一种糖敏灵制剂中5种化学成分的检测方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103575822 A (43)申请公布日 2014.02.12 CN 103575822 A (21)申请号 201210281596.8 (22)申请日 2012.08.08 G01N 30/02(2006.01) G01N 30/36(2006.01) G01N 30/06(2006.01) (71)申请人 天士力制药集团股份有限公司 地址 300410 天津市北辰区淮河道与汀江西 路交口天之骄园区法务中心知识产权 部 (72)发明人 佟玲 朱永宏 周水平 马晓慧 张瀛 靳元鹏 (74)专利代理机构 北京华科联合专利事务所 ( 普通合伙 ) 11130 代理人 。

2、王为 (54) 发明名称 一种糖敏灵制剂中 5 种化学成分的检测方法 (57) 摘要 一种糖敏灵制剂中化学成分的检测方法， 该 方法包括， 检测样品采用水或低级醇提取， 然后采 用高效液相色谱进行检测， 色谱条件为采用 C18 色谱柱， 流动相 A 相为乙酸或磷酸或甲酸水溶液， B 相为乙腈或甲醇， 检测器为二极管阵列检测器。 本发明具有很好的线性、 重复性、 重现性和回收 率， 有助于更加全面控制糖敏灵的质量。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 10 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书10页 附图2页 (10。

3、)申请公布号 CN 103575822 A CN 103575822 A 1/1 页 2 1. 一种糖敏灵制剂中化学成分的检测方法， 其特征在于， 检测样品采用水或低级醇提 取， 然后采用高效液相色谱进行检测， 色谱条件为采用 C18 色谱柱， 流动相 A 相为乙酸或磷 酸或甲酸水溶液， B 相为乙腈或甲醇， 检测器为二极管阵列检测器。 2. 如权利要求 1 所述的检测方法， 其特征在于， 检测样品采用水或甲醇超声提取。 3. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 色谱流动相 A 相为 0.01 -0.1磷酸水溶 液， B 相为乙腈。 4. 如权利要求 3 所述的方法， 其特征在于， 色。

4、谱流动相 A 相为 0.05磷酸水溶液， B 相 为乙腈， 采用梯度洗脱， 方法为 ： 0 20min， 8 B 相 20 B 相 ； 20 38min， 20 B 相 22 B 相 ； 38 45min， 22 B 相 28 B 相。 5. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 色谱流动相流速为 0.8-1.2mL/min。 6. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 色谱柱温为 30-40。 7. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 检测器波长为 210nm-256nm。 8. 如权利要求 7 所述的方法， 其特征在于， 检测器波长为 0 10min， 220nm ； 。

5、10 45min， 230nm。 9. 如权利要求 1-8 任意一项所述的方法， 其特征在于， 检测糖敏灵制剂中的没食子酸、 原儿茶素、 芍药内酯苷、 芍药苷和苯甲酸。 10. 如 权 利 要 求 9 所 述 的 方 法， 其 特 征 在 于， 糖 敏 灵 制 剂 中 没 食 子 酸、 原 儿 茶 素、芍 药 内 酯 苷、芍 药 苷 和 苯 甲 酸 的 含 量 分 别 为 0.7496-2.035mgg-1、 3.88210 -2-8.44010-2mgg-1、 1.121-1.795mgg-1、 2.365-5.140mgg-1、 0.5389-1.422mgg-1。 权 利 要 求 书 C。

6、N 103575822 A 2 1/10 页 3 一种糖敏灵制剂中 5 种化学成分的检测方法 技术领域 0001 本发明属于现代中药应用领域， 特别涉及一种对糖敏灵制剂中 5 种药物活性成分 同时进行含量测定的方法。 背景技术 0002 糖敏灵丸是在临床验证的有效方开郁清胃颗粒基础上加减变化与剂型改革而成。 糖敏灵丸由黄连、 大黄、 黄芩、 白芍、 柴胡、 枳实、 山楂、 乌梅、 半夏、 天花粉共十味常用中药组 成， 具有开郁清胃、 滋阴降火、 通腑泻浊之功效。临床观察证实其对 II 型糖尿病的血糖有明 显的改善作用， 尤其是对体型偏胖的早中期 II 型糖尿病患者效果更加显著。同时， 药理实 。

