一种利伐沙班中间体的分析检测方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103822997 A (43)申请公布日 2014.05.28 CN 103822997 A (21)申请号 201410105391.3 (22)申请日 2014.03.20 G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) (71)申请人 山东新时代药业有限公司 地址 273400 山东省临沂市费县北外环路 1 号 (72)发明人 李铁健 郭玉 (54) 发明名称 一种利伐沙班中间体的分析检测方法 (57) 摘要 本发明涉及一种利伐沙班中间体的分析检 测方法， 用于利伐沙班中间体的质量控制， 是以 十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱。

2、 （C18， 4.6150mm， 5m） ， 以高氯酸水溶液和甲醇为流 动相， 梯度洗脱， 以检测波长为240250nm， 柱温 为 30 40， 流速 0.7 1.1ml/min 进行高效液 相色谱法分析检测。本发明的分析检测方法可以 有效的将利伐沙班中间体及其杂质分开， 而且该 方法具有分离度及灵敏度高， 重复性及耐用性好， 分析时间短， 操作简单， 结果稳定可靠的优点。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 7 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书7页 附图2页 (10)申请公布号 CN 103822997 A。

3、 CN 103822997 A 1/1 页 2 1. 一种利伐沙班中间体的分析检测方法， 采用高效液相色谱法进行分析检测， 其特征 在于包括以下步骤 ： A、 取利伐沙班中间体样品适量， 用 40%（体积比） 甲醇水溶液溶解， 配制成每 1ml 含利 伐沙班中间体 1.0mg 的样品溶液 ； B、 设置流动相流速为 0.7 1.1ml/min， 检测波长为 240 250nm， 柱温为 30 40 ； C、 取 A 的样品溶液 5l 注入液相色谱仪， 完成利伐沙班中间体的分析检测 ； 其中， 色谱柱 ： C18， 4.6150mm， 5m ； 所述流动相 A 是用三乙胺调节 pH 为 2.5 。

4、3.5 的 0.4 0.6% 高氯酸水溶液， 流动相 B 为甲醇， 梯度洗脱设置如下 ： 2. 如权利要求 1 所述的分析检测方法， 其特征在于 ： 所述的流动相 A 为用三乙胺调节 pH=3 的 0.5% 高氯酸水溶液。 3. 如权利要求 1 所述的分析检测方法， 其特征在于 ： 所述梯度洗脱设置如下 ： 4.如权利要求1所述的分析检测方法， 其特征在于所述的流动相流速为1.0ml/min， 检 测波长为 245nm， 柱温为 35。 权 利 要 求 书 CN 103822997 A 2 1/7 页 3 一种利伐沙班中间体的分析检测方法 技术领域 0001 本发明涉及一种高效液相色谱分析方法。

5、， 尤其是利伐沙班中间体的分析检测方 法。 背景技术 0002 利伐沙班， 英文名为 Rivaroxban， 是由拜耳和强生公司联合开发的一种口服 Xa 因 子直接抑制剂， 2008 年在加拿大首先上市， 利伐沙班主要用于预防髋关节或者膝关节置换 术后患者深静脉血栓和肺栓塞的形成， 也可用于预防非瓣膜性心房纤颤患者脑卒中和非中 枢神经系统性栓塞， 降低冠状动脉综合症复发的风险等。 0003 4-4-(5(s)-5- 氨基甲基 )-2- 氧代 -1,3- 噁唑烷 -3- 基 苯基 吗啉 -3 酮盐酸 盐是合成利伐沙班的重要中间体， 其化学式为 C14H18ClN3O4， 结构式如下 ： 0004。

6、 0005 到目前为止， 文献中尚未记载该中间体的分析检测方法， 但该中间体的分析检测 对反应控制和收率提高有着重要的作用， 同时也直接影响着终产品利伐沙班的质量， 所以 建立一种稳定有效的分析检测方法对该中间体进行质量控制是非常必要的。 发明内容 0006 本发明要解决的技术问题是提供一种利伐沙班中间体的高效液相色谱分析检测 方法， 用于利伐沙班中间体的质量控制。 0007 为解决上述技术问题， 发明人通过大量试验， 最终获得如下技术方案 ： 0008 一种利伐沙班中间体的分析检测方法， 是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色 谱柱 （C18， 4.6150mm， 5m） ， 以高氯酸水溶液和甲。

7、醇为流动相， 梯度洗脱， 以检测波长为 240 250nm， 柱温为 30 40， 流速 0.7 1.1ml/min 进行高效液相色谱法分析检测。 0009 所述流动相 A 是用三乙胺调节 pH 为 2.5 3.5 的 0.4 0.6% 高氯酸水溶液， 流 动相 B 为甲醇， 梯度洗脱设置如下 ： 说 明 书 CN 103822997 A 3 2/7 页 4 0010 0011 所述的流动相 A 优选为用三乙胺调节 pH=3 的 0.5% 高氯酸水溶液， 梯度洗脱设置 优选为 ： 0012 0013 进一步的， 所述的流动相流速优选为 1.0ml/min， 检测波长优选为 245nm， 柱温优。

