高分子铕荧光探针及其制备方法、磺草酮农药检测试剂盒.pdf

本发明提供了一种高分子铕荧光探针及其制备方法、磺草酮农药检测试剂盒和一种磺草酮农药的检测方法。其中，本发明高分子铕荧光探针由如下方法制备：先制备铕多配位复合物，然后将所述铕多配位复合物在交联剂作用下发生分子印迹聚合反应。本发明高分子铕荧光探针对磺草酮具有抗干扰、高选择性、高灵敏度特点。本发明磺草酮农药检测试剂盒含有本发明高分子铕荧光探针，其中，该高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子被洗脱。本发明磺草酮农药的检测方法直接利用本发明磺草酮农药检测试剂盒进行检测。本发明磺草酮农药检测试剂盒和磺草酮农药的检测方法能快速实现对磺草酮进行检测，且灵敏度高，成本低。

权利要求书
1.  一种高分子铕荧光探针的制备方法，包括如下步骤：
将铕金属盐溶液与带不饱和双键的配位化合物、磺草酮农药进行反应，制备出铕多配位复合物；
将所述铕多配位复合物在交联剂作用下发生分子印迹聚合反应，生成高分子铕荧光探针。

2.  根据权利要求1所述的高分子铕荧光探针的制备方法，其特征在于，将所述铕金属盐与带不饱和双键的配位化合物、磺草酮农药进行反应方法如下：
向铕金属盐溶液中加入带不饱和双键的配位化合物和磺草酮农药，得到溶液A；其中，所述铕金属盐、带不饱和双键的配位化合物和磺草酮三者的摩尔比为1：(1～3)：(1～3)；
向所述溶液A中加入水后将混合液的pH调至8.0～10，搅拌直至所述混合液中出现絮状物，接着进行结晶处理，固液分离处理，得到铕多配位复合物。

3.  根据权利要求1或2所述的高分子铕荧光探针的制备方法，其特征在于：所述带不饱和双键的配位化合物选用邻苯二甲酸烯酯类化合物。

4.  根据权利要求1或2所述的高分子铕荧光探针的制备方法，其特征在于，所述分子印迹聚合反应的方法如下：
将所述铕多配位复合物与苯乙烯、二乙烯基苯交联剂混合溶解后，加入引发剂混合，得到半透明状溶液；其中，所述铕多配位复合物：苯乙烯：二乙烯基苯交联剂的摩尔比为1：(90～95)：(1～4)；
在无氧的环境中，将所述半透明状溶液于50～70℃下超声反应2～8小时，生成高分子铕荧光探针。

5.  一种高分子铕荧光探针，其特征在于：所述高分子铕荧光探针为根据权利要求1-4任一所述的高分子铕荧光探针的制备方法制备获得的高分子铕荧光探针。

6.  一种磺草酮农药检测试剂盒，包括聚合物酶联板和结合在所述聚合物酶联板上的高分子铕荧光探针，所述高分子铕荧光探针为权利要求5所述的高分子铕荧光探针，其中，所述高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子被洗脱。

7.  根据权利要求6所述的磺草酮农药检测试剂盒，其特征在于：所述高分子铕荧光探针结合在所述聚合物酶联板上的方法为：
将含有所述高分子铕荧光探针的溶液涂布在所述聚合物酶联板上后，经紫外光老化处理；
将经老化处理后的所述聚合物酶联板进行浸泡溶胀处理，采用浓度为0.1-1％的甲酸洗涤处理，洗脱除去高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子。

8.  根据权利要求6或7所述的磺草酮农药检测试剂盒，其特征在于：所述高分子铕荧光探针在聚合物酶联板上的单位面积含量为0.5～2.0mg/cm2。

9.  一种磺草酮农药的检测方法，包括如下步骤：
获取含有待测样品的溶液；
