一种油菜两型系不育系Y42AB种子纯度检测方法.pdf

本发明公开了一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，通过在0.5%盐浓度胁迫条件下，将两系不育系Y4-2AB种子在实验室培育幼苗，出苗后至3-4叶期，观察记载幼苗生长情况，出现不发苗或者发苗后连续出现叶尖发生卷曲、叶片出现萎焉、生长减缓症状的、说明不耐盐即为杂株；而在盐=浓度胁迫条件下生长正常的，说明耐盐即为Y4-2AB，从而计算出Y4-2AB种子纯度。该检测方法通过幼苗形态鉴定与Y4-2AB固有的高耐盐性结合起来检测种子纯度，也可以用于鉴定耐盐性较好的其他油菜两型系不育系种子纯度的鉴定，具有准确、快捷、简单实用、省时省工的优点。

1.一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1浸种催芽；S2沙培基质准备；S3盐胁迫培育幼苗；S4幼苗生长观察记载；S5计算受检样品纯度。2.根据权利要求1所述的一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，其特征在于，所述步骤S1具体按照以下方式实施：选择籽粒饱满、整齐一致、无破损、无霉病的Y4-2AB种子，将选取的种子用0.1%Hgcl消毒10min，然后用蒸馏水冲洗4-5次，之后浸种、催芽，直至种子破胸、露白即可。3.根据权利要求2所述的一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，其特征在于，所述步骤S2具体按照以下方式实施：将大小均匀且消毒后的细沙装在培养皿/箱中，使细沙高度为1.5～2.0cm；之后往培养皿中加入配制好的浓度为0.5%盐溶液至细沙湿润、种子萌发即可，3次重复，每个重复能够播种所选种子的三分之一；每个重复要根据培养皿/箱的大小可以设置多个培养皿。4.根据权利要求3所述的一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，其特征在于，所述浓度为0.5%盐溶液由5gNacl溶解于1000ml的蒸馏水配制而成。5.根据权利要求3所述的一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，其特征在于，所述步骤S3具体按照以下方式实施：将破胸露白的Y4-2AB种子均匀播种在培养皿内的沙培基质上，然后用消毒过的细沙进行覆盖，不露种即可；将播种后培养皿/箱放置在人工气候箱中，温度保持28～30℃，湿度保持70～75%；3～5d后培养皿/箱中保持0.5%盐浓度的薄水层，同时每12h更换一次0.5%盐溶液。6.根据权利要求5所述的一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，其特征在于，所述步骤S4具体按照以下方式实施：连续观察记载出苗后至3～4叶期的Y4-2AB的幼苗生长情况，统计连续出现叶尖发生卷曲、叶片出现萎蔫、生长减缓症状的幼苗数量，而在盐胁迫条件下生长正常的秧苗数量，所述3～4叶期播种后15d。7.根据权利要求6所述的一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，其特征在于，所述步骤S5具体按照以下方式实施：受检样品纯度为3次重复平均值，即为Y4-2AB实际纯度；所述受检样品纯度计算公式是如下：受检样品纯度(%)=(供检样品幼苗总株数-非本品种幼苗株数)∕供检样品幼苗总株数×100。

一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法

【技术领域】

本发明涉及一种种子纯度检测方法，具体涉及一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法。

【背景技术】

油菜是世界上分布最广，种植历史悠久的重要油料作物之一，是继水稻、小麦、玉米之后的第四大作物。目前，我国油菜常年种植面积和总产约占世界的三分之一，是世界上最大的油菜生产国。油菜杂种优势利用是提高油菜产量的最有效途径，现阶段杂种优势利用的途径主要有以下几种：（1）油菜细胞核雄性不育；（2）油菜细胞质雄性不育；（3）自交不亲和；（4）油菜化学杀雄等方法，通过这些方法先后育出了很多油菜新品种，这些油菜品种的推广和应用，极大地提高了油菜生产单产水平。油菜种子纯度检测就成为一项重要内容。

