一种检测水相中苏丹红I号的方法、荧光试纸及制备方法和应用.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103868898 A (43)申请公布日 2014.06.18 CN 103868898 A (21)申请号 201410067951.0 (22)申请日 2014.02.26 G01N 21/64(2006.01) (71)申请人 华南理工大学 地址 510640 广东省广州市天河区五山路 381 号 (72)发明人 王小慧 陈惠 孙润仓 黄飞 (74)专利代理机构 广州市华学知识产权代理有 限公司 44245 代理人 宫爱鹏 (54) 发明名称 一种检测水相中苏丹红 I 号的方法、 荧光试 纸及制备方法和应用 (57) 摘要 本发明公开了一种检测水相中苏丹红 I。

2、 号的 方法、 荧光试纸及制备方法和应用， 检测方法包括 以下步骤 ：（1） 制备荧光探针溶液， 所述荧光探针 溶液为两亲性壳聚糖衍生物 CMCs-g-PPDO/PFO 纳 米复合物荧光探针溶液， 其中胶束浓度为 0.5 2mg/mL ；（2） 将荧光探针溶液加入比色皿中， 置于 荧光光谱仪中扫描荧光光谱 ；（3） 将待测样品溶 液加入步骤 （2） 中含荧光探针溶液的比色皿中， 置于荧光光谱仪中扫描荧光光谱， 然后根据荧光 猝灭程度识别苏丹红 I 号色素， 若荧光光谱猝灭 明显， 则样品中含有苏丹红 I 号色素， 若荧光光谱 无明显变化， 则不含有苏丹红 I 号色素。进一步， 制备出了功能化荧。

3、光试纸， 对苏丹红 I 号有较好 的检测效果。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 6 页 附图 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书6页 附图4页 (10)申请公布号 CN 103868898 A CN 103868898 A 1/2 页 2 1. 一种检测水相中苏丹红 I 号的方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： （1） 制备荧光探针溶液， 所述荧光探针溶液为两亲性壳聚糖衍生物 CMCs-g-PPDO/PFO 纳米复合物荧光探针溶液， 其中胶束浓度为 0.5 2mg/mL ； （2） 将荧光探针溶液加入比色皿中， 置于。

4、荧光光谱仪中扫描荧光光谱 ； （3） 将待测样品溶液加入步骤 （2） 中含荧光探针溶液的比色皿中， 置于荧光光谱仪中扫 描荧光光谱， 然后根据荧光猝灭程度识别苏丹红 I 号色素， 若荧光光谱猝灭明显， 则样品中 含有苏丹红 I 号色素， 若荧光光谱无明显变化， 则不含有苏丹红 I 号色素。 2. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述荧光探针溶液是通过如下步骤制备 的 ： （1） 聚合物纳米胶束水溶液的制备 ： 将两亲性壳聚糖衍生物 CMCs-g-PPDO 溶于超纯水 中， 磁力搅拌， 配置成浓度为 0.5 2mg/mL 的聚合物纳米胶束水溶液 ； （2） 荧光共轭聚合物溶液的制备。

5、 ： 将荧光共轭聚合物 9,9- 二辛基聚芴溶解在四氢呋喃 中， 配置成浓度为 0.1 1mg/mL 的荧光共轭聚合物溶液 ； （3） 聚合物胶束 / 共轭聚合物的纳米复合物荧光探针溶液的制备 ： 将步骤 （2） 中配置的 荧光共轭聚合物溶液搅拌条件下缓慢滴加至步骤 （1） 中制备的聚合物纳米胶束水溶液中， 超声混合均匀， 旋转蒸发除去四氢呋喃， 补水定容至蒸发前的体积， 将定容后的溶液过滤即 得到所述的荧光探针溶液。 3.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 所述两亲性壳聚糖衍生物CMCs-g-PPDO的 制备 ： （1） 羧甲基壳聚糖的制备 ： 将纯化后的壳聚糖加入到 NaOH 溶液中。

