金鸣片的质量控制检测方法.pdf

《金鸣片的质量控制检测方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《金鸣片的质量控制检测方法.pdf（18页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、(10)申请公布号 CN 103954727 A (43)申请公布日 2014.07.30 CN 103954727 A (21)申请号 201410204452.1 (22)申请日 2014.05.15 G01N 30/90(2006.01) G01N 30/02(2006.01) (71)申请人 山东宏济堂制药集团有限公司 地址 250100 山东省济南市历城区华龙路 360 号 (72)发明人 毕丽娟 李海燕 李樱 李军红 李秀凤 张爱均 (74)专利代理机构 济南舜源专利事务所有限公 司 37205 代理人 江莉莉 (54) 发明名称 金鸣片的质量控制检测方法 (57) 摘要 本发明属。

2、于药物检测技术领域， 具体涉及一 种金鸣片质量控制检测方法， 本发明在原检测标 准基础上改进了金鸣片处方中薄荷脑薄层色谱鉴 别方法， 增加了金鸣片处方中丹参高效液相色谱 法含量测定项。 本发明设计的检查项目合理， 精密 度及重现性好， 其方法考察验证中， 丹酚酸 B 平均 回收率为 97.69， n 6， RSD 2.87 ； 重现性 考察中， 丹酚酸B的RSD为1.205； 稳定性考察中 丹酚酸 B 相对标准偏差 RSD 为 1.91， 本发明用 于金鸣片质量控制， 能够提高产品质量的可控性。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 11 页 附图 4 页 (19)中华人民共和国。

3、国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书11页 附图4页 (10)申请公布号 CN 103954727 A CN 103954727 A 1/2 页 2 1. 金鸣片的质量控制检测方法， 其特征在于， 该方法包括下述的步骤 ： （1） 取金鸣片研细， 加乙醇， 水浴， 取上清液， 过滤， 浓缩， 得供试品溶液 ； 取胆酸对照品， 配制成每 1ml 中含 1mg 胆酸的溶液， 作为对照品溶液 ； 按薄层色谱法试验展开 ； （2） 取金鸣片研细， 加乙醇， 水浴， 取上清液， 过滤， 浓缩， 得供试品溶液 ； 取薄荷脑对照品， 配制成每 1ml 中含 1mg 薄荷脑的溶液， 作。

4、为对照品溶液 ； 按薄层色谱法试验展开 ； （3） 检查 ； （4） 高效液相色谱法测定含量。 2. 如权利要求 1 所述的金鸣片的质量控制检测方法， 其特征在于， 该方法包括下述的 步骤 ： （1） 取规格为 0.6g/ 片的金鸣片 5 片或 0.3g/ 片的金鸣片 10 片， 研细， 置于 25ml 量瓶 中， 加乙醇至刻度， 置水浴中振摇 10 分钟， 放置 4 小时， 取上清液， 过滤， 滤液浓缩至 5ml， 作 为供试品溶液 ； 另取胆酸对照品， 加乙醇配制成每 1ml 中含 1mg 胆酸的溶液， 作为对照品溶液 ； 按照中国药典 2010 版一部附录 VI B 薄层色谱法试验， 吸。

5、取供试品溶液 10l、 对照品 溶液 20l， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以三氯甲烷乙醚冰乙酸为展开剂， 展开， 取 出， 晾干， 喷以10磷钼酸乙醇溶液， 在120烘8-12分钟， 供试品色谱中， 在与对照品色谱 相应的位置上， 显相同颜色的斑点 ； （2） 取规格为0.6g/片的金鸣片5片或0.3g/片的金鸣片10片， 研细， 加无水乙醇6ml， 振摇 10 分钟， 过滤， 滤液加无水乙醇至 5ml， 作为供试品溶液 ； 另取薄荷脑对照品加无水乙醇制成每 1ml 中含 1mg 的溶液， 作为对照品溶液 ； 照中国药典 2010 版一部附录 VI B 薄层色谱法试验， 吸取上述供试品。

6、溶液和对照品溶 液各 5l， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以环己烷乙酸乙酯为展开剂， 展开， 取出 , 晾 干， 喷以 5香草醛硫酸溶液， 在 105加热至斑点显色清晰 ； 供试品色谱中， 在与对照品色 谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点 ； （3） 检查 ： 应符合中国药典 2010 版一部附录 I D 片剂项下有关的各项规定 ； （4） 含量测定 ： 丹参照中国药典 2010 版一部附录 D 高效液相色谱法测定 ； 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ； 以甲醇 - 乙腈 - 甲 酸 - 水为流动相 ； 检测波长为 286nm， 理论板数按丹酚酸 B 峰计算不低。

