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1、(10)申请公布号 CN 102159931 A (43)申请公布日 2011.08.17 CN 102159931 A *CN102159931A* (21)申请号 200980136984.3 (22)申请日 2009.08.06 08164548.3 2008.09.18 EP G01N 1/28(2006.01) (71)申请人 恰根有限公司 地址 德国希尔登 (72)发明人 G巴尔 D梅尔腾斯 A谢弗 F威莫尔 (74)专利代理机构 上海专利商标事务所有限公 司 31100 代理人 沙永生 (54) 发明名称 用于同时自动破碎多个生物样品的方法和装 置 (57) 摘要 本发明涉及一种。
2、用来破碎生物样品 (9) 的方 法， 所述方法包括以下步骤 ： 将所述样品 (9) 放 入由塑料组成的容器 (6) 中， 具体来说， 将所述容 器 (6) 插入适配器 (2， 2a) 中， 将所述其中装有封 闭容器的适配器与能够使得该适配器自动往复移 动、 具体来说是上下移动的设备相连。通过该方 法可以使得生物样品以自动的方式破碎， 能够对 室温样品和冷冻样品进行精确处理。本发明还涉 及用来实施该方法的设备， 所述设备包括适配器 (2， 2a)， 该适配器主要由塑料组成， 包括由金属制 成的套(4)， 所述套(4)用来容纳容器(6)， 所述容 器 (6) 具体来说由塑料组成。 (30)优先权数。
3、据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2011.03.17 (86)PCT申请的申请数据 PCT/EP2009/060173 2009.08.06 (87)PCT申请的公布数据 WO2010/031636 DE 2010.03.25 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 2 页 说明书 7 页 附图 2 页 CN 102159937 A1/2 页 2 1. 破碎生物样品 (9) 的方法， 其包括以下步骤 ： 将样品 (9) 装入非金属容器 (6) 中， 将所述容器 (6) 插入适配器 (2， 2a) 中， 将其中设置有密封的容器 (6)。
4、 的适配器与能使该适配器往复移动、 尤其是上下往复移 动的设备相连。 2. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 有多个容器 (6) 中装有生物样品 (9)， 这些 样品通过自动往复方式通过适配器进行同时破碎， 这些容器插入适配器中。 3. 如以上权利要求中任一项所述的方法， 其特征在于， 首先洗涤样品 (9)， 然后在液氮 中冷冻或进行化学保存， 将由此制备的样品装入容器 (6) 中。 4. 如以上权利要求中任一项所述的方法， 其特征在于， 所述适配器包括金属套 (4)， 套 中插有容器 (6)， 所述容器中装有生物样品。 5. 如以上权利要求中任一项所述的方法， 其特征在于， 首先将。
5、所述容器 (6)、 样品 (9) 和适配器(2， 2a)冷却到低于-20， 优选冷却到低于-50， 随后通过使适配器往复移动而 破碎样品。 6. 如以上权利要求中任一项所述的方法， 其特征在于， 将所述适配器 (2， 2a) 冷却到不 低于 -80。 7. 如以上权利要求中任一项所述的方法， 其特征在于， 容器中装入至少一个可移动硬 体 (8)， 优选是两个可移动硬体， 该硬体具体由金属或玻璃构成。 8. 如以上权利要求中任一项所述的方法， 其特征在于， 在破碎之前将分解缓冲剂装入 容器(6)中， 具体是包含用于破碎DNA的络合剂和表面活性剂的缓冲剂， 优选是ATL， 或包含 用于破碎 RNA。