6、， 壳聚糖在其中的浓 度为 0.04 0.1g/mL， 搅拌均匀后置于冰箱中冷冻过夜 ； 将溶胀后的样品转移到烧杯中， 加入异丙醇搅拌分散样品 ； 将与壳聚糖等质量的氯乙酸分批次加入烧杯中， 机械搅拌反应 312h ； 滤出异丙醇， 加水使样品溶解 ； 调溶液pH至中性， 去离子水中透析35d ； 收集透 析袋内溶液， 冷冻干燥即得到 CMCs ； 所述 NaOH 溶液为质量分数 50% 的饱和 NaOH 溶液， 透析 袋截留分子量 MWCO=3500 ； （2） 羧甲基壳聚糖接枝对二氧环己酮的制备 ： 离子液体 BmimCl 加热至完全融化后加 入干燥的 CMCs， N2保护下磁力搅拌使 C。

7、MCs 完全溶解 ； N2保护下向溶液中加入对二氧环己酮 及4-二甲氨基吡啶， N2保护下100反应12h， 冷却至室温， 无水乙醇中沉淀， 并用无水乙醇 重复洗涤， 沉淀经抽提后减压干燥即得到 CMCs-g-PPDO ； 所述 CMCs 中糖单元与二氧环己酮 摩尔比为 1:4 1:15， 4- 二甲氨基吡啶与 CMCs 中 OH 摩尔比为 0.1 1。 4. 根据权利要求 3 所述的方法， 其特征在于， 所述减压干燥的条件为 60干燥 48h。 5. 根据权利要求 2 所述的方法， 其特征在于， 步骤 （3） 所述的过滤是 0.45m 微孔滤膜 过滤。 6. 根据权利要求 1 5 任意一项所。

8、述的方法， 其特征在于， 步骤 （2） 、（3） 中所述的扫描 荧光光谱是在激发光波长为 340nm， 狭缝宽度为 2.5nm 条件下进行荧光扫描的。 7. 一种检测水相中苏丹红 I 号的荧光试纸的制备方法， 其特征在于， 将权利要求 1 或 2 所述荧光探针溶液涂布在原纸表面， 室温干燥即制得所述荧光试纸。 8. 权利要求 7 所述方法制备的荧光试纸。 9. 权利要求 8 所述荧光试纸在检测水相中苏丹红 I 号中的应用。 权 利 要 求 书 CN 103868898 A 2 2/2 页 3 10. 权利要求 9 所述的应用， 其特征在于， 取待测样品溶液滴加到试纸表面， 用紫外灯 或验钞机照。

9、射试纸， 观察试纸表面荧光变化， 根据荧光信号猝灭程度识别鉴定苏丹红 I 号 色素。 权 利 要 求 书 CN 103868898 A 3 1/6 页 4 一种检测水相中苏丹红 I 号的方法、 荧光试纸及制备方法 和应用 技术领域 0001 本发明涉及一种用于检测苏丹红 I 号的光学材料羧甲基壳聚糖接枝对二氧环己 酮 / 荧光染料复合纳米胶束及其功能化试纸的制备方法和应用， 属光学和高分子化学领 域， 有望应用于检测食品添加剂的安全问题。 背景技术 0002 近年来， 对致癌色素添加剂苏丹红 I 号的快速、 高效、 灵敏检测成为全球食品安全 领域关注的重点。目前， 对苏丹红 I 号的检测还主要。