7、于 3000 ； 对照品溶液的制备 ： 取丹酚酸 B 对照品适量， 精密称定， 加 75甲醇制成每 1ml 中含 45g 的溶液， 即得 ； 供试品溶液的制备 ： 取规格为 0.6g/ 片的金鸣片 30 片或 0.3g/ 片的金鸣片 60 片， 除 去包衣， 精密称定， 研细， 取 3.95-4.05g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入 75甲醇 50ml， 密塞、 称定重量， 超声处理， 放冷， 再称定重量， 用 75% 甲醇补足减失的重量， 摇匀， 滤 过， 取续滤液， 即得 ； 测定法 ： 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l， 注入液相色谱仪， 测定， 即得。 3. 如权利。

8、要求 1 所述的金鸣片的质量控制检测方法， 其特征在于， 所述的金鸣片中规 格为 0.6g/ 片的金鸣片中含丹参以丹酚酸 B（C36H30O16） 计， 不少于 0.26mg ； 规格为 0.3g/ 权 利 要 求 书 CN 103954727 A 2 2/2 页 3 片的金鸣片中含丹参以丹酚酸 B（C36H30O16） 计， 不少于 0.13mg。 4. 如权利要求 1 所述的金鸣片的质量控制检测方法， 其特征在于， 所述的步骤 （1） 中， 水浴温度为 98-100。 5. 如权利要求 1 所述的金鸣片的质量控制检测方法， 其特征在于， 所述的步骤 （1） 中， 三氯甲烷、 乙醚、 冰乙酸。

9、的体积比为 2:2:1。 6. 如权利要求 1 所述的金鸣片的质量控制检测方法， 其特征在于， 所述的步骤 （2） 中， 所述的环己烷、 乙酸乙酯的体积比为 17:3。 7. 如权利要求 1 所述的金鸣片的质量控制检测方法， 其特征在于， 所述的步骤 （4） 中， 超声处理的时间为 10-20 分钟， 功率 300W, 频率 40kHz。 8. 如权利要求 1 所述的金鸣片的质量控制检测方法， 其特征在于， 所述的步骤 （4） 中甲 醇、 乙腈、 甲酸、 水的体积比为 30:10:1:59。 权 利 要 求 书 CN 103954727 A 3 1/11 页 4 金鸣片的质量控制检测方法 技术。

10、领域 0001 本发明属于药物检测技术领域， 具体涉及一种金鸣片的质量控制检测方法。 背景技术 0002 金鸣片功能主治 ： 清热生津， 开音利咽。用于慢性咽炎， 慢性喉炎， 咽喉肿痛， 声哑 失音， 用声过度后的咽干、 喉痒、 发声费力、 起声困难等症。 0003 金鸣片原质量标准收载于中华人民共和国卫生部药品标准新药转正标准第七册。 原标准中仅有药材牛黄、 薄荷脑薄层色谱鉴别， 此项为定性检测项目， 不能保证对金鸣片进 行更精确的质量控制与检测， 例如金鸣片中的丹酚酸 B 的成分并没有相关的文献披露其测 定方法。 0004 原薄荷脑薄层色谱鉴别的展开剂为石油醚 - 醋酸乙酯 - 苯 （18。

11、:2:4） ， 其中苯是有 毒试剂， 职业活动中， 苯主要以蒸气形态经呼吸道进入人体， 短时间吸入高浓度苯蒸气和长 期吸入低浓度苯蒸气均可引起作业人员身体损害。短时间大量吸入可造成急性轻度中毒， 表现为头痛、 头晕、 咳嗽、 胸闷、 兴奋、 步态蹒跚。 此时如继续吸入则可发展为重度急性中毒， 病人神志模糊、 血压下降， 肌肉震颤， 呼吸浅快、 脉搏快而弱。 抢救及时经数小时或数天可恢 复健康， 但严重者也可因呼吸中枢麻痹死亡。长期低浓度接触可发生慢性中毒， 症状逐渐 出现， 以血液系统和神经衰弱症候群为主， 表现为血白细胞、 血小板和红细胞减少、 头晕、 头 痛、 记忆力下降、 失眠等。严重者。