将如权利要求6-8任一所述的磺草酮农药检测试剂盒中含有高分子铕荧光探针的聚合物酶联板进行浸泡处理；
将所述含有待测样品的溶液加入经浸泡处理后的聚合物酶联板孔中进行震荡反应10-30min，然后对所述聚合物酶联板进行洗涤处理；
将经洗涤处理后的所述聚合物酶联板置于荧光酶标仪测定相应孔的荧光强度，从而得出磺草酮的量。

10.  根据权利要求9所述的一种磺草酮农药的检测方法，其特征在于：所述含有待测样品的溶液中待测样品的浓度为0.02-1.0μg/ml；且所述含有待测样品的溶液加入经浸泡处理后的聚合物酶联板孔中的体积为100-250ul；
所述测定相应孔的荧光强度检测条件是：激发波长为310nm，发射波长为615nm。

说明书高分子铕荧光探针及其制备方法、磺草酮农药检测试剂盒
技术领域
本发明属于农药残留检测技术领域，具体涉及一种高分子铕荧光探针及其制备方法、磺草酮农药检测试剂盒和磺草酮农药的一种检测方法。
背景技术
农药是当前农业生产中用于防治病、虫、杂草对农作物危害不可缺少的物质。农药的大面积使用也带来了严重的食品安全与环境问题，农药残留污染环境、污染农产品，影响农产品出口，引起人、畜中毒事故。我国蔬菜产业目前仍属于小农经济，生产规模不大，市场小而散，产销方式多为即采即售。因此，要有效防止“毒菜”流入市场，无疑需要很大的检测量，而建立既简便、快速又经济有效的样品前处理及检测方式是解决这一问题的关键。因此，为有效监测农药残留，发展高灵敏、高选择性、快速、可靠和低成本的检测技术具有十分重要的意义。
常用的农药残留快速检测技术有酶抑制法、免疫分析法等。酶抑制法测定样品和农药种类有限，目前只用于蔬菜、水果中有机磷和氨基甲酸酯类农药的残留检测，且不能给出定性和定量结果。免疫分析法具有简单、快速、灵敏度高、特异性强、检测费用低等优点，只需很少的仪器设备和专业培训，是农药残留快速筛查的好方法。但是，免疫分析是以抗体、酶等一些脆弱的生物活性物质作为分子识别单元，这些生物活性物质易失活，缺乏保存和操作的稳定性，操作条件苛刻、繁琐；其次，并非所有的农药分子都适用于免疫分析，一些没有特征结构的农药分子无法设计相应的半抗原；第三，抗体或标记抗体的制备 和纯化难度大，无法重复使用，因此免疫分析的成本依然较高。免疫分析的这些局限性在很大程度上限制了它们在农残快筛检测中的广泛应用。
在现有检测农药的残留农药化合物中，磺草酮是最为常见的一种农药之一。磺草酮为三酮类除草剂，主要用于防治玉米、甘蔗与小麦田杂草的广谱除草剂，具有稳定性强、兼容性好、除草效果佳等优点，已在许多国家得到广泛的应用。目前农药(磺草酮)残留分析的主要手段为基于色谱、质谱及色谱-质谱联用的大型精密仪器分析法，采用仪器分析法虽然方法灵敏度高、准确度好等优点，然而这些方法存在着样品处理步骤复杂繁琐，分析时间长，仪器设备昂贵、庞大，检测成本高，难以实现现场(在线)检测等问题，无法满足目前市场急需的经济、快速、简便的农药残留检测需求。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种磺草酮农药检测试剂盒和磺草酮农药的一种检测方法，旨在解决现有检测磺草酮农药残留方法存在的检测步骤繁琐，时间长，成本高，灵敏度不高等技术问题。
本发明的另一目的在于提供一种有对磺草酮农药具有特异识别和检测功能的高分子高子铕荧光探针及其制备方法。
为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：
