测定血液和尿液中苯丙胺类、氯胺酮、哌替啶和美沙酮的方法技术领域
本发明属分析化学领域，具体涉及一种测定血液和尿液中苯丙胺类、氯胺酮、
哌替啶和美沙酮的方法。本方法可简便快速测定血液和尿液中4种苯丙胺类(苯
丙胺、甲基苯丙胺、亚甲基二氧苯丙胺、亚甲基二氧甲基苯丙胺)氯胺酮、哌替
啶和美沙酮等化合物，尤其适用于司法鉴定领域。
背景技术
据资料显示，目前被广泛滥用的毒品包括4种苯丙胺类化合物(苯丙胺
(amphetamine,AMP)、甲基苯丙胺(methamphetamine,MAMP)、亚甲基二氧苯
丙胺(methylenedioxyamphetamine,MDA)、亚甲基二氧甲基苯丙胺
(methylenedioxymethamphetamine,MDMA)，以及氯胺酮和哌替啶。
研究显示，AMP和MAMP其毒性主要以中枢神经系统兴奋作用为主；MDA、
MDMA兼具兴奋和致幻作用，是被称为“摇头丸”毒品的主要成分。氯胺酮又
被称作“K粉”，有致幻作用，长期使用或过量使用会对脑部造成永久损害；哌
替啶又名度冷丁，是临床常用的镇痛剂，长期使用会产生依赖性，在我国被列为
严格管制的毒品；美沙酮因其药理作用与吗啡相似，戒断症状较轻，为海洛因等
阿片类毒品依赖进行替代递减法戒毒治疗的首选药物，因此在涉毒案例的鉴定中
有着较高的检出率。
司法鉴定实践显示，血液和尿液是毒品鉴定中最为重要的生物检材；其中，
尿液中毒品的浓度高，因此，尿液是毒品定性分析常用检材；血液是毒品定量分
析常用的检材，所得的定量数值可为与文献报道的中毒浓度或致死浓度相比较。
现有技术公开的测定血液和尿液中苯丙胺类、氯胺酮、哌替啶、美沙酮的
方法通常有酶联免疫法、气相色谱－质谱联用法、液相色谱－质谱联用法等。实
践显示，所述的酶联免疫法专属性较差，难以区分结构类似物，常出现假阳性的
情况，因而，只能作为一种初筛的手段，需要进一步采用气相色谱－质谱联用法
或液相色谱－质谱联用法进行确证，且在将生物样品进行气相色谱－质谱联用法
或液相色谱－质谱联用法进行分析之前，均需要对样品进行提取和纯化，而该步
骤涉及将提取液挥干的过程，因此常产生并经研究表明，AMP和MAMP随着提
取液的挥干而快速挥发，影响分析的重现性及标准曲线的线性，造成生物检材中
所述被检物质难以准确定量的缺陷。有研究人员通过加酸或使用低温条件下对样
品进行挥干或通过衍生化操作以期避免AMP和MAMP的挥发，但所采用的方
法繁琐而耗时，仍难以满足司法鉴定对于毒品分析快速的要求。
本申请的发明人针对目前现状，拟提供一种简便、快速而准确的能同时测定
血液和尿液中4种苯丙胺类(苯丙胺、甲基苯丙胺、亚甲基二氧苯丙胺、亚甲基
二氧甲基苯丙胺)、氯胺酮、哌替啶、美沙酮含量的方法。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种测定血液和尿液中苯丙胺
类、氯胺酮、哌替啶和美沙酮的方法；尤其是一种简便、快速而准确的能同时测
定血液和尿液中4种苯丙胺类(苯丙胺、甲基苯丙胺、亚甲基二氧苯丙胺、亚甲
基二氧甲基苯丙胺)、氯胺酮、哌替啶、美沙酮含量的方法。本方法能满足司法
鉴定对于毒品分析快速的要求。
具体的，本发明方法采用气相色谱－质谱联用法对血液和尿液中4种苯丙胺
类、氯胺酮、哌替啶、美沙酮进行定性和定量分析。本方法中，对少量血液和尿
液(0.2-1mL)经过碱化处理后，加入少量有机溶剂(1－氯丁烷，100-300μL)
进行液液萃取，转移上层萃取液直接采用气相色谱－质谱联用法进行测定(进样
量2μL)，即可测定被检物质的含量。
本发明方法样品的前处理过程简便、快速、易于推广；本发明采用HP-5MS
