一种秸秆腐熟剂及其制作方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103740693 A (43)申请公布日 2014.04.23 CN 103740693 A (21)申请号 201310642456.3 (22)申请日 2013.12.03 CGMCC No7861 2013.07.03 CGMCC No7848 2013.07.03 CGMCC No7849 2013.07.03 CGMCC No7850 2013.07.03 C12N 11/14(2006.01) C05F 17/00(2006.01) C05F 11/08(2006.01) C12R 1/885(2006.01) C12R 1/125(2006.01) C。

2、12R 1/865(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (71)申请人 中农绿康 （北京） 生物技术有限公司 地址 102101 北京市延庆县八达岭经济开发 区康西路 856 号 (72)发明人 张丽霞 王树雪 李芳 (74)专利代理机构 北京超凡志成知识产权代理 事务所 ( 普通合伙 ) 11371 代理人 吴开磊 (54) 发明名称 一种秸秆腐熟剂及其制作方法 (57) 摘要 本发明涉及生物技术领域， 具体而言， 涉及一 种秸秆腐熟剂及其制作方法。 该秸秆腐熟剂， 包括 草炭和含有菌体活性成分的微生物菌群， 所述菌 体活性成分为芽孢、 营养体或孢子 ； 其中， 微生物。

3、 菌群包括哈茨木霉、 枯草芽孢杆菌、 酿酒酵母和绿 僵菌 ； 且微生物菌群的含量为 ： 0.5-5 亿个 / 克草 炭。 因此， 该秸秆腐熟剂具备除了能够起到分解秸 秆的作用之外， 其还具有抑制病虫害的生长和繁 殖的效果。 (83)生物保藏信息 (51)Int.Cl. 权利要求书 3 页 说明书 7 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书3页 说明书7页 附图1页 (10)申请公布号 CN 103740693 A CN 103740693 A 1/3 页 2 1. 一种秸秆腐熟剂， 其特征在于， 包括草炭和含有菌体活性成分的微生物菌群， 所述菌。

4、 体活性成分为芽孢、 营养体或孢子 ； 其中， 所述微生物菌群包括哈茨木霉、 枯草芽孢杆菌、 酿酒酵母和绿僵菌 ； 且所述微生 物菌群的含量为 ： 0.5-5 亿个 / 克草炭。 2. 根据权利要求 1 所述的秸秆腐熟剂， 其特征在于， 所述哈茨木霉、 枯草芽孢杆菌、 酿 酒酵母和绿僵菌的个数比为 7:30:5:8。 3. 根据权利要求 1 所述的秸秆腐熟剂， 其特征在于， 所述草炭的粒度为 ： 0.08-0.1 毫 米。 4. 根据权利要求 1-3 任一项所述的秸秆腐熟剂， 其特征在于， 所述哈茨木霉、 枯草芽孢 杆菌、 酿酒酵母和绿僵菌均保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 。

5、其保 藏号依次为 CGMCC No.7861、 CGMCC No.7850、 CGMCC No.7849 和 CGMCCNo.7848 ； 其保藏命名 依次为 ： 哈茨木霉、 枯草芽孢杆菌、 酿酒酵母和绿僵菌。 5. 一种根据权利要求 1 所述的秸秆腐熟剂的制作方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： 将哈茨木霉原菌进行菌种活化、 摇瓶培养、 种子罐培养和发酵罐培养， 得到哈茨木霉发 酵液 ； 将枯草芽孢杆菌原菌进行菌种活化、 摇瓶培养、 种子罐培养和发酵罐培养， 得到枯草芽 孢杆菌发酵液 ； 将酿酒酵母原菌进行菌种活化、 摇瓶培养、 种子罐培养和发酵罐培养， 得到酿酒酵母发 酵液 ； 将绿僵菌。

6、原菌种进行菌种活化、 摇瓶培养、 种子罐培养和发酵罐培养， 得到绿僵菌发酵 液 ； 将所述哈茨木霉发酵液、 所述枯草芽孢杆菌发酵液、 所述酿酒酵母发酵液和所述绿僵 菌发酵液混合， 得到混合菌液 ； 将所述混合菌液与既定重量的草炭吸附混拌， 得到含菌量为 0.5-5 亿个 / 克草炭的混 合物 ； 将所述混合物粉碎后制剂， 得到秸秆腐熟剂。 6. 根据权利要求 5 所述的秸秆腐熟剂的制作方法， 其特征在于， 在所述将哈茨木霉原 菌进行菌种活化、 摇瓶培养、 种子罐培养和发酵罐培养， 得到哈茨木霉发酵液的步骤中， 具 体包括 ： 将哈茨木霉原菌接种至菌种活化培养基中， 在 28-30的温度下培养 。