8、 选为 35。 0014 本发明所述的分析检测方法， 可通过以下步骤实现 ： 0015 A、 取利伐沙班中间体样品适量， 用 40% （体积比） 甲醇水溶液溶解， 配制成每 1ml 含 利伐沙班中间体 1.0mg 的样品溶液 ； 0016 B、 设置流动相流速为 0.7 1.1ml/min， 检测波长为 240 250nm， 柱温为 30 40 ； 0017 C、 取 A 的样品溶液 5l 注入液相色谱仪， 完成利伐沙班中间体的分析检测 ； 0018 通过各实施例中的数据说明， 本发明涉及的分析检测方法， 可以有效的将利伐沙 班中间体及其杂质分开， 而且该方法分离度及灵敏度高， 重复性及耐用性。

9、好， 分析时间短， 操作简单， 结果稳定可靠， 从而可用于利伐沙班中间体的质量控制， 为最终成品的质量提供 有效保障。 附图说明 0019 图 1 实施例 1 的利伐沙班中间体 HPLC 图谱。 0020 图 2 实施例 2 的利伐沙班中间体 HPLC 图谱。 0021 图 3 实施例 3 的利伐沙班中间体 HPLC 图谱。 说 明 书 CN 103822997 A 4 3/7 页 5 0022 图 4 实施例 8 的利伐沙班中间体线性与范围工作曲线。 具体实施方式 0023 以下是本发明的具体实施例， 对本发明的技术方案做进一步作描述， 但是本发明 的保护范围并不限于这些实施例。 凡是不背离。

10、本发明构思的改变或等同替代均包括在本发 明的保护范围之内。 0024 实施例 1 0025 仪器与条件 ： Agilent1200 液相色谱系统， 色谱柱 ： 安捷伦 SB-C18（4.6150mm， 5m） ， 检测波长 245nm， 柱温 35， 流速 1.0ml/min， 流动相 A 为用三乙胺调节 pH=3 的 0.5% 高氯酸水溶液， 流动相 B 为甲醇， 梯度洗脱设置如下 ： 0026 0027 实验步骤 ： 将利伐沙班中间体用 40%（体积比） 甲醇水溶液溶解并定量稀释制成每 1ml中含利伐沙班中间体1.0mg的溶液， 作为供试品溶液， 精密量取供试品溶液5l注入液 相色谱仪， 。

11、按上述条件进行高效液相色谱分析， 记录色谱图， 结果见附图 1。 0028 附图 1 表明， 在该色谱条件下， 利伐沙班中间体峰和杂质峰可以完全分离， 利伐沙 班中间体峰的分离度为 2.05， 保留时间在 6.164min。 0029 实施例 2 0030 仪器与条件 ： Agilent1200 液相色谱系统， 色谱柱 ： 安捷伦 SB-C18（4.6150mm， 5m） ， 检测波长 245nm， 柱温 35， 流速 1.1ml/min， 流动相 A 为用三乙胺调节 pH=3.5 的 0.6% 高氯酸水溶液， 流动相 B 为甲醇， 梯度洗脱设置如下 ： 0031 0032 说 明 书 CN 。

12、103822997 A 5 4/7 页 6 0033 实验步骤 ： 将利伐沙班中间体用 40%（体积比） 甲醇水溶液溶解并定量稀释制成每 1ml中含利伐沙班中间体1.0mg的溶液， 作为供试品溶液， 精密量取供试品溶液5l注入液 相色谱仪， 按上述条件进行高效液相色谱分析， 记录色谱图， 结果见附图 2。 0034 附图 2 表明， 在该色谱条件下， 利伐沙班中间体峰和杂质峰可以完全分离， 利伐沙 班中间体峰的分离度为 2.35， 保留时间在 5.929min。 0035 实施例 3 0036 仪器与条件 ： Agilent1200 液相色谱系统， 色谱柱 ： 安捷伦 SB-C18（4.615。

13、0mm， 5m） ， 检测波长 245nm， 柱温 35， 流速 0.7ml/min， 流动相 A 为用三乙胺调节 pH=2.5 的 0.4% 高氯酸水溶液， 流动相 B 为甲醇， 梯度洗脱设置如下 ： 0037 0038 实验步骤 ： 将利伐沙班中间体用 40%（体积比） 甲醇水溶液溶解并定量稀释制成每 1ml中含利伐沙班中间体1.0mg的溶液， 作为供试品溶液， 精密量取供试品溶液5l注入液 相色谱仪， 按上述条件进行高效液相色谱分析， 记录色谱图， 结果见附图 3。 0039 附图 3 表明， 在该色谱条件下， 利伐沙班中间体峰和杂质峰可以完全分离， 利伐沙 班中间体峰的分离度为 4.2。