7、验揭示糖敏灵能显著增强高热量饲料诱导的胰岛素抵抗模型糖尿病大鼠和自发性 II 型糖 尿病大鼠的胰岛素敏感性。 0003 为使糖敏灵药物生产标准化， 达到疗效确切， 质量稳定的目的， 需要准确检测糖敏 灵制剂的化学成分。糖敏灵丸所含的药物成分中， 可以确定的药物活性物质包括 ： 没食子 酸、 原儿茶素、 芍药内酯苷、 芍药苷和苯甲酸。这些物质均属于已知物质。为更加全面控制 糖敏灵制剂的质量， 建立满足中药现代化的质量控制标准， 需要一种可以同时检测糖敏灵 制剂中多种化学成分的分析方法。 发明内容 0004 为使糖敏灵药物生产标准化， 达到疗效确切， 质量稳定的目的。 本发明提供了一种 检测本发明。

8、制剂中5种药物活性物质的方法， 该方法采用HPLC法对其中的药物活性物质同 时进行含量测定。该方法精密度、 灵敏度、 稳定性均好， 确保产品质量的 “安全、 均一、 稳定、 有效、 可控” 。 0005 本发明提供一种糖敏灵制剂中化学成分的检测方法， 其特征在于， 检测样品采用 水或低级醇提取， 然后采用高效液相色谱进行检测， 色谱条件为采用 C18 色谱柱， 流动相 A 相为乙酸或磷酸或甲酸水溶液， B 相为乙腈或甲醇， 检测器为二极管阵列检测器。 0006 根据本发明实施方式之一， 检测样品采用水或甲醇超声提取。 0007 优选的， 检测样品采用水超声提取。 0008 分别考察了水和不同浓。

9、度的甲醇等溶媒， 结果表明水和甲醇的提取效率较高， 其 中水的提取效率最高。为了除去色谱测定是大部分弱极性物质的干扰， 使用 ODS 小柱对待 测成分进行纯化、 富集， 具有良好的提取回收率。 0009 根据本发明的实施方式之一， 色谱流动相 A 相为 0.01%-0.1% 磷酸水溶液， B 相为 乙腈。 0010 优选的， 色谱流动相 A 相为 0.05% 磷酸水溶液， B 相为乙腈， 采用梯度洗脱， 方法 为 ： 0011 0 20min， 8%B 相 20%B 相 ； 0012 20 38min， 20%B 相 22%B 相 ； 说 明 书 CN 103575822 A 3 2/10 页。

10、 4 0013 38 45min， 22%B 相 28%B 相。 0014 分别用甲醇 - 水、 乙腈 - 水、 乙腈 - 水 - 磷酸或甲酸或乙酸作流动相时样品的分离 效果， 结果表明采用乙腈 - 水 - 磷酸流动相系统所得色谱峰峰形好、 保留时间短， 可达到理 想的分离效果。 0015 根据本发明的另一实施方式， 色谱流动相流速为 0.8-1.2mL/min。 0016 根据本发明的再一实施方式， 色谱柱温为 30-40。 0017 根据本发明的再一实施方式， 检测器波长为 210nm-256nm。 0018 优选的， 检测器波长为 010min， 220nm ； 1045min， 230。

11、nm。 0019 实验表明 ： 没食子酸和原儿茶素的最大吸收波长是 220nm， 芍药内酯苷、 芍药苷和 苯甲酸的最大吸收波长是 230nm， 为提高各成分检测的灵敏度和准确度， 在 10min 时将检测 波长由 220nm 转换至 230nm， 各成分均以最大吸收波长作为检测波长。 0020 根据本发明， 检测到的糖敏灵制剂中的化学成分为 ： 糖敏灵制剂中的没食子 酸、 原儿茶素、 芍药内酯苷、 芍药苷和苯甲酸。它们的含量分别为 0.7496-2.035mgg-1、 3.88210 -2-8.44010-2mgg-1、 1.121-1.795mgg-1、 2.365-5.140mgg-1、 。

12、0.5389-1.422mgg-1。 0021 本发明利用HPLC测定了糖敏灵中5种化学成分的含量， 具有很好的线性、 重复性、 重现性和回收率， 有助于更加全面控制糖敏灵的质量。 0022 本发明所述糖敏灵制剂包括 ： 片剂、 糖衣片剂、 薄膜衣片剂、 肠溶衣片剂、 胶囊剂、 硬胶囊剂、 软胶囊剂、 口含剂、 颗粒剂、 冲剂、 丸剂、 散剂、 膏剂、 丹剂、 混悬剂、 粉针剂、 注射 剂、 栓剂、 软膏剂、 硬膏剂、 霜剂、 滴剂、 贴剂、 滴丸。 因为药物活性成分相同， 所以本发明提供 的方法可以用于多种不同制剂的检测。 0023 本发明所述糖敏灵丸由下列重量份的原料制成 ： 0024 天。