10、依赖于较昂贵的检测仪器， 而且检测 费时， 如质谱色谱联用仪等。但很多情况下， 尤其是危急情况下往往需要在现场对苏丹红 I 号的含量迅速做出判断， 而在众多可用于检测苏丹红 I 号的方法中能现场快速检测的却很 少， 因而对其含量的现场快速检测目前还缺乏有效的检测手段。 0003 具有特殊荧光信号放大功能的共轭聚合物是优良的传感活性材料， 对缺电子的苏 丹红 I 号具有灵敏的识别能力， 然而这些共轭聚合物自身的疏水性却限制了其在水相体系 中检测苏丹红 I 号的应用。因此对这些共轭聚合物进行改性使其具有亲水性， 可扩大其应 用范围， 然而制备水溶性的共轭聚合物却涉及到非常复杂的合成过程， 大大增加。

11、了检测的 成本。 发明内容 0004 为解决上述现有技术中存在的不足， 本发明的首要目的在于提供一种基于荧光传 感快速检测水相中苏丹红 I 号的方法。该方法是用自组装纳米胶束对疏水性荧光共轭聚合 物进行包埋， 利用微相萃取作用， 将水相中的痕量苏丹红 I 号富集于胶束内核， 与储存在内 核里的共轭聚合物发生作用， 使共轭聚合物的荧光信号出现明显的变化， 从而借助荧光传 感快速、 超灵敏检测水相中的微量苏丹红 I 号。 0005 进一步， 本发明通过这种荧光聚合物纳米胶束对原纸进行表面涂布， 制备出一种 具有荧光识别苏丹红 I 号的功能特种试纸。 0006 本发明的另一个目的在于提供基于所述的荧。

12、光纳米胶束及其功能化试纸快速检 测水相中苏丹红 I 号的方法的应用。 0007 本发明的目的通过以下技术方案得以实现 ： 0008 一种检测水相中苏丹红 I 号的方法， 包括以下步骤 ： 0009 （1） 制备荧光探针溶液， 所述荧光探针溶液为两亲性壳聚糖衍生物 CMCs-g-PPDO/ PFO 纳米复合物荧光探针溶液， 其中胶束浓度为 0.5 2mg/mL ； 0010 （2） 将荧光探针溶液加入比色皿中， 置于荧光光谱仪中扫描荧光光谱 ； 0011 （3） 将待测样品溶液加入步骤 （2） 中含荧光探针溶液的比色皿中， 置于荧光光谱仪 中扫描荧光光谱， 然后根据荧光猝灭程度识别苏丹红 I 号。

13、色素， 若荧光光谱猝灭明显， 则样 品中含有苏丹红 I 号色素， 若荧光光谱无明显变化， 则不含有苏丹红 I 号色素。 说 明 书 CN 103868898 A 4 2/6 页 5 0012 所述荧光探针溶液是通过如下步骤制备的 ： 0013 聚合物纳米胶束水溶液的制备 ： 将两亲性壳聚糖衍生物 CMCs-g-PPDO 溶于超纯 水中， 磁力搅拌， 配置成浓度为 0.5 2mg/mL 的聚合物纳米胶束水溶液 ； 0014 荧光共轭聚合物溶液的制备 ： 将荧光共轭聚合物 9,9- 二辛基聚芴 （PFO） 溶解在 四氢呋喃 （THF） 中， 配置成浓度为 0.1 1mg/mL 的荧光共轭聚合物溶液。

14、 ； 0015 聚合物胶束 / 共轭聚合物的纳米复合物荧光探针溶液的制备 ： 将步骤中配置 的荧光共轭聚合物溶液搅拌条件下缓慢滴加至步骤中制备的聚合物纳米胶束水溶液中， 超声混合均匀， 旋转蒸发除去 THF， 补水定容至蒸发前的体积， 将定容后的溶液过滤即得到 所述的荧光探针溶液。 0016 所述两亲性壳聚糖衍生物 CMCs-g-PPDO 的制备 ： 0017 （a） 羧甲基壳聚糖 （CMCs） 的制备 ： 将纯化后的壳聚糖加入到 NaOH 溶液中， 壳聚糖 在其中的浓度为 0.04 0.1g/mL， 搅拌均匀后置于冰箱中冷冻过夜 ； 将溶胀后的样品转移 到烧杯中， 加入异丙醇搅拌分散样品 ；。