一种高分子铕荧光探针的制备方法，包括如下步骤：
将铕金属盐溶液与带不饱和双键的配位化合物、磺草酮农药进行反应，制备出铕多配位复合物；
将所述铕多配位复合物在交联剂作用下发生分子印迹聚合反应，生成高分子铕荧光探针。
以及，一种高分子铕荧光探针，所述高分子铕荧光探针为上述的高分子铕荧光探针的制备方法制备获得的高分子铕荧光探针。
以及，一种磺草酮农药检测试剂盒，其包括聚合物酶联板和结合在所述聚 合物酶联板上的高分子铕荧光探针，所述高分子铕荧光探针为本发明高分子铕荧光探针，其中，所述高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子被洗脱。
以及，一种磺草酮农药的检测方法，包括如下步骤：
获取含有待测样品的溶液；
将如上述的磺草酮农药检测试剂盒中含有高分子铕荧光探针的聚合物酶联板进行浸泡处理2.0-8.0小时；
将所述含有待测样品的溶液加入经浸泡处理后的聚合物酶联板孔中进行震荡反应10-30min，然后对所述聚合物酶联板进行洗涤；
将经洗涤处理后的所述聚合物酶联板置于荧光酶标仪测定相应孔的荧光强度，从而得出磺草酮的量。
与现有技术相比，上述高分子铕荧光探针的制备方法将高度灵敏的铕荧光检测与分子印迹相结合，制备出的高分子铕荧光探针能够利用分子印迹技术的识别特性，完成对磺草酮的特异识别，其后将分析结果以荧光的形式表达出来，从而使得该高分子铕荧光探针对磺草酮具有抗干扰、高选择性、高灵敏度特点，同时Stokes位移大，发射线状光谱，荧光寿命长，荧光稳定。另外，其制备方法简单，制备的高分子铕荧光探针性能稳定。
上述磺草酮农药检测试剂盒由于含有上述的高分子铕荧光探针，且高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子被洗脱处理，因此，该高分子铕荧光探针中具有磺草酮结合位点，使得上述磺草酮农药检测试剂盒对磺草酮农药具有特异性，高选择性和抗干扰性，能够实现快速的检测磺草酮农药，且灵敏度高，成本低。
上述磺草酮农药的检测方法直接利用上述磺草酮农药检测试剂盒进行检测，因此，该方法能够实现对磺草酮农药快速、准确的检测，且检测灵敏度高，其方法简单，成本低。
附图说明
图1为本发明磺草酮检测方法实施例中配制的磺草酮浓度为0、20、40、 80、200的系列标准溶液采用含有实施例1制备的高分子铕荧光探针的磺草酮农药检测试剂盒进行荧光检测的含量与荧光强度关系图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图和实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明实例提供了一种将高度灵敏的铕荧光检测与分子印迹相结合的高分子铕荧光探针的制备方法。该方法包括如下步骤：
步骤S01.制备铕多配位复合物：
将铕金属盐溶液与带不饱和双键的配位化合物、磺草酮农药进行反应，制备出铕多配位复合物；
步骤S02.利用铕多配位复合物制备高分子铕荧光探针：
将所述铕多配位复合物在交联剂作用下发生分子印迹聚合反应，生成高分子铕荧光探针。
具体地，在上述步骤S01中，为了有效提高铕多配位复合物的得率和稳定性能，在一实施例中，铕金属盐与带不饱和双键的配位化合物、磺草酮农药进行反应方法如下：
步骤S011：向铕金属盐溶液中加入带不饱和双键的配位化合物和磺草酮农药，得到溶液A；
步骤S012：向所述溶液A中加入水后将混合液的pH调至8.0-10.0，搅拌直至所述混合液中出现絮状物，接着进行结晶处理，固液分离处理，得到铕多配位复合物。
