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1、(10)申请公布号 CN 102524082 A (43)申请公布日 2012.07.04 CN 102524082 A *CN102524082A* (21)申请号 201210070367.1 (22)申请日 2012.03.17 A01H 4/00(2006.01) (71)申请人 常熟市尚湖农业生态园有限公司 地址 215500 江苏省苏州市常熟市尚湖朝阳 大桥堍 (72)发明人 李玉弟 (74)专利代理机构 苏州广正知识产权代理有限 公司 32234 代理人 张利强 (54) 发明名称 玉蝉花的纳米组织培养方法 (57) 摘要 本发明公开了一种玉蝉花的纳米组织培养方 法， 主要通过组。
2、织培养过程中初代培养、 继代培 养、 增殖培养、 生根培养添加了纳米助剂， 达到了 增殖速度快、 遗传性状稳定、 繁殖系数高、 试管苗 生长旺盛的优良效果， 玉蝉花的愈伤组织的萌动 率达到了98%， 增殖倍数达到了4.55倍， 生根率达 到了 100%， 而移栽成活率达到了 98%。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1 页 2 1. 一种玉蝉花的纳米组织培养方法， 其特征在于该方法包括下列步骤 ： （1） 外植体的选择 ： 在玉蝉花开花之前取花葶的茎段和分节点作为外植。
3、体 ； （2） 材料处理方法 ： 先用无菌水将外植体冲洗干净， 去除叶鞘， 切成具有 1-4 个腋芽、 长 3-5cm 段， 用 0.5g/L 的多菌灵溶液浸泡 2-3 个小时， 紫外灯照射 20 min， 再用 75% 乙醇消毒 30 秒钟， 用 0.1% 升汞水浸泡 20 分钟， 无菌水冲洗 5-6 次， 取出材料， 切成具有一个腋芽、 长 度为 1cm 左右的小段， 最后用 12% 次氯酸钠杀菌 30 秒， 无菌水冲洗 5-6 次 ； （3） 初代培养 ： 在无菌的条件下将步骤得到的外植体接种在初代培养基上， 该培养 基是在 MS 常规培养基中添加了 3.0mg/L 的 6-BA、 1.。
4、2mg/L 的 NAA, 30mg/L 的蔗糖， 5mg/ mL-20mg/mL纳米助剂， PH 5.9， 培养温度为24， 光照周期13h/d， 光强度为2100-2200lux， 待培养出的外植体带芽量长至 3 个时， 即开始下一个阶段 ； 所述的纳米助剂的制备方法为 ： 将海泡石、 蒙脱石粘土混合溶液在 0下搅拌活化 2 h， 加入十二烷基硫酸钠， 3104 r min 高剪切 3 h， 反应溶液冷却至室温后减压抽滤， 所 得沉淀在 105下干燥至恒重， 得到纳米助剂 ； （5） 生根培养 ： 将继代培养的高度超过 2.5cm 的新苗剪下接种在生根培养基上， 该培养 基是在 1/2MS 。
5、常规培养基中添加了 0.7mg/L 的 IAA、 0.5mg/L 的 NAA， 0.2mg/L 的 GA， 28mg/ L 的蔗糖， PH 5.9， 培养温度为 24， 光照周期 13h/d， 光强度为 2100-2200lux， 待新苗长至 2.3cm 左右时， 即开始下一个阶段 ； （6）炼苗移栽 ： 将长高至 10-15cm、 长根根的组培苗带瓶移至普通大棚内， 放置 1-3 天后打开瓶盖， 在 25-28， 湿度 70-80， 光强100-7900lx 条件下炼苗 3-5 天， 炼苗 完成后取出小苗洗净根部附着的培养基， 移栽到经消毒的重量比腐殖土草炭珍珠岩 =3 2 2 的混合基质中。
6、， 温度控制在 28， 前 5d 湿度控制在 90% 左右， 以后逐渐降低湿 度， 直至将移栽苗置于自然条件下。 权 利 要 求 书 CN 102524082 A 2 1/3 页 3 玉蝉花的纳米组织培养方法 技术领域 0001 本发明涉及的是玉蝉花的组织培养方法。 背景技术 0002 鸢尾属(Iris)为鸢尾科(Iridaceae)多年生草本植物,广泛分布于北温带,以中 国至中东 ( 古地中海 ) 为分化中心。中国鸢尾属资源非常丰富 , 尤其是主要分布在西南、 西北及东北地区的无髯鸢尾类群。鸢尾的生态适应性广 , 抗性较强 , 适宜在不同生境下栽 培 , 耐粗放管理 , 繁殖系数较高 , 特。
