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1、(10)申请公布号 CN 102297924 A (43)申请公布日 2011.12.28 CN 102297924 A *CN102297924A* (21)申请号 201110168695.0 (22)申请日 2011.06.21 G01N 30/89(2006.01) (71)申请人 上海试四赫维化工有限公司 地址 200940 上海市宝山区泰和路 1004 号 (72)发明人 顾一雯 贾玲 周琴 (74)专利代理机构 上海天翔知识产权代理有限 公司 31224 代理人 陈学雯 (54) 发明名称 3- 异苯并二氢吡喃酮中邻 - 甲基苯乙酸和 2- 氯甲基苯乙酸杂质含量的高效液相色谱分析。
2、 方法 (57) 摘要 一种3-异苯并二氢吡喃酮中邻-甲基苯乙酸 和 2- 氯甲基苯乙酸杂质含量的高效液相色谱分 析(HPLC)方法， 所述3-异苯并二氢吡喃酮采用重 量百分比浓度为 20 40乙腈水溶液溶解， 配 制的样品浓度为10mg/ml50mg/ml， 采用反相高 效液相色谱法， 测定 3- 异苯并二氢吡喃酮中邻甲 基苯乙酸和 2- 氯甲基苯乙酸杂质含量。本发明 采用 C18 反相色谱柱， 以液相色谱方法准确测定 3- 异苯并二氢吡喃酮中邻 - 甲基苯乙酸和 2- 氯 甲基苯乙酸杂质的含量。本发明选用乙腈溶解样 品， 确保了溶液的稳定性 ； 选用进样体积为 5l， 柱温为 40， 提高。
3、了色谱峰的对称性 ； 采用梯度 洗脱程序， 提高了杂质峰的分离度 ； 为 3- 异苯并 二氢吡喃酮中邻-甲基苯乙酸和2-氯甲基苯乙酸 杂质含量的测定提供了可靠的检测数据。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 4 页 CN 102297933 A1/1 页 2 1. 一种 3- 异苯并二氢吡喃酮中邻 - 甲基苯乙酸和 2- 氯甲基苯乙酸杂质含量的高效 液相色谱分析方法， 其特征在于， 所述 3- 异苯并二氢吡喃酮采用重量百分比浓度为 20 40乙腈水溶液溶解， 配制的样品浓度为 10mg/ml 50mg/m。
4、l， 采用反相高效液相色谱法， 测定 3- 异苯并二氢吡喃酮中邻甲基苯乙酸和 2- 氯甲基苯乙酸杂质含量， 高效液相色谱条 件为 ： 色谱柱 ： ZORBAX Eclipse XDB-C18 4.6150nm， 5m 流动相 ： pH 为 3.0 磷酸 - 磷酸二氢钠缓冲溶液 梯度洗脱 ： 0 30 分钟内流动相比例为 80 60， 流速 ： 1ml/min 柱温 ： 40 进样量 ： 5l 检测波长 ： 230nm。 2.根据权利要求1所述的一种3-异苯并二氢吡喃酮中邻-甲基苯乙酸和2-氯甲基苯 乙酸杂质含量的高效液相色谱分析方法， 其特征在于， 以峰面积对浓度作图， 邻甲苯乙酸在 浓度为 。
5、0 50mg/ml 的范围内， 样品浓度与峰面积成正比关系， 线性回归方程为 ： A 4.128x-0.358， r 0.99994。 3.根据权利要求1所述的一种3-异苯并二氢吡喃酮中邻-甲基苯乙酸和2-氯甲基苯 乙酸杂质含量的高效液相色谱分析方法， 其特征在于， 以峰面积对浓度作图， 2- 氯甲基苯乙 酸在浓度为 0 50mg/ml 的范围内， 样品浓度与峰面积成正比关系， 线性回归方程为 ： A 1.296x+0.421， r 0.99992。 权 利 要 求 书 CN 102297924 A CN 102297933 A1/4 页 3 3- 异苯并二氢吡喃酮中邻 - 甲基苯乙酸和 2-。
6、 氯甲基苯乙 酸杂质含量的高效液相色谱分析方法 技术领域 0001 本发明涉及一种 3- 异苯并二氢吡喃酮中邻 - 甲基苯乙酸和 2- 氯甲基苯乙酸杂质 含量的高效液相色谱分析方法。 背景技术 0002 3- 异苯并二氢吡喃酮是一种重要的有机合成中间体， 用于合成烯肟菌酯类药物、 甲氧基丙烯酸酯杀菌剂、 香料等产品。 0003 3- 异苯并二氢吡喃酮的制备方法 ： 由邻 - 甲基苯乙酸与氯通过自由基引发剂 (如 ： AIBN)作用下合成邻-氯甲基苯乙酸， 再在碱性条件下(如 ： 重碳酸钾)闭环生成3-异 苯并二氢吡喃酮。 0004 3- 异苯并二氢吡喃酮的结构如下 ： 0005 0006 3-。
