一种防治糖尿量低下的黄芪发酵产物检测方法技术领域
本发明涉及药品检测技术领域，具体是一种防治糖尿量低下的黄芪发酵产物检测方法。
背景技术
黄芪是一种常见的中药材，黄芪中的总黄酮含量相对于其他药材比较高，因此黄芪对治疗糖尿病有着很好的疗效，通过黄芪得到总黄酮有很多方法，有水煮法、发酵、有机提取等方法，采用发酵和有机提取方法能获得高产量的总黄酮，对于黄芪发酵过程中总黄酮的含量的测定，目前现有的方法过于复杂，操作过于繁琐，而且测定含量精度不高，误差相对较大，检测不稳定。
发明内容
本发明的目的在于提供一种防治糖尿量低下的黄芪发酵产物检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种防治糖尿量低下的黄芪发酵产物检测方法，具体操作步骤如下：
（1）对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品13.000mg于25mL容量瓶中，加体积分数为70%的乙醇，水浴加热使溶解，放冷，再用体积分数为70%的乙醇稀释至刻度，摇匀，配置成0.52mg·g-1的对照品溶液；
（2）待测样品溶液的制备
取待测样品1g与圆底烧瓶中，加10倍量体积分数为95%的乙醇，浸泡过夜，在索氏提取器中连续回流提取2h，冷却，过滤，收集滤液，定容于100mL容量瓶中，备用；
（3）线性关系的考察
精密吸取上述芦丁标准液0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0mL于10mL比色管中，各加0.5mL的5%NaNO2溶液，摇匀放置6min，再加入30.5mL的10%Al(NO)3，摇匀放置6min，再加入4mL的1mol·L-1的NaOH溶液，最后溶液用体积分数为70%的乙醇溶液定容，摇匀放置15min；在510nm波长处，以第一管溶液作为空白，测得不同浓度下吸光度值，以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标进行回归，绘制标准曲线；
（4）样品中总黄酮含量的测定及计算
精密吸取样品5.0mL分别于25mL容量瓶中，加蒸馏水至6mL，按标准曲线制作方法进行测定，记录各样品吸光度，通过公式X=（C×V0×25）（V1×m）计算总黄酮含量，式中X-样品中总黄酮含量，V0-样品待测液总体积，V1-样品提取液测定吸取体积，C-从标准曲线查得待测液中芦丁浓度，m-样品待测液折合原始生药量。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明检测方法操作简单方便，具有精密度准确、重复性好、检测稳定以及回收率高的优点，能精确检测出黄芪发酵产物中总黄酮的含量。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种防治糖尿量低下的黄芪发酵产物检测方法，具体操作步骤如下：
（1）对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品13.000mg至于25mL容量瓶中，加70%乙醇适量，水浴加热使溶解，放冷，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，配置成0.52mg·g-1的对照品溶液；
（2）待测样品溶液的制备
取待测样品1g与圆底烧瓶中，加10倍量95%乙醇，浸泡过夜，在索氏提取器中连续回流提取2h，冷却，过滤，收集滤液，定容于100mL容量瓶中，备用；
（3）线性关系的考察
精密吸取上述芦丁标准液0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0mL于10mL比色管中，加0.5mL的5%NaNO2溶液，摇匀放置6min，再加入30.5mL的10%Al(NO)3，摇匀放置6min，再加4mL的1mol·L-1的NaOH，溶液用70%乙醇溶液定容，摇匀放置15min；在510nm波长处，以第一管溶液作为空白，测得不同浓度下吸光度值，以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标进行回归，绘制标准曲线，如表1所示，结果表明，芦丁对照品在0.026～0.52mg·mL-1浓度范围内呈良好的线性关系，其标准曲线方程为Y=11.467X+0.0096，r=0.9992；
①精密度实验
取上述供试品溶液，参照上述标准曲线方法，在510nm测定吸光度，连续测定6次，RSD为2.14%（n=6），结果见表1，结果表明本法精密度良好；
表1精密度试验测定结果次数 1 2 3 4 5 6 RSD%
A 0.6532 0.6247 0.6537 0.6594 0.6321 0.6502 2.14
②重复性考察
取同一批待测样品，按待测样品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液，分别精密测定吸光度，计算得总黄酮的平均含量为5.315％，RSD为0.58％，结果见表2，表明本方法重复性良好；
表2重复性试验测定结果次数 1 2 3 4 5 6 RSD%
测得含量（%） 5.469 5.229 5.367 5.213 5.301 5.311 0.58
③稳定性试验
取对照品及待测样品溶液于室温分别放置0、5、10、20、30mim后，测定吸光度RSD分别为1.09%和0.89%，结果见表3，表明对照品及供试溶液在30min内稳定；
表3稳定性实验测定结果时间（min）02481630RSD%
对照品0.48790.49730.49710.47630.48590.47021.09
供试品0.46850.44770.45030.45710.44650.43050.89
④加样回收率试验
精密称取已知黄芪总黄酮含量的药材6份，每份1g，按步骤（2）操作制成待测样品溶液，加蒸馏水定容至2mL，分成2组，每组3份，分别精密添加0.5mg·mL-1的芦丁对照品0.83mL，1.04mL，1.25mL，按步骤（3）测定，并计算回收率；试验结果见表4，表明本法具有良好的回收率；
加样回收率试验测定结果(n=6)
（4）样品中总黄酮含量的测定及计算
精密吸取样品5.0mL分别于25mL容量瓶中，加蒸馏水至6mL，按标准曲线制作方法进行测定，记录各样品吸光度，通过公式X=(C×V0×25)/(V1×m)计算总黄酮含量，式中X-样品中总黄酮含量，V0-样品待测液总体积，V1-样品提取液测定吸取体积，C-从标准曲线查得待测液中芦丁浓度，m-样品待测液折合原始生药量。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。