种子纯度是评价油菜种子质量以及油菜种子质量分级的一项重要指标，国家标准要求杂交种子纯度必须达到85%以上才可以销售，而种子纯度的高低又对作物产量及产品品质有较大的影响。据研究，杂交油菜种子纯度每降低1个百分点，产量则降低0.3%~0.4%，如果优质种子种混有优质种子，可降低油菜籽的品质。目前，鉴定油菜种子纯度的方法有籽粒形态鉴定法，幼苗形态鉴定法，田间种植鉴定法以及同工酶鉴定法，蛋白质鉴定法和RAPD，AFLP，SSR等方法。然而这种坚定方法或多或少存在一些不足，例如：籽粒形态鉴定法和幼苗形态鉴定法要求品种有比较典型的籽粒特征或农艺性状表现，并且还要求检验人员要有十分丰富的经验。否则，鉴定的准确程度就会受到限制，可靠性差。田间种植鉴定标准可靠，但要占用较多的人力、物力和财力，检验周期长，一般需要一个生长季节，且不能满足生产上当年制种，当年销售的需要。PAPD，SSR法对人员素质要求高，且成本较高。

【发明内容】

针对上述问题，本发明提供的一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度进行准确、快捷、实用检测的方法，克服了籽粒形态等鉴定方法的可靠性差以及RAPD，SSR等实验室方法对人员素质要求高，且成本较高等弊端。通过将幼苗形态鉴定法与Y4-2AB固有的高耐盐性结合起来检测种子纯度，具有简单实用，省时省工的优点。

本发明是通过以下技术方案实现的，提供一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，包括如下步骤：

S1浸种催芽；

S2沙培基质准备；

S3盐胁迫培育幼苗；

S4幼苗生长观察记载；

S5计算受检样品纯度。

特别的，所述步骤S1具体按照以下方式实施：

选择籽粒饱满、整齐一致、无破损、无霉病的Y4-2AB种子，将选取的种子用0.1%Hgcl消毒10min，然后用蒸馏水冲洗4-5次，之后浸种、催芽，直至种子破胸、露白即可。

特别的，所述步骤S2具体按照以下方式实施：

将大小均匀且消毒后的细沙装在培养皿/箱中，使细沙高度为1.5～2.0cm；之后往培养皿中加入配制好的浓度为0.5%盐溶液至细沙湿润、种子萌发即可，3次重复，每个重复能够播种所选种子的三分之一；每个重复要根据培养皿/箱的大小可以设置多个培养皿。

特别的，所述浓度为0.5%盐溶液由5gNacl溶解于1000ml的蒸馏水配制而成。

特别的，所述步骤S3具体按照以下方式实施：

将破胸露白的Y4-2AB种子均匀播种在培养皿内的沙培基质上，然后用消毒过的细沙进行覆盖，不露种即可；将播种后培养皿/箱放置在人工气候箱中，温度保持28～30℃，湿度保持70～75%；3～5d后培养皿/箱中保持0.5%盐浓度的薄水层，同时每12h更换一次0.5%盐溶液。

特别的，所述步骤S4具体按照以下方式实施：

连续观察记载出苗后至3～4叶期的Y4-2AB的幼苗生长情况，统计连续出现叶尖发生卷曲、叶片出现萎蔫、生长减缓症状的幼苗数量，而在盐胁迫条件下生长正常的秧苗数量，所述3～4叶期播种后15d。

特别的，所述步骤S5具体按照以下方式实施：

受检样品纯度为3次重复平均值，即为Y4-2AB实际纯度；所述受检样品纯度计算公式是如下：

受检样品纯度(%)=(供检样品幼苗总株数-非本品种幼苗株数)∕供检样品幼苗总株数×100。

相较于现有技术，本发明提供的一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，利用经多年研究发现江苏沿海地区农业科学研究所育成的油菜两型系不育系Y4-2AB的幼苗期的耐盐性显著高于一般油菜品种的原理，在0.5%盐浓度胁迫条件下，将油菜两型系不育系Y4-2AB在实验室培育幼苗，出苗后至3-4叶期，即播种后15d左右，观察记载幼苗生长情况，连续出现叶尖发生卷曲、叶片出现萎蔫、生长减缓症状的、说明不耐盐即为杂株；而在盐胁迫条件下生长正常的、说明耐盐即为Y4-2AB，从而可以计算出Y4-2AB种子纯度。该检测方法克服了籽粒形态等鉴定方法的可靠性差以及RAPD，SSR等实验室方法对人员素质要求高，且成本较高等弊端，其通过幼苗形态鉴定与Y4-2AB固有的高耐盐性结合起来检测种子纯度，也可以用于鉴定耐盐性较好的其他油菜两型系不育系种子纯度的鉴定，具有准确、快捷、简单实用、省时省工的优点。

