发明得到的灵芝食用安全，品质较高，有效成分含量较高，本发明具有病虫害较少，种植后的管理较容易，产量能够得到保障，适合规模化种植的特点。
本发明得到的灵芝具有品质较高，有效成分含量较高的特点，灵芝中的有效成分为灵芝多糖和三萜及甾醇，下面将本发明的灵芝与大棚种植的灵芝中的灵芝多糖和三萜及甾醇含量进行比较。
随机选择本发明栽培的一年生、二年生、三年生和四年生灵芝各三份，再从市场上购买大棚种植灵芝作为对比，按照下面的方法测定灵芝中的灵芝多糖和三萜及甾醇含量，计算结果取平均值，对测定结果进行比较。
1 、灵芝多糖含量测定
（1）对照品溶液的制备
精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，加水制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
（2）标准曲线的制备
分别精密吸取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，置于10ml的具塞试管中，加水至2.0ml，精密加入硫酸蒽酮溶液（配制方式：精密称取蒽酮0.1g，加80％的硫酸溶液100ml使溶解，摇匀）6ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，取出，放入冰浴中冷却15分钟。以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在625nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
（3）供试品溶液的制备
取本品粉末约2g，精密称定，置于索氏提取器中，加水90ml，电加热器加热回流提取，至提取液无色，提取液转移至100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，加入乙醇150ml，摇匀，4℃放置12小时，取出，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解并转移至50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
（4）测定法
精密量取供试品溶液2ml，置于10ml具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量（mg），计算，即得。本品按干燥品计算，含灵芝多糖以无水葡萄糖（C6H12O6）计。
2 、三萜及甾醇含量测定
（1）对照品溶液的制备
取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
（2）标准曲线的制备
精密量取对照品溶液0.1 ml、0.2 ml、0.3 ml、0.4 ml、0.5ml，分别置于15ml的具塞试管中，挥干，放冷，精密加入新配置的香草醛冰醋酸溶液（配制方式为：精密称取香草醛0.5g，加冰醋酸使溶解成10ml，即得）0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，在70℃水浴中加热15分钟，立即置于冰浴中冷却5分钟，取出，精密加入乙酸乙酯4ml，摇匀，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在256nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。
（3）供试品溶液的制备
取本品粉末约2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加乙醇50ml，超声处理（功率140W，频率42kHz）45分钟，过滤，滤液置于100ml量瓶中，用适量乙醇，分次洗涤滤器和滤渣，洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。
（4）测定法
精密量取供试品溶液0.2ml，置于15ml具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“挥干”起，同法操作，测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中齐墩果酸的含量，计算，即得。本品按干燥品计算，含三萜及甾醇以齐墩果酸（C30H48O3）计。
灵芝多糖、三萜及甾醇的测定结果如下表所示：
样品 多糖（%） 三萜及甾醇（%） 一年生灵芝 1.14 1.24 二年生灵芝 1.27 1.38 三年生灵芝 1.45 1.49 四年生灵芝 1.52 1.68 大棚灵芝 1.03 0.95
从上表中可以看出，通过本发明所示方法种植的灵芝在灵芝多糖、三萜及甾醇的含量上有明显的提升。
具体实施方式
本发明的实施例1：一种灵芝的栽培方法，包括以下步骤，
（1）菌种培养：将灵芝菌种接种到菌种培养基中，培养后得到培育的灵芝菌种；将南韩灵芝或武芝8号作为灵芝菌种，在无菌室内将灵芝菌种接种到已经装入塑料菌袋内的菌种培养基中，将接种后的菌袋分层排放，放入消毒后的培养室内，在培养室内培养20～30天后得到长满菌袋的培育的灵芝菌种。
在培养室内培养须注意以下几点：一是培养室内控制温度24～26℃，控制空气相对湿度控制在70%以下；二是经常翻动菌袋，以便增加袋内氧气，使得菌袋内的灵芝菌种能够较快发菌；三是检查菌袋内的灵芝菌种有无杂菌感染，有则除去。
