一种刺桐组织培养的快速繁殖方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 104285799 A (43)申请公布日 2015.01.21 CN 104285799 A (21)申请号 201410550345.4 (22)申请日 2014.10.17 A01H 4/00(2006.01) (71)申请人 南京帝道农业科技有限公司 地址 211225 江苏省南京市溧水区白马镇工 业集中区 (72)发明人 刘东锋 杨成东 (54) 发明名称 一种刺桐组织培养的快速繁殖方法 (57) 摘要 本发明研究了一种刺桐组织培养的快速繁殖 方法， 包括茎段的消毒、 腋芽的诱导、 丛生芽的增 殖、 生根诱导、 炼苗移栽等步骤。本发明可以控制 条件， 不受季。

2、节限制， 全年连续生产， 生长繁殖率 高， 并且保持原有的优良性状不变， 可以实现刺桐 优良无性系或单株迅速推广。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 (10)申请公布号 CN 104285799 A CN 104285799 A 1/1 页 2 1. 一种刺桐组织培养的快速繁殖方法， 包括茎段的消毒、 腋芽的诱导、 丛生芽的增殖、 生根诱导、 炼苗移栽， 其主要步骤如下 ： （1） 取刺桐的带芽茎段， 进行消毒处理 ； （2）将 步 骤 （1）消 毒 处 理 过 的 刺 桐 带 芽。

3、 茎 段 接 种 到 1/2Miller+0.1mg/L2， 4， 5-D+0.1mg/LIAA+1-2mg/L 谷胱甘肽的培养基中进行腋芽的诱导， 附加蔗糖 25g/L， 琼脂 9g/ L， 培养温度 26， 光照强度 2000lx， 光照时间 11h/d， pH5.8， 培养基采用 121、 1.1kp 进行 高压灭菌 15min ； （3） 取步骤 （2） 诱导出来的腋芽接入 Miller+0.5mg/LZT+0.1mg/LNAA+IAA0.1mg/L 培养 基中进行丛生芽的增殖， 培养条件同上 ； （4） 将步骤 （3） 培养出来的丛生芽接入培养基为 1/2Miller+1mg/LIB。

4、A+0.5mg/LIAA 进 行生根诱导， 附加蔗糖20g/L， 琼脂8g/L， 培养温度28， 光照强度7000lx， 光照时间15h/d， pH5.8， 培养基采用 121、 1.1kp 进行高压灭菌 15min ； （5） 将步骤 （4） 生根后的无菌苗进行野外炼苗移栽。 2. 按照权利要求 1 所述的一种刺桐组织培养的快速繁殖方法， 其特征在于 ： 步骤 （1） 中所述刺桐无菌茎段的获得为切取 3cm 的刺桐带芽茎段放入 500ml 磨口广口瓶中， 包上纱 布， 流水冲洗 30min， 在超净工作台上先用 50% 的 Bleach 水溶液消毒 4min， 之后迅速用无菌 水洗涤 3 次。

5、， 再用 0.2% 的升汞溶液灭菌 12min， 最后用无菌水洗涤 5 次。 3. 按照权利要求 1 所述的一种刺桐组织培养的快速繁殖方法， 其特征在于 ： 步骤 （2） 中刺桐的腋芽诱导培养基中附加 15-20mg/L 的夹竹桃霉素， 防止内生菌的生成。 4. 按照权利要求 1 所述的一种刺桐组织培养的快速繁殖方法， 其特征在于 ： 步骤中的 培养条件均采用人工光照， 封闭式。 5. 按照权利要求 1 所述的一种刺桐组织培养的快速繁殖方法， 其特征在于 ： 步骤 （5） 中刺桐的野外炼苗移栽的方法为揭开封口膜， 在培养室内放置 7d， 然后取出单苗洗净根上 附带的培养基， 把根浸入 800-。

6、1000 倍的多菌灵溶液消毒 3min， 栽植于草炭 ： 珍珠岩 =1:1 的 基质里， 栽植后 10d 内用塑料薄膜保湿， 以 1/4MS 营养液进行叶面喷洒。 权 利 要 求 书 CN 104285799 A 2 1/3 页 3 一种刺桐组织培养的快速繁殖方法 技术领域 0001 本发明涉及刺桐的组织培养， 属于生物技术领域。 背景技术 0002 刺桐，Erythrina variegata Linn.， 又称海桐、 山芙蓉、 空桐树、 木本象牙红， 豆 科， 落叶乔木， 高约 20m， 干皮灰色， 具圆锥形皮刺 ； 三出复叶互生， 小叶菱形或菱状卵形 ； 总 状花序， 花萼佛焰状暗红色，。