6、 的离液剂的缓冲剂， 具体是 RLT。 9.如以上权利要求中任一项所述的方法， 其特征在于， 所述适配器(2， 2a)以至少10赫 兹、 优选至少 30 赫兹的频率往复移动。 10. 如以上权利要求中任一项所述的方法， 其特征在于， 装入容器 (6) 中的样品重量不 超过 50 毫克， 优选不超过 30 毫克。 11. 如以上权利要求中任一项所述的方法， 其特征在于， 所述容器 (6) 由塑料构成。 12. 用于进行如以上权利要求中任一项所述的方法的装置， 其包括适配器 (2， 2a)， 该 适配器具体主要由塑料构成， 还包括套 (4)， 套由金属构成， 套用于容纳非金属容器 (6)， 该 容。
7、器优选由塑料构成。 13. 如以上装置权利要求中任一项所述的装置， 其特征在于， 适配器 (2， 2a) 以可松脱 的方式与能使适配器平行于所述套自动往复移动的设备连接， 具体是以可旋松螺丝的方式 连接。 14. 如以上权利要求中任一项所述的装置， 其特征在于， 所述设备经过设置， 使适配器 能以至少 10 赫兹、 优选至少 30 赫兹的频率往复移动。 15. 如以上装置权利要求中任一项所述的装置， 其特征在于， 容器 (6) 插入套中， 所述 容器中还有生物样品 (9) 以及另外的可移动硬体 (8)， 所述容器主要由金属或玻璃构成。 16. 如以上装置权利要求中任一项所述的装置， 其特征在于。
8、， 金属套 (4) 的内部直径不 超过 16 毫米， 优选不超过 12 毫米。 17.如以上权利要求中任一项所述的装置， 其特征在于， 有至少6个金属套(4)， 优选有 权 利 要 求 书 CN 102159931 A CN 102159937 A2/2 页 3 至少 12 个金属套 (4)， 所述金属套用于容纳容器 (6)。 18. 如以上权利要求中任一项所述的装置， 其特征在于， 套 (4) 通过插入件 (2a) 固定， 该插入件能从适配器取下。 19. 如以上权利要求中任一项所述的装置， 其特征在于， 在俯视图中， 套 (4) 设置成环 的形状。 20. 如以上权利要求中任一项所述的装置。
9、， 其特征在于， 具有盖子 (3)， 所述盖子能与 适配器 (2， 2a) 牢固连接。 权 利 要 求 书 CN 102159931 A CN 102159937 A1/7 页 4 用于同时自动破碎多个生物样品的方法和装置 发明领域 0001 本发明涉及用于破碎植物或动物样品进行处理的方法和装置， 例如从样品分离核 酸或蛋白质。这些制备和测试在实验室中通过实验室技术按照标准化的处理指令进行。所 谓规程是这种处理指令的一部分。这种用于从大肠杆菌 (E.coli) 分离质粒的规程的一个 例子可以从文献 DE 101 53 957A1 了解。 技术背景 0002 为了按所需方式处理样品， 即， 分离。
10、核酸或蛋白质， 例如根据样品和所需结果， 可以从市场购得所谓 “试剂盒” ， 例如恰根公司 (Qiagen) 的 “超净组织 DNA 分离试剂盒 (UltraClean Tissue DNA Isolation Kit)” (www.Qiagen.com)。 在使用这种试剂盒按照预 先确定的规程处理样品之前， 必须以合适的方式对样品进行制备。 0003 以下描述这些现有技术已知的典型制备方法。 0004 例如， 从实验动物如大鼠取出器官。动物器官的选择取决于目的。在洗涤缓冲溶 液如 PBS( 磷酸盐缓冲盐水， 具有以下组成 ： Na2HPO4( 干燥的 )、 NaH2PO4( 干燥的 )、 N。
11、aCl 和 蒸馏水 ) 中对取出的动物器官或组织进行洗涤。由于洗涤过程， 取出的组织部分以无血状 态提供， 而且没有不利的组分。 0005 然后， 将取出的组织在液氮中冷却， 以停止细胞活动等。否则， 将不能在处理之后 以所需质量获得所需的信息。 在该过程中， 通常将具有体温例如37的组织浸没在液氮中。 将产生气泡。直到气泡停止形成才将组织从液氮中取出。然后使用例如干冰将组织储存 在 -80。 0006 如果要避免在液氮中的冷却步骤， 则作为替代， 在洗涤过程之后， 使用稳定化试剂 如RNAlater对取出的组织进行化学保存。 RNAlater是一种粘性液体， 由Ambion公司开 发 (ww。
