中成药益肾补骨液的质量控制方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103675190 A (43)申请公布日 2014.03.26 CN 103675190 A (21)申请号 201310699363.4 (22)申请日 2013.12.18 G01N 30/90(2006.01) G01N 30/02(2006.01) (71)申请人 吉林修正药业新药开发有限公司 地址 130103 吉林省长春市高新区顺达路 1369 号 (72)发明人 付成国 徐建 白冰 徐国强 徐云 王婷婷 赵俞 任晶 (74)专利代理机构 吉林省长春市新时代专利商 标代理有限公司 22204 代理人 孙国振 (54) 发明名称 中成药益肾补骨液的质量控制。

2、方法 (57) 摘要 中成药益肾补骨液的控制质量方法， 用于该 药物生产中的质量管控， 克服现有技术中只是一 个简单的显色反应和一个薄层鉴别， 专属性不够 强， 质量可控性较差。难于控制药品的质量标准， 严重影响产品的质量和疗效的不足。本发明增加 了骨碎补含量测定以及白芍、 骨碎补、 当归、 续断 薄层色谱定性鉴别， 改进了益肾补骨液的质量控 制方法， 所制定的方法简便、 可行、 操作性强， 使 供试品溶液杂质大大减少， 薄层斑点清晰、 重现性 好。保证了药品的安全性、 有效性及质量可控性。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (1。

3、2)发明专利申请 权利要求书2页 说明书5页 (10)申请公布号 CN 103675190 A CN 103675190 A 1/2 页 2 1. 一种中成药益肾补骨液的控制质量方法， 其特征是包括以下步骤 ： （1） 鉴别 白芍的薄层鉴别 ： 取益肾补骨液 30 50ml， 用水饱和的正丁醇振摇提取 3 次， 每次 30ml， 合并正丁醇液， 蒸干， 残渣加甲醇 1ml 使溶解， 加中性氧化铝 （100 200 目） 1 2g， 拌匀， 蒸干， 加在中性氧化铝柱 （100 200 目， 2 3g， 内径为 1.5cm） 上， 用甲醇 - 乙酸乙酯 （1:3） 40 50ml 洗脱， 弃去洗脱。

4、液， 再用甲醇 - 乙酸乙酯 （1:1） 40 50ml 洗脱， 收集洗脱 液， 蒸干， 残渣加甲醇或乙醇 1 3ml 使溶解， 作为供试品溶液， 另取芍药苷对照品， 加甲醇 或乙醇制成每 1ml 含 0.5 1mg 的溶液 , 作为对照品溶液， 照薄层色谱法 ( 中国药典 2010 年版一部附录 B) 试验， 吸取上述供对照品溶液和试品溶液各 3 5l， 分别点于同一硅 胶 G 薄层板上， 以三氯甲烷 - 甲醇 - 乙酸乙酯 - 水为展开剂， 四组份的配比为 38:10:5:0.2 或40:10:5:0.2， 展开， 取出， 晾干， 喷以5%香草醛硫酸溶液， 在105加热至斑点显色清晰， 供。

5、试品色谱中 , 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点 ； 骨碎补的薄层鉴别 ： 取柚皮苷对照品， 加甲醇或乙醇或 70% 乙醇制成每 1ml 含 1 1.5mg 的溶液， 作为对照品溶液。取 鉴别 （1） 项下的供试品溶液作为供试品溶液， 照薄 层色谱法 ( 中国药典 2010 年版一部附录 B) 试验， 吸取上述供试品溶液及对照品溶液各 5 10l， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以甲苯 - 乙酸乙酯 - 甲酸 - 水的上层溶液为展 开剂， 四组份的配比为 1:12:2.5:3 或 1:10:2:3 或 1.5:12:2.5:2.5， 展开， 取出， 晾干， 喷以 5 10% 。

6、三氯化铝乙醇溶液， 在 105加热 3 5 分钟， 置紫外光灯 （365nm） 下检视， 供试品 色谱中 , 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点 ； 当归的薄层鉴别 ： 取益肾补骨液3040ml， 加稀盐酸调节pH至23， 用乙酸乙酯振 摇提取2次， 每次30ml， 合并乙酸乙酯液， 继用1%碳酸氢钠溶液振摇提取2次， 每次30ml,合 并碳酸氢钠溶液， 用稀盐酸调节 pH 至 2 3， 再用乙酸乙酯振摇提取 2 次， 每次 30 40ml， 合并乙酸乙酯液， 蒸干， 残渣加乙醇或乙酸乙酯12ml使溶解， 作为供试品溶液， 另取当归 对照药材12g， 用1%碳酸氢钠溶液4050。