7、70-74 小时， 得到 活化后哈茨木霉菌种 ； 其中， 按照重量计， 所述菌种活化培养基包括土豆 20%、 葡萄糖 2% 和 琼脂 2%， 且其 pH 值为 7.0-7.5 ； 将所述活化后哈茨木霉菌种接种至第一液体培养基中， 在温度为 26-30， 转速为 110-130 转 / 分钟的条件下摇瓶培养 12-16h， 得到哈茨木霉一级种子液， 其中， 所述第一液 体培养基含有重量份数为 5% 的麦麸 ； 将所述哈茨木霉一级种子液接种在装有第二液体培养基种子发酵罐中， 在温度为 26-30、 转速为 110-130 转 / 分钟的条件下发酵培养 16-20 小时， 得到哈茨木霉二级种子 液 。

8、； 其中， 按照重量计， 所述第二液体培养基包括玉米粉 5%、 硫酸铵 0.05%、 泡敌 0.02%、 注 射青霉素钾 0.0005%、 注射硫酸链霉素 0.0003%， 且其 pH 值为 4.0-4.5 ； 权 利 要 求 书 CN 103740693 A 2 2/3 页 3 将所述哈茨木霉二级种子液接种至装有所述第二液体培养基的发酵罐中， 在转速为 150-170 转 / 分钟、 压力为 0.04-0.06 兆帕的条件下发酵培养 84-90 小时， 得到所述哈茨木 霉发酵液。 7. 根据权利要求 5 所述的秸秆腐熟剂的制作方法， 其特征在于， 在所述将枯草芽孢杆 菌原菌进行菌种活化、 摇。

9、瓶培养、 种子罐培养和发酵罐培养， 得到枯草芽孢杆菌发酵液的步 骤中， 具体包括 ： 将枯草芽孢杆菌原菌接种至菌种活化培养基中， 在 28-30的温度下培养 22-26 小时， 得到活化后枯草芽孢杆菌菌种 ； 其中， 按照重量计， 所述菌种活化培养基包括牛肉膏 0.3%、 蛋白胨 0.5%、 NaCl0.5%、 琼脂 2%， 且其 pH 值为 7.0-7.5 ； 将所述活化后枯草芽孢杆菌菌种接种至第一液体培养基中， 在温度为 30-34、 转速为 170-190转/分钟的条件下摇瓶培养8-10h， 得到枯草芽孢杆菌一级种子液， 其中， 所述第一 液体培养基包括牛肉膏 0.3%、 氯化钠 0.5。

10、%、 蛋白胨 0.7%， 且其 pH 值为 7.0 ； 将所述枯草芽孢杆菌一级种子液接种在装有第二液体培养基的种子发酵罐中， 在温度 为30-34、 转速为210-230转/分钟的条件下发酵培养8-10小时， 得到枯草芽孢杆菌二级 种子液 ； 其中， 所述第二液体培养基包括 ： 豆粕粉 2%、 鱼粉 0.5%、 玉米粉 1.8%、 淀粉 0.4%、 硫 酸镁 0.06%、 磷酸氢二钾 0.5%、 泡敌 0.025%， 且其 pH 值为 7.0-7.5 ； 将所述枯草芽孢杆菌二级种子液接种至含有第三液体培养基的发酵罐中， 在转速为 210-230 转 / 分钟、 压力为 0.04-0.06 兆帕。

11、的条件下发酵培养 28-32 小时， 得到所述枯草芽 孢杆菌发酵液。 8. 根据权利要求 5 所述的秸秆腐熟剂的制作方法， 其特征在于， 在所述将酿酒酵母原 菌进行菌种活化、 摇瓶培养、 种子罐培养和发酵罐培养， 得到酿酒酵母发酵液的步骤中， 具 体包括 ： 将酿酒酵母原菌接种至菌种活化培养基中， 在 28-30的温度下培养 70-74 小时， 得到 活化后酿酒酵母菌种 ； 其中， 按照重量计， 所述菌种活化培养基包括酵母膏 1%、 蛋白胨 2%、 葡萄糖 2%、 琼脂 2%， 且其 pH 值为 7.0-7.5 ； 将所述活化后酿酒酵母菌种接种至第一液体培养基中， 在温度为 26-30、 转速。

12、为 170-190 转 / 分钟的条件下摇瓶培养 8-10h， 得到酿酒酵母一级种子液 ； 其中， 按照重量计， 所述第一液体培养基包括酵母膏 1%、 蛋白胨 2%、 葡萄糖 2%， 且其 pH 值 7.0 ； 将所述酿酒酵母一级种子液接种在装有第二液体培养基的种子发酵罐中， 在温度为 26-30、 转速为 210-230 转 / 分钟的条件下发酵培养 8-10 小时， 得到酿酒酵母二级种子 液 ； 其中， 按照重量计， 所述第二液体培养基包括 ： 葡萄糖 5%、 蛋白胨 0.5%、 酵母膏 0.5%、 硫 酸镁 0.1%、 磷酸二氢钾 0.1%、 泡敌 0.05% ； 将所述酿酒酵母二级种子。