13、花粉1030份， 柴胡1030份， 枳实315份， 大黄16份， 半夏112份， 黄芩315 份， 黄连 112 份， 白芍 315 份， 乌梅 520 份， 山楂 315 份。 0025 制备方法如下 ： 所述的黄芩加水提取两次， 每次1小时， 提取液加浓盐酸调pH值至 1.5 2.0， 80保温 1 小时， 抽滤， 滤饼干燥， 得黄芩提取物 ； 所述的黄连加 75% 乙醇提取 2 次每次 2 小时， 提取液减压回收乙醇， 加入浓盐酸调 pH 值至 1.0 2.0， 抽滤， 滤饼干燥， 得 黄连提取物 ； 其余 8 味药用水回流提取 2 次， 每次 1 小时， 提取液减压浓缩至 1 ： 1，。

14、 加入 95% 乙醇至含醇量 70%， 滤过， 滤液减压浓缩至稠膏加入黄连提取物与黄芩提取物， 即得糖敏灵 制剂的药物活性成分。药物活性成分与微晶纤维素按适当比例混合， 按照常规方法制备成 浓缩丸。 0026 本发明附加的方面和优点将在下面的描述中部分给出， 部分将从下面的描述中变 得明显， 或通过本发明的实践了解到。 附图说明 0027 图 1 对照品色谱图。1- 没食子酸、 2- 原儿茶素、 3- 芍药内酯苷、 4- 芍药苷、 5- 苯甲 酸。 0028 图 2 糖敏灵丸色谱图。1- 没食子酸、 2- 原儿茶素、 3- 芍药内酯苷、 4- 芍药苷、 5- 苯 甲酸。 说 明 书 CN 10。

15、3575822 A 4 3/10 页 5 0029 图 3 白芍阴性对照色谱图。1- 没食子酸、 2- 原儿茶素、 5- 苯甲酸。 具体实施方式 ： 0030 以下通过实施例进一步说明本发明， 但不作为对本发明的限制。 0031 试验例 方法学考察与样品测定 0032 对照品溶液和供试品溶液的制备 0033 （1） 对照品溶液的制备 0034 取没食子酸、 原儿茶素、 芍药内酯苷、 芍药苷和苯甲酸对照品各适量， 精密称定， 分 别制成浓度为 1.971mgmL-1， 0.310mgmL-1， 2.101mgmL-1， 3.302mgmL-1， 1.961mgmL-1 的对照品溶液。 0035 。

16、分别精密量取上述对照品溶液1.0， 0.7， 2.0， 2.5， 2.0mL置于同一10mL量瓶中， 甲 醇稀释至刻度， 制成浓度为没食子酸 197.1gmL-1， 原儿茶素 21.70gmL-1， 芍药内酯苷 420.2gmL-1， 芍药苷 826gmL-1， 苯甲酸 392.2gmL-1的混合对照品储备液。 0036 (2) 供试品溶液的制备 取糖敏灵丸 2.0g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入 水 25mL， 称重， 超声 (180W， 355%kHz) 处理 30min， 放冷至室温， 用水补足减失的重量， 摇 匀， 离心 (10000rmin-1)2min， 精密吸取上清液。

17、 2mL， 加到处理过的 ODS 小柱上 (ODS 填料 1.0g， 填装到内径为 1cm 的玻璃柱中， 先用甲醇 8mL 洗脱， 再用水 8mL 洗脱， 备用 )， 先用 8mL 水洗脱， 再用 50% 甲醇水溶液 8mL 洗脱， 收集 50% 甲醇洗脱液， 置于 10mL 量瓶中， 以 50% 甲 醇水溶液定容， 摇匀， 经 0.45m 微孔滤膜过滤， 取续滤液作为供试溶液。 0037 (3) 阴性对照溶液的制备 按糖敏灵丸处方与制备工艺， 制备不含白芍的阴性对照 缺味制剂， 按 “供试品溶液的制备” 项下方法操作， 制备阴性对照溶液。 0038 色谱条件 0039 色谱柱 ： Therm。