14、9， 保留时间在 7.319min。 0040 实施例 4 0041 系统适应性实验 0042 仪器与条件 ： 同实施例 1。 0043 实验步骤 ： 取本品适量， 精密称定， 加 40%（体积比） 甲醇水溶液溶解并稀释制成每 1ml中含1.0mg的溶液， 作为供试品溶液。 取供试品溶液， 连续进样六次， 分别计算利伐沙班 中间体峰峰面积以及保留时间的相对标准偏差， 实验结果见表 1。 0044 表 1 利伐沙班中间体系统适用性实验结果 0045 说 明 书 CN 103822997 A 6 5/7 页 7 0046 由表 1 可知， 利伐沙班中间体峰与相邻杂质峰的分离度均大于 1.5， 理论。

15、板数均高 于 2500， 峰面积的相对标准偏差为 0.21%（限度 2.0%） ， 保留时间的相对标准偏差为 0.06% （限度 1.0%） 。可见， 该色谱条件下， 利伐沙班中间体及其杂质可以完全分离， 而且相对标准 偏差均在中国药典规定的限度内， 所得结果稳定可靠。 0047 实施例 5 0048 重复性实验 0049 仪器与条件 ： 同实施例 1。 0050 实验步骤 ： 取本品适量， 精密称定， 加 40%（体积比） 甲醇水溶液溶解并稀释制成每 1ml中含1.0mg的溶液， 作为供试品溶液， 同法配制6份供试品溶液。 取供试品溶液， 连续进 样六次， 按面积归一化法计算利伐沙班中间体的。

16、含量， 并计算其相对标准偏差， 实验结果见 表 2。 0051 表 2 利伐沙班中间体重复性实验结果 0052 0053 说 明 书 CN 103822997 A 7 6/7 页 8 0054 由表 2 可知， 各供试品溶液中利伐沙班中间体的含量没有明显差异， 相对标准偏 差为 0.05， 可见本分析检测方法的重复性良好。 0055 实施例 6 0056 耐用性实验 0057 仪器与条件 ： Agilent1200 液相色谱系统， 色谱柱 ： 安捷伦 SB-C18（4.6150mm， 5m） ， 流动相及梯度设置同实施例 1。 0058 实验步骤 ： 取本品适量， 精密称定， 加 40%（体积。

17、比） 甲醇水溶液溶解并稀释制成每 1ml中含1.0mg的溶液， 作为供试品溶液。 分别通过改变柱温、 流速和检测波长， 记录利伐沙 班中间体有关物质及含量的变化情况 （按面积归一化法计算） ， 实验结果见表 3。 0059 表 3 利伐沙班中间体耐用性实验结果 0060 0061 由表 3 可知， 改变柱温、 流速和检测波长后， 利伐沙班中间体有关物质及含量的测 定结果没有明显差异， 可见本发明分析检测方法的耐用性良好。 0062 实施例 7 0063 检测限 0064 仪器与条件 ： 同实施例 1。 0065 实验步骤 ： 精密称取利伐沙班中间体 25.0mg， 置于 25ml 量瓶中， 加。

18、 40%（体积比） 甲醇水溶液溶解并稀释至刻度， 作为检测限储备液。采用加溶剂逐步稀释法， 以 S/N 3 时 的浓度作为检测限浓度， 此时利伐沙班中间体的浓度为 0.1ug/ml， 检测限为 0.5ng。可见本 方法及仪器的灵敏度较高。 说 明 书 CN 103822997 A 8 7/7 页 9 0066 实施例 8 0067 线性与范围 0068 仪器与条件 ： 同实施例 1。 0069 实验步骤 ： 取利伐沙班中间体 100.2mg， 精密称定， 置 50ml 量瓶中， 加 40%（体积 比） 甲醇水溶液溶解并稀释至刻度， 即得线性储备液。精密量取线性储备液 1.0ml， 2.0ml，。

19、 3.0ml， 4.0ml， 5.0ml， 6.0ml 分别置 10ml 量瓶中， 加 40%（体积比） 甲醇水溶液稀释至刻度， 摇匀， 依法测定。 以供试品溶液的浓度为横坐标， 以利伐沙班中间体峰峰面积为纵坐标进行 线性回归， 得线性回归方程为 y=13085.4872x+61.8848， 工作曲线见附图 4。 0070 由附图 4 可知， 图中趋势线的相关系数 r=0.9998， 可见在该色谱条件下， 利伐沙班 中间体在 0.2004 1.2024mg/ml 的浓度范围内线性关系良好。 说 明 书 CN 103822997 A 9 1/2 页 10 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103822997 A 10 2/2 页 11 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 103822997 A 11 。