7、ml， 超声处理2025分钟， 滤过， 滤液用稀盐 酸调节 pH 至 2 3， 用乙酸乙酯振摇提取 2 次， 每次 30 40ml， 合并乙酸乙酯液， 蒸干， 残 渣加乙醇或乙酸乙酯 1 2ml 使溶解， 作为对照药材溶液， 再取阿魏酸对照品， 加乙醇或乙 酸乙酯制成每 1ml 含 1 1.2mg 的溶液 , 作为对照品溶液， 照薄层色谱法 ( 中国药典 2010 年版一部附录 B) 试验， 吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各 5 10l、 对照品溶液 2 4l， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以甲苯 - 三氯甲烷 - 冰醋酸为展开剂， 三组份的 配比为 6:1:0.5 或 6:2:0.8。

8、 或 6:1:1， 展开， 取出， 晾干， 置紫外光灯 （365nm） 下检视， 供试品 色谱中 , 在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点 ； 续断的薄层鉴别 ： 取益肾补骨液 30 40ml， 加乙醚振摇提取 2 次， 每次 20 30ml， 弃去乙醚液， 水层用水饱和的正丁醇振摇提取 3 次， 每次 30 40ml， 合并正丁醇液， 正丁醇 液用正丁醇饱和的水洗涤2次， 每次3040ml， 弃去洗涤液， 正丁醇液再用3040ml的氨 试液洗涤， 弃去洗液。将正丁醇液蒸干， 残渣加甲醇或乙醇 1 2ml 使溶解， 作为供试品溶 液， 另取续断对照药材 1 1.5g。

9、， 加甲醇或乙醇 25 35ml， 冷浸 30 分钟， 超声处理 30 40 分钟， 滤过， 滤液蒸干， 残渣加水2025ml使溶解， 按照供试品溶液制备方法制成对照药材 溶液， 再取川续断皂苷对照品， 加甲醇或乙醇制成每 1ml 含 3 5mg 的溶液作为对照品溶 液， 照薄层色谱法 ( 中国药典 2010 年版一部附录 B) 试验， 吸取供试品溶液 5 10l、 权 利 要 求 书 CN 103675190 A 2 2/2 页 3 对照药材溶液 3 5l、 对照品溶液 5 8l， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以三氯甲 烷-甲醇-水10以下放置的下层溶液为展开剂， 三组份的配比为13:。

10、7:2或13:6:1， 展开， 取出， 晾干， 喷以810%的磷钼酸乙醇溶液， 在105加热至斑点显色清晰， 供试品色谱中， 在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点 ； （2） 骨碎补的含量测定 色谱条件与系统适用性试验 ： 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， 以甲醇-水-冰醋 酸 =30 35:69 64:1 为流动相， 检测波长为 284nm， 理论板数按柚皮苷峰计算应不低于 3000 ； 对照品溶液的制备 ： 取柚皮苷对照品适量， 精密称定， 加7080%乙醇制成每1ml含 60 80g 的溶液， 即得 ； 供试品溶液的制备 ： 精密量取益肾补骨液 5 10ml， 置。

11、 100ml 量瓶， 加 70 80% 乙 醇80ml， 超声处理2030分钟， 放冷， 加7080%乙醇稀释至刻度， 摇匀， 滤过， 取续滤液， 即得 ； 测定 ： 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 5 10l， 注入液相色谱仪， 测定， 得数据， 本品每 1ml 含骨碎补以柚皮苷计， 不得少于 0.20mg。 权 利 要 求 书 CN 103675190 A 3 1/5 页 4 中成药益肾补骨液的质量控制方法 技术领域 0001 本发明属于中药技术领域， 涉及一种中成药益肾补骨液的质量控制方法。 背景技术 0002 中成药益肾补骨液记载于部颁标准中药成方制剂第十册， 标准编号为 WS3。