7、 花蝶形， 鲜红色， 花期 3 月 ； 荚果呈念珠状， 种子红色。此花原 产印度及马来西亚等地， 性强健， 萌发力强， 生长快， 开花时新梢可长达 1.5 米， 花序长达 50 厘米， 喜温暖湿润、 光照充足的环境， 耐旱也耐湿， 对土壤要求不严， 喜肥沃排水良好的砂壤 土， 不甚耐寒， 见于树旁或近海溪边。 树皮含生物碱下箴刺桐碱、 刺桐灵、 甜菜碱、 胆碱， 树皮 或根皮入药， 称海桐皮， 祛风湿， 舒筋通络， 治风湿麻木， 腰腿筋骨疼痛， 跌打损伤， 对横纹肌 有松弛作用， 对中枢神经有镇静作用。目前常用的繁殖方法为扦插， 扦插成活率偏低。 发明内容 0003 本发明所要解决的技术问题是。

8、刺桐组织培养的方法， 本发明可以控制条件， 不受 季节限制， 全年连续生产， 生长繁殖率高， 并且保持原有的优良性状不变， 可以实现优良无 性系或单株迅速推广。 0004 为解决上述技术问题， 本发明采用下列技术方案 ： 切取 3cm 的刺桐带芽茎段放入 500ml 磨口广口瓶中， 包上纱布， 流水冲洗 30min， 在 超净工作台上先用 50% 的 Bleach 水溶液消毒 4min， 之后迅速用无菌水洗涤 3 次， 再用 0.2% 的升汞溶液灭菌 12min， 最后用无菌水洗涤 5 次， 消毒处理过的刺桐带芽茎段接种到 1/2Miller+0.1mg/L2， 4， 5-D+0.1mg/LI。

9、AA+1-2mg/L 谷胱甘肽 +15-20mg/L 夹竹桃霉素的培 养基中进行腋芽的诱导， 附加蔗糖 25g/L， 琼脂 9g/L， 培养温度 26， 光照强度 2000lx， 光 照时间 11h/d， pH5.8， 培养基采用 121、 1.1kp 进行高压灭菌 15min， 诱导出来的腋芽接入 Miller+0.5mg/LZT+0.1mg/LNAA+IAA0.1mg/L 培养基中进行丛生芽的增殖， 培养出来的丛生 芽接入培养基为 1/2Miller+1mg/LIBA+0.5mg/LIAA 进行生根诱导， 附加蔗糖 20g/L， 琼脂 8g/L， 培养温度28， 光照强度7000lx， 光。

10、照时间15h/d， pH5.8， 培养基采用121、 1.1kp进 行高压灭菌 15min， 培养条件均采用人工光照， 封闭式， 试管苗长至 4cm， 根数为 3， 揭开封口 膜， 在培养室内放置 7d， 然后取出单苗洗净根上附带的培养基， 把根浸入 800-1000 倍的多 菌灵溶液消毒 3min， 栽植于草炭 ： 珍珠岩 =1:1 的基质里， 栽植后 10d 内用塑料薄膜保湿， 以 1/4MS 营养液进行叶面喷洒。 0005 采用本发明制备的刺桐成活率高， 操作简单无污染， 利于大规模种植。 0006 下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述， 但本发明要求保护的范围并不 局限于下列实施。

11、方式。 具体实施方式 说 明 书 CN 104285799 A 3 2/3 页 4 0007 实施例 1 切取 3cm 的刺桐带芽茎段放入 500ml 磨口广口瓶中， 包上纱布， 流水冲洗 30min， 在 超净工作台上先用 50% 的 Bleach 水溶液消毒 4min， 之后迅速用无菌水洗涤 3 次， 再用 0.2% 的升汞溶液灭菌 12min， 最后用无菌水洗涤 5 次， 消毒处理过的刺桐带芽茎段接种 到 1/2Miller+0.1mg/L2， 4， 5-D+0.1mg/LIAA+1mg/L 谷胱甘肽 +15mg/L 夹竹桃霉素的培养 基中进行腋芽的诱导， 附加蔗糖 25g/L， 琼脂 。

12、9g/L， 培养温度 26， 光照强度 2000lx， 光照 时间 11h/d， pH5.8， 培养基采用 121、 1.1kp 进行高压灭菌 15min， 诱导出来的腋芽接入 Miller+0.5mg/LZT+0.1mg/LNAA+IAA0.1mg/L 培养基中进行丛生芽的增殖， 培养出来的丛生 芽接入培养基为 1/2Miller+1mg/LIBA+0.5mg/LIAA 进行生根诱导， 附加蔗糖 20g/L， 琼脂 8g/L， 培养温度28， 光照强度7000lx， 光照时间15h/d， pH5.8， 培养基采用121、 1.1kp进 行高压灭菌 15min， 培养条件均采用人工光照， 封闭。