15、 将与壳聚糖等质量的氯乙酸分批次加入烧杯中， 机械 搅拌反应 3 12h ； 滤出异丙醇， 加水使样品溶解 ； 调溶液 pH 至中性， 去离子水中透析 3 5d ； 收集透析袋内溶液， 冷冻干燥即得到 CMCs ； 所述 NaOH 溶液为质量分数 50% 的饱和 NaOH 溶液， 透析袋截留分子量 MWCO=3500 ； 0018 （b） 羧甲基壳聚糖接枝对二氧环己酮 CMCs-g-PPDO 的制备 ： 离子液体 BmimCl 加 热至完全融化后加入干燥的 CMCs， N2保护下磁力搅拌使 CMCs 完全溶解 ； N2保护下向溶液中 加入对二氧环己酮 （PDO） 及 4- 二甲氨基吡啶 （DM。

16、AP） ， N2保护下 100反应 12h， 冷却至室 温， 无水乙醇中沉淀， 并用无水乙醇重复洗涤， 沉淀经抽提后减压干燥即得到 CMCs-g-PPDO ； 所述 CMCs 中糖单元与 PDO 摩尔比为 1:4 1:15， DMAP 与 CMCs 中 OH 摩尔比为 0.1 1。 0019 所述减压干燥的条件为 60干燥 48h。 0020 步骤所述的过滤是 0.45m 微孔滤膜过滤。所述聚合物胶束 / 共轭聚合物的纳 米复合物荧光探针的粒径为 77.97 151.4nm ； 所述的探针中荧光共轭聚合物 PFO 的包载 率为 11.36 41.94%。 0021 步骤 （2） 、（3） 中所。

17、述的扫描荧光光谱是在激发光波长为 340nm， 狭缝宽度为 2.5nm 条件下进行荧光扫描的。 0022 所述样品溶液指直接粉碎、 分散、 浓缩的食品基质水溶液或醇溶液， 不需经过抽 提、 分离、 提取等工艺 ； 红色色素包括工业色素苏丹红I号和-胡萝卜素、 红曲红色素及番 茄红素等食品中常见天然红色色素。本发明可根据苏丹红 I 号、 - 胡萝卜素、 红曲红色素 及番茄红素的标准曲线计算色素浓度， 即根据荧光随苏丹红 I 号、 - 胡萝卜素、 红曲红色 素及番茄红素等加入量的增多逐步淬灭的信号， 用 Stern-Volmer 方程计算。 0023 一种检测水相中苏丹红 I 号的荧光试纸的制备方。

18、法， 将所述荧光探针溶液 （1 2mL） 涂布在原纸表面， 室温干燥即制得所述荧光试纸。该荧光试纸在检测水相中苏丹红 I 号中的应用， 具体地， 取待测样品溶液滴加到试纸表面， 用紫外灯或验钞机照射试纸， 观察 试纸表面荧光变化， 根据荧光信号猝灭程度识别鉴定苏丹红 I 号色素。 0024 本发明的原理在于 ： 本发明提出利用接枝型壳聚糖两亲性衍生物自组装纳米胶束 作为包埋保护荧光共轭聚合物的载体， 以这些具有优异水分散性的自组装纳米胶束 / 共轭 聚合物复合物为荧光探针检测水相中苏丹红 I 号。该方法利用了荧光共轭聚合物对苏丹红 说 明 书 CN 103868898 A 5 3/6 页 6 。