13、液接种至装有所述第二液体培养基的发酵罐中， 在转速为 210-230 转 / 分钟、 压力为 0.04-0.06 兆帕的条件下发酵培养 16-20 小时， 得到所述酿酒酵 母发酵液。 9. 根据权利要求 5 所述的秸秆腐熟剂的制作方法， 其特征在于， 在所述将绿僵菌原菌 种进行菌种活化、 摇瓶培养、 种子罐培养和发酵罐培养， 得到绿僵菌发酵液的步骤中， 具体 包括 ： 将绿僵菌原菌种接种至菌种活化培养基中， 在 28-30的温度下培养 70-74 小时， 得到 权 利 要 求 书 CN 103740693 A 3 3/3 页 4 活化后绿僵菌菌种 ； 其中， 按照重量计， 所述菌种活化培养基包。

14、括土豆 20%、 葡萄糖 2%、 琼脂 2%， 且其 pH 值为 7.0-7.5 ； 将所述活化后绿僵菌菌种接种至第一液体培养基中， 在温度为 26-30、 转速为 110-130 转 / 分钟的条件下摇瓶培养 12-16 小时， 得到绿僵菌一级种子液， 其中， 按照重量 计， 所述第一液体培养基包括细麦麸 5% ； 将所述绿僵菌一级种子液接种在装有第二液体培养基的种子发酵罐中， 在温度为 26-30、 转速为 110-130 转 / 分钟的条件下发酵培养 16-20 小时， 得到绿僵菌二级种子液 ； 其中， 按照重量计， 所述第二液体培养基包括玉米粉 5%、 硫酸铵 0.05%、 泡敌 0.。

15、02%、 注射青 霉素钾 0.0005%、 注射硫酸链霉素 0.0003%， 且其 pH 值为 4.0-4.5 ； 将所述绿僵菌二级种子液接种至装有所述第二液体培养基的发酵罐中， 在转速为 150-170 转 / 分钟、 压力为 0.04-0.06 兆帕的条件下发酵培养 84-90 小时， 得到所述绿僵菌 发酵液。 10. 根据权利要求 5 所述的秸秆腐熟剂的制作方法， 其特征在于， 在所述将所述混合物 粉碎后制剂， 得到秸秆腐熟剂的步骤中， 所述制剂包括制成粉剂。 权 利 要 求 书 CN 103740693 A 4 1/7 页 5 一种秸秆腐熟剂及其制作方法 技术领域 0001 本发明涉及。

16、生物技术领域， 具体而言， 涉及一种秸秆腐熟剂及其制作方法。 背景技术 0002 秸秆还田是秸秆利用的一种重要方式 ； 其一般都需要利用秸秆腐熟剂加速秸秆分 解。 秸秆腐熟剂中含有大量的酵母菌、 霉菌和芽孢杆菌等， 其大量繁殖能快速有效地将作物 秸秆分解成作物生长所需要的氮、 磷、 钾等大量元素和钙、 镁、 锰、 钼等中微量元素， 能够有 效改良土壤团粒结构， 提高土壤通气和保肥保水功能， 并且能产生热量和一定量的二氧化 碳， 从而改善植物的生长环境并促进秸秆循环的有效利用。 0003 但是， 秸秆直接还田为某些病虫害的发生创造了适宜的环境条件， 可使玉米螟安 全过冬以及蛴螬、 地老虎、 金针。

17、虫等地下害虫增多 ； 秸秆中的病原菌难以移出大田， 从而增 加了病原菌的数量。因此， 提供一种能够抑制田间病虫害的生长和繁殖的秸秆腐熟剂是本 领域亟待解决的一个技术问题。 发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种秸秆腐熟剂， 以解决上述的问题 ； 0005 本发明的另一个目的在于提供一种秸秆腐熟剂制作方法。 0006 在本发明的实施例中提供了一种秸秆腐熟剂， 包括草炭和含有菌体活性成分的微 生物菌群， 所述菌体活性成分为芽孢、 营养体或孢子 ； 0007 其中， 所述微生物菌群包括哈茨木霉、 枯草芽孢杆菌、 酿酒酵母和绿僵菌 ； 所述微 生物菌群的含量为 ： 0.5-5 亿个 / 克草炭。。

18、 0008 本发明提供的这种秸秆腐熟剂， 其包括含有菌体活性成分的微生物菌群和草炭， 并且微生物菌群的含量控制在 0.5-5 亿个 / 克草炭之间 ； 含有菌体活性成分的微生物菌群 作为秸秆腐熟剂的重要组份， 其具有很好的抗逆性， 能够在恶略的环境下存活 ； 当使用该秸 秆腐熟剂分解秸秆时， 由于哈茨木霉、 枯草芽孢杆菌具有抑制有害病原菌生长繁殖效果， 酿 酒酵母和绿僵菌具有抑制害虫生长繁殖效果， 因此， 长期存活的微生物菌群还可以很好的 作为杀虫、 杀菌剂， 其能够杀死病虫害或者抑制病虫害的生长和繁殖 ； 因此， 该秸秆腐熟剂 具备除了能够起到分解秸秆的作用之外， 其还具有抑制病虫害的生长和。