其中，该步骤S011中，所述铕金属盐、带不饱和双键的配位化合物和磺草酮三者的摩尔比为1：(1-3)：(1-3)。在一具体实施例中，该铕金属盐、带不饱和双键的配位化合物和磺草酮三者的摩尔比为1：2：1。在另一实施例中，在 将三者混合物的过程中，先将铕金属盐与带不饱和双键的配位化合物进行混合均匀后，然后再加入磺草酮进行混料均匀。
在上述步骤S011中的各实施例的基础上，在一具体实施例中，该带不饱和双键的配位化合物选用邻苯二甲酸烯酯类化合物，在具体实施例中，该邻苯二甲酸烯酯类化合物为邻苯二甲酸二丙烯酯、邻苯二甲酸二乙烯酯中的至少一种。该选用的邻苯二甲酸烯酯类化合物含有不饱和双键，不仅能够与铕形成稳定的配位，而且能够参与聚合反应从而将铕探针固定。
在另一具体实施例中，该铕金属盐选用硝酸铕、氯化铕中的至少一种。该铕金属盐为上述各实施例中提供铕离子。
在另一具体实施例中，铕金属盐溶液的溶剂为甲醇、乙醇中的至少一种。
该步骤S012中，在一实施例中，向溶液A中加入水的量为在加水的混合溶液中的含量为20-40％。在一具体实施例中，该向溶液A中加入水的量为在加水的混合溶液中的含量为30％v/v。
当将加有水的混合溶液的pH调至8-10时，该反应物发生反应，生成絮状物。为了提高絮状物的得率，在一具体实施例中，该pH调至8.0。在一实施例中，调节该混合溶液的pH调可以用但不仅仅用氢氧化钠溶液。
为了使得该絮状的铕多配位复合物能有效的结晶，在一实施例中，该结晶在处理是将生成有絮状物的溶液直接在暗室中过夜，使得絮状物充分结晶。待充分结晶后，进行过滤，干燥处理即可得到结晶的铕多配位复合物。
上述步骤S02中，在交联剂作用下，铕多配位复合物单体发生分子印迹聚合反应，生成高分子铕荧光探针。为了提高分子印迹聚合反应的反应速率和提高高分子铕荧光探针的得率，在一实施例中，该分子印迹聚合反应的方法如下：
步骤S021.将上述步骤S012制备的铕多配位复合物与苯乙烯、二乙烯基苯交联剂混合溶解后，加入引发剂混合，得到半透明状溶液；
步骤S022.在无氧的环境中，将所述半透明状溶液于50-70℃下超声反应2～8小时，生成高分子铕荧光探针。
其中，步骤S021中，在一实施例中，该铕多配位复合物、苯乙烯、二乙烯基苯交联剂三者的摩尔比为1：(90-95)：(1-4)，在一具体实施例中，该铕多配位复合物、苯乙烯、二乙烯基苯交联剂三者的摩尔比为1：95：4。其中，苯乙烯在该反应过程中作为聚合溶剂，第一是用来溶解化合物，另外能够参与聚合形成粘稠液。
在另一实施例中，引发剂是引发相关单体发生聚合反应，以生成高分子铕荧光探针。针对单体，在一实施例中，该引发剂选用偶氮二乙丁腈、过氧化苯甲酰中的一种或两种以任意比例的混合物。另外，该引发剂的添加量可以按照常规引发剂的添加量进行添加。
该步骤S022中，无氧的环境可以是充满氮气的无氧环境，如向密闭容器中通入氮气，充分排出空气，从而营造一无氧环境。在该无氧环境中，将该步骤S011配制的半透明状溶液在50-70℃下进行超声聚合反应，从而生成高分子铕荧光探针。经该超声聚合反应反应后的溶液为粘稠液。在一具体实施例中，该聚合反应反应的温度为60℃。
在该聚合反应中，含有铕荧光探针的铕多配位复合物单体进行聚合反应，生成设计具有特异识别性的高分子铕荧光探针聚合物(Molecular Imprinting Polymers,MIPs)。由于该聚合物具有许多固定形状和大小的孔穴，孔穴内通常带有确定排列的结合位点，对印迹分子的立体结构具有记忆和识别功能。而含有的铕荧光探针具有Stokes位移大，发射线状光谱，荧光寿命长，荧光稳定，受外界影响小等优点，因此可以较好的消除复杂基质中的背景干扰。
