一种快速检测金刚烷胺含量的方法技术领域
本发明涉及一种快速检测金刚烷胺含量的方法，属于分析化学技术领域。
背景技术
金刚烷胺（amantadine），又称三环癸胺，是一种具有对称结构的常见药物分子。药
理学研究表明，金刚烷胺可以阻止病毒穿入宿主细胞并有效地抑制病毒的脱壳和繁殖；同
时，其在脑组织中能够促进多巴胺能神经元释放多巴胺递质并抑制多巴胺的再摄取。因此，
金刚烷胺在抗病毒和治疗帕金森综合征等方面具有重要的应用。但是，过量服用金刚烷胺
会引发嗜睡、眩晕、幻听、神经系统损伤等不良反应。为了尽可能的避免金刚烷胺的过量摄
入，采用准确可行的金刚烷胺检测方法，实现金刚烷胺在药品片剂中含量的准确测定就显
得尤为重要。目前常用的金刚烷胺检测方法主要包括高效液相色谱法、气相色谱法、质谱
法、毛细管电泳法和示波伏安法等。这些方法虽然在检测灵敏度、特异性和稳定性等方面各
有优势，但是，常用的金刚烷胺检测方法普遍存在检测耗时长、仪器设备昂贵、操作繁琐等
缺点。
发明内容
本发明的目的是：针对现有方法的不足，提出一种快速检测金刚烷胺含量的方法，
该方法依赖于葫芦[7]脲（Cucurbit[7]uril）参与的显色反应，形成稳定的金刚烷胺与葫芦
[7]脲的配合物，实现金刚烷胺的含量检测。
为实现上述目的，本发明采用如下机理：
（1）ABTS（2,2'-联氮双-3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）是一种常见的过氧化物酶显色底物；
借助过氧化物酶的催化，ABTS可以与过氧化氢反应生成稳定的阳离子自由基ABTS·+；葫芦
[7]脲可以通过内部的疏水空腔结合ABTS，提高其反应活性，使其在无需过氧化物酶催化的
条件下，直接与过氧化氢反应生成ABTS·+。
（2）当不存在金刚烷胺时，ABTS可以与葫芦[7]脲结合，进而ABTS直接与过氧化氢
反应生成绿色物质ABTS·+，从而在紫外-可见吸收光谱420 nm处出现明显的特征吸收峰。
当存在金刚烷胺时，金刚烷胺通过占据葫芦[7]脲的疏水空腔，形成稳定的葫芦[7]脲@金刚
烷胺配合物，使得ABTS无法与葫芦[7]脲结合，导致ABTS无法直接与过氧化氢反应生成
ABTS·+， 这导致检测溶液的颜色保持无色，且在420 nm处无法出现明显的紫外-可见吸收
峰。根据检测溶液在420 nm处的吸光度值，实现对金刚烷胺的检测。
根据上述机理，本发明采用的技术方案是：
一种快速检测金刚烷胺含量的方法，其特征在于该方法的具体步骤为：
a. 取物质的量浓度为0.25～0.6 mM的葫芦[7]脲溶液100 μL置于微量管中，加入含金
刚烷胺的100 μL样品溶液，充分混合后进行反应，反应温度为20～30ºC，反应时间为0.5～1
小时，反应后得到葫芦[7]脲@金刚烷胺配合物溶液；
b. 向上述步骤（a）所得的葫芦[7]脲@金刚烷胺配合物溶液中加入物质的量浓度为30
～50 mM的ABTS溶液25 μL和物质的量浓度为25～50 mM的过氧化氢溶液25 μL，混合均匀，
加热至40～50ºC进行显色反应，反应时间0.5～1小时，显色反应后得到检测溶液；
c.采用紫外-可见分光光度计测量上述步骤（b）所得的显色反应后的检测溶液在400~
500 nm波长范围内的紫外-可见吸收光谱，并根据在420 nm处的吸光度（A420）值与金刚烷胺
浓度之间的关系，计算出金刚烷胺含量。
与现有技术相比，本发明具有如下的突出的优点：
该方法依赖于葫芦[7]脲参与的显色反应以及稳定形成的葫芦[7]脲@金刚烷胺配合
物，实现了金刚烷胺的含量检测；该方法操作简便、快速，且灵敏度高、特异性好。
附图说明
图1为检测不同浓度金刚烷胺时得到的紫外-可见吸收光谱。，图中，从a到i，金刚
烷胺的浓度分别为0 µM、5 µM、31.25 µM、62.5 µM、125µM、150 µM、175 µM、200 µM和225 µM
时，在420 nm处的特征吸收峰随着金刚烷胺浓度的升高而逐渐降低，其中420 nm处出现一
个明显的特征吸收峰。
图2为显色反应后检测溶液的A420值与金刚烷胺浓度间的关系图，从图中可以看
出，用于金刚烷胺检测的最低检测限为3.81 µM，当金刚烷胺的浓度在5~150µM之间时，CADA
和A420值之间的线性关系；线性回归方程为A420=-0.0153 CADA+2.507 （r=0.998）。
图3为检测200 µM金刚烷胺以及2000 µM若干药剂共存组分的显色反应后的待测
溶液A420值相比于空白对照组A420值的比例示意图。
具体实施方式
现将本发明的具体实施例叙述于后。
实施例1
本发明的一种快速检测金刚烷胺含量的方法，其步骤如下：
a. 取物质的量浓度为0.5 mM的葫芦[7]脲溶液100 μL置于微量管中，加入含金刚烷胺
的100 μL样品溶液，充分混合后进行反应，反应温度为25ºC，反应时间为0.5小时，反应后得
到葫芦[7]脲@金刚烷胺配合物溶液；
b. 向上述步骤（a）所得的葫芦[7]脲@金刚烷胺配合物溶液中加入物质的量浓度为40
mM 的ABTS溶液25 μL和物质的量浓度为40 mM的过氧化氢溶液25 μL，混合均匀，加热至45
ºC，发生显色反应（反应时间为0.5小时），显色反应后得到检测溶液；
c.采用紫外-可见分光光度计测量上述步骤（b）所得的显色反应后的检测溶液的在400
~500 nm波长范围内的紫外-可见吸收光谱，根据A420值与金刚烷胺浓度之间的关系，计算出
金刚烷胺含量，如图1、图2所示。
为了验证本发明方法的检测药剂金刚烷胺含量的特异性，将若干药剂共存组分
（马来酸氯苯那敏、蔗糖、葡萄糖、苏氨酸、麦芽糖和丙氨酸）作为对照，按照上述实施例的步
骤技术方案分别进行检测。检测结果如图3所示：当检测含有200 µM金刚烷胺的样品溶液
时，显色反应后的检测溶液A420值显著降低，与空白对照组A420值相比，其下降比例高达95%；
而当检测含有2000µM其他药剂共存组分的对照溶液时，显色反应后的检测溶液相应的A420
值降低较少。这些结果说明，本方法用于检测金刚烷胺具有很好的特异性。