19、繁殖的效果。 0009 本发明还提供了一种腐熟剂的制作方法， 包括以下步骤 ： 0010 将哈茨木霉原菌进行菌种活化、 摇瓶培养、 种子罐培养和发酵罐培养， 得到哈茨木 霉发酵液 ； 0011 将枯草芽孢杆菌原菌进行菌种活化、 摇瓶培养、 种子罐培养和发酵罐培养， 得到枯 草芽孢杆菌发酵液 ； 0012 将酿酒酵母原菌进行菌种活化、 摇瓶培养、 种子罐培养和发酵罐培养， 得到酿酒酵 母发酵液 ； 0013 将绿僵菌原菌种进行菌种活化、 摇瓶培养、 种子罐培养和发酵罐培养， 得到绿僵菌 说 明 书 CN 103740693 A 5 2/7 页 6 发酵液 ； 0014 将所述哈茨木霉发酵液、 所。

20、述枯草芽孢杆菌发酵液、 所述酿酒酵母发酵液和所述 绿僵菌发酵液混合， 得到混合菌液 ； 0015 将所述混合菌液与既定重量的草炭吸附混拌， 得到含量为 0.5-5 亿个 / 克草炭的 混合物 ； 0016 将所述混合物粉碎后制剂， 得到秸秆腐熟剂。 0017 通过上述方法可以实现将草炭和微生物菌群制成秸秆腐熟剂。 附图说明 0018 图 1 示出了本发明实施例二提供的秸秆腐熟剂的制作流程图。 具体实施方式 0019 下面通过具体的实施例子并结合附图对本发明做进一步的详细描述。 0020 实施例一 0021 在本发明的实施例中提供了一种秸秆腐熟剂， 包括草炭和含有菌体活性成分的微 生物菌群， 所。

21、述菌体活性成分为芽孢、 营养体或孢子 ； 0022 其中， 所述微生物菌群包括哈茨木霉、 枯草芽孢杆菌、 酿酒酵母和绿僵菌 ； 所述微 生物菌群的含量为 ： 0.5-5 亿个 / 克草炭。 0023 本发明提供的这种秸秆腐熟剂， 其包括含有菌体活性成分的微生物菌群和草炭， 并且微生物菌群的含量控制在0.5亿-5亿个/克草炭之间 ； 含有菌体活性成分的微生物菌 群作为秸秆腐熟剂的重要组份， 其具有很好的抗逆性， 能够在恶略的环境下存活 ； 当使用该 秸秆腐熟剂分解秸秆时， 由于哈茨木霉、 枯草芽孢杆菌具有抑制有害病原菌生长繁殖效果， 酿酒酵母和绿僵菌具有抑制害虫生长繁殖效果， 因此， 长期存活的。

22、微生物菌群还可以很好 的作为杀虫、 杀菌剂， 其能够杀死病虫害或者抑制病虫害的生长和繁殖 ； 因此， 该秸秆腐 熟 剂具备除了能够起到分解秸秆的作用之外， 其还具有抑制病虫害的生长和繁殖的效果。 0024 此外， 本发明实施例提供的这种秸秆腐熟剂， 其微生物菌群为含有菌体活性成分 （芽孢、 孢子或者营养体） 的菌群， 含有菌体活性成分的微生物菌群， 其被吸附剂 （草炭） 吸附 后， 当期施加至秸秆后， 微生物菌群的生长和繁殖非常迅速， 因此， 其分解秸秆的效率也大 大提高。 0025 秸秆腐熟剂分解秸秆的能力很大程度上决定于微生物菌群所含菌的比例， 因此， 在本实施例中， 为了使得秸秆腐熟剂具。

23、有更好的分解能力以及抗病虫害的效果， 优选的， 哈 茨木霉、 枯草芽孢杆菌、 酿酒酵母和绿僵菌的个数比为 7:30:5:8。 0026 此外， 草炭作为吸附剂， 其用于使微生物菌群吸附在其表面和内部。在本实施例 中， 草炭的粒度为 0.08-0.1 毫米。 0027 另外， 在本实施例中， 哈茨木霉、 枯草芽孢杆菌、 酿酒酵母和绿僵菌均保藏在中 国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 其保藏号依次为 ： CGMCC No.7861、 CGMCC No.7850、 CGMCCNo.7849 和 CGMCC No.7848 ； 其保藏命名依次为 ： 哈茨木霉、 枯草芽孢杆菌、 酿酒酵母和绿僵菌。