因此，上述高分子铕荧光探针的制备方法将高度灵敏的铕荧光检测与分子印迹相结合，制备出的高分子铕荧光探针能够利用分子印迹技术的识别特性，完成对磺草酮的特异识别，其后将分析结果以荧光的形式表达出来，从而使得该高分子铕荧光探针对磺草酮具有抗干扰、高选择性、高灵敏度特点，同时Stokes位移大，发射线状光谱，荧光寿命长，荧光稳定。另外，其制备方法简单，制备的高分子铕荧光探针性能稳定。
相应地，在上文提供的高分子铕荧光探针的制备方法的基础上，本发明实施例还提供了一种由上文高分子铕荧光探针的制备方法制备获得的高分子铕荧光探针。因此，该高分子铕荧光探针将高度灵敏的荧光检测与分子印迹相结合的产物，探针具有对磺草酮特异识别性和高选择性，且荧光寿命长，荧光稳定。
相应地，在上文高分子铕荧光探针的基础上，本发明实施例还提供了一种磺草酮农药检测试剂盒。该磺草酮农药检测试剂盒包括聚合物酶联板和结合在所述聚合物酶联板上的高分子铕荧光探针。
其中，该高分子铕荧光探针为上文所述的高分子铕荧光探针，不同之处在于，在试剂盒中，该高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子被洗脱。该高分子铕荧光探针制备方法敬请参上上文关于高分子铕荧光探针制备方法，为了节约篇幅，在此不再赘述。
用于高分子铕荧光探针的载体聚合物酶联板可以选用试剂盒常用的聚合物酶联板，如在一具体实施例中，该聚合物酶联板选用96孔聚苯乙烯酶联板。
为了使得该被洗脱磺草酮模板分子的高分子铕荧光探针能够有效牢固的结合在载体聚合物酶联板上，在一实施例中，该所述高分子铕荧光探针结合在所述聚合物酶联板上的方法如下：
步骤a：将含有所述高分子铕荧光探针的溶液涂布在所述聚合物酶联板上后，经紫外光老化处理。
步骤b：将经老化处理的所述聚合物酶联板通过溶剂浸泡溶胀处理，采用浓度为0.1-1.0％的甲酸洗涤处理，洗脱除去高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子。
其中，步骤a中，高分子铕荧光探针的溶液可以直接是由步骤S022中超声聚合反应后的粘稠液。让然也可以是另外配制的其他适于涂布的含有高分子铕荧光探针的溶液。
为了使得该磺草酮农药检测试剂盒具有合适的检出限和较高的灵敏度，在一实施例中，上述高分子铕荧光探针在聚合物酶联板上的单位面积含量为0.5～ 2.0mg/cm2。
步骤b中，在一实施例中，对聚合物酶联板进行浸泡溶胀处理方法为：将经老化处理后的聚合物酶联板置于溶剂中进行震荡，使得高分子铕荧光探针充分溶胀。在一具体实施例中，当聚合物酶联板为聚苯乙烯酶联板时，将该聚苯乙烯酶联板置于甲醇溶液中进行震荡溶胀12小时。在进一步具体实施例中，该甲醇溶液的浓度可以是50％v/v。
对溶胀处理后的聚合物酶联板洗涤处理过程中，高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子被洗脱，从而在高分子铕荧光探针留下磺草酮的结合位点。为了有效除去该磺草酮模板分子，在一实施例中，该甲酸的体积浓度控制为0.1-1.0％，在一具体实施例中，该甲酸的体积浓度为1.0％。