毛细气相色谱柱以及质谱检测器，测定血液和尿液中4种苯丙胺类、氯胺酮、哌
替啶、美沙酮的含量，检测的灵敏度高、准确度好。
更具体的，本发明的测定血液和尿液中苯丙胺类、氯胺酮、哌替啶和美沙酮
的方法，其特征在于，提取液直接采用气相色谱－质谱联用法进行测定，包括下
述步骤：
(1)对血液或尿液样品预处理
取血液或尿液检材，加入内标，加入10％NaOH溶液将检材调至强碱性，
再加入1-氯丁烷，涡旋混合2min，10000rpm离心5min，转移上层有机相；
(2)采用气相色谱－质谱联用法测定血液或尿液检材中4种苯丙胺类、氯
胺酮、哌替啶和美沙酮的浓度；色谱柱为HP-5MS毛细管柱。
本发明中，只需取少量血液或尿液检材样品进行预处理，本发明的实施例中
取0.2-1mL的血液或尿液检材样品进行预处理；
本发明中，在血液或尿液检材样品中加入内标MAMP-D5，本发明的实施例
中在血液或尿液检材样品中加入内标MAMP-D50.2-1μg，再加入10％NaOH
溶液将检材调至强碱性；
本发明中，血液和尿液样品预处理操作中使用1－氯丁烷作为提取溶剂，不
涉及提取液的挥干过程，本发明的实施例中加入1-氯丁烷100-300μL，涡旋混合
2min，10000rpm离心5min，转移上层有机相；
本发明中，加入1-氯丁烷后，不涉及提取液的挥干过程，将提取液直接进样
气相色谱－质谱联用仪进行检测；
本发明中，采用的色谱柱为HP-5MS毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)，
进样量2μL。
本发明对血液和尿液中4种苯丙胺类、氯胺酮、哌替啶、美沙酮进行了定
性和定量分析，结果准确、可靠；各化合物检测限均为5ng/mL，定量限为20
ng/mL，线性范围0.02～25μg/mL，线性相关系数r值均大于0.99。对于血液样
品，提取回收率在33.7-80.5％范围内，准确度在87.1-113.9％范围内，批内精密
度的RSD值不超过10.2％，批间精密度的RSD值不超过12.1％；对于尿液样品，
提取回收率在64.6-112.6％范围内，准确度在85.1-108.4％范围内，批内精密度的
RSD值不超过6.3％，批间精密度的RSD值不超过11.5％。
表1为检测目标物的色谱保留时间和质谱特征峰。
表1
本发明方法与现有技术的方法比较具有以下明显优势：
(1)与酶联免疫法相比，本发明方法的灵敏度高，各化合物的检测限可达
到5ng/mL，而酶联免疫法的检测限为300-1000ng/mL。而对于毒品的检测，
国际上通行的做法是先用酶联免疫法进行初筛，再用气相色谱－质谱联用法或液
相色谱－质谱联用法进行确证，因而本发明方法的灵敏度足以满足司法鉴定工作
中实际检案的需要。
(2)与现有技术的气相色谱－质谱联用法或液相色谱－质谱联用法相比，
本发明方法极大地简化了样品的前处理步骤；现有技术的方法均需将样品的提取
液吹干的过程，耗时较长(超过30min)，且难以避免2种重要的苯丙胺类物质
(AMP和MAMP)随着提取液的挥发而损失，进行影响分析的重现性及标准曲
线的线性，造成生物检材中这2种物质难以准确定量；虽有研究人员通过加酸或
使用低温条件下对样品进行挥干或通过衍生化操作以期避免AMP和MAMP的
挥发，但这些方法繁琐而耗时，难以满足司法鉴定对于毒品分析快速的要求；本
发明方法样品前处理的步骤避免了吹干的过程，不需其他样品处理步骤，保证了
标准曲线的线性，确保定量结果的准确性；同时简便、快速(样品前处理时间为
10min以内)，能显著地提高毒品鉴定的效率。
(3)本发明方法使用的全血样品量少(可低至0.2mL，现有技术为0.95-2