19、I 号的识别检测活性， 并有效解决了共轭聚合物的水不溶性问题， 而且利用纳米胶束的微相 萃取作用使得待测物与检测物质在纳米胶束内富集， 大大提高了传感效率和检测灵敏度。 此外， 这个方法提供了一种从常见的疏水性共轭聚合物中获得水溶性发光共轭聚合物纳米 粒子的替代方法。 0025 本发明与现有技术相比， 具有如下优点和有益效果 ： 0026 （1） 以自组装聚合物纳米胶束作为包载保护疏水性荧光共轭聚合物的载体， 使其 在保持优良荧光性能的同时具有良好的水溶性， 可方便地应用于水相检测。 0027 （2） 所使用的载体两亲性壳聚糖纳米聚合物资源丰富且具有生物相容性， 为昂贵 功能材料共轭聚合物的应。

20、用提供了优良的载体， 可扩展和优化其应用。 0028 （3） 由于纳米胶束的微相萃取富集作用， 与荧光共轭聚合物在有机溶剂中的传感 性能相比， 其纳米胶束体系在水相中检测苏丹红 I 号的灵敏度获得显著提高。 0029 （4） 整个检测过程不涉及复杂的样品预处理过程、 食品基质不需经过抽提、 分离、 提纯， 可直接检测， 不依靠复杂昂贵的仪器设备， 检测过程可在 5 分钟之内完成， 极其适合 实地、 现场食品安全检测。 0030 （5） 功能试纸轻便可携带、 制备工艺简单易行， 适合大规模生产。 附图说明 0031 图 1 为实施例 1 中制备的两亲性壳聚糖衍生物 CMCs-g-PPDO/PFO。

21、 纳米复合物荧光 探针溶液对苏丹红 I 号 （a） 、 - 胡萝卜素 （b） 、 红曲红色素 （c） 以及番茄红素 （d） 的传感检 测得到的不同荧光猝灭效果图。 0032 图 2 为实施例 2 中制备的两亲性壳聚糖衍生物 CMCs-g-PPDO/PFO 纳米复合物荧光 探针溶液对苏丹红 I 号 （a） 、 - 胡萝卜素 （b） 、 红曲红色素 （c） 以及番茄红素 （d） 的传感检 测得到的不同荧光猝灭效果图。 0033 图 3 为实施例 3 中制备的两亲性壳聚糖衍生物 CMCs-g-PPDO/PFO 纳米复合物荧光 探针溶液对苏丹红 I 号 （a） 、 - 胡萝卜素 （b） 、 红曲红色素。

22、 （c） 以及番茄红素 （d） 的传感检 测得到的不同荧光猝灭效果图。 0034 图 4 为实施例 3 中制备的两亲性壳聚糖衍生物 CMCs-g-PPDO/PFO 纳米复合物荧光 探针溶液对苏丹红 I 号 （a） 及实施例 5 中 PFO 在有机溶剂甲苯中对苏丹红 I 号 （b） 的传感 检测得到的不同荧光猝灭效果图。 0035 图 5 为实施例 3 中制备的两亲性壳聚糖衍生物 CMCs-g-PPDO/PFO 纳米复合物荧光 探针对苏丹红 I 号、 - 胡萝卜素、 红曲红色素以及番茄红素的传感效率 （Ksv） 及实施例 5 中共轭聚合物 PFO 在有机溶剂甲苯中对四种色素的传感效率 （Ksv）。

23、 。 0036 图 6 为实施例 4 中制备的功能性荧光试纸检测苏丹红 I 号、 - 胡萝卜素、 红曲红 色素以及番茄红素时荧光变化照片， 其中 a、 d、 g、 j 是空白试纸的荧光照片， b、 e、 h、 k 是荧 光试纸的荧光照片， c、 f、 i、 l 分别是滴加上述 4 种色素样品后的荧光试纸照片。 具体实施方式 0037 下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步具体详细描述， 但本发明的实施方 式不限于此。实施例中苏丹红 I 号标准溶液为浓度为 5 10M 的乙腈溶液 ； - 胡萝卜 说 明 书 CN 103868898 A 6 4/6 页 7 素、 红曲红色素及番茄红素等天然色素。