24、 ； 其分类命名依次为 ： Trichoderma harzianum、 Baciilus subtilis、 Saccharomyces cerevisiae、 Metarhizium anisopliae ； 保藏日期均为2013年7月03日。 说 明 书 CN 103740693 A 6 3/7 页 7 0028 为了使得本发明实施例一的秸秆腐熟剂得到更好的应用， 更加有效应用到分解秸 秆以及病虫害防治中， 本发明还在上述实施例一的基础之上提供了实施例二， 实施例二是 实施例一的腐熟剂的具体制作方法， 现做详细的阐述和解释 ： 0029 实施例二 0030 本实施例的秸秆腐熟剂的制作方法。

25、包括以下步骤， 请参考图 1 ： 0031 步骤 101 ： 将哈茨木霉原菌进行菌种活化、 摇瓶培养、 种子罐培养和发酵罐培养， 得到哈茨木霉发酵液 ； 0032 步骤 102 ： 将枯草芽孢杆菌原菌进行菌种活化、 摇瓶培养、 种子罐培养和发酵罐培 养， 得到枯草芽孢杆菌发酵液 ； 0033 步骤 103 ： 将酿酒酵母原菌进行菌种活化、 摇瓶培养、 种子罐培养和发酵罐培养， 得到酿酒酵母发酵液 ； 0034 步骤 104 ： 将绿僵菌原菌种进行菌种活化、 摇瓶培养、 种子罐培养和发酵罐培养， 得到绿僵菌发酵液 ； 0035 其中， 步骤101-步骤104为分别将哈茨木霉原菌、 枯草芽孢杆菌原。

26、菌、 酿酒酵母原 菌和绿僵菌原菌种通过一系列的扩培操作， 得到发酵液的过程， 其制备顺序随意， 可以分步 操作， 也可以同时进行。 0036 此外， 在具体的操作过程中， 4 种菌均需要通过菌种活化、 摇瓶培养、 种子罐培养以 及发酵罐培养的过程， 而为了简化操作过程， 在进行每一步操作的过程中， 优选的， 可以对 4 种菌都进行处理， 例如同时将 4 种菌进行活化处理， 然后同时再进行摇瓶培养， 待所有的菌 摇瓶培养都完成之后再进入下一个环节， 直到完成发酵罐培养的过程， 进而得到 4 种菌的 发酵液。 0037 步骤 105 ： 将哈茨木霉发酵液、 枯草芽孢杆菌发酵液、 酿酒酵母发酵液和绿。

27、僵菌发 酵液混合， 得到混合菌液 ； 0038 在步骤 105 中， 得到多种发酵液之后， 需要将多种发酵液混合， 得到混合菌液。 0039 步骤 106 ： 将混合菌液与既定重量的草炭吸附混拌， 得到含菌量为 0.5 亿个 / 克草 炭的混合物 ； 0040 步骤 107 ： 将混合物粉碎后制剂， 得到秸秆腐熟剂。 0041 步骤 106 和步骤 107 分别为将混合菌液与草炭混合得到混合物、 将得到的混合物 粉碎制剂的过程， 优选的， 在制剂的过程中， 制成粉剂。 0042 在本实施例中， 步骤 101-104 均包含菌种活化 - 摇瓶培养 - 种子罐培养和发酵罐 培养的操作， 具体的， 。

28、为了更好的实现扩大培养的效果， 提高各菌的存活率， 各步骤可以优 选按照以下操作得以实现 ： 0043 步骤 101 可以通过以下操作得以实现 ： 0044 将哈茨木霉原菌接种至菌种活化培养基中， 在 28-30的温度下培养 70-74 小时， 得到活化后哈茨木霉菌种 ； 其中， 按照重量计， 菌种活化培养基包括土豆 20%、 葡萄糖 2% 和 琼脂 2%， 且其 pH 值为 7.0-7.5 ； 0045 具体的， 上述将哈茨木霉原菌活化的操作可以为用接种针在无菌条件下从原菌种 斜面上挑取少许菌苔， 在倒有菌种活化培养基的培养皿内进行划线， 然后置 28-30温箱内 培养 72h， 肉眼观察，。

29、 菌苔丰满， 涂片、 染色检查无杂菌， 孢子整齐时， 可得到活化后哈茨木霉 说 明 书 CN 103740693 A 7 4/7 页 8 菌种。 0046 将活化后哈茨木霉菌种至第一液体培养基中， 在温度为 26-30， 转速为 110-130 转 / 分钟的条件下培养 12-16h， 得到哈茨木霉一级种子液， 其中， 第一液体培养基含有重量 份数为 5% 的麦麸 ； 0047 在培养的过程中， 优选将活化后的哈茨木霉菌种于28， 转速120转/分钟的全温 振荡培养箱中培养 12-16 小时， 镜检观察哈茨木霉菌丝较多呈团簇状， 即可得到哈茨木霉 一级种子液。 0048 将哈茨木霉一级种子液接。