12、-B-2020-95。 其功能主治为滋补肝肾， 强壮筋骨。 用于肝肾不足， 劳伤腰痛， 筋骨折伤等。 处方及制法为 ： 0003 【处方】 骨碎补 45g 何首乌 126g 茯苓 63g 续断 63g 白芍 44g 0004 当归 63g 党参 75g 熟地黄 63g 黄精 63g 枸杞子 63g 0005 自然铜 （煅， 醋淬） 45g 陈皮 16g 0006 【制法】 以上十二味， 加水煎煮二次， 每次 2 小时， 滤过， 合并滤液， 浓缩至每 1ml 溶 液相当于原药材 1g， 加乙醇 2 倍量， 搅拌， 静置， 滤过， 回收乙醇， 浓缩至适量， 加入阿司帕 坦、 甜菊素、 白酒、 苯甲。

13、酸钠适量使溶解， 滤过， 加水至 1000ml， 搅拌， 即得。 0007 该药物的质量控制方法如下 ： 0008 1、 取本品 5ml， 加石油醚 （60-90） 10ml， 振摇， 分取石油醚层， 挥干， 残渣加 5% 香 草醛硫酸溶液 1 2 滴， 显紫红色。 0009 2、 取本品 20ml, 加水饱和的正丁醇 10ml, 振摇， 分取正丁醇液， 用水洗涤 3 次， 每 次10ml， 弃去水液， 正丁醇液置水浴上蒸干， 残渣加乙醇1ml使溶解， 作为供试品溶液。 另取 何首乌对照药材 2.5g， 加水 20ml, 加热回流 2 小时， 滤过， 滤液同法制成对照药材溶液。再 取白芍对照药。

14、材 1g, 加水 20ml， 加热回流 2 小时， 滤过， 滤液同法制成对照药材溶液。照薄 层色谱法试验， 吸取上述三种溶液各 5l， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以氯仿 - 乙酸乙 酯 - 甲醇 - 甲酸 （40:5:10:0.2） 为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 5% 香草醛硫酸溶液， 热风 吹至斑点显色清晰。供试品色谱中在与何首乌对照药材色谱相应的位置上， 显一个相同的 紫红色斑点， 在与白芍对照药材色谱相应的位置上， 显一个相同的蓝紫色斑点。 0010 以上原标准只是一个简单的显色反应和一个薄层鉴别， 专属性不够强， 质量可控 性较差。难于控制药品的质量标准， 严重影响。

15、产品的质量和疗效。 发明内容 0011 发明目的是提供一种中成药益肾补骨液的控制质量方法， 用于该药物生产中的质 量管控， 克服现有的质量控制方法操作的上述不足。 0012 本发明意在增加君药骨碎补中柚皮苷的含量测定， 增加骨碎补、 当归、 续断的薄层 色谱鉴别， 同时对原标准中白芍薄层鉴别进行了方法的改进， 在白芍供试品溶液处理方法 上增加了柱层析。 0013 本发明的方法包括 ： 0014 1、 鉴别 0015 （1） 白芍的薄层鉴别 ： 取益肾补骨液 30 50ml， 用水饱和的正丁醇振摇提取 3 次， 说 明 书 CN 103675190 A 4 2/5 页 5 每次 30ml， 合并。

16、正丁醇液， 蒸干， 残渣加甲醇 1ml 使溶解， 加中性氧化铝 （100 200 目） 1 2g， 拌匀， 蒸干， 加在中性氧化铝柱 （100200目， 23g， 内径为1.5cm） 上， 用甲醇-乙酸乙 酯 （1:3） 4050ml洗脱， 弃去洗脱液， 再用甲醇-乙酸乙酯 （1:1） 4050ml洗脱， 收集洗脱 液， 蒸干， 残渣加甲醇或乙醇 1 3ml 使溶解， 作为供试品溶液。另取芍药苷对照品， 加甲醇 或乙醇制成每 1ml 含 0.5 1mg 的溶液 , 作为对照品溶液。照薄层色谱法 ( 中国药典 2010 年版一部附录 B) 试验， 吸取上述供对照品溶液和试品溶液各 3 5l， 分。

17、别点于同一硅 胶 G 薄层板上， 以三氯甲烷 - 甲醇 - 乙酸乙酯 - 水为展开剂， 四组份的配比为 38:10:5:0.2 或40:10:5:0.2， 展开， 取出， 晾干， 喷以5%香草醛硫酸溶液， 在105加热至斑点显色清晰。 供试品色谱中 , 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。 0016 （2） 骨碎补的薄层鉴别 ： 取柚皮苷对照品， 加甲醇或乙醇或 70% 乙醇制成每 1ml 含 1 1.5mg 的溶液， 作为对照品溶液。取 鉴别 （1） 项下的供试品溶液作为供试品溶液。 照薄层色谱法 ( 中国药典 2010 年版一部附录 B) 试验， 吸取上述供试品溶液及对照品溶 。