24、的标准溶液为浓度为 0.01 0.05mM 的乙醇或水溶 液。 0038 实施例 1 0039 5g 纯化后的壳聚糖 （Mw=50000） 加入到 50mL 质量分数为 50% 的饱和 NaOH 溶液中， 搅拌均匀后置于冰箱中冷冻过夜 ； 将溶胀后的样品转移到 1000mL 烧杯中， 加入 300mL 异丙 醇搅拌均匀 ； 5g 氯乙酸分批次加入烧杯中， 机械搅拌反应 12h ； 滤出异丙醇， 加水使样品溶 解 ； 稀醋酸调溶液 pH 至中性， 去离子水中透析 3-5d（MWCO=3500） ； 收集透析袋内溶液， 冷 冻干燥 48h 得到 CMCs ； 10g 离子液体 BmimCl 加热融。

25、化后加入 0.2g 干燥的 CMCs， N2保护 下 1500rmp 磁力搅拌 3h 使 CMCs 完全溶解 ； N2保护下向溶液中加入 0.388g 对二氧环己酮 （PDO） 及 0.128g4- 二甲氨基吡啶 （DMAP） ， N2保护下 100反应 12h， 冷却至室温， 250mL 无 水乙醇中沉淀， 并用无水乙醇重复洗涤， 沉淀于索氏抽提器中抽提 24h， 60减压干燥 48h 得到 CMCs-g-PPDO ； 配制 0.9mg/mL 的 CMCs-g-PPDO 聚合物纳米胶束水溶液， 动态光散射 法 （DLS） 用 Malvern 粒度仪测定出其粒径为 43.59nm ； 配制浓度。

26、为 0.5mg/mL 的荧光共轭 聚合物 9,9- 二辛基聚芴 PFO/THF 溶液 ； 将 100L PFO/THF 溶液搅拌条件下缓慢滴加至 10mL0.9mg/mL的CMCs-g-PPDO聚合物纳米胶束水溶液中， 超声2h混合均匀后旋转蒸发除去 THF， 补水定容至 10mL ； 用 0.45m 微孔滤膜过滤除去未包埋的 PFO 即得到两亲性壳聚糖衍 生物 CMCs-g-PPDO/PFO 纳米复合物荧光探针溶液。使用紫外光谱仪测定计算该探针溶液中 共轭聚合物 PFO 的包载率为 33.21% ； 量取稀释 5 倍后的该探针溶液 2.5mL 置于四面石英比 色皿中， 于激发波长 340nm。

27、， 狭缝宽度 2.5nm 条件下扫描荧光光谱 ； 向含荧光探针溶液的比 色皿中滴加 10L 待测样品溶液， 扫描其荧光光谱 , 继续滴加 10L 待测样品溶液 , 扫描 对应的荧光光谱 ; 重复此操作共 20 次到最后共滴加 200L 待测样品溶液 ( 待测样品溶液 共 4 份， 一份是含苏丹红的， 其余 3 份分别含天然色素 - 胡萝卜素、 红曲红色素和番茄红 素） ， 分别扫描对应的荧光光谱。荧光光谱猝灭明显的待测样品溶液中即含有苏丹红 I 号色 素， 荧光光谱无明显变化的待测样品溶液中则仅含天然色素， 根据光谱荧光猝灭程度， 结合 苏丹红 I 号色素标准曲线可计算其中苏丹红 I 号的浓度。

28、。结果如图 1 所示， (a) 是含苏丹 红的， 其荧光猝灭明显， 而(b)、 (c)、 (d)分别是-胡萝卜素、 红曲红色素及番茄红素， 他们 的荧光猝灭不明显。 0040 实施例 2 0041 实施例 1 中制备的 CMCs-g-PPDO 配制成 0.9mg/mL 的聚合物纳米胶束水溶液， 1mL0.5mg/mL PFO/THF溶液搅拌条件下缓慢滴加至10mL聚合物纳米胶束水溶液中， 超声2h 混合均匀后旋转蒸发除去 THF， 补水定容至 10mL ； 用 0.45m 微孔滤膜过滤除去未包埋的 PFO 即得到两亲性壳聚糖衍生物 CMCs-g-PPDO/PFO 纳米复合物荧光探针溶液。使用紫。