上述磺草酮农药检测试剂盒由于含有上述的且磺草酮模板分子被洗脱的高分子铕荧光探针，因此，该磺草酮农药检测试剂盒对磺草酮农药具有特异性，高选择性和抗干扰性，能够实现快速的检测磺草酮农药，且灵敏度高，跟现有检测磺草酮方法相比，成本显著降低。另外，通过对被洗脱的高分子铕荧光探针在聚合物酶联板上的结合量的控制，使得本磺草酮农药检测试剂盒对磺草酮的检出限达到20ppb(20μg/L)。
相应地，在上文提供磺草酮农药检测试剂盒的基础上，本发明实施例还提供了一种磺草酮农药的检测方法，包括如下步骤：
步骤S03.获取含有待测样品的溶液；
步骤S04.将上文所述的磺草酮农药检测试剂盒中含有高分子铕荧光探针的聚合物酶联板进行浸泡处理；
步骤S05.将所述含有待测样品的溶液加入经浸泡处理后的聚合物酶联板孔中进行震荡反应10-30min，然后对所述聚合物酶联板进行洗涤；
步骤S06.将经洗涤处理后的所述聚合物酶联板置于荧光酶标仪测定相应孔的荧光强度，从而得出磺草酮的量。
具体地，上述步骤S03中，获取含有待测样品的溶液的方法是按照常规对 样品进行前处理后所配制的待测溶液。在一具体实施例中，该溶液的溶剂选用NH4Ac。
在一实施例中，该含有待测样品的溶液中的待测样品的浓度为0.02-1.0μg/mL，如在一具体实施例中，该待测样品的NH4Ac溶液的浓度为10-50mmol/L。
上述步骤S05中，当待测样品中含有磺草酮时，该磺草酮会与高分子铕荧光探针留下磺草酮的结合位点结合，使得铕的配位发生变化，发出特异性的荧光，进而将结果表达出来，达到对磺草酮识别检测的目的。
因此，为了使得待测样品与高分子铕荧光探针充分反应的基础上缩短检测时间，在一实施例中，该震荡反应30min。
在另一实施例中，当含有待测样品的NH4Ac溶液中待测样品的浓度为0.02-1.0μg/ml时，所述含有待测样品的NH4Ac溶液加入经NH4Ac溶液浸泡处理后的聚合物酶联板孔中的体积为100-200ul。在一具体实施例中，含有待测样品的NH4Ac溶液加入聚合物酶联板孔中的体积为250ul。当聚合物酶联板为上文所述的96孔聚苯乙烯酶联板时，向聚苯乙烯酶联板的每一孔中加入250ul含有待测样品溶液。这样可以同时进行多种样品或对同一样品同时进行多次重复检测。
待待测样品与高分子铕荧光探针反应完毕后对聚合物酶联板进行洗涤处理可以直接采用溶解待测样品的溶剂。通过洗涤处理，充分除去反应后的含有待测样品溶液。
上述步骤S06中，在测定相应孔的荧光强度时，在一实施例中，设定测定相应孔的荧光强度检测条件是：激发波长为310nm，发射波长为615nm。
上述磺草酮农药的检测方法直接利用上述磺草酮农药检测试剂盒进行检测，因此，该方法能够实现对磺草酮农药快速、准确的检测，且检测灵敏度高，其方法简单，成本低。
以下通过多个实施例来举例说明上述高分子铕荧光探针及其制备方法、磺 草酮农药检测试剂盒和磺草酮农药的一种检测方法。
实施例1
一种高分子铕荧光探针及其制备方法。该高分子铕荧光探针的制备方法如包括如下步骤：
S11.制备铕配位复合物：
S111.将硝酸铕溶于甲醇中，往硝酸铕溶液中加入2倍量的邻苯二甲酸二丙烯酯，搅拌混匀后再加入1倍量的磺草酮农药，得到澄清溶液A；
S112.向澄清溶液A加入水并使水的含量在30％，用0.05mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液A的pH值为8.0，之后搅拌此混合溶液5～24小时，至有絮状物出现；
S113.然后将S112中反应器盖上玻璃盖置于暗室中，过夜结晶；过滤并干燥结晶得到制备分子探针用的配位复合物；