18、o Hypersil Gold C18(250mm4.6mm， 5m) ； 0040 流动相 ： 0.05% 磷酸水溶液 (A) 乙腈 (B)， 按如下梯度进行洗脱 ： 0041 0 20min， 8%B 相 20%B 相 ； 0042 20 38min， 20%B 相 22%B 相 ； 0043 38 45min， 22%B 相 28%B 相。 0044 流速 ： 1.0mLmin-1； 0045 检测波长 ： 010min， 220nm ； 1045min， 230nm。 0046 柱温 ： 35 ； 0047 进样量 ： 10L。 0048 在上述色谱条件下， 分别取对照品、 样品及阴性。

19、对照溶液进样分析， 结果表明， 各 成分之间分离效果良好， 阴性无干扰。 0049 系统适用性试验 0050 取供试溶液 10L 进样， 记录色谱图， 没食子酸、 原儿茶素、 芍药内酯苷、 芍药苷和 苯甲酸色谱峰的保留时间分别为4.5， 7.3， 15.1， 17.0， 25.2min。 供试、 对照与阴性对照色谱 图见图 1-3。 0051 标准曲线的绘制 0052 精密量取混合对照储备液 0.1， 0.2， 0.4， 0.6， 0.8， 1.0mL， 分别置于 10mL 量瓶 说 明 书 CN 103575822 A 5 4/10 页 6 中， 加甲醇稀释至刻度， 摇匀， 得标准系列溶液。。

20、分别精密吸取各混合对照品溶液 10L， 注入高效液相色谱仪， 记录色谱图。以对照品峰面积为纵坐标 (y)， 以对照品溶液的浓度 (gmL-1) 为横坐标 (x)， 绘制标准工作曲线， 回归方程和浓度范围如表 1 所示， 各待测成 分在浓度范围内呈良好线性关系。 0053 表 1 标准曲线与检测限 (n=6). 0054 0055 精密度试验 0056 (1) 仪器精密度试验 精密吸取同一供试溶液 10L， 重复进样 6 次， 记录色谱图， 测量峰面积， 其相对标准偏差 (RSD) 分别为 1.7， 1.7， 1.7， 1.7， 1.6%。 0057 (2) 方法重复性试验 取同一批号样品约 2。

21、.0g， 精密称定， 按 “供试品溶液的制备” 项下方法平行制备 6 份供试品溶液， 分别吸取 10L 进样分析， 记录色谱峰面积， 计算重复 性 RSD 分别为 2.9， 4.3， 3.9， 3.2， 2.1%。 0058 回收率试验 0059 取已知含量的糖敏灵丸样品 6 份， 每份 1.0g, 精密称定， 分置 25mL 量瓶中， 分别精 密加入混合对照品溶液 ( 浓度分别为没食子酸 197.1gmL-1， 原儿茶素 21.70gmL-1， 芍药内酯苷 420.2gmL-1， 芍药苷 826gmL-1， 苯甲酸 392.2gmL-1)3.0mL， 按 “供试 品溶液的制备” 方法制备供试。

22、品溶液， 在上述色谱条件下进行分析， 测得各成分含量。计算 回收率， 结果见表 2- 表 6。 0060 表 2 没食子酸回收率测定结果 (n=6) 0061 0062 表 3 原儿茶素回收率测定结果 (n=6) 0063 说 明 书 CN 103575822 A 6 5/10 页 7 0064 0065 表 4 芍药内酯苷回收率测定结果 (n=6) 0066 0067 表 5 芍药苷回收率测定结果 (n=6) 0068 0069 表 6 苯甲酸回收率测定结果 (n=6) 0070 说 明 书 CN 103575822 A 7 6/10 页 8 0071 稳定性试验 0072 取同一供试品溶液。

23、， 分别于室温放置 0， 2， 4， 8， 12h 后进样分析， 记录色谱图， 测得 峰面积 RSD 分别 1.5， 3.3， 2.5， 2.2， 1.4%， 结果表明供试品溶液室温下 12h 内稳定。 0073 方法应用 0074 按所拟订的含量测定方法， 测定了 5 批糖敏灵样品中没食子酸、 原儿茶素、 芍药内 酯苷、 芍药苷和苯甲酸的含量， 结果见表 7。 0075 表 7 样品测得结果 (mgg-1)(n=3) 0076 0077 结果与讨论 0078 (1) 色谱条件的选择 0079 分别用甲醇 - 水、 乙腈 - 水、 乙腈 - 水 - 磷酸或甲酸或乙酸作流动相时样品的分离 效果，。