12、可发生再生障碍性贫血， 甚至白血病、 死亡。 0005 因此需要针对上述的方法进行改进， 设计一种新的方法， 在不影响检测结果的同 时， 降低操作人员的中毒风险。 0006 丹酚酸 B 对多种心、 脑血管疾病及肝肾功能损伤和肺纤维化等组织器官病变均有 明显的保护作用， 业已得到人们日益广泛的关注。丹酚酸 B 在中药中的含量定量检测的相 关文献也鲜有披露。 0007 而且由于对丹酚酸 B 的研究起步较晚， 有关其含量测定的报道并不多见， 曾有文 献报道采用反相高效液相色谱法对鼠尾草属植物中所含的丹酚酸 B 进行定量测定， 其样品 预处理方法为 ： 先用水浸泡过夜 - 水热提 30 分钟 - 盐酸。

13、酸化 - 乙酸乙酯萃取 - 浓缩 - 甲醇 溶解并定容， 其色谱分离采用双泵梯度法。 但是目前的研究结果表明， 作为一种强抗氧化剂 的丹酚酸 B 其本身的化学结构并不稳定， 在加温、 光照、 潮湿和暴露在空气的条件下， 丹酚 酸 B 会发生明显的降解而其中温度的影响尤为突出， 在上述的文献方法中， 样品需要经较 长时间的高温， 影响测定结果的可靠性， 且其预处理的过程比较繁琐， 可操作性较差。 0008 CN1435688A 披露了一种丹参中丹酚酸 B 的定量测定方法， 该方法包括下述的步 骤 ： 采用超声波处理 - 水提取法对样品预处理， 超声波处理温度为 0-8； 用 C16、 C18、 。

14、C8键合 相硅胶为固定相， 以甲醇 - 乙腈 - 水 - 甲酸 （三氟乙酸） 或乙腈 - 水 - 甲酸 （三氟乙酸） 为流 动相 ； 样品进行反相色谱分离， 紫外检测。 该发明的样品预处理方法具有一定的专一性和良 好的回收率，（ 95%） ， 与上述的液相色谱测定相配合， 可简便、 可靠地完成丹参生药和固体 制剂、 注射剂中丹酚酸B的定量测定， 其各项方法学指标均可满足2000版中国药典的规定。 说 明 书 CN 103954727 A 4 2/11 页 5 上述文献方法中， 样品需要在 0-8超声波处理， 可操作性较差， 而采用本发明的方法， 常温 即可进行提取， 利于检验。 发明内容 00。

15、09 为了解决上述的技术问题， 本发明提供了一种精密度高， 重现性好， 稳定性好的金 鸣片的质量控制检测方法。 0010 本发明的金鸣片的质量控制检测方法是通过下述的技术方案来解决以上的技术 问题的 ： 金鸣片的质量控制检测方法包括下述的步骤 ： （1） 取金鸣片研细， 加乙醇， 水浴， 取上清液， 过滤， 浓缩， 得供试品溶液 ； 取胆酸对照品， 配制成每 1ml 中含 1mg 胆酸的溶液， 作为对照品溶液 ； 按薄层色谱法试验展开 ； （2） 取金鸣片研细， 加乙醇， 水浴， 取上清液， 过滤， 浓缩， 得供试品溶液 ； 取薄荷脑对照品， 配制成每 1ml 中含 1mg 薄荷脑的溶液， 作。

16、为对照品溶液 ； 按薄层色谱法试验展开 ； （3） 检查 ； （4） 高效液相色谱法测定含量。 0011 具体的， 金鸣片的质量控制检测方法包括下述的步骤 ： （1） 取规格为 0.6g/ 片的金鸣片 5 片或 0.3g/ 片的金鸣片 10 片， 研细， 置于 25ml 量瓶 中， 加乙醇至刻度， 置水浴中振摇 10 分钟， 放置 4 小时， 取上清液， 过滤， 滤液浓缩至 5ml， 作 为供试品溶液 ； 另取胆酸对照品， 加乙醇配制成每 1ml 中含 1mg 胆酸的溶液， 作为对照品溶液 ； 按照中国药典 2010 版一部附录 VI B 薄层色谱法试验， 吸取供试品溶液 10l、 对照品 溶。