29、外光 谱仪测定计算该探针溶液中共轭聚合物 PFO 的包载率为 11.36% ； 量取稀释 5 倍后的该探针 溶液 2.5mL 置于四面石英比色皿中， 于激发波长 340nm， 狭缝宽度 2.5nm 条件下扫描荧光光 谱 ； 向含荧光探针溶液的比色皿中滴加 10L 待测样品溶液， 扫描其荧光光谱 , 继续滴加 10L 待测样品溶液 , 扫描对应的荧光光谱 ; 重复此操作共 20 次到最后共滴加 200L 待 测样品溶液 ( 待测样品溶液共 4 份， 一份是含苏丹红的， 其余 3 份分别含天然色素 - 胡萝 卜素、 红曲红色素和番茄红素） ， 分别扫描对应的荧光光谱。荧光光谱猝灭明显的待测样品 溶。

30、液中即含有苏丹红 I 号色素， 荧光光谱无明显变化的待测样品溶液中则仅含天然色素， 说 明 书 CN 103868898 A 7 5/6 页 8 根据光谱荧光猝灭程度， 结合苏丹红 I 号色素标准曲线可计算其中苏丹红 I 号的浓度。结 果如图 2 所示， (a) 是含苏丹红的， 其荧光猝灭明显， 而 (b)、 (c)、 (d) 分别是 - 胡萝卜素、 红曲红色素及番茄红素， 他们的荧光猝灭不明显。 0042 实施例 3 0043 实施例 1 中制备的 CMCs-g-PPDO 配制成 1.35mg/mL 的聚合物纳米胶束水溶液， 动 态光散射法 （DLS） 用Malvern粒度仪测定出其粒径为2。

31、3.18nm ； 100L0.5mg/mL PFO/THF溶 液搅拌条件下缓慢滴加至 10mL 聚合物纳米胶束水溶液中， 超声 2h 混合均匀后旋转蒸发除 去THF， 补水定容至10mL ； 用0.45m微孔滤膜过滤除去未包埋的PFO即得到两亲性壳聚糖 衍生物 CMCs-g-PPDO/PFO 纳米复合物荧光探针溶液。使用紫外光谱仪测定计算该探针溶液 中共轭聚合物 PFO 的包载率为 41.94% ； 量取稀释 5 倍后的该探针溶液 2.5mL 置于四面石英 比色皿中， 于激发波长 340nm， 狭缝宽度 2.5nm 条件下扫描荧光光谱 ； 向含荧光探针溶液的 比色皿中滴加 10L 待测样品溶液。

32、， 扫描其荧光光谱 , 继续滴加 10L 待测样品溶液 , 扫 描对应的荧光光谱 ; 重复此操作共 20 次到最后共滴加 200L 待测样品溶液 ( 待测样品溶 液共 4 份， 一份是含苏丹红的， 其余 3 份分别含天然色素 - 胡萝卜素、 红曲红色素和番茄 红素） ， 分别扫描对应的荧光光谱。荧光光谱猝灭明显的待测样品溶液中即含有苏丹红 I 号 色素， 荧光光谱无明显变化的待测样品溶液中则仅含天然色素， 根据光谱荧光猝灭程度， 结 合苏丹红 I 号色素标准曲线可计算其中苏丹红 I 号的浓度。结果如图 3 所示， (a) 是含苏 丹红的， 其荧光猝灭明显， 而(b)、 (c)、 (d)分别是-。