24、 结果表明采用乙腈 - 水 - 磷酸流动相系统所得色谱峰峰形好、 保留时间短， 可达到理 想的分离效果。没食子酸和原儿茶素的最大吸收波长 220nm， 芍药内酯苷、 芍药苷和苯甲酸 的最大吸收波长是 230nm， 为提高各成分检测的灵敏度和准确度， 在 10min 时将检测波长由 220nm 转换至 230nm， 各成分均以最大吸收波长作为检测波长。 0080 (2) 样品提取方法的选择 0081 采用超声提取方法， 分别考察了水和不同浓度的甲醇等溶媒， 结果表明水的提取 效率最高 ； 为了除去色谱测定是大部分弱极性物质的干扰， 使用 ODS 小柱对待测成分进行 纯化、 富集， 具有良好的提取。

25、回收率。 又分别考察了上样体积、 洗脱溶剂比例和体积， 确定了 最佳提取方法。 0082 实施例 1 ： 0083 对照品溶液和供试品溶液的制备 0084 对照品溶液的制备 0085 取没食子酸、 原儿茶素、 芍药内酯苷、 芍药苷和苯甲酸对照品各适量， 精密称定， 分 别制成浓度为 1.971mgmL-1， 0.310mgmL-1， 2.101mgmL-1， 3.302mgmL-1， 1.961mgmL-1 说 明 书 CN 103575822 A 8 7/10 页 9 的对照品溶液。 0086 分别精密量取上述对照品溶液 1.0， 0.7， 2.0， 2.5， 2.0mL 置于同一 10mL。

26、 量瓶中， 甲醇稀释至刻度， 制成浓度为没食子酸 197.1gmL-1， 原儿茶素 21.70gmL-1， 芍药 内酯苷 420.2gmL-1， 芍药苷 826gmL-1， 苯甲酸 392.2gmL-1的混合对照品储备 液。供试品溶液的制备 取糖敏灵丸 2.0g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入水 25mL， 称重， 超声 (180W， 355%kHz) 处理 30min， 放冷至室温， 用水补足减失的重量， 摇匀， 离心 (10000r min-1)2min， 精密吸取上清液 2mL， 加到处理过的 ODS 小柱上 (ODS 填料 1.0g， 填装 到内径为1cm的玻璃柱中， 先用甲。

27、醇8mL洗脱， 再用水8mL洗脱， 备用)， 先用8mL水洗脱， 再 用 50% 甲醇水溶液 8mL 洗脱， 收集 50% 甲醇洗脱液， 置于 10mL 量瓶中， 以 50% 甲醇水溶液定 容， 摇匀， 经 0.45m 微孔滤膜过滤， 取续滤液作为供试溶液。 0087 色谱条件 0088 色谱柱 ： Thermo Hypersil Gold C18(250mm4.6mm， 5m) ； 0089 流动相 ： 0.05% 磷酸水溶液 (A) 乙腈 (B)， 按如下梯度进行洗脱 ： 0090 0 20min， 8%B 相 20%B 相 ； 0091 20 38min， 20%B 相 22%B 相 ；。

28、 0092 38 45min， 22%B 相 28%B 相。 0093 流速 ： 1.0mLmin-1； 0094 检测波长 ： 010min， 220nm ； 1045min， 230nm。 0095 柱温 ： 35 ； 0096 进样量 ： 10L。 0097 在上述色谱条件下， 分别取对照品、 供试品溶液进样分析， 经过计算， 检测出的糖 敏灵制剂中的化学成分为没食子酸、 原儿茶素、 芍药内酯苷、 芍药苷和苯甲酸。它们的含量 分别为 2.034mgg-1、 8.43210-2mgg-1、 1.765mgg-1、 2.340mgg-1、 1.022mgg-1。 0098 实施例 2 ： 0。