12、w.ambion.com) 用于保存新鲜组织。该保存效果主要基于通过除水使组织中所有的 酶失活， 以及基于停止细胞活动。该粘性液体必须迅速扩散到组织的所有细胞中。因此， 组 织片的尺寸必须限于边长最多为0.5厘米。 化学处理之后， 经过如此处理的组织也在-80 冷却， 以在处理之前对其进行储存。 0007 对于处理而言， 通常需要 10-100 毫克组织以进行所需测试、 分离等。在处理之前， 使用例如解剖刀切下所需量的动物组织。 0008 上述样品制备步骤可以单独或组合地作为下述本发明的特征。 0009 对切割的样品即切割的组织进行破碎， 意味着必须打开细胞壁。这种操作可以通 过机器、 化学或。
13、酶方式进行。机器破碎可以例如使用恰根公司的 “TissueRuptor” 进行 ( 参 见 TissueRuptor 手册， 2006 年 7 月， 恰根公司 (Qiagen)， 德国希尔敦 (Hiden Germany) 了 解 )。在这种情况中， 旋转刀片以 35000 转 / 分钟的速度使组织的细胞壁分解。机械破碎通 常在缓冲剂中进行， 以避免破坏成分如核酸。 0010 在缓冲剂 ( 即一种化学物质 ) 存在下在容器中进行的机械破碎在文献 EP 1577011A2 中描述。 说 明 书 CN 102159931 A CN 102159937 A2/7 页 5 0011 在低温研磨机中制备。
14、样品也是已知的 ( 参见例如 http:/www.laborpraxis.de/ fachartikel/lp_fachartikel_nh_2384859.html， 2007 年 3 月 12 日 )。在这种主动冷却的 研磨机中， 在液氮温度下对样品进行研磨。 样品在整个研磨过程中保持深度冷冻， 而不与氮 接触。这种技术上相当复杂的方法可以在上述方法失败的那些样品情况中进行， 例如在材 料非常硬的情况中， 例如骨头， 或者在材料含胶原的情况中， 例如皮肤。如果要制备骨头样 品， 则将其放置在充满液氮的容器中， 使用金属钉将其压碎。然后提供粉末形式的骨头。 0012 如果要用显微镜进行组织学。
15、测试， 则首先用石蜡浸渍样品， 使其变硬， 然后使用显 微镜切片机切割成组织薄层。 0013 如果要处理植物样品， 则只有在软材料(如叶、 软豆等)的情况中才能用解剖刀将 它们切割成一定尺寸。 在干燥的或冷冻的植物样品的情况中， 它们被冷冻在液氮中， 在用液 氮主动冷却的研钵中使用研杵进行研磨。 0014 德国专利说明书 738 286 说明了将细胞与分散液体一起进行冷冻和研磨， 从而分 解细胞。 0015 从文献 DE 602005001256T2 和 WO 2004/082837A1 了解了用于食品如香料的压碎 / 混合装置。该装置包括中空体， 该中空体中放置一个球， 使用该球压碎食品。 。
16、0016 文 献 US 2004/0144874A1、 JP 2006051505A、 JP 2002-066 366A 和 JP 03-186 360A揭示了用于球磨机和同类可比装置的其他例子。 从这些文献不能了解破碎生物样品的 方法。 0017 发明概述 0018 以上述方式制备样品的目的是在处理之后获得尽可能好的所探寻的结果。因此， 本发明的目的是适当且简单地破碎生物样品。 0019 一种达到该目的的解决方案包括权利要求 1 的特征。一种用于进行该方法的装置 包括独立权利要求的特征。通过从属权利要求了解有利的实施方式。 0020 将适当制备的样品插入塑料构成的容器中。将该塑料容器插入适配。
17、器中。然后密 封该塑料容器。 可以用适配器的盖子进行密封。 但是优选塑料容器具有其自身的盖子， 因此 即使在破碎过程之后从适配器中取出塑料容器时， 该塑料容器仍然是密封的。 而且， 如果塑 料容器不再使用而是最后丢弃， 则使清洁努力最小化。随后将适配器与使其自动往复 ( 尤 其是上下往复 ) 的设备相连， 从而破碎样品。具体来说， 以一定方式对适配器进行设置， 使 其能够容纳大量塑料容器， 从而能同时破碎大量生物样品。 0021 在插入塑料容器之前， 样品经过适当制备， 具体是首先洗涤样品， 然后 使 用 液 氮 进 行 保 存 或 进 行 化 学 保 存， 即， 例 如 使 用 美 国 公 。