17、液 20l， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以三氯甲烷乙醚冰乙酸为展开剂， 展开， 取 出， 晾干， 喷以10磷钼酸乙醇溶液， 在120烘8-12分钟， 供试品色谱中， 在与对照品色谱 相应的位置上， 显相同颜色的斑点 ； （2） 取规格为0.6g/片的金鸣片5片或0.3g/片的金鸣片10片， 研细， 加无水乙醇6ml， 振摇 10 分钟， 过滤， 滤液加无水乙醇至 5ml， 作为供试品溶液 ； 另取薄荷脑对照品加无水乙醇制成每 1ml 中含 1mg 的溶液， 作为对照品溶液 ； 照中国药典 2010 版一部附录 VI B 薄层色谱法试验， 吸取上述供试品溶液和对照品溶 液各 5l， 分别。

18、点于同一硅胶 G 薄层板上， 以环己烷乙酸乙酯为展开剂， 展开， 取出 , 晾 干， 喷以 5香草醛硫酸溶液， 在 105加热至斑点显色清晰 ； 供试品色谱中， 在与对照品色 谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点 ； （3） 检查 ： 应符合中国药典 2010 版一部附录 I D 片剂项下有关的各项规定 ； （4） 含量测定 ： 丹参照中国药典 2010 版一部附录 D 高效液相色谱法测定 ； 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ； 以甲醇 - 乙腈 - 甲 酸 - 水为流动相 ； 检测波长为 286nm， 理论板数按丹酚酸 B 峰计算不低于 3000 ； 对照品溶液的制备。

19、 ： 取丹酚酸 B 对照品适量， 精密称定， 加 75甲醇制成每 1ml 中含 45g 的溶液， 即得 ； 说 明 书 CN 103954727 A 5 3/11 页 6 供试品溶液的制备 ： 取规格为 0.6g/ 片的金鸣片 30 片或 0.3g/ 片的金鸣片 60 片， 除 去包衣， 精密称定， 研细， 取 3.95-4.05g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入 75甲醇 50ml， 密塞、 称定重量， 超声处理， 放冷， 再称定重量， 用 75% 甲醇补足减失的重量， 摇匀， 滤 过， 取续滤液， 即得 ； 测定法 ： 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l， 注入液相色谱仪，。

20、 测定， 即得。 0012 金鸣片的质量控制检测方法中， 金鸣片中规格为 0.6g/ 片的金鸣片中含丹参以 丹酚酸 B（C36H30O16） 计， 不得少于 0.26mg ； 规格为 0.3g/ 片的金鸣片中含丹参以丹酚酸 B （C36H30O16） 计， 不得少于 0.13mg。 0013 上述的步骤 （1） 中， 水浴温度为 98-100。 0014 上述的步骤 （1） 中， 三氯甲烷、 乙醚、 冰乙酸的体积比为 2:2:1。 0015 上述的步骤 （2） 中， 所述的环己烷、 乙酸乙酯的体积比为 17:3。 0016 上述的步骤 （4） 中， 超声处理的时间为 10-20 分钟， 功率 。

21、300W, 频率 40kHz。 0017 上述的步骤 （4） 中甲醇、 乙腈、 甲酸、 水的体积比为 30:10:1:59。 0018 本发明的有益效果在于， 采用本发明的方法对金鸣片的质量控制， 准确度高、 重现 性好， 稳定性好， 其方法考察验证中， 丹酚酸 B 平均回收率为 97.69， n 6， RSD 2.87； 重现性考察中， 丹酚酸 B 的 RSD 为 1.205 ； 稳定性考察中丹酚酸 B 相对标准偏差 RSD 为 1.91。 附图说明 0019 图 1 本发明的丹酚酸 B 对照品图谱 ； 图 2 为空白图谱 ； 图 3 为样品图谱 ； 图 4 为本发明的实施例 1 的线性回归。

22、图 ； 图 5 为人工牛黄薄层色谱， 从左往右的顺序依次为对照品 - 样品 1- 样品 2- 样品 3- 空 白对照 ； 图6为原来标准中的薄荷脑薄层色谱， 从左往右顺序依次为 ： 样品1-样品2-样品3-对 照品 ； 图7为改进后的薄荷脑薄层色谱， 从左往右顺序依次为 ： 空白对照-对照品-样品1-样 品 2- 样品 3。 具体实施方式 0020 下面结合附图和具体实施方式来对本发明作更进一步的说明， 以便本领域的技术 人员更了解本发明， 但并不以此限制本发明。 0021 实施例 1 将本发明的方法应用于检测金鸣片中丹酚酸 B 的含量的检测上， 其具体的步骤如下 ： （1） 色谱条件 ： 以。