S12.铕高分子探针制备：
S121.将3mol％上述配位复合物置于反应器中，加入95mol％苯乙烯、2mol％二乙烯基苯交联剂，待配位复合物完全溶解后，加入1mol％的过氧化苯甲酰，搅拌均匀得到半透明状溶液；
S122.密封S121中反应器，通氮气10分钟，去除氧气，得到待反应溶液B；
S123.上述溶液B置于60℃水浴槽中，超声反应2～8小时，直到溶液变为粘稠液，即为含有对磺草酮农药具有特异识别和检测功能的高分子铕荧光探针的粘稠液。
实施例2
一种高分子铕荧光探针及其制备方法。该高分子铕荧光探针的制备方法如下：
S21.制备铕配位复合物：
S211.将氯化铕溶于甲醇中，往氯化铕溶液中加入2倍量的邻苯二甲酸二 乙烯酯，搅拌混匀后再加入2倍量的磺草酮农药，得到澄清溶液A；
S212.向澄清溶液A加入水并使水的含量在40％，用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液A的pH值为9.0，之后搅拌此混合溶液5～24小时，至有絮状物出现；
S213.然后将S212中反应器盖上玻璃盖置于暗室中，过夜结晶；过滤并干燥结晶得到制备分子探针用的配位复合物；
S22.铕高分子探针制备：
S221.将1mol％上述配位复合物置于反应器中，加入95mol％苯乙烯、4mol％二乙烯基苯交联剂，待配位复合物完全溶解后，加入1mol％的偶氮二乙丁腈，搅拌均匀得到半透明状溶液；
S222.密封S221中反应器，通氮气10分钟，去除氧气，得到待反应溶液B；
S223.上述溶液B置于65℃水浴槽中，超声反应2～8小时，直到溶液变为粘稠液，即为含有对磺草酮农药具有特异识别和检测功能的高分子铕荧光探针的粘稠液。
实施例3
一种高分子铕荧光探针及其制备方法。该高分子铕荧光探针的制备方法如下：
一种高分子铕荧光探针及其制备方法。该高分子铕荧光探针的制备方法如包括如下步骤：
S31.制备铕配位复合物：
S311.将硝酸铕溶于甲醇中，往硝酸铕溶液中加入1倍量的邻苯二甲酸二丙烯酯，搅拌混匀后再加入1倍量的磺草酮农药，得到澄清溶液A；
S312.向澄清溶液A加入水并使水的含量在20％，用0.05mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液A的pH值为10.0，之后搅拌此混合溶液5～24小时，至有絮状物出现；
S313.然后将S312中反应器盖上玻璃盖置于暗室中，过夜结晶；过滤并干燥结晶得到制备分子探针用的配位复合物；
S32.铕高分子探针制备：
S321.将3mol％上述配位复合物置于反应器中，加入90mol％苯乙烯、1mol％二乙烯基苯交联剂，待配位复合物完全溶解后，加入1mol％的过氧化苯甲酰，搅拌均匀得到半透明状溶液；
S322.密封S321中反应器，通氮气10分钟，去除氧气，得到待反应溶液B；
S323.上述溶液B置于50℃水浴槽中，超声反应8小时，直到溶液变为粘稠液，即为含有对磺草酮农药具有特异识别和检测功能的高分子铕荧光探针的粘稠液。
实施例4
一种高分子铕荧光探针及其制备方法。该高分子铕荧光探针的制备方法如下：
一种高分子铕荧光探针及其制备方法。该高分子铕荧光探针的制备方法如包括如下步骤：
S41.制备铕配位复合物：
S411.将硝酸铕溶于甲醇中，往硝酸铕溶液中加入3倍量的邻苯二甲酸二乙烯酯，搅拌混匀后再加入3倍量的磺草酮农药，得到澄清溶液A；