18、司 Ambion， 弗 斯 特 城 (Foster City) 的 RNAlater或 者 根 据 网 页 http:/www1.qiagen.com/products/ RnaStabilizationPurification/AllprotectTissueReagent.aspx 使 用 恰 根 公 司 (Qiagen)的AllProtect进行。 主要根据塑料容器的尺寸， 将适当制备的样品全部或部分地 装入塑料容器中。如果只装入一部分样品， 则使用例如解剖刀将该部分切除。 0022 因为在化学保存的情况中， 待保存样品必须比较小， 优选对塑料容器的尺寸进行 设计， 使其只能容纳小样品。。
19、因此， 如果出于这个原因总是只能制备优选不超过 50 毫克、 更 优选不超过 30 毫克的少量样品， 则可以以改进的方式避免操作误差。 0023 该方法能自动破碎样品， 即以不同方式自动破碎样品。通过首先将经过冷冻或化 说 明 书 CN 102159931 A CN 102159937 A3/7 页 6 学保存的样品放置在密封的处于插入状态的塑料容器中， 由此避免整体装置的其他成分污 染。 该塑料容器是一种便宜的可丢弃的制品， 在样品破碎之后， 不一定需要因为经济原因而 再使用。因此， 可以省去对用过的塑料容器的清洁。由于适配器能容纳大量其中放置了样 品的塑料容器， 所以可以同时破碎大量样品。。
20、 0024 从根本上说， 另一方面， 适配器是能从设备分离的部件， 从而能够适当且简单地制 备适配器。具体来说， 在该情况中， 在将样品插入塑料容器中之前， 可以简单地将适配器冷 却到一定的温度范围， 具体是 -20到 -80， 例如在冷冻箱中进行冷却， 或者使用干冰进 行冷却， 从而能破碎冷冻的样品， 而无须担心样品解冻， 即使在缺少主动冷却的条件下也无 须担心。 0025 根据权利要求的内容可以用于植物也可以用于动物或人的组织， 用于植物或组织 的稳定化的以及新鲜的样品。 此外， 可以在室温下以非常简单的方式进行破碎， 对于化学保 存的样品， 以及对于在低温冷冻的样品， 都是如此。 002。
21、6 为了能可靠地在破碎过程中保持冷冻的样品处于适当冷却条件下， 在一种实施方 式中， 适配器包括一个、 优选若干个金属套， 该金属套插入塑料容器中。 除此以外， 适配器全 部或至少主要由塑料构成。金属套具有在足够长的时间内保持塑料容器冷却所需的热容。 此外， 适配器全部或至少主要由塑料构成， 因此， 适配器不会太重， 否则会使其操作变得困 难得多。 0027 在本发明的一种实施方式中， 将深度冷冻的样品放置在冷却的塑料容器中， 该容 器中另外包含至少一个可移动的硬体。然后将冷却的塑料容器插入冷却的适配器中， 或者 插入冷却的适配器的金属套中。在一种实施方式中， 适配器冷却的温度应当低于 -50。
22、， 从 而可靠地防止冷冻的样品在破碎过程中解冻。优选温度约为 -80， 例如应当选择为 -70 到 -90。可以使用干冰或者在冷冻箱中以成本有效的方式提供 -80或者 -70到 -90 的温度。发现通过冷却到约 -80能获得特别优良的结果。在某种程度上， 低于 -80的温 度也是可能的。但是， 应当注意适配器不能过度冷却， 否则将无法进行破碎。例如， 已经证 明液氮温度 ( 即 -196 ) 太低， 不能获得优良的结果。然后， 插入设备中之后， 使适配器非 常迅速地往复运动， 从而使可移动体相对于塑料容器以一定方式振摇， 可移动体将深度冷 冻的样品压碎并破碎。 已经证明， 例如通过氮对适配器进。
23、行额外的主动冷却是不必要的， 因 此优选不提供。这使得与破碎过程中需要主动冷却的现有技术相比， 操作变得简单得多。 0028 特别合适的情况是， 塑料容器的圆筒形内部具有至少一个中空球形状的端部。在 这种情况下， 可移动体优选是球或具有球形端部的销。球或销的直径略小于塑料容器内部 的直径， 从而确保移动性。 可移动体由硬质材料、 优选是重质材料构成， 例如金属， 从而能压 碎样品。优选以一定方式将样品引入塑料容器中， 将其放置在塑料容器的中空球形端部和 球或销之间。球或销的直径优选至少为 5 毫米， 更优选至少为 8 毫米。塑料容器的直径优 选不超过 15 毫米， 优选最大为 10 毫米。优选。