7、 异苯并二氢吡喃酮产品含有邻 - 甲基苯乙酸和 2- 氯甲基苯乙酸杂质， 该杂质 含量直接影响产品的质量和合成药物、 香料等产品性能。因此， 对 3- 异苯并二氢吡喃酮中 邻 - 甲基苯乙酸和 2- 氯甲基苯乙酸杂质含量的检测显得十分重要， 目前还未见有 3- 异苯 并二氢吡喃酮中邻 - 甲基苯乙酸和 2- 氯甲基苯乙酸杂质含量的高效液相色谱分析方法的 报道。 发明内容 0007 本发明所要解决的技术问题在于提供一种 3- 异苯并二氢吡喃酮中邻 - 甲基苯乙 酸和 2- 氯甲基苯乙酸杂质含量的高效液相色谱分析方法， 以填补现有技术中对 3- 异苯并 二氢吡喃酮中邻 - 甲基苯乙酸和 2- 氯甲。
8、基苯乙酸杂质含量进行定量检测的空白。 0008 为了达到上述目的， 本发明采用以下技术方案来实现 ： 0009 一种 3- 异苯并二氢吡喃酮中邻 - 甲基苯乙酸和 2- 氯甲基苯乙酸杂质含量的高效 液相色谱分析(HPLC)方法， 其特征在于， 所述3-异苯并二氢吡喃酮采用重量百分比浓度为 2040乙腈水溶液溶解， 配制的样品浓度为10mg/ml50mg/ml， 采用反相高效液相色 谱法， 测定 3- 异苯并二氢吡喃酮中邻 - 甲基苯乙酸和 2- 氯甲基苯乙酸杂质含量， 高效液相 色谱条件为 ： 0010 色谱柱 ： ZORBAX Eclipse XDB-C18 4.6150nm， 5m 001。
9、1 流动相 ： pH 为 3.0 磷酸 - 磷酸二氢钠缓冲溶液 0012 梯度洗脱 ： 0 30 分钟内流动相比例为 80 60， 0013 流速 ： 1ml/min 0014 柱温 ： 40 说 明 书 CN 102297924 A CN 102297933 A2/4 页 4 0015 进样量 ： 5l 0016 检测波长 ： 230nm。 0017 本发明的有益效果 ： 0018 本发明采用 C18 反相色谱柱， 以液相色谱方法准确测定 3- 异苯并二氢吡喃酮中 邻 - 甲基苯乙酸和 2- 氯甲基苯乙酸杂质的含量。本发明选用乙腈溶解样品， 确保了溶液的 稳定性 ； 选用进样体积为 5l， 。
10、柱温为 40， 提高了色谱峰的对称性 ； 采用梯度洗脱程序， 提高了杂质峰的分离度 ； 为 3- 异苯并二氢吡喃酮中邻 - 甲基苯乙酸和 2- 氯甲基苯乙酸杂 质含量的测定提供了可靠的检测数据。 附图说明 ： 0019 图 1 为紫外光谱图， 其中 ： 图 1-a 为邻甲苯乙酸紫外光谱图， 图 1-b 为 2- 氯甲基苯 乙酸紫外光谱图。 0020 图 2 为不同体积比流动相组成的液相色谱图， 其中 ： 图 2-a 为 20乙腈和 80含 有 pH3.0 磷酸二氢钠缓冲溶液作为流动相的分离效果图 ； 图 2-b 为流动相为 pH3.0 磷酸二 氢钠缓冲溶液梯度洗脱程序的分离效果图 0021 图。
11、 3 为邻 - 甲基苯乙酸标准曲线图。 0022 图 4 为 2- 氯甲基苯乙酸标准曲线图。 0023 图 5 为 3- 异苯并二氢吡喃酮样品液相色谱图， 其中 a 峰为邻 - 甲基苯乙酸， b 峰 为 2- 氯甲基苯乙酸。 具体实施方式 0024 下面通过实施例对本发明作进一步说明， 但实施例并不限制本发明的保护范围。 0025 主要实验仪器及色谱条件 ： 0026 Agilent 1200 高效夜想色谱仪， 包括在线脱气装置、 四元泵、 柱温箱及二极管阵列 (DAD) 检测器， 化学工作站。 0027 色谱柱选用的是 ZORBAX Eclipse XDB-C18 4.6150nm， 5m 。
12、； 流动相为 pH 为 3.0 磷酸二氢钠缓冲溶液 ； 梯度洗脱 ： 0 30 分钟内流动相比例为 80 60； 流速 ： 1ml/ min ； 柱温 ： 40， 检测波长 ： 230nm。 0028 试剂与药品 ： 0029 邻 - 甲基苯乙酸对照品 (99.0 ) 0030 2- 氯甲基苯乙酸对照品 (99.0 ) 0031 乙腈 ： HPLC 级 0032 磷酸 ： 分析纯 0033 磷酸二氢钠 ： 分析纯 0034 实验中流动相和溶液用水均为纯水。 0035 实施例 1 0036 高效液相色谱条件的选择 ： 0037 1.1 流动相的选择 0038 根据溶剂的强度、 溶解度、 极性和粘。