18、液各 5 10l， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以甲苯 - 乙酸乙酯 - 甲酸 - 水的上层溶液 为展开剂， 四组份的配比为 1:12:2.5:3 或 1:10:2:3 或 1.5:12:2.5:2.5， 展开， 取出， 晾干， 喷以 5 10% 三氯化铝乙醇溶液， 在 105加热 3 5 分钟， 置紫外光灯 （365nm） 下检视。 供试品色谱中 , 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点。 0017 （3） 当归的薄层鉴别 ： 取益肾补骨液 30 40ml， 加稀盐酸调节 pH 至 2 3， 用乙 酸乙酯振摇提取 2 次， 每次 30ml， 合并乙酸乙酯液， 继用 1% 。

19、碳酸氢钠溶液振摇提取 2 次， 每 次 30ml, 合并碳酸氢钠溶液， 用稀盐酸调节 pH 至 2 3， 再用乙酸乙酯振摇提取 2 次， 每次 30 40ml， 合并乙酸乙酯液， 蒸干， 残渣加乙醇或乙酸乙酯 1 2ml 使溶解， 作为供试品溶 液。 另取当归对照药材12g， 用1%碳酸氢钠溶液4050ml， 超声处理2025分钟， 滤过， 滤液用稀盐酸调节 pH 至 2 3， 用乙酸乙酯振摇提取 2 次， 每次 30 40ml， 合并乙酸乙酯 液， 蒸干， 残渣加乙醇或乙酸乙酯 1 2ml 使溶解， 作为对照药材溶液。再取阿魏酸对照品， 加乙醇或乙酸乙酯制成每 1ml 含 1 1.2mg 的。

20、溶液 , 作为对照品溶液。照薄层色谱法 ( 中 国药典 2010 年版一部附录 B) 试验， 吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各 5 10l、 对照品溶液 2 4l， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以甲苯 - 三氯甲烷 - 冰醋酸为展开 剂， 三组份的配比为 6:1:0.5 或 6:2:0.8 或 6:1:1， 展开， 取出， 晾干， 置紫外光灯 （365nm） 下 检视。供试品色谱中 , 在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光 斑点。 0018 （4） 续断的薄层鉴别 ： 取益肾补骨液 30 40ml， 加乙醚振摇提取 2 次， 每次 20 30ml， 弃去乙醚液。。

21、水层用水饱和的正丁醇振摇提取 3 次， 每次 30 40ml， 合并正丁醇液。 正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤 2 次， 每次 30 40ml， 弃去洗涤液。正丁醇液再用 30 40ml 的氨试液洗涤， 弃去洗液。将正丁醇液蒸干。残渣加甲醇或乙醇 1 2ml 使溶解， 作为 供试品溶液。另取续断对照药材 1 1.5g， 加甲醇或乙醇 25 35ml， 冷浸 30 分钟， 超声处 理 30 40 分钟， 滤过， 滤液蒸干， 残渣加水 20 25ml 使溶解， 按照供试品溶液制备方法制 成对照药材溶液。再取川续断皂苷对照品， 加甲醇或乙醇制成每 1ml 含 3 5mg 的溶液 作为对照品溶液。照薄层。

22、色谱法 ( 中国药典 2010 年版一部附录 B) 试验， 吸取供试品溶 液 5 10l、 对照药材溶液 3 5l、 对照品溶液 5 8l， 分别点于同一硅胶 G 薄层板 上， 以三氯甲烷 - 甲醇 - 水 10以下放置的下层溶液为展开剂， 三组份的配比为 13:7:2 或 说 明 书 CN 103675190 A 5 3/5 页 6 13:6:1， 展开， 取出， 晾干， 喷以 8 10% 的磷钼酸乙醇溶液， 在 105加热至斑点显色清晰。 供试品色谱中， 在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。 0019 2、 骨碎补的含量测定 0020 （1）色谱条件与系统适用性试。