24、塑料容器在破碎过程中垂直设置， 中空球形端 部位于底部。由于重力的原因， 样品材料主要保持在较低的区域中， 因此， 只要一个 ( 较低 的 ) 中空球形端部就足以使用球可靠地进行压碎。 0029 具体来说， 将冷却到至少 -50的样品放置在塑料容器中。然后振摇该容器， 具体 来说， 使用设备以一定方式振摇 10-200 秒， 使可移动体来回运动， 优选上下运动， 优选运动 频率为 10-100 赫兹， 具体来说， 频率至少为 30 赫兹。如果振摇或往复运动时间太长， 则样 说 明 书 CN 102159931 A CN 102159937 A4/7 页 7 品有解冻的风险。 为了能可靠地在可用。
25、时间内破碎样品， 往复过程应足够长且频率足够高。 由此， 将样品压碎， 从塑料容器中取出， 按照规程使用试剂盒对所需量的样品进行处理。除 了冷冻的样品和一个或多个可移动的硬体以外， 容器中基本上没有其他物质， 尤其是没有 冷却剂 ( 如液氮 ) 或例如缓冲溶液。这些其他物质至少在通常情况下只会对所需结果造成 掺假。 0030 令人吃惊的是， 发现与本领域已知的样品制备法相比， 这种形式的对冷冻试样的 破碎能获得非常优良的结果， 而且不需要进行大的技术改进， 操作也很简单。 可以省去在例 如 TissueRupter 中的破碎， 因为这种额外的破碎基本上是不需要的。由此制备的样品可以 立刻进行处。
26、理， 给出特别优良的结果。 技术改进要求不高， 因为只有包括可移动体的容器和 其中放置的适配器需要冷却， 例如在冷冻箱中冷却到例如 -50到 -80的温度。将样品压 碎之后， 可以将其取出， 例如储存在另一个容器中并进行冷却， 供以后使用。 或者， 不需要取 出样品并储存在另一个容器中， 而是仍然在包括可移动体的塑料容器中进行。 在该情况中， 该容器同时用作破碎容器和储存容器。可以精确且简单地决定处理所需的样品量。另外， 在该过程中可以实现同种组织分配。 甚至可以制备稳定化的组织、 植物的叶和种子， 以这种 方式进行进一步处理。但是， 这种方法并不适合皮肤和骨头以及比较硬或粘的样品。 0031。
27、 由于在冷却的密封适配器中进行处理不需要很长时间， 所以不需要中断振摇过程 和在间歇时间内将适配器冷却到适当的低温。如果适配器具有壁足够厚的金属套， 这样做 是特别有利的。一般来说， 壁厚几毫米就足够了。在一种实施方式中， 壁的厚度至少为 0.5 毫米， 从而提供足够的热容， 优选至少为 1 毫米。为了不至于变得太重， 在一种实施方式中， 壁厚不超过 4 毫米。 0032 由于压碎之后， 样品以粉末形式提供， 所以使样品具有特定的大表面积是有利的， 随后可以在该大表面积上与使用的化学物质发生作用。 可以以特别简单的方式为随后的步 骤提供所需量的粉末， 例如通过称量提供， 或者甚至通过相应尺寸的。
28、测量容器 ( 例如量匙 ) 提供。 0033 适配器本身适合于以非冷却的状态破碎未冷却的样品。 但是， 在这种情况中， 样品 通过分解缓冲剂的方式进行破碎， 在破碎过程中， 该分解缓冲剂与样品一起位于塑料容器 中。当适配器以非冷却状态使用时， 也对样品进行压碎。在这种情况中， 产生缓冲剂和组 织的溶液。合适的分解缓冲剂包括含有用于破碎 DNA 的络合剂和表面活性剂的缓冲剂， 例 如， 从德国希尔敦的 (Hilden， Germany) 恰根公司 (Qiagen GmbH) 购得的分解缓冲剂 ATL， 或者缓冲剂包含用于破碎 RNA 的离液剂， 例如从恰根公司 (Qiagen GmbH) 购得的。
29、分解缓冲 剂 RLT。 0034 将之前称量的组织片在冷却状态中处理成粉末之后， 在一种实施方式中加入缓冲 剂， 即将粉末转移到溶液中。由此避免困难的操作， 从而再次取出非常少量的样品， 例如 10 毫克组织粉末。 0035 如果对组织进行破碎， 则优选对破碎使用位于塑料容器中的较大的金属可移动 体。如果对细菌进行破碎， 则较小的可移动体主要由玻璃构成 ( 所谓玻璃珠 )。玻璃珠具 有较小的直径， 类似砂。由此， 摩擦变得强得多。这些性质是需要的， 以便对细菌进行破碎。 一般来说， 金属珠太大， 因此单个球之间的距离产生的间隙太大， 从而无法破碎细菌。 0036 作为上述实践的代替方式， 还可。