23、十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ； 以甲醇 - 乙腈 - 甲酸 - 水 （甲醇、 乙腈、 甲酸、 水的 体积比为 30:10:1:59） 为流动相 ； 检测波长为 286nm。理论板数按丹酚酸 B 峰计算应不低 于 3000 ； 说 明 书 CN 103954727 A 6 4/11 页 7 （2） 对照品溶液的制备 ： 取丹酚酸 B 对照品适量， 精密称定， 加 75甲醇制成每 1ml 中含 45g 的溶液， 即得。 0022 （3） 供试品溶液的制备 ： 取规格为 0.6g/ 片的本品 30 片， 除去包衣， 精密称定， 研细， 取约 4.0g， 精密称定， 置具 塞锥形瓶中， 精密加入 7。

24、5甲醇 50ml， 密塞、 称定重量， 超声处理 （功率 300W, 频率 40kHz） 15 分钟， 放冷， 再称定重量， 用 75% 甲醇补足减失的重量， 摇匀， 滤过， 取续滤液， 即得 ； （4） 测定 ： 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l， 注入液相色谱仪， 测定， 即得。 0023 本发明的方法应用于金鸣片中丹酚酸 B 的检测中方法学验证 1. 准确度 采用加样回收试验， 取已经测知含量的样品 2g， 精密称定， 精密加入丹酚酸 B 对照品适 量， 按照供试品制备方法进行提取、 测定， 计算， 结果丹酚酸B平均回收率为97.69， n6， RSD 2.87。表明本法方法准确。

25、， 结果见表 1。 0024 回收率 （C A） B100 A ： 样品所含被测成分含量 B: 加入纯品量 C ： 实测值 表 1 丹酚酸 B 回收率测定结果 2. 精密度 重复性 取批号为1311008批样品， 照含量测定方法制备6个供试品溶液进行测定， 计算相对标 准偏差， 结果丹酚酸 B 的 RSD 为 1.205。表明该方法重复性良好， 结果见表 2。 0025 表 2 重复性试验结果 说 明 书 CN 103954727 A 7 5/11 页 8 重现性 实验人员 ： 中心化验室检验人员 实验地点 ： 中心化验室 实验仪器 ： 高效液相色谱仪 ： 岛津 LC-10AT 型恒流泵， 岛。

26、津 SPD-10A 紫外检测器 ； 色谱 柱 ： Kromasil C18柱 （250mm4.6mm， 5m） ； 对同一供试品重复测定 6 次， 计算相对标准偏差， 结果丹酚酸 B 的 RSD 为 1.93。表明 该方法重复性良好， 结果见表 3。 0026 表 3 重现性试验结果 3. 稳定性试验 取同一供试品溶液， 分别在 0、 2、 4、 6、 8 小时进样测定， 结果样品在 8 小时内稳定， 丹酚 酸 B 相对标准偏差 RSD 为 1.91。表明该方法稳定性良好， 结果见表 4。 0027 表 4 稳定性试验结果 说 明 书 CN 103954727 A 8 6/11 页 9 4. 。

27、专属性 按照处方比例和本品制备工艺， 制成不含丹参的空白样品， 再按供试液的制备方法制 成空白对照溶液， 依法测定， 结果表明， 空白对样品测定无干扰 （附图 1 丹酚酸 B 对照品图 谱， 附图 2 空白图谱， 附图 3 样品图谱） 。 0028 5线性 精密称取丹酚酸 B 对照品适量， 加 75% 甲醇分别制成每 1ml 含的对照品溶液， 分别吸取 10?l， 按上述色谱条件测定， 以峰面积为纵坐标， 丹酚酸 B 浓度为横坐标， 绘制标准曲线， 得一直线， 回归方程 Y 6188.6x-12563， r 0.9995， 结果表明， 丹酚酸 B 在 12.2?g 195.2?g 范围内具有良。

28、好的线性关系， 见表 5 及附图 4。 0029 表 5 线性试验结果 6. 样品测定 五批样品含量测定 依法对 5 批样品进行了测定， 结果见表 6。依测定结果， 暂定规格为 0.6g/ 片的金鸣片 中丹酚酸 B 含量为每片不低于 0.26mg。限度制定依据 ： 5 批平均含量为 0.55 mg/g， 下浮 20， 即 0.44mg/g， 金鸣片规格为 0.6g/ 片， 相当于 0.26mg/ 片。 0030 表 6 5 批样品的测定结果 说 明 书 CN 103954727 A 9 7/11 页 10 实施例 2 （1） 取规格为 0.6g/ 片的金鸣片 5 片或 0.3g/ 片的金鸣片 。