7、别适合荒山绿化、 水土保持、 盐碱地改良 , 而且具有很 高的观赏价值 , 根茎可药用 , 在初春和秋季霜后 , 还可以作为牛羊饲料 , 应用前景极其广 泛。国内对鸢尾的研究起步较晚 , 且以分类学研究为主 , 大多数种类仍处于尚未开发利用 的野生状态。 0003 玉蝉花 (I.ensata) 主要分布在日本、 朝鲜以及我国东北三省、 山东和浙江昌化等 地。花蓝紫色 , 花色艳丽 , 株形优美 , 是园林绿化和湿地修复的良种 , 也是繁育花菖蒲品 杂交种的重要种质资源 , 对该物种的保育研究也具有重要的实际意义。 0004 与其它根茎类鸢尾相同 , 玉蝉花兼备有性即种子和无性即分株两种繁殖方式。
8、， 然 而， 利用种子繁殖， 速度慢， 繁殖效率低， 且变异率高， 而利用分株繁殖则会导致分株苗生长 势越来越弱， 利用组培技术繁育玉蝉花的技术尚未有人研究， 优良品种的推广普及尚未完 成， 苗木供求矛盾日益加剧， 严重影响了玉蝉花的园林应用和推广。 发明内容 0005 本发明针对现有的不足提供了一种玉蝉花的育苗方法。 0006 本发明通过以下方法实现上述目的。 0007 玉蝉花的纳米组织培养方法， 其特征在于该方法包括下列步骤 ： （1） 外植体的选择 ： 在玉蝉花开花之前取花葶的茎段和分节点作为外植体 ； （2） 材料处理方法 ： 先用无菌水将外植体冲洗干净， 去除叶鞘， 切成具有 1-4。
9、 个腋芽、 长 3-5cm 段， 用 0.5g/L 的多菌灵溶液浸泡 2-3 个小时， 紫外灯照射 20 min， 再用 75% 乙醇消毒 30 秒钟， 用 0.1% 升汞水浸泡 20 分钟， 无菌水冲洗 5-6 次， 取出材料， 切成具有一个腋芽、 长 度为 1cm 左右的小段， 最后用 12% 次氯酸钠杀菌 30 秒， 无菌水冲洗 5-6 次 ； （3） 初代培养 ： 在无菌的条件下将步骤得到的外植体接种在初代培养基上， 该培养 基是在 MS 常规培养基中添加了 3.0mg/L 的 6-BA、 1.2mg/L 的 NAA, 30mg/L 的蔗糖， 5mg/ mL-20mg/mL纳米助剂， 。
10、PH 5.9， 培养温度为24， 光照周期13h/d， 光强度为2100-2200lux， 待培养出的外植体带芽量长至 3 个时， 即开始下一个阶段 ； 所述的纳米助剂的制备方法为 ： 将海泡石、 蒙脱石粘土混合溶液在 0下搅拌活化 2 h， 加入十二烷基硫酸钠， 3104 r min 高剪切 3 h， 反应溶液冷却至室温后减压抽滤， 所 得沉淀在 105下干燥至恒重， 得到纳米助剂。 0008 （5） 生根培养 ： 将继代培养的高度超过 2.5cm 的新苗剪下接种在生根培养基上， 说 明 书 CN 102524082 A 3 2/3 页 4 该培养基是在 1/2MS 常规培养基中添加了 0.。
11、7mg/L 的 IAA、 0.5mg/L 的 NAA， 0.2mg/L 的 GA， 28mg/L的蔗糖， PH 5.9， 培养温度为24， 光照周期13h/d， 光强度为2100-2200lux， 待新苗 长至 2.3cm 左右时， 即开始下一个阶段 ； （6）炼苗移栽 ： 将长高至 10-15cm、 长根根的组培苗带瓶移至普通大棚内， 放置 1-3 天后打开瓶盖， 在 25-28， 湿度 70-80， 光强100-7900lx 条件下炼苗 3-5 天， 炼苗 完成后取出小苗洗净根部附着的培养基， 移栽到经消毒的重量比腐殖土草炭珍珠岩 =3 2 2 的混合基质中， 温度控制在 28， 前 5d。