30、种在装有第二液体培养基种子发酵罐中， 在温度为 26-30、 转速为 110-130 转 / 分钟的条件下发酵培养 16-20 小时， 得到哈茨木霉二级种子 液 ； 其中， 按照重量计， 第二 液体培养基包括玉米粉 5%、 硫酸铵 0.05%、 泡敌 0.02%、 注射青 霉素钾 0.0005%、 注射硫酸链霉素 0.0003%， 且其 pH 值为 4.0-4.5 ； 0049 其中， 在上述种子发酵罐的操作中， 优选将哈茨木霉一级种子液于温度为 28、 转 速 120 转 / 分钟的条件下培养 16-20 小时， 镜检观察菌丝较多呈团簇状， 即可得到哈茨木霉 二级种子液， 以进行后续的发酵罐。

31、培养。 0050 将哈茨木霉二级种子液接种至装有第二液体培养基的发酵罐中， 在转速为 150-170 转 / 分钟、 压力为 0.04-0.06 兆帕的条件下发酵培养 84-90 小时， 得到哈茨木霉发 酵液。 0051 其中， 在上述操作中， 优选的， 搅拌速度 （即转速） 为 160 转 / 分钟， 罐压为 0.05 兆 帕 ； 通气量 ： 发酵前期 1:0.5（V/Vmin） ， 后期逐渐调至 1:1（V/Vmin） ， 检测含杂菌率 0.3%， 含菌量 5 亿个孢子 /ml， 即可放罐， 得到哈茨木霉发酵液。 0052 具体的， 在本实施例中， 步骤 102 可以通过以下操作得以完成 。

32、： 0053 将枯草芽孢杆菌原菌接种至菌种活化培养基中， 在 28-30的温度下培养 22-26 小时， 得到活化后枯草芽孢杆菌菌种 ； 其中， 按照重量计， 菌种活化培养基包括牛肉膏 0.3%、 蛋白胨 0.5%、 NaCl0.5%、 琼脂 2%， 且其 pH 值为 7.0-7.5 ； 0054 具体的， 上述操作可以为用接种针在无菌条件下从原菌种斜面上挑取少许菌苔， 在倒有菌种活化培养基的培养皿内进行划线， 然后置 28-30温箱内培养 24 小时， 肉眼观 察， 菌苔丰满， 涂片、 染色检查无杂菌， 孢子整齐时， 可得到活化后枯草芽孢杆菌菌种。 0055 将活化后枯草芽孢杆菌菌种接种至第。

33、一液体培养基的摇瓶中， 在温度为 30-34、 转速为 170-190 转 / 分钟的条件下培养 8-10h， 得到枯草芽孢杆菌一级种子液， 其中 , 第一 液体培养基包括牛肉膏 0.3%、 氯化钠 0.5%、 蛋白胨 0.7%， 且其 pH 值为 7.0 ； 优选的， 具体的 操作可以为 ： 从活化后的枯草芽孢杆菌的平板上刮取少许菌苔放入摇瓶中， 于 32、 转速 为 180 转 / 分钟的全温振荡培养箱中培养 8-10 小时， 镜检观察枯草芽孢杆菌生长状态达到 对数期， 得到枯草芽孢杆菌一级种子液， 即可上种子罐进行培养。 0056 将枯草芽孢杆菌一级种子液接种到装有第二液体培养基的种子发。

34、酵罐中， 在温度 为 30-34、 转速为 210-230 转 / 分钟的条件下发酵培养 8-10 小时， 得到枯草芽孢杆菌二 级种子液 ； 其中， 第二液体培养基包括 ： 豆粕粉 2%、 鱼粉 0.5%、 玉米粉 1.8%、 淀粉 0.4%、 硫酸 镁 0.06%、 磷酸氢二钾 0.5%、 泡敌 0.025%， 且其 pH 值为 7.0-7.5 ； 在培养的过程中， 同样， 需 要进行检测， 待枯草芽孢杆菌生长至对数期时， 即可得到枯草芽孢杆菌二级种子液， 并用于 后续的发酵培养。 说 明 书 CN 103740693 A 8 5/7 页 9 0057 将枯草芽孢杆菌二级种子液接种至含有第三。

35、液体培养基的发酵罐中， 在转速为 210-230 转 / 分钟、 压力为 0.04-0.06 兆帕的条件下发酵培养 28-32 小时， 得到枯草芽孢杆 菌发酵液。 0058 优选的， 将枯草芽孢杆菌发酵培养的操作可具体设置为以下参数 ： 将枯草芽孢 杆菌二级种子液在搅拌速度 220 转 / 分钟、 罐压 0.05 兆帕 ； 通气量 ： 发酵前期 1:0.5（V/ Vmin） ， 后期逐渐调至 1:1.5（V/Vmin） ， 培养周期为 28-32 小时， 在芽孢形成率达到 90% 以上， 杂菌率 0.3%， 含菌量 100 亿个芽孢 /ml， 即可放罐， 进而得到枯草芽孢杆菌发酵 液。 005。