29、10 片， 研细， 置于 25ml 量瓶 中， 加乙醇至刻度， 置水浴中振摇 10 分钟， 放置 4 小时， 取上清液， 过滤， 滤液浓缩至 5ml， 作 为供试品溶液 ； 空白对照品溶液的制备 ： 按照金鸣片的生产工艺制备处方中缺少人工牛黄的空白样 品， 取空白对照粉末 3g， 按照供试品溶液的制备方法同法制备人工牛黄空白对照品溶液。 0031 另取胆酸对照品， 加乙醇配制成每 1ml 中含 1mg 胆酸的溶液， 作为对照品溶液 ； 按照中国药典 2010 版一部附录 VI B 薄层色谱法试验， 吸取供试品溶液与空白对照品 溶液各10l、 对照品溶液20l， 分别点于同一硅胶G薄层板上， 以。

30、三氯甲烷乙醚冰乙 酸为展开剂， 展开， 三氯甲烷、 乙醚、 冰乙酸的体积比为 2:2:1， 取出， 晾干， 喷以 10磷钼酸 乙醇溶液， 在 120烘 8-12 分钟， 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜 色的斑点， 空白对照色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 无相同颜色的斑点 ； （2） 取规格为0.6g/片的金鸣片5片或0.3g/片的金鸣片10片， 研细， 加无水乙醇6ml， 振摇 10 分钟， 过滤， 滤液加无水乙醇至 5ml， 作为供试品溶液 ； 空白对照品溶液制备 ： 按照金鸣片的生产工艺制备处方中缺少薄荷脑的空白样品， 取 薄荷脑空白对照品 3g， 按照供试。

31、品溶液的制备方法同法制备薄荷脑空白对照品溶液。 0032 另取薄荷脑对照品加无水乙醇制成每 1ml 中含 1mg 的溶液， 作为对照品溶液 ； 照中国药典2010版一部附录VI B薄层色谱法试验， 吸取上述供试品溶液、 空白对照品 溶液和对照品溶液各 5l， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上， 以环己烷乙酸乙酯为展开剂， 展开， 环己烷乙酸乙酯的体积比为 17:3 取出 , 晾干， 喷以 5香草醛硫酸溶液， 在 105 加热至斑点显色清晰 ； 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点， 空白对照品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 无相同颜色的斑点 ； 说 明 书 CN。

32、 103954727 A 10 8/11 页 11 （3） 检查 ： 应符合中国药典 2010 版一部附录 I D 片剂项下有关的各项规定 ； （4） 含量测定 ： 丹参照中国药典 2010 版一部附录 D 高效液相色谱法测定 ； 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ； 以甲醇 - 乙腈 - 甲 酸 - 水为流动相， 甲醇 - 乙腈 - 甲酸 - 水的体积比为 30:10:1:59 ； 检测波长为 286nm， 理论 板数按丹酚酸 B 峰计算不低于 3000 ； 对照品溶液的制备 ： 取丹酚酸 B 对照品适量， 精密称定， 加 75甲醇制成每 1ml 中含 45g 的溶液。

33、， 即得 ； 供试品溶液的制备 ： 取规格为 0.6g/ 片的金鸣片 30 片或规格为 0.3g/ 片的金鸣片 60 片， 除去包衣， 精密称定， 研细， 取 3.95-4.05g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入 75甲醇 50ml， 密塞、 称定重量， 超声处理， 超声处理的时间为 10-20 分钟， 功率 300W， 频率 40kHz， 放冷， 再称定重量， 用 75% 甲醇补足减失的重量， 摇匀， 滤过， 取续滤液， 即得 ； 测定法 ： 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l， 注入液相色谱仪， 测定， 即得。 0033 实施例 2 中 （1） 人工牛黄药材胆酸成分薄层色谱。

34、鉴别结果见说明书附图 5 ； （2） 薄荷脑成分原薄层色谱鉴别结果见说明书附图 6 ； 改进后的薄层色谱鉴别结果见说明书附图 7 ； 附图 5-7 中， 样品 1、 样品 2、 样品 3 分别是指金鸣片不同的批次所做的平行实验 ； 附图 5 中， 空白对照是指按照金鸣片的生产工艺制备处方中缺少人工牛黄的空白样 品， 取空白样品粉末 3g， 按照供试品溶液的制备方法同法制备人工牛黄空白对照品溶液， 并 与供试品、 对照品同时进行鉴别， 以便证明该方法的专属性 ； 附图 7 中， 空白对照是指按照金鸣片的生产工艺制备处方中缺少薄荷脑的空白样品， 取空白样品粉末 3g， 按照供试品溶液的制备方法同法。