所述的菌种培养基；按以下重量份的原料制成，
硬杂木屑70～80份，玉米粉20～30份，蔗糖1～2份，石膏粉1～2份，水50～60份。
硬杂木屑选择能种香菇或木耳的树种的木屑，一般选取柞木、桦木、青冈木、水曲柳、白蜡木、榆木或枣木的木屑。
制成菌种培养基后，将菌种培养基装入塑料菌袋中，进行灭菌。
（2）椴木发菌：将培育的灵芝菌种接种在椴木培养基中，将接种的椴木培养基进行培养，得到发菌的椴木；将在无菌室内培养好的培育的灵芝菌种接种在塑料菌袋内的椴木培养基中，将接种后的塑料菌袋内的椴木培养基在消毒后的发菌室内进行培养，发菌室内的温度控制在25～30℃，空气相对湿度控制在70%以下；培养60～70天，得到发菌的椴木，
大约经过60～70天的培养，椴木表层的菌丝即可变得洁白粗壮，当少数椴木断面有豆大原基出现时，即判断菌丝成熟，即可得到发菌的椴木；
所述的椴木培养基，按以下步骤获得，
a 、选取阔叶树作为原木；阔叶树为桦木、柞木或青冈木。
b 、将原木截成长度为25～35厘米的木段，装袋；
c 、在原木的底部和表面放木屑培养料，扎口；
d 、在80～110℃下维持8～12小时，得到椴木培养基。
（3）椴木移栽：将发菌的椴木移植到红豆杉林中，包括以下步骤，
1 ）在红豆杉林间挖15～25cm深的沟，埋入发菌的椴木，椴木与椴木的间隙为4～5cm；
2 ）在椴木移栽处覆盖一层2～3cm的细砂，适当喷水，保持沙土湿润。
当灵芝栽培长成后进行灵芝采摘，灵芝采摘为当灵芝菌盖充分展开，菌盖呈现棕色时开始采摘。
具体为：当灵芝菌盖充分展开，边缘的浅白色或淡黄色基本消失，菌盖开始革质化，呈现棕色时，即可开始采摘；或者也可以让灵芝继续生长，灵芝会从菌盖边缘下部长出一圈新生带，生长发育后长出较大菌盖的灵芝。该灵芝可以生长多年，一般在生长3～5年后可得到品质更好地灵芝。灵芝采摘后阴干或40～50℃烘干保存。
由于红豆杉本身具有一定的防病虫害的功能，因此在红豆杉林中栽培的灵芝基本上不需要进行专门的病虫害防治工作。
本发明的实施例2：一种灵芝的栽培方法，包括以下步骤，
（1）菌种培养：将灵芝菌种接种到菌种培养基中，培养后得到培育的灵芝菌种；将南韩灵芝或武芝8号作为灵芝菌种，在无菌室内将灵芝菌种接种到已经装入塑料菌袋内的菌种培养基中，将接种后的菌袋分层排放，放入消毒后的培养室内，在培养室内培养25天后得到长满菌袋的培育的灵芝菌种。
在培养室内培养须注意以下几点：一是培养室内控制温度25℃，控制空气相对湿度控制在70%以下；二是经常翻动菌袋，以便增加袋内氧气，使得菌袋内的灵芝菌种能够较快发菌；三是检查菌袋内的灵芝菌种有无杂菌感染，有则除去。
所述的菌种培养基；按以下重量份的原料制成，
硬杂木屑74份，玉米粉24份，蔗糖1份，石膏粉1份，水55份。
硬杂木屑选择能种香菇或木耳的树种的木屑，一般选取柞木、桦木、青冈木、水曲柳、白蜡木、榆木或枣木的木屑。
制成菌种培养基后，将菌种培养基装入塑料菌袋中，进行蒸汽灭菌。
（2）椴木发菌：将培育的灵芝菌种接种在椴木培养基中，将接种的椴木培养基进行培养，得到发菌的椴木；将在无菌室内培养好的培育的灵芝菌种接种在塑料菌袋内的椴木培养基中，将接种后的塑料菌袋内的椴木培养基在消毒后的发菌室内进行培养，发菌室内的温度控制在25℃，空气相对湿度控制在70%以下；培养70天，得到发菌的椴木，
大约经过70天的培养，椴木表层的菌丝即可变得洁白粗壮，当少数椴木断面有豆大原基出现时，即判断菌丝成熟，即可得到发菌的椴木；
所述的椴木培养基，按以下步骤获得，
a 、选取阔叶树作为原木；阔叶树为桦木、柞木或青冈木。
b 、将原木截成长度为30厘米的木段，装袋；
c 、在原木的底部和表面放木屑培养料，扎口；
d 、在100℃下维持10小时，得到椴木培养基。
（3）椴木移栽：将发菌的椴木移植到红豆杉林中，包括以下步骤，
1 ）在红豆杉林间挖20cm深的沟，埋入发菌的椴木，椴木与椴木的间隙为5cm；
2 ）在椴木移栽处覆盖一层3cm的细砂，适当喷水，保持沙土湿润。
当灵芝栽培长成后进行灵芝采摘，灵芝采摘为当灵芝菌盖充分展开，菌盖呈现棕色时开始采摘。
具体为：当灵芝菌盖充分展开，边缘的浅白色或淡黄色基本消失，菌盖开始革质化，呈现棕色时，即可开始采摘；或者也可以让灵芝继续生长，灵芝会从菌盖边缘下部长出一圈新生带，生长发育后长出较大菌盖的灵芝。该灵芝可以生长多年，一般在生长5年后可得到品质更好地灵芝。灵芝采摘后阴干或50℃烘干保存。
由于红豆杉本身具有一定的防病虫害的功能，因此在红豆杉林中栽培的灵芝基本上不需要进行专门的病虫害防治工作。
本发明是将灵芝菌种接种到菌种培养基中，在培养室内培养后得到培育的灵芝菌种，再将培育的灵芝菌种接种在椴木培养基中，将接种的椴木培养基放于发菌室内培养后，得到发菌的椴木，再将发菌的椴木移植到红豆杉林中，由于红豆杉本身具有一定的防治病虫害能力，因此红豆杉林中栽培的灵芝基本上没有病虫害的威胁，具有病虫害较少的特点；因病虫害较少，进而最大限度地减少了农药化肥的使用，保证了灵芝食用的安全性；本发明中灵芝是在红豆杉林中自然生长，生长周期较长，品质较高，灵芝中的有效成分含量较高。本发明移植到人工种植的红豆杉林中，经过人工管理可以使红豆杉林的生长处于一种最适合灵芝栽培的状态，灵芝在规范的、整齐的红豆杉林中种植，种植后更容易管理，灵芝的产量能够得到保障，更适用于灵芝的规模化种植。