13、式， 试管苗长至 4cm， 根数为 3， 揭开封口 膜， 在培养室内放置 7d， 然后取出单苗洗净根上附带的培养基， 把根浸入 800 倍的多菌灵溶 液消毒 3min， 栽植于草炭 ： 珍珠岩 =1:1 的基质里， 栽植后 10d 内用塑料薄膜保湿， 以 1/4MS 营养液进行叶面喷洒， 成活率 88%。 0008 实施例 2 切取 3cm 的刺桐带芽茎段放入 500ml 磨口广口瓶中， 包上纱布， 流水冲洗 30min， 在 超净工作台上先用 50% 的 Bleach 水溶液消毒 4min， 之后迅速用无菌水洗涤 3 次， 再用 0.2% 的升汞溶液灭菌 12min， 最后用无菌水洗涤 5 。

14、次， 消毒处理过的刺桐带芽茎段接种 到 1/2Miller+0.1mg/L2， 4， 5-D+0.1mg/LIAA+2mg/L 谷胱甘肽 +20mg/L 夹竹桃霉素的培养 基中进行腋芽的诱导， 附加蔗糖 25g/L， 琼脂 9g/L， 培养温度 26， 光照强度 2000lx， 光照 时间 11h/d， pH5.8， 培养基采用 121、 1.1kp 进行高压灭菌 15min， 诱导出来的腋芽接入 Miller+0.5mg/LZT+0.1mg/LNAA+IAA0.1mg/L 培养基中进行丛生芽的增殖， 培养出来的丛生 芽接入培养基为 1/2Miller+1mg/LIBA+0.5mg/LIAA 。

15、进行生根诱导， 附加蔗糖 20g/L， 琼脂 8g/L， 培养温度 28， 光照强度 7000lx， 光照时间 15h/d， pH5.8， 培养基采用 121、 1.1kp 进行高压灭菌 15min， 培养条件均采用人工光照， 封闭式， 试管苗长至 4cm， 根数为 3， 揭开封 口膜， 在培养室内放置 7d， 然后取出单苗洗净根上附带的培养基， 把根浸入 1000 倍的多菌 灵溶液消毒 3min， 栽植于草炭 ： 珍珠岩 =1:1 的基质里， 栽植后 10d 内用塑料薄膜保湿， 以 1/4MS 营养液进行叶面喷洒， 成活率 92%。 0009 实施例 3 切取 3cm 的刺桐带芽茎段放入 5。

16、00ml 磨口广口瓶中， 包上纱布， 流水冲洗 30min， 在 超净工作台上先用 50% 的 Bleach 水溶液消毒 4min， 之后迅速用无菌水洗涤 3 次， 再用 0.2% 的升汞溶液灭菌 12min， 最后用无菌水洗涤 5 次， 消毒处理过的刺桐带芽茎段接种 到 1/2Miller+0.1mg/L2， 4， 5-D+0.1mg/LIAA+2mg/L 谷胱甘肽 +20mg/L 夹竹桃霉素的培养 基中进行腋芽的诱导， 附加蔗糖 25g/L， 琼脂 9g/L， 培养温度 26， 光照强度 2000lx， 光照 时间 11h/d， pH5.8， 培养基采用 121、 1.1kp 进行高压灭菌。

17、 15min， 诱导出来的腋芽接入 Miller+0.5mg/LZT+0.1mg/LNAA+IAA0.1mg/L 培养基中进行丛生芽的增殖， 培养出来的丛生 芽接入培养基为 1/2Miller+1mg/LIBA+0.5mg/LIAA 进行生根诱导， 附加蔗糖 20g/L， 琼脂 8g/L， 培养温度28， 光照强度7000lx， 光照时间15h/d， pH5.8， 培养基采用121、 1.1kp进 行高压灭菌 15min， 培养条件均采用人工光照， 封闭式， 试管苗长至 4cm， 根数为 3， 揭开封口 说 明 书 CN 104285799 A 4 3/3 页 5 膜， 在培养室内放置 7d， 然后取出单苗洗净根上附带的培养基， 把根浸入 800 倍的多菌灵溶 液消毒 3min， 栽植于草炭 ： 珍珠岩 =1:1 的基质里， 栽植后 10d 内用塑料薄膜保湿， 以 1/4MS 营养液进行叶面喷洒， 成活率 94%。 说 明 书 CN 104285799 A 5 。