35、制备薄荷脑空白对照品溶液， 并与供 试品、 对照品同时进行鉴别， 以便证明该方法的专属性。 0034 薄荷脑薄层色谱鉴别原执行标准为 ： 规格为 0.6g/ 片的金鸣片 5 片或 0.3g/ 片的 金鸣片 10 片， 研细， 加无水乙醇 6ml， 振摇 10 分钟， 滤过， 滤液加无水乙醇至 5ml， 作为供试 品溶液。另取薄荷脑对照品加无水乙醇制成每 1ml 中含 1mg 的溶液， 作为对照品溶液。照 薄层色谱法 （中国药典 2010 版一部附录 VI B） 试验， 吸取上述两种溶液各 5l， 分别点于 同一硅胶G薄层板上， 以石油醚乙酸乙酯苯(18:2:4)为展开剂， 展开， 取出， 晾干。

36、， 喷以 5磷钼酸乙醇溶液， 在 80烘约 10 分钟。供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。 0035 由于原执行标准展开系统中含有有毒试剂苯， 考虑保护员工人身安全， 降低操作 毒性， 改进成本发明展开系统， 经试验证明， 该鉴别方法专属性强， 色谱斑点分离效果好， 在 达到检验目的的同时， 本发明方法比原执行标准使用的制剂毒性更低， 具有可操作性。 0036 实施例 3 (1) 以地黄为例， 测定梓醇含量 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ； 以乙腈为流动相 A， 0.03%磷酸溶液为流动相B ； 检测波长为210nm,按下表中规定的进行。

37、梯度洗脱， 理论板数 按梓醇峰计算应不低于 3000。 0037 表 7 说 明 书 CN 103954727 A 11 9/11 页 12 对照品溶液的制备 取梓醇对照品适量， 精密称定， 加甲醇制成每1ml中含10g的溶 液， 即得。 0038 供试品溶液的制备 取规格为 0.6g/ 片的本品 30 片， 除去包衣， 精密称定， 研细， 取约 4.0g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入甲醇 50ml， 密塞、 称定重量， 超声处理 （功 率 300W, 频率 40kHz） 15 分钟， 放冷， 再称定重量， 用甲醇补足减失的重量， 摇匀， 滤过， 取续 滤液， 即得。 0039 测。

38、定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l， 注入液相色谱仪， 测定， 即 得。 0040 结果 ： 供试品在与对照品相应有极小峰， 不足以积分， 表明含量极少， 不易宜做含 量测定。 0041 原因分析 ： 地黄主要成分梓醇在加热过程中易受热转化为其他成分， 不适于作为 产品成分检测。 0042 (2) 以地黄为例， 测定毛蕊花糖苷含量 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ； 以乙腈为流动相 A， 0.03%磷酸溶液为流动相B ； 检测波长为334nm,按下表中规定的进行梯度洗脱， 理论板数 按毛蕊花糖苷峰计算应不低于 3000。 0043 表 8 对照品溶液的制备。

39、 取毛蕊花糖苷对照品适量， 精密称定， 加甲醇制成每 1ml 中含 10g 的溶液， 即得。 0044 供试品溶液的制备 取规格为 0.6g/ 片的本品 30 片， 除去包衣， 精密称定， 研细， 取约 4.0g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入甲醇 50ml， 密塞、 称定重量， 超声处理 （功 率 300W, 频率 40kHz） 15 分钟， 放冷， 再称定重量， 用甲醇补足减失的重量， 摇匀， 滤过， 取续 滤液， 即得。 0045 测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l， 注入液相色谱仪， 测定， 即 得。 说 明 书 CN 103954727 A 12 10/11 。

40、页 13 0046 结果 ： 供试品在与对照品相应位置上无明显的色谱峰， 不宜做含量测定。 0047 分析 : 毛蕊花糖苷在地黄中含量本身就低， 另外金鸣片处方包含其他多味中药 材， 将金鸣片成品提纯到其检测浓度不易， 因此不适于进行含量测定。 0048 实施例 4 (1) 以玄参为例， 测定哈巴苷与哈巴俄苷含量 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ； 以乙腈为流动相 A， 0.03% 磷酸溶液为流动相 B ； 检测波长为 210nm， 按下表中规定的进行梯度洗脱， 理论板数 按哈巴苷峰计算应不低于 3000。 0049 表 9 对照品溶液的制备 取哈巴苷对照品适量， 精。