36、9 具体的， 在本实施例中， 步骤 103 可以通过以下操作得以完成 ： 0060 将酿酒酵母原菌接种至菌种活化培养基中， 在 28-30的温度下培养 70-74 小时， 得到活化后酿酒酵母菌种 ； 其中， 按照重量计， 菌种活化培养基包括酵母膏 1%、 蛋白胨 2%、 葡萄糖 2%、 琼脂 2%， 且其 pH 值为 7.0-7.5 ； 0061 具体的， 上述将酿酒酵母活化的操作可以为用接种针在无菌条件下从原菌种斜面 上挑取少许菌苔， 在倒有菌种活化培养基的培养皿内进行划线， 然后置 28-30温箱内培养 72 小时， 肉眼观察， 菌苔丰满， 涂片、 染色检查无杂菌， 孢子整齐时， 可得到活。

37、化后酿酒酵母 菌种。 0062 将活化后酿酒酵母菌种接种至第一液体培养基中， 在温度为 26-30、 转速为 170-190 转 / 分钟的条件下摇瓶培养 8-10 小时， 得到酿酒酵母一级种子液， 其中， 按照重量 计， 第一液体培养基包括酵母膏1%、 蛋白胨2%、 葡萄糖2%， 且其pH值7.0 ； 优选的， 可通过将 活化后的酿酒酵母于 28， 转速 180 转 / 分钟的全温振荡培养箱中培养 8-10 小时， 镜检观 察酵母菌呈芽殖状态， 即可得到一级种子液， 可进行种子罐培养。 0063 将酿酒酵母一级种子液接种在装有第二液体培养基种子发酵罐中， 在温度为 26-30、 转速为 21。

38、0-230 转 / 分钟的条件下发酵培养 8-10 小时， 得到酿酒酵母二级种子 液 ； 其中， 按照重量计， 第二液体培养基包括 ： 葡萄糖 5%、 蛋白胨 0.5%、 酵母膏 0.5%、 硫酸镁 0.1%、 磷酸二氢钾 0.1%、 泡敌 0.05% ； 优选的， 酿酒酵母一级种子液在温度为 28、 转速为 220 转 / 分钟的搅拌条件下， 培养 8-10 小时， 镜检观察酿酒酵母呈芽殖状态， 即可得到酿酒 酵母二级种子液， 待转入发酵罐进行发酵培养。 0064 将酿酒酵母二级种子液接种至装有第二液体培养基的发酵罐中， 在转速为 210-230 转 / 分钟、 压力为 0.04-0.06 。

39、兆帕的条件下发酵培养 16-20 小时， 得到酿酒酵母发 酵液。 0065 优选的， 在得到酿酒酵母发酵液的操作过程中的具体工艺参数为 ： 搅拌速度 220 转 / 分钟、 罐压 0.05 兆帕 ； 通气量 ： 1:0.5 （V/V min） 。发酵培养周期为 16-20 小时， 在 90% 菌体不再芽殖， 杂菌率0.3%， 含菌量10亿个菌体/ml即可放罐， 得到酿酒酵母发酵液。 0066 具体的， 在本实施例中， 步骤 104 可以通过以下操作得以完成 ： 0067 将绿僵菌原菌种接种至菌种活化培养基中， 在 28-30的温度下培养 70-74 小时， 得到活化后绿僵菌菌种 ； 其中， 按。

40、照重量计， 菌种活化培养基包括土豆 20%、 葡萄糖 2%、 琼脂 2%， 且其 pH 值为 7.0-7.5 ； 0068 具体的， 上述将绿僵菌原菌种活化的操作可以为 ： 用接种针在无菌条件下从原菌 种斜面上挑取少许菌苔， 在倒有菌种活化培养基的培养皿内进行划线， 然后置 28-30温箱 说 明 书 CN 103740693 A 9 6/7 页 10 内培养 72h， 肉眼观察， 菌苔丰满， 涂片、 染色检查无杂菌， 孢子整齐时， 可得到活化后绿僵菌 菌种。 0069 将活化后绿僵菌菌种接种至第一液体培养基中， 在温度为 26-30、 转速为 110-130 转 / 分钟的条件下摇瓶培养 1。

41、2-16 小时， 得到绿僵菌一级种子液， 其中， 按照重量 计， 第一液体培养基包括细麦麸 5% ； 0070 在培养的过程中， 优选将活化后的绿僵菌菌种于28、 转速120转/分钟的全温振 荡培养箱中培养 12-16h， 镜检观察绿僵菌较多的菌丝呈团簇状， 即可得到绿僵菌一级种子 液。 0071 将绿僵菌一级种子液接种在装有第二液体培养基种子发酵罐中， 在温度为 26-30、 转速为 110-130 转 / 分钟的条件下发酵培养 16-20 小时， 得到绿僵菌二级种子液 ； 其中， 按照重量计， 第二液 体培养基包括玉米粉 5%、 硫酸铵 0.05%、 泡敌 0.02%、 注射青霉素 钾 0。