23、验 ： 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ： 以甲 醇 - 水 - 冰醋酸 =30 35:69 64:1 为流动相 ； 检测波长为 284nm， 理论板数按柚皮苷峰 计算应不低于 3000 ； 0021 （2） 对照品溶液的制备 ： 取柚皮苷对照品适量， 精密称定， 加 70 80% 乙醇制成每 1ml 含 60 80g 的溶液， 即得。 0022 （3） 供试品溶液的制备 ： 精密量取益肾补骨液 5 10ml， 置 100ml 量瓶， 加 70 80% 乙醇 80ml， 超声处理 20 30 分钟， 放冷， 加 70 80% 乙醇稀释至刻度， 摇匀， 滤过， 取 续滤液， 即得。 0023 （。

24、4） 测定 ： 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 5 10l， 注入液相色谱仪， 测定， 得数据 ； 本品每 1ml 含骨碎补以柚皮苷计， 不得少于 0.20mg。 0024 本发明的有益效果是 ： 增加了骨碎补含量测定以及白芍、 骨碎补、 当归、 续断薄层 色谱定性鉴别， 改进了益肾补骨液的质量控制方法， 所制定的方法简便、 可行、 操作性强， 使 供试品溶液杂质大大减少， 薄层斑点清晰、 重现性好。保证了药品的安全性、 有效性及质量 可控性。 具体实施方式 0025 实施例 1 0026 1、 鉴别 0027 （1） 白芍的薄层鉴别 ： 取益肾补骨液 40ml， 用水饱和的正丁醇振摇提。

25、取 3 次， 每次 30ml， 合并正丁醇液， 蒸干， 残渣加甲醇 1ml 使溶解， 加中性氧化铝 （100 200 目） 1g， 拌匀， 蒸干， 加在中性氧化铝柱 （100200目， 2g， 内径为1.5cm） 上， 用甲醇-乙酸乙酯 （1:3） 40ml 洗脱， 弃去洗脱液， 再用甲醇-乙酸乙酯 （1:1） 40ml洗脱， 收集洗脱液， 蒸干， 残渣加甲醇1ml 使溶解， 作为供试品溶液。另取芍药苷对照品， 加甲醇制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液 , 作为对 照品溶液。照薄层色谱法 ( 中国药典 2010 年版一部附录 B) 试验， 吸取上述对照品溶液 和供试品溶液各 5l， 分别点。

26、于同一硅胶 G 薄层板上， 以三氯甲烷 - 甲醇 - 乙酸乙酯 - 水 （38:10:5:0.2） 为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 5% 香草醛硫酸溶液， 在 105加热至斑点 显色清晰。供试品色谱中 , 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。 0028 （2） 骨碎补的薄层鉴别 ： 取柚皮苷对照品， 加甲醇制成每 1ml 含 1mg 的溶液， 作为 对照品溶液。取 鉴别 （1） 项下的供试品溶液作为供试品溶液。照薄层色谱法 ( 中国药 典 2010 年版一部附录 B) 试验， 吸取上述供试品溶液及对照品溶液各 10l， 分别点于同 一硅胶 G 薄层板上， 以甲苯 - 乙酸。

27、乙酯 - 甲酸 - 水 （1:12:2.5:3） 的上层溶液为展开剂， 展 开， 取出， 晾干， 喷以 5% 三氯化铝乙醇溶液， 在 105加热 3 分钟， 置紫外光灯 （365nm） 下检 视。供试品色谱中 , 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点。 0029 （3） 当归的薄层鉴别 ： 取益肾补骨液 30ml， 加稀盐酸调节 pH 至 2 3， 用乙酸乙酯 振摇提取2次， 每次30ml， 合并乙酸乙酯液， 继用1%碳酸氢钠溶液振摇提取2次， 每次30ml, 合并碳酸氢钠溶液， 用稀盐酸调节 pH 至 2 3， 再用乙酸乙酯振摇提取 2 次， 每次 30ml， 合 说 明 书 。

28、CN 103675190 A 6 4/5 页 7 并乙酸乙酯液， 蒸干， 残渣加乙醇 1ml 使溶解， 作为供试品溶液。另取当归对照药材 1g， 用 1%碳酸氢钠溶液40ml， 超声处理20分钟， 滤过， 滤液用稀盐酸调节pH至23， 用乙酸乙酯 振摇提取 2 次， 每次 30ml， 合并乙酸乙酯液， 蒸干， 残渣加乙醇 1ml 使溶解， 作为对照药材溶 液。再取阿魏酸对照品， 加乙醇制成每 1ml 含 1mg 的溶液 , 作为对照品溶液。照薄层色谱 法(中国药典2010年版一部附录B)试验， 吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各8l、 对照品溶液 3l， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以甲。