41、密称定， 加 50% 甲醇制成每 1ml 中含 50g的溶液， 即得哈巴苷对照品溶液。 另取哈巴俄苷对照品适量， 精密称定， 加50%甲醇制 成每 1ml 中含 40g 的溶液， 即得哈巴俄苷对照品溶液。 0050 供试品溶液的制备 ： 取规格为 0.6g/ 片的本品 30 片， 除去包衣， 精密称定， 研细， 取约 4.0g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入 50甲醇 50ml， 密塞、 称定重量， 超声处理 （功率 300W, 频率 40kHz） 15 分钟， 放冷， 再称定重量， 用 50% 甲醇补足减失的重量， 摇匀， 滤 过， 取续滤液， 即得。 0051 测定法 精密吸取对。

42、照品溶液与供试品溶液各 10l， 注入液相色谱仪， 测定， 即 得。 0052 结果 ： 供试品在与哈巴苷相应位置有极小峰， 没有形成积分或积分量少 ； 供试品 在与哈巴俄苷相应位置有未分离完全的吸收峰， 需继续调整方法。 0053 原因分析 ： 哈巴苷成分不稳定， 在提取过程中受热易转化， 不能作为含量测定标准 进行质量控制。 0054 （2） 以玄参为例， 测定哈巴俄苷含量 由于考虑不再检测哈巴苷， 波长可以不用接近末端吸收的 210nm， 哈巴俄苷在 278nm 有 吸收峰， 因此用波长278nm。 梯度洗脱发现， 在对照品相应位置有较密集的样品峰， 难以确定 相应的哈巴俄苷检测成分峰，。

43、 改流动相为恒流， 逐步测定适宜的比例。 0055 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ； 检测波长为 278nm ； 对照品溶液的制备 取哈巴俄苷对照品适量， 精密称定， 加 50% 甲醇制成每 1ml 中含 40g 的溶液， 即得哈巴俄苷对照品溶液。 0056 供试品溶液的制备 取规格为0.6g/片的本品30片， 除去包衣， 精密称定， 研细， 取约 4.0g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入 50甲醇 50ml， 密塞、 称定重量， 超声处理 （功率 300W, 频率 40kHz） 15 分钟， 放冷， 再称定重量， 用 50% 甲醇补足减失的重量， 摇匀， 滤 说 明 书。

44、 CN 103954727 A 13 11/11 页 14 过， 取续滤液， 即得。 0057 测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l， 注入液相色谱仪， 测定， 即 得。 0058 流动相 ： 乙腈 -0.3% 磷酸溶液 （24 ： 76） 结果 ： 供试品与对照品相应位置有峰， 并且有相连分离差的极小峰， 经多次调整流动 相， 仍无法完全分离， 考虑该检测方法存在空白干扰。 0059 空白样品 ： 按金鸣片制备工艺制备不含玄参的空白样品。 0060 空白对照品溶液 ： 取空白样品， 按制备供试品溶液制备方法制备空白对照品溶液。 0061 流动相 ： 乙腈 -0.3% 磷酸溶液 （。

45、24 ： 76） 结果 ： 空白对照品在与哈巴俄苷对照品相应位置有吸收峰， 证明该检测方法专属性差， 因此改做其他成分含量测定。 0062 经过研究， 最终确定选择金鸣片的丹参药材中丹酚酸 B 作为含量测定检测项目。 0063 以上实施例 3 和实施例 4 说明金鸣片处方中虽然含有很多中药成分， 例如地黄与 玄参， 但是由于中药制剂生产过程中药物相互作用或者中药成分本身进行转化， 同时考虑 检验方法的专属性等原因， 并不是所有的药材中能检测的成分都能用来对金鸣片成品进行 质量控制， 因此证明本发明的检测方法对金鸣片成品而言， 是更精确与可行的质量控制方 法。 说 明 书 CN 103954727 A 14 1/4 页 15 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103954727 A 15 2/4 页 16 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 103954727 A 16 3/4 页 17 图 5 图 6 说 明 书 附 图 CN 103954727 A 17 4/4 页 18 图 7 说 明 书 附 图 CN 103954727 A 18 。