30、在原则上选择不同的非金属材料， 尤其是能与塑 说 明 书 CN 102159931 A CN 102159937 A5/7 页 8 料相近的材料。但是， 塑料是特别优选的。 0037 通过以下对实验的说明， 其他优点和实施方式将是显而易见的。 0038 图 1 显示通过适配器 1 的横截面。适配器 1 包括容器形状的基体 2， 该基体被盖子 3 密封。在该基体中， 设置了总共 12 个套 4( 在俯视图中看 )， 这些套由铝构成， 在适配器中 轴周围以圆形方式设置。套 4 的壁厚度为 1 毫米。套 4 的上部区域中具有一个或多个缝 5。 有缝的上部区域通过夹具固定在插入件 2a 中， 插入件位。
31、于基体 2 中。因此， 可以为了清洁 的目的从基体 2 取下套 4， 尤其是与插入件 2a 一起简单地取下。 0039 图 1 显示有盖的塑料容器 6， 其插入金属套 4 中。塑料容器 6 被夹在两个发泡硅 酮的弹性环状盘 7 之间， 该盘 7 设置在塑料容器 6 的下方和上方。上部环状盘通过盖子 3 以设置在盖子 3 下侧的横向沟槽的方式固定。下部环状盘 7 通过横向沟槽固定在基体 2 的 底部上。弹性盘 7 在破碎过程中使容器稳定化， 因此不会破损。此外， 弹性盘 7 具有降噪效 果。 0040 由塑料构成的容器 6 的底部是中空球形的。在容器 6 中存在钢构成的球 8。将生 物样品 9 。
32、放置在钢球 8 和塑料容器 6 的中空球形底部之间。只需要塑料容器 6 的底部是中 空球形的就足够的， 而对其盖子区域没有这种要求， 由于重力的原因， 样品将至少主要保持 在较低的部分中， 因此样品在底部区域中被压碎。 0041 在其上半部， 基体2具有钢质螺线插入件10， 该插入件中螺旋连接有盖子3的紧固 螺丝 11， 从而用盖子密封基体。转四分之一圈就足以紧固盖子。在下半部中有另一个钢质 螺线轴衬 12， 该轴衬中螺旋连接有螺丝 13， 从而使螺丝 13 的螺线在容器 2 的底部区域上突 出。而且， 螺丝 13 用胶粘剂紧固， 反面连接了螺母 14， 这种连接非常可靠， 不会使这种紧固 状。
33、态松脱。 0042 螺丝13向下突出的那部分螺线用于将适配器1以可松脱的方式紧固于设备， 从而 使适配器能以振动方式上下移动， 用球 8 将样品 9 压碎并使其破碎。 0043 而且， 基体 2 由塑料 ( 即聚甲醛 ) 构成。这种塑料能承受约 -80的低温， 以及普 通的清洁溶液。由聚甲醛构成的环状插入件 2a 在基体 2 的上部区域中受到硅酮 O 形环 15 的支承， 该O形环的肖氏硬度为50， 并通过盖子3通过夹具固定。 将金属套的上部区域夹在 插入件 2a 中。因此， 由硅酮构成的环能降噪。但是， 还可选择其他符合上述要求的塑料。 0044 盖子 3 和插入件 2a 通过弹性中间层互相。
34、分开， 从而进一步降低破碎过程中的噪 声。中间层还可以是硅酮环。 0045 插入件2a包括向上的突起， 居中设置的夹钳16， 从而能使插入件14与套和其中悬 挂的塑料容器一起移动。 为了能适当地悬挂塑料容器， 其上部部分中具有较宽的轮缘， 其宽 度大于套 4 的内部直径。在所示的示例性实施方式中， 套的上部部分具有加宽的内部直径， 从而能容纳塑料容器的加宽的轮缘。如果插入件 2a 与塑料容器 6 一起取出， 则塑料容器的 加宽的上部轮缘能进入内部直径放大的套的相应上部凹陷中， 然后在运输过程中特别牢固 地固定。 0046 图 1 中所示基体的直径约为 80 毫米。基体高度约为 50 毫米。金属。
35、套 4 的内部直 径为 11 毫米。这种套 4 的高度为 35 毫米。相应尺寸的塑料容器 6 方便地装有约 25 毫克 样品材料作为标准。 0047 上述尺寸和适配器材料仅仅是优选情况， 无须强制选择。同样适用于所示适配器 说 明 书 CN 102159931 A CN 102159937 A6/7 页 9 的设计。 0048 图 2 显示一个台架， 其上可以放置插入件 2a 以及悬挂的塑料容器 6 和套。台架的 圆筒形凹陷 18 用于容纳套 4 和塑料容器 6。钻锥 19 用于将塑料容器从套中推出， 从而能简 单地取出塑料容器。台架 17 的向上突起夹钳 20 推过插入件 2a 的中央开口，。