29、苯 - 三氯甲烷 - 冰醋酸 （6:1:0.5） 为 展开剂， 展开， 取出， 晾干， 置紫外光灯 （365nm） 下检视。供试品色谱中 , 在与对照药材色谱 和对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点。 0030 （4） 续断的薄层鉴别 ： 取益肾补骨液30ml， 加乙醚振摇提取2次， 每次20ml， 弃去乙 醚液。水层用水饱和的正丁醇振摇提取 3 次， 每次 30ml， 合并正丁醇液。正丁醇液用正丁醇 饱和的水洗涤 2 次， 每次 30ml， 弃去洗涤液。正丁醇液再用 30ml 的氨试液洗涤， 弃去洗液。 将正丁醇液蒸干。残渣加甲醇 1ml 使溶解， 作为供试品溶液。另取续断对照药材。

30、 1g， 加甲醇 25ml， 冷浸 30 分钟， 超声处理 30 分钟， 滤过， 滤液蒸干， 残渣加水 20ml 使溶解， 按照供试品 溶液制备方法制成对照药材溶液。再取川续断皂苷对照品， 加甲醇制成每 1ml 含 3mg 的 溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法 ( 中国药典 2010 年版一部附录 B) 试验， 吸取供试 品溶液 7l、 对照药材溶液 5l、 对照品溶液 8l， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以三氯 甲烷 - 甲醇 - 水 （13:7:2） 10以下放置的下层溶液为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 8% 的 磷钼酸乙醇溶液， 在 105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中。

31、， 在与对照药材色谱和对照 品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。 0031 2、 骨碎补的含量测定 0032 (1) 色谱条件与系统适用性试验 ： 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ： 以甲 醇 - 水 - 冰醋酸 =30:69:1 为流动相 ； 检测波长为 284nm， 理论板数按柚皮苷峰计算应不低 于 3000 ； 0033 （2） 对照品溶液的制备 ： 取柚皮苷对照品适量， 精密称定， 加70%乙醇制成每1ml含 70g 的溶液， 即得。 0034 （3）供试品溶液的制备 ： 精密量取益肾补骨液 5ml， 置 100ml 量瓶， 加 70% 乙醇 80ml， 超声处理 20 分钟， 放。

32、冷， 加 70% 乙醇稀释至刻度， 摇匀， 滤过， 取续滤液， 即得。 0035 （4） 测定法 ： 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l， 注入液相色谱仪， 测定， 得数据， 本品每 1ml 含骨碎补以柚皮苷计， 不得少于 0.20mg。 0036 实施例 2 0037 1 鉴别 0038 （1） 白芍的薄层鉴别 ： 取益肾补骨液 50ml， 用水饱和的正丁醇振摇提取 3 次， 每 次 40ml， 合并正丁醇液， 蒸干， 残渣加乙醇 1ml 使溶解， 加中性氧化铝 （100 200 目） 2g， 拌 匀， 蒸干， 加在中性氧化铝柱 （100 200 目， 3g， 内径为 1.5cm）。

33、 上， 用甲醇 - 乙酸乙酯 （1:3） 50ml 洗脱， 弃去洗脱液， 再用甲醇 - 乙酸乙酯 （1:1） 50ml 洗脱， 收集洗脱液， 蒸干， 残渣加乙 醇 1ml 使溶解， 作为供试品溶液。另取芍药苷对照品， 加乙醇制成每 1ml 含 1mg 的溶液 , 作 为对照品溶液。照薄层色谱法 ( 中国药典 2010 年版一部附录 B) 试验， 吸取上述对照品 溶液和试品溶液各3l， 分别点于同一硅胶G薄层板上， 以三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-水 （40:10:5:0.2） 为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 10% 香草醛硫酸溶液， 在 105加热至斑点 说 明 书 CN 1036751。