12、 湿度控制在 90% 左右， 以后逐渐降低湿 度， 直至将移栽苗置于自然条件下。 0009 有益效果 本发明对玉蝉花采用组织培养技术， 具有以下优点 ： 1、 本发明针对玉蝉花原产地的气候特点， 提高了组培过程中的光强度和并延长了光照 周期， 降低了培养温度， 从而使培养环境更接近其原生地的气候， 通过对初代培养基、 生根 培养基配方的精确筛选， 达到了增殖速度快、 遗传性状稳定、 繁殖系数高、 试管苗生长旺盛 的优良效果。 0010 2、 在炼苗移栽中通过逐渐提高光照强度， 并且在移栽过程中， 逐渐降低湿度、 严格 控制温度， 采用合适的基质配方， 最终提高了生根试管苗的成活率。 0011 。
13、3、 通过组织培养， 其繁殖系数高， 能周年繁殖， 适合工厂化育苗， 大大缩短了育种 的时间。 0012 4、 纳米助剂的添加， 纳米颗粒因为其所具有的巨大表面积会有利于细胞的吞噬吸 收， 颗粒的纳米尺度可能会通过促进细胞的吞噬吸收来影响细胞的生理活动。 同时， 粘土材 料中微量金属元素对植物的生长有一种类似于激素 （生长素和细胞分裂素） 的效应， 其对高 等植物具有促进其生长的功效。 具体实施方式 0013 下面结合实施例对本发明作进一步的说明， 下述各实施例仅用于说明本发明， 对 本发明并没有限制。 0014 玉蝉花的纳米组织培养方法， 其特征在于该方法包括下列步骤 ： （1） 外植体的选。
14、择 ： 在玉蝉花开花之前取花葶的茎段和分节点作为外植体 ； （2） 材料处理方法 ： 先用无菌水将外植体冲洗干净， 去除叶鞘， 切成具有 1-4 个腋芽、 长 3-5cm 段， 用 0.5g/L 的多菌灵溶液浸泡 2-3 个小时， 紫外灯照射 20 min， 再用 75% 乙醇消毒 30 秒钟， 用 0.1% 升汞水浸泡 20 分钟， 无菌水冲洗 5-6 次， 取出材料， 切成具有一个腋芽、 长 度为 1cm 左右的小段， 最后用 12% 次氯酸钠杀菌 30 秒， 无菌水冲洗 5-6 次 ； （3） 初代培养 ： 在无菌的条件下将步骤得到的外植体接种在初代培养基上， 该培养 基是在 MS 常规。
15、培养基中添加了 3.0mg/L 的 6-BA、 1.2mg/L 的 NAA, 30mg/L 的蔗糖， 5mg/ mL-20mg/mL纳米助剂， PH 5.9， 培养温度为24， 光照周期13h/d， 光强度为2100-2200lux， 待培养出的外植体带芽量长至 3 个时， 即开始下一个阶段 ； 所述的纳米助剂的制备方法为 ： 将海泡石、 蒙脱石粘土混合溶液在 0下搅拌活化 2 h， 加入十二烷基硫酸钠， 3104 r min 高剪切 3 h， 反应溶液冷却至室温后减压抽滤， 所 得沉淀在 105下干燥至恒重， 得到纳米助剂。 说 明 书 CN 102524082 A 4 3/3 页 5 00。
16、15 （5） 生根培养 ： 将继代培养的高度超过 2.5cm 的新苗剪下接种在生根培养基上， 该培养基是在 1/2MS 常规培养基中添加了 0.7mg/L 的 IAA、 0.5mg/L 的 NAA， 0.2mg/L 的 GA， 28mg/L的蔗糖， PH 5.9， 培养温度为24， 光照周期13h/d， 光强度为2100-2200lux， 待新苗 长至 2.3cm 左右时， 即开始下一个阶段 ； （6）炼苗移栽 ： 将长高至 10-15cm、 长根根的组培苗带瓶移至普通大棚内， 放置 1-3 天后打开瓶盖， 在 25-28， 湿度 70-80， 光强100-7900lx 条件下炼苗 3-5 天， 炼苗 完成后取出小苗洗净根部附着的培养基， 移栽到经消毒的重量比腐殖土草炭珍珠岩 =3 2 2 的混合基质中， 温度控制在 28， 前 5d 湿度控制在 90% 左右， 以后逐渐降低湿 度， 直至将移栽苗置于自然条件下。 0016 经过上述步骤的培养， 玉蝉花的愈伤组织的萌动率达到了 98%， 增殖倍数达到了 4.55 倍， 生根率达到了 100%， 而移栽成活率达到了 98%。 说 明 书 CN 102524082 A 5 。