13、度等因素对 HPLC 分离的影响， 分别考察了甲 说 明 书 CN 102297924 A CN 102297933 A3/4 页 5 醇 - 水和乙腈 - 水组成的流动相对分离的影响。结果表明， 3- 异苯并二氢吡喃酮在乙腈中 的溶解度非常好， 其粘度比甲醇小， 对机器压力的影响较小， 故采用乙腈 - 水作为流动。另 外考察了不同体积比的乙腈 - 水溶液对分离效果的影响。实验发现， 当流动相中乙腈比例 在 20 40时， 3- 异苯并二氢吡喃酮中的杂质能较好地分离， 故采用梯度洗脱程序， 使 杂质峰能更有效地分离。 在上述选定的流动相下， 为了改善峰形， 对分离条件进行了进一步 的优化， 考。
14、察了缓冲液与 pH 值。实验发现， 在流动相中加入少许磷酸缓冲液效果好， 并控制 pH 值为 3.0 能消除拖尾影响， 提高组分分离度和峰的对称性。 0039 1.2 检测波长的选择 0040 用二极管阵列检测器在 190 400nm 进行扫描， 得到紫外吸收光谱图， 邻 - 甲基苯 乙酸和 2- 氯甲基苯乙酸杂质在 230nm 附近有最大吸收 ( 参见图 )， 而乙腈在此区间无吸收 波长， 综合考虑基线、 峰形、 信号相应强弱等情况， 选择检测波长为 230nm。 0041 实施例 2 0042 标准样品的配制 0043 准确称取 400.00mg 邻 - 甲基苯乙酸和 2- 氯甲基苯乙酸杂。
15、质标准对照品， 置于 10ml容量瓶中， 用乙腈稀释至刻度， 超声摇匀。 配成浓度为40mg/ml的标准。 依次稀释10ml， 得到 5 个浓度点， 分别为 10mg/ml， 20mg/ml， 30mg/ml， 40mg/ml， 50mg/ml。 0044 实施例 3 0045 标准曲线的制作 0046 选择最佳高效液相色谱条件， 即色谱柱为 ZORBAX Eclipse XDB-C184.6150nm， 5m(Agilent) ； 流动相为 pH 为 3.0 磷酸二氢钠缓冲溶液 ； 梯度洗脱为 0 30 分钟内 ； 流 动相比例为 80 60 ； 流速 ： 1ml/min ； 柱温 ： 40。
16、 ； 进样量为 5l， 检测波长为 230nm。 0047 以峰面积对浓度作图， 邻 - 甲基苯乙酸在浓度为 0 50mg/ml 的范围内， 样品浓度 与峰面积成正比关系， 线性回归方程为 ： 0048 A 4.128x-0.358， r 0.99994 0049 以峰面积对浓度作图， 2-氯甲基苯乙酸在浓度为050mg/ml的范围内， 样品浓度 与峰面积成正比关系， 线性回归方程为 ： 0050 A 1.296x+0.421， r 0.99992 0051 实施例 4 0052 样品的测定 0053 选择任意 5 个批号的 3- 异苯并二氢吡喃酮样品， 按上述方法配制 20mg/ ml 样品。
17、溶液。根据本发明的高效液相色谱分析条件， 即色谱柱 ： ZORBAX Eclipse XDB-C184.6150nm， 5m(Agilent)， 流动相 ： pH 为 3.0 磷酸二氢钠缓冲溶液， 流速 ： 1ml/ min ； 柱温 ： 40； 进样量为 5l， 梯度洗脱为 30 分钟内， 流动相比例为 80 60， 检测波 长为 230nm 进行 HPLC 分析。 0054 样品中杂质成分的检测结果见表 1 0055 表 1 检测结果 0056 说 明 书 CN 102297924 A CN 102297933 A4/4 页 6 邻 - 甲基苯乙酸 2- 氯甲基苯乙酸 Rsd 1 0.04。
18、 0.08 0.45 2 0.08 0.04 0.55 3 0.09 0.06 0.48 4 0.08 0.07 0.50 5 0.07 0.08 0.52 说 明 书 CN 102297924 A CN 102297933 A1/4 页 7 图 1-a 图 1-b 说 明 书 附 图 CN 102297924 A CN 102297933 A2/4 页 8 图 2-a 图 2-b 说 明 书 附 图 CN 102297924 A CN 102297933 A3/4 页 9 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 102297924 A CN 102297933 A4/4 页 10 图 5 说 明 书 附 图 CN 102297924 A 。