【具体实施方式】

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进一步详细说明。

本发明利用多年研究发现江苏沿海地区农业科学研究所育成的油菜两型系不育系Y4-2AB幼苗期的耐盐性显著高于一般油菜品种的原理，在0.5%盐浓度胁迫条件下，将两系不育系Y4-2AB种子在实验室培育幼苗，出苗后至3-4叶期（即播种后15天左右），观察记载幼苗生长情况，出现不发苗或者发苗后连续出现叶尖发生卷曲、叶片出现萎焉、生长减缓症状的、说明不耐盐即为杂株；而在盐（Nacl）浓度胁迫条件下生长正常的，说明耐盐即为Y4-2AB，从而计算出Y4-2AB种子纯度。

实施例该实施例选用光温敏核不育系盐582S种子进行纯度检测实验，具体包括以下步骤：

S1浸种催芽：选择籽粒饱满、整齐一致、无破损、无霉病的盐582S种子6000粒以上，将选取的种子用0.1%Hgcl消毒10min，然后用蒸馏水冲洗4-5次，之后浸种、催芽，直至种子破胸、露白即可；

S2沙培基质准备：将大小均匀且消毒后的细沙装在培养皿/箱中，使细沙高度为1.5～2.0cm；之后往培养皿中加入配制好的浓度为0.5%盐溶液至细沙湿润、种子萌发即可，3次重复，每个重复能够播种2000粒以上；每个重复要根据培养皿/箱的大小可以设置多个培养皿；所述浓度为0.5%盐溶液由5gNacl溶解于1000ml的蒸馏水配制而成；

S3盐胁迫培育幼苗：将破胸露白的Y4-2AB种子均匀播种在培养皿内的沙培基质上，然后用消毒过的细沙进行覆盖，不露种即可；将播种后培养皿/箱放置在人工气候箱中，温度保持28～30℃，湿度保持70～75%；3～5d后培养皿/箱中保持0.5%盐浓度的薄水层，同时每12h更换一次0.5%盐溶液。

S4幼苗生长观察记载：连续观察记载出苗后至3～4叶期的Y4-2AB的幼苗生长情况，统计连续出现叶尖发生卷曲、叶片出现萎蔫、生长减缓症状的幼苗数量，而在盐胁迫条件下生长正常的秧苗数量，所述3～4叶期播种后15d左右；

S5计算受检样品纯度：受检样品纯度为3次重复平均值，即为Y4-2AB实际纯度；所述受检样品纯度计算公式是如下：

受检样品纯度(%)=(供检样品幼苗总株数-非本品种幼苗株数)∕供检样品幼苗总株数×100。

经过试验发现，三年间Y4-2AB种子纯度检验结果与田间种植鉴定纯度结果对照比较，二者的结果高度一致，见如下表1、2、3。

表1第一年利用耐盐性检测Y4-2AB种子纯度与田间种植鉴定纯度对照表

样品编号田间鉴定结果（%）耐盐鉴定结果（%）199.9599.94299.9499.95399.9699.96499.9299.93599.9699.97699.9499.95799.9799.98899.9599.96999.9399.951099.9699.971199.9899.981299.9399.921399.9899.991499.9599.961599.9499.95

表2第二年利用耐盐性检测Y4-2AB种子纯度与田间种植鉴定纯度对照表

样品编号田间鉴定结果（%）耐盐鉴定结果（%）199.9299.93299.9899.97399.9499.95499.9799.98599.9599.96699.9399.95799.9899.97899.9999.98999.9399.921099.9799.961199.9599.961299.9499.95

表3第三年利用耐盐性检测Y4-2AB种子纯度与田间种植鉴定纯度对照表

样品编号田间鉴定结果（%）耐盐鉴定结果（%）199.9799.95299.9499.95399.9599.96499.9299.93599.9699.97699.9499.95799.9799.96899.9599.96999.9399.951099.9699.971199.9599.941299.9399.921399.9899.991499.9599.961599.9899.97

由表1、表2、表3可知，经t测验：各年度利用耐盐性检测Y4-2AB种子纯度与田间种植鉴定纯度结果之间的差异不显著，说明两种不同方法检测的纯度结果的一致性。同时也说明利用不同油菜品种耐盐性的差异不仅可以鉴定两系不育系Y4-2AB的真实性和种子纯度的检验，而且相对于田间种植鉴定方法，其纯度检测准确、快捷、实用。

应当理解的是，本发明提供的方法不仅可以通过幼苗形态鉴定与Y4-2AB固有的高耐盐性结合起来检测种子纯度，也可以用于鉴定耐盐性较好的其他油菜两型系不育系种子纯度的鉴定，于本领域的技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。