42、.0005%、 注射硫酸链霉素 0.0003%， 且其 pH 值为 4.0-4.5 ； 0072 其中， 在上述将绿僵菌进行种子罐发酵培养的操作中， 优选将绿僵菌一级种子液 于温度为 28、 转速 120 转 / 分钟的条件下培养 16-20h， 镜检观察菌丝较多呈团簇状， 即可 得到绿僵菌二级种子液， 以进行后续的发酵罐培养。 0073 将绿僵菌二级种子液接种至装有第二液体培养基的发酵罐中， 在转速为 150-170 转 / 分钟、 压力为 0.04-0.06 兆帕的条件下发酵培养 84-90 小时， 得到绿僵菌发酵液 ； 0074 其中， 在得到绿僵菌发酵液操作中， 优选的， 搅拌速度 （。

43、即转速） 为 160 转 / 分钟、 罐 压为 0.05 兆帕 ； 通气量 ： 发酵前期 1:0.5（V/V min） ， 后期逐渐调至 1:1（V/V min） ， 检测 含杂菌率 0.3%， 含量 5 亿个孢子 /ml， 即可放罐， 得到绿僵菌发酵液。 0075 此外， 在上述所有的操作中， 所使用的培养基以及培养液 （液体培养基） 均优选在 0.11MPa压力下灭菌30分钟， 以防止杂菌生长。 而且， 种子发酵罐以及发酵罐在使用之前也 需要灭菌。 0076 在得到混合菌液之后， 再将混合菌液和草炭混合的过程中， 优选的， 机械搅拌 3-6 分钟， 使芽孢、 孢子或者营养体全部被吸附， 混。

44、合均匀之后， 得到混合物。 0077 在直接的过程中， 优选的， 将得到的混合物优选利用皮带机传送到链条粉碎机粉 碎， 使其几乎达到 100% 能够通过 0.09 毫米的孔径筛， 即可得到粉剂成品。 0078 另外， 本实施例的这种秸秆腐熟剂可以包括 ： 枯草芽孢杆菌 0.3 亿个芽孢 / 克、 哈 茨木霉 0.07 亿个孢子 / 克、 绿僵菌 0.08 亿个孢子 / 克和酿酒酵母菌 0.05 亿个菌体 / 克混 合制备含菌量为 0.5 亿 / 克的具有腐熟秸秆以及防治病虫害的防病虫秸秆腐熟剂。 0079 通过实验证明， 收割后将作物秸秆均匀平铺在田面上， 秸秆粉碎后还田效果更好。 每亩地均匀。

45、撒施按照上述比例制成的腐熟剂 2 公斤， 并根据当地施肥习惯补施适量 N、 P、 K。 采用机械或人工拍打压秆， 使秸秆沉降到地表， 与泥土相粘， 防止秸秆泡水后浮起。保持土 壤含水量 50%-60%， 堆腐大约 15 天， 秸秆即可腐解。 0080 该秸秆腐熟菌剂在田间的应用试验研究表明， 秸秆还田加施防病虫秸秆腐熟剂， 能加快多种作物秸秆的腐熟分解， 秸秆可提早 5-10 天腐熟。秸秆腐解后提高了土壤的基本 肥力， 改善了土壤的理化性质， 进而有效的促进作物生长、 增加作物产量、 改善作物品质、 提 高作物抗逆性等。它具有广泛的适应性， 在多种作物秸秆上均表现较为稳定的效果。 0081 防。

46、病虫秸秆腐熟剂应用于玉米秸秆还田种植小麦、 水稻秸秆还田种植水稻、 玉米 说 明 书 CN 103740693 A 10 7/7 页 11 秸秆还田种植玉米等田间试验， 作用效果显著可以有效控制秸秆还田后引发的病虫害。对 作物纹枯病防治效果达到 42.3%-53.9%， 对地下害虫的防治效果达到 39.4%-40.7% ； 同时， 具有促长增产的效果， 可使作物亩增产 5%-10%， 作物品质明显得到改善， 作物的抗倒伏、 抗 旱性、 抗寒性都明显提高 ； 此外， 该秸秆腐熟剂与其它农业措施兼容性好， 可与杀虫剂、 除草 剂、 化肥、 微量元素、 生长调节类物质等混合使用 ； 不受环境因子影响， 适应性广， 在各地作 物秸秆上均可推广使用。 0082 以上所述仅为本发明的优选实施例而已， 并不用于限制本发明， 对于本领域的技 术人员来说， 本发明可以有各种更改和变化。凡在 本发明的精神和原则之内， 所作的任何 修改、 等同替换、 改进等， 均应包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 CN 103740693 A 11 1/1 页 12 图 1 说 明 书 附 图 CN 103740693 A 12 。