36、 从而将插入件 2a 放置在台架 17 上。 实施例 0049 以下实验使用图 1 中所示的适配器进行。 0050 1. 从新鲜大鼠肝脏和新鲜大鼠心脏分离 DNA 0051 分别将 12 个新鲜大鼠肝脏和心脏的样品 (25 毫克 ) 加入 180 微升 ATL( 即包含络 合剂和表面活性剂的缓冲剂， 从恰根公司 (Qiagen GmbH)， 德国希尔敦 (Hilden， Germany) 购得 ( 参见网页 http:/www1.qiagen.com/Products/Accessories/Buffers/BufferATL. aspx)和10微升DX(参见网页http:/www1.qiag。
37、en.com/Products/ReagentDX.aspx)中， 使用两个金属不锈钢球 ( 也称为 “珠” )， 其直径为 5 毫米， 以 50 赫兹的频率破碎 1.5 分钟。 测试显示， 在两个珠的情况中， 紊流较大， 导致组织研磨程度较高。因此， 通过设备以 50 赫 兹的频率上下移动适配器。然后取出样品， 用小的台式离心机离心。破碎过程之后， 将适配 器夹在这种台式离心机中。然后打开离心机短时间周期， 再次使所有成分来到适配器的底 部。 0052 然后加入 20 微升蛋白酶 K， 进行旋流， 将溶液在 56培养 1 小时。培养之后， 向 样品中加入 4 微升 RNAse A(100 毫。
38、克 / 毫升 )， 培养 5 分钟。其他步骤按照 DNeasy 规程进 行 ( 参见网页 http:/www1.qiagen.com/Products/GenomicDnaStabilizationPurificati on/DNeasyTissueSystem/DNeasyBloodTissueKit.aspx)。 0053 结果 ： 0054 心脏 ： 0055 心脏组织给出平均5.83微克DNA和1.07的标准偏差。 分离的DNA质量可以略高， 但是对于该结果没有抱怨。 0056 肝脏 ： 0057 肝脏组织给出平均 34.08 微克 DNA 和 10.97 的标准偏差。肝脏组织的破碎显。
39、示， 破碎工作非常优良。 0058 2. 从新鲜的牛肝脏分离 DNA 0059 分别将 12 个样品 (25 毫克 ) 的新鲜牛肝脏加入 180 微升 ATL 和 6 微升 DX 中， 使 用两个珠， 以 50 赫兹的频率破碎 2 分钟。然后取出样品， 并离心。然后加入 20 微升蛋白酶 K， 进行旋流， 将溶液在 56培养 1.5 小时。培养之后， 向样品中加入 4 微升 RNAse A(100 毫 克 / 毫升 )， 以室温培养 5 分钟。其他步骤按照德国希尔敦得恰根公司 (Quiagen， Hilden， Germany)的QIAcube组织和啮齿动物尾巴规程进行。 组织和啮齿动物尾巴规。
40、程与QIA cube 一起装运。 0060 结果 ： 0061 肝脏 ： 0062 肝脏组织给出平均 44.38 微克 DNA 和 12.84 的标准偏差。对肝脏组织的破碎再次 说 明 书 CN 102159931 A CN 102159937 A7/7 页 10 显示， 破碎工作非常优良。DNA 同样可以作为白色卷状物看到， 使用移液管将其转移到新的 MRV 中比较困难 (MRV 微反应容器， 或简称为 “eppi” )。 0063 一般来说， 预计有 20 微克 DNA。较高的 44.38 微克的 DNA 平均值表明， DNA 进行了 进一步的分解。小的碎片导致测量中产生较高的信号， 会造成浓度较高的错误指示。 说 明 书 CN 102159931 A CN 102159937 A1/2 页 11 图 1 说 明 书 附 图 CN 102159931 A CN 102159937 A2/2 页 12 图 2 说 明 书 附 图 CN 102159931 A 。