mL)，能够应对法医案件中检材量通常非常有限的情况。
(4)本发明方法使用的有机溶剂用量少(100-300μL，现有技术为1.5-5mL)，
对操作人员的身体健康危害小，对环境比较友好，可节约分析成本。
附图说明
图1是4种苯丙胺类、氯胺酮、哌替啶、美沙酮的标准色谱图，
其中，AMP(3.6min),MAMP(4.0min),MDA(5.8min),MDMA(6.1min)，哌
替啶(7.2min)，氯胺酮(7.7min)及美沙酮(8.8min)及内标物MAMP-D5(4.0
min)。
具体实施方式
实施例1
采用的色谱条件：
色谱柱：HP-5MS弹性石英毛细管气相色谱柱，30m×0.25mm×0.25μm
柱温：100℃(1.5min)—25℃/min—280℃(15min)
溶剂延迟时间：3min
进样口/传输线温度：250℃/280℃
载气：高纯He，恒流1mL/min
EI源电子能量：70Ev
扫描方式：选择离子监测(SIM)
进样量：2μL
检测目标物的色谱保留时间和质谱特征峰：如表1所示。
样品制备：
(1)血液检材的提取
取血液检材0.2-1mL，加入内标(MAMP-D5)0.2-1μg，加入10％NaOH
溶液0.05mL混匀，再加入1-氯丁烷100-300μL，涡旋混合2min，10000rpm
离心5min，转移上层有机相50-100μL供GC-MS分析；
(2)尿液检材的提取
取尿液检材0.2-1mL，加入内标(MAMP-D5)0.2-1μg，采用10％NaOH
溶液调至pH>11，再加入1-氯丁烷100-300μL，涡旋混合2min，10000rpm离心
5min，转移上层有机相50-100μL供GC-MS分析；
线性试验：
取混合标准系列工作液，加入空白全血和尿液，涡旋混匀，配成含待测物浓
度分别为0.02、0.05、0.1、0.5、1、5、10、25μg/ml的标准含药血浆和尿液,
按“样品处理”项下操作，制备标准曲线，并同时制备空白样品，记录色谱图；
以待测物浓度为横坐标，待测物与内标的峰面积比值为纵坐标，用加权(W＝1/x2)
最小二乘法进行回归运算，绘制标准曲线；
精密度和准确度试验：
取混合标准低、中、高质控工作液，加入空白全血和尿液，涡旋混匀，配成
含待测物浓度分别为0.05,1,20μg/mL的含药全血和尿液；每批每个浓度配
制5份，共做3批；按“样品处理”项下操作；根据每批线性回归方程计算其实
测浓度，计算每个浓度的准确度、批内和批间精密度，精密度以相对标准偏差
(RSD)表示；
回收率试验：
取低、中、高浓度混合标准质控工作液配制成含待测物浓度分别为0.05,1,
20μg/mL的含药全血和尿液各5份，按“样品制备”项下操作，记录样品及内
标峰面积AS1、AS2及AIS1；(取一批精密度数据计算)另以空白全血或尿液按
“样品制备”项下操作所得空白基质液，加入混合标准工作液，配制3个相同浓
度的对照溶液，每个浓度平行配制3份，记录样品及内标峰面积并计算均值AS3、
AS4及AIS2，以AS1/AS3×100％、AS2/AS4×100％和AIS1/AIS2×100％计算回收
率。
结果显示，本发明方法样品的前处理过程简便、快速，且需样品量少，使用
的有机溶剂用量少；采用HP-5MS毛细气相色谱柱以及质谱检测器，测定血液和
尿液中4种苯丙胺类、氯胺酮、哌替啶、美沙酮的含量，检测简便、快速，灵敏
度高、准确度好，能显著地提高毒品鉴定的效率。
表2是人全血中待测物的批内和批间精密度、准确度及提取回收率的数据。
表3是人尿液中待测物的批内和批间精密度、准确度及提取回收率的数据。
表2
表3