34、90 A 7 5/5 页 8 显色清晰。供试品色谱中 , 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。 0039 （2） 骨碎补的薄层鉴别 ： 取柚皮苷对照品， 加乙醇制成每 1ml 含 1.2mg 的溶液， 作 为对照品溶液。取 鉴别 （1） 项下的供试品溶液作为供试品溶液。照薄层色谱法 ( 中国 药典2010年版一部附录B)试验， 吸取上述供试品溶液及对照品溶液各8l， 分别点于同 一硅胶 G 薄层板上， 以甲苯 - 乙酸乙酯 - 甲酸 - 水 （1:10:2:3） 的上层溶液为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 10% 三氯化铝乙醇溶液， 在 105加热 4 分钟， 置紫外光灯 。

35、（365nm） 下检视。 供试品色谱中 , 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点。 0040 （3） 当归的薄层鉴别 ： 取益肾补骨液 40ml， 加稀盐酸调节 pH 至 2 3， 用乙酸乙酯 振摇提取2次， 每次30ml， 合并乙酸乙酯液， 继用1%碳酸氢钠溶液振摇提取2次， 每次30ml, 合并碳酸氢钠溶液， 用稀盐酸调节pH至23， 再用乙酸乙酯振摇提取2次， 每次40ml， 合并 乙酸乙酯液， 蒸干， 残渣加乙酸乙酯1ml使溶解， 作为供试品溶液。 另取当归对照药材1.5g， 用 1% 碳酸氢钠溶液 50ml， 超声处理 25 分钟， 滤过， 滤液用稀盐酸调节 pH 至 。

36、2 3， 用乙酸 乙酯振摇提取 2 次， 每次 35ml， 合并乙酸乙酯液， 蒸干， 残渣加乙酸乙酯 1ml 使溶解， 作为对 照药材溶液。再取阿魏酸对照品， 加乙酸乙酯制成每 1ml 含 1.2mg 的溶液 , 作为对照品溶 液。照薄层色谱法 ( 中国药典 2010 年版一部附录 B) 试验， 吸取上述供试品溶液和对照 药材溶液各 5l、 对照品溶液 2l， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以甲苯 - 三氯甲烷 - 冰 醋酸 （6:1:1） 为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 置紫外光灯 （365nm） 下检视。供试品色谱中 , 在 与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧。

37、光斑点。 0041 （4） 续断的薄层鉴别 ： 取益肾补骨液40ml， 加乙醚振摇提取2次， 每次30ml， 弃去乙 醚液。水层用水饱和的正丁醇振摇提取 3 次， 每次 40ml， 合并正丁醇液。正丁醇液用正丁醇 饱和的水洗涤 2 次， 每次 40ml， 弃去洗涤液。正丁醇液再用 40ml 的氨试液洗涤， 弃去洗液。 将正丁醇液蒸干。残渣加乙醇 2ml 使溶解， 作为供试品溶液。另取续断对照药材 1.5g， 加乙 醇 30ml， 冷浸 30 分钟， 超声处理 35 分钟， 滤过， 滤液蒸干， 残渣加水 25ml 使溶解， 按照供试 品溶液制备方法制成对照药材溶液。再取川续断皂苷对照品， 加乙醇。

38、制成每 1ml 含 5mg 的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法 ( 中国药典 2010 年版一部附录 B) 试验， 吸取供 试品溶液10l、 对照药材溶液3l、 对照品溶液6l， 分别点于同一硅胶G薄层板上， 以三 氯甲烷 - 甲醇 - 水 （13:6:1） 10以下放置的下层溶液为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 10% 的磷钼酸乙醇溶液， 在 105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中， 在与对照药材色谱和对 照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。 0042 2、 骨碎补的含量测定 0043 （1）色谱条件与系统适用性试验 ： 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ： 以甲 醇 - 水 -。

39、 冰醋酸 =32:67:1 为流动相 ； 检测波长为 284nm， 理论板数按柚皮苷峰计算应不低 于 3000 ； 0044 （2） 对照品溶液的制备 ： 取柚皮苷对照品适量， 精密称定， 加80%乙醇制成每1ml含 75g 的溶液， 即得。 0045 （3）供试品溶液的制备 ： 精密量取益肾补骨液 10ml， 置 100ml 量瓶， 加 80% 乙醇 80ml， 超声处理 25 分钟， 放冷， 加 80% 乙醇稀释至刻度， 摇匀， 滤过， 取续滤液， 即得。 0046 （4） 测定 ： 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 5l， 注入液相色谱仪， 测 定， 得数据， 本品每 1ml 含骨碎补以柚皮苷计， 不得少于 0.20mg。 说 明 书 CN 103675190 A 8 。