33、胡萝卜素、 红曲红色素及番茄红素， 他 们的荧光猝灭不明显。 0044 实施例 4 0045 实施例 1 中制备的 CMCs-g-PPDO 配制成 1.35mg/mL 的聚合物纳米胶束水溶液 ； 500L0.5mg/mL PFO/THF 溶液搅拌条件下缓慢滴加至 10mL 聚合物纳米胶束水溶液中， 超 声 2h 混合均匀后旋转蒸发除去 THF， 补水定容至 10mL ； 用 0.45m 微孔滤膜过滤除去未包 埋的 PFO 即得到两亲性壳聚糖衍生物 CMCs-g-PPDO/PFO 纳米复合物荧光探针溶液。使用紫 外光谱仪测定计算该探针溶液中共轭聚合物 PFO 的包载率为 25.70% ； 量取该。

34、探针溶液 2ml 涂布于原纸表面， 室温干燥获得功能化荧光试纸。在功能化荧光试纸表面滴加 200L 待测 样品溶液， 使用手持式紫外灯观察试纸表面荧光信号变化。试纸表面荧光猝灭明显的待测 样品溶液中即含有苏丹红 I 号色素， 试纸表面荧光信号无明显变化的待测样品溶液中则仅 含有天然色素， 结果如图 6 所示， c 为含苏丹红 I 号的样品溶液， 其荧光猝灭明显。可见， 该 方法可用于苏丹红 I 号的快速定性和半定量检测。 0046 实施例 5 0047 配制 0.004mg/mL 的荧光共轭聚合物 PFO 甲苯溶液 10mL, 量取该溶液 2.5mL 置于 四面石英比色皿中， 于激发波长 34。

35、0nm， 狭缝宽度 2.5nm 条件下扫描荧光光谱 ； 向含荧光共 轭聚合物 PFO 甲苯溶液的比色皿中滴加 10L 待测样品溶液， 扫描其荧光光谱， 继续滴加 10L 待测样品溶液 , 扫描对应的荧光光谱 ; 重复此操作共 20 次到最后共滴加 200L 待 测样品溶液 ( 待测样品溶液共 4 份， 一份是含苏丹红的， 其余 3 份分别含天然色素 - 胡萝 卜素、 红曲红色素和番茄红素） ， 分别扫描对应的荧光光谱。荧光光谱猝灭相对明显的待测 样品溶液中即含有苏丹红 I 号色素， 荧光光谱无明显变化的待测样品溶液中则仅含天然色 素， 根据光谱荧光猝灭程度， 结合苏丹红 I 号色素标准曲线可计。

36、算其中苏丹红 I 号的浓度。 说 明 书 CN 103868898 A 8 6/6 页 9 0048 从图 1 3 可以看出所制备的聚合物胶束 / 共轭聚合物的纳米复合物荧光探针溶 液对不同色素的传感效果不同 ： 对苏丹红 I 号的传感效果最好， 其次是 - 胡萝卜素、 红曲 红色素， 番茄红素传感效果最差。从图 4 可以看出荧光共轭聚合物在所制备的两亲性纳米 胶束溶液探针体系中对苏丹红 I 号的传感效果明显优于荧光共轭聚合物在有机溶剂甲苯 （MB） 中时对苏丹红 I 号的传感效果。从图 6 可以看出制备的功能性荧光试纸的荧光强弱受 苏丹红 I 号影响变化较大， 而随天然色素的加入荧光强弱基本。

37、不变。因此， 使用这种技术， 对苏丹红 I 号的检测可以达到很好的效果。 0049 上述实施例为本发明的一些实施方式， 但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制， 其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、 修饰、 替代、 组合、 简化， 均应为等效的置换方式， 都包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 CN 103868898 A 9 1/4 页 10 图 1 说 明 书 附 图 CN 103868898 A 10 2/4 页 11 图 2 说 明 书 附 图 CN 103868898 A 11 3/4 页 12 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 103868898 A 12 4/4 页 13 图 5 图 6 说 明 书 附 图 CN 103868898 A 13 。