S412.向澄清溶液A加入水并使水的含量在40％，用0.05mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液A的pH值为9.0，之后搅拌此混合溶液5～24小时，至有絮状物出现；
S413.然后将S412中反应器盖上玻璃盖置于暗室中，过夜结晶；过滤并干燥结晶得到制备分子探针用的配位复合物；
S42.铕高分子探针制备：
S421.将3mol％上述配位复合物置于反应器中，加入95mol％苯乙烯、 4mol％二乙烯基苯交联剂，待配位复合物完全溶解后，加入3mol％的过氧化苯甲酰，搅拌均匀得到半透明状溶液；
S422.密封S421中反应器，通氮气20分钟，去除氧气，得到待反应溶液B；
S423.上述溶液B置于70℃水浴槽中，超声反应2小时，直到溶液变为粘稠液，即为含有对磺草酮农药具有特异识别和检测功能的高分子铕荧光探针的粘稠液。
磺草酮农药检测试剂盒实施例
一种磺草酮农药检测试剂盒。该磺草酮农药检测试剂盒包括96孔聚苯乙烯酶联板和结合在所述96孔聚苯乙烯酶联板上的高分子铕荧光探针，所述高分子铕荧光探针为实施例1制备的含有高分子铕荧光探针的粘稠液，其中，所述高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子被洗脱。
其中，高分子铕荧光探针结合在所述聚合物酶联板上的方法如下：
(1).将实施例1制备的含有高分子铕荧光探针的粘稠液直接涂布在96孔聚苯乙烯酶联板上，在紫外灯下老化10小时，待粘稠液硬化变为固态，即得到涂布有对磺草酮农药具有特异识别和检测功能的高分子铕荧光探针的96孔聚苯乙烯酶联板；其中，控制该高分子铕荧光探针在聚合物酶联板上的单位面积含量为1.1mg/cm2。
(2).将步骤(1)获得的涂布有高分子铕荧光探针的96孔聚苯乙烯酶联板浸泡在50％甲醇水中，振荡、溶胀12小时后用1.0％的甲酸溶液振荡洗涤，去除磺草酮模板分子，得到不含磺草酮模板分子的酶联板，干燥后装入试剂盒。
另外，按照上述方法，将实施例2-4的含有高分子铕荧光探针的粘稠液分别涂覆在96孔聚苯乙烯酶联板表面，经紫外光固化后进行浸泡处理，控制该高分子铕荧光探针在聚合物酶联板上的单位面积含量为0.5～2.0mg/cm2。
磺草酮检测方法实施例
一种磺草酮检测方法，包括如下步骤：
(1)标准磺草酮样品溶液和待测样品溶液的配制：用20mM的NH4Ac溶液配制磺草酮浓度为0、20、40、80、200(μg/L)的系列标准溶液；；待测样品采用NH4Ac配制1.0μg/ml的NH4Ac溶液；
(2)将上述磺草酮农药检测试剂盒实施例提供的磺草酮农药检测试剂盒用20mmol/L的NH4Ac溶液浸泡2h；
(3)弃去浸泡液，分别向96孔聚苯乙烯酶联板的孔中加入250ul用步骤(1)配制的20mmol/L的NH4Ac溶解的标准磺草酮样品溶液和待测样品溶液，振荡30min；
(4)弃去待测液，以100μL的20mmol/L的NH4Ac溶液清洗2次；
(5)将酶联板置于荧光酶标仪，以310nm激发波长，615nm发射波长分别测定各孔的荧光强度。
检测结果，如图1所述，磺草酮浓度为0、20、40、80、200μg/L的系列标准溶液采用含有实施例1制备的高分子铕荧光探针的磺草酮农药检测试剂盒所测得的荧光强度之间具有良好的线性关系，其R高达0.9935。将待测样品的荧光值按照图1中标准曲线进行计算，得到待测样品中的磺草酮含量。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包括在本发明的保护范围之内。