29、099 对照品溶液和供试品溶液的制备 0100 对照品溶液的制备 0101 同实施例 1。 0102 供试品溶液的制备 取糖敏灵丸 2.0g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入 10% 甲醇水溶液25mL， 称重， 超声(功率250W， 频率33kHz)处理30min， 放冷至室温， 用10%甲醇 水溶液补足减失的重量， 摇匀， 离心 (10000r min-1)2min， 精密吸取上清液 2mL， 加到处理过 的 ODS 小柱上 (ODS 填料 1.0g， 填装到内径为 1cm 的玻璃柱中， 先用甲醇 8mL 洗脱， 再用水 8mL 洗脱， 备用 )， 先用 10% 甲醇水溶液 8mL。

30、 洗脱， 再用 50% 甲醇水溶液 8mL 洗脱， 收集 50% 甲醇洗脱液， 置于 10mL 量瓶中， 以 50% 甲醇水溶液定容， 摇匀， 经 0.45m 微孔滤膜过滤， 取 续滤液作为供试溶液。 0103 色谱条件 0104 色谱柱 ： Phenomenex Synergi C18(250mm4.6mm， 5m) ； 0105 流动相 ： 0.01% 磷酸水溶液 (A) 乙腈 (B)， 按如下梯度进行洗脱 ： 0106 0 20min， 8%B 相 20%B 相 ； 0107 20 38min， 20%B 相 22%B 相 ； 说 明 书 CN 103575822 A 9 8/10 页 。

31、10 0108 38 45min， 22%B 相 28%B 相。 0109 流速 ： 0.8mLmin-1； 0110 检测波长 ： 210nm。 0111 柱温 ： 30 ； 0112 进样量 ： 10L。 0113 在上述色谱条件下， 分别取对照品、 供试品溶液进样分析， 经过计算， 检测出的糖 敏灵制剂中的化学成分为没食子酸、 原儿茶素、 芍药内酯苷、 芍药苷和苯甲酸。它们的含量 分别为 0.7428mgg-1、 3.89610-2mgg-1、 1.695mgg-1、 3.040mgg-1、 0.8622mgg-1。 0114 实施例 3 ： 0115 对照品溶液和供试品溶液的制备 01。

32、16 对照品溶液的制备 0117 同实施例 1。 0118 供试品溶液的制备取糖敏灵丸 2.0g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入水 25mL， 称重， 超声 ( 功率 350W， 频率 50kHz) 处理 30min， 放冷至室温， 用水补足减失的重量， 摇匀， 离心 (10000r min-1)2min， 精密吸取上清液 1mL， 加到处理过的 ODS 小柱上 (ODS 填料 1.0g， 填装到内径为 1cm 的玻璃柱中， 先用甲醇 8mL 洗脱， 再用水 8mL 洗脱， 备用 )， 先用 4mL 水洗脱， 再用 50% 甲醇水溶液 4mL 洗脱， 收集 50% 甲醇洗脱液， 置于。

33、 10mL 量瓶中， 以 50% 甲 醇水溶液定容， 摇匀， 经 0.45m 微孔滤膜过滤， 取续滤液作为供试溶液。 0119 色谱条件 0120 色谱柱 ： Agilent Zorbax SBC18柱 (250mm4.6mm， 5m) ； 0121 流动相 ： 0.1% 磷酸水溶液 (A) 甲醇 (B)， 按如下梯度进行洗脱 ： 0122 0 20min， 8%B 相 20%B 相 ； 0123 20 38min， 20%B 相 22%B 相 ； 0124 38 45min， 22%B 相 28%B 相。 0125 流速 ： 1.2mLmin-1； 0126 检测波长 ： 220nm。 01。

34、27 柱温 ： 40 ； 0128 进样量 ： 10L。 0129 在上述色谱条件下， 分别取对照品、 供试品溶液进样分析， 经过计算， 检测出的糖 敏灵制剂中的化学成分为没食子酸、 原儿茶素、 芍药内酯苷、 芍药苷和苯甲酸。它们的含量 分别为 0.7035mgg-1、 3.84010-2mgg-1、 1.095mgg-1、 2.140mgg-1、 0.5322mgg-1。 0130 实施例 4 ： 0131 对照品溶液和供试品溶液的制备 0132 对照品溶液的制备 0133 同实施例 1。 0134 供试品溶液的制备 取糖敏灵丸 2.0g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入 5% 甲 。

35、醇水溶液 25mL， 称重， 超声 ( 功率 240W， 频率 50kHz) 处理 30min， 放冷至室温， 用 5% 甲醇水 溶液补足减失的重量， 摇匀， 离心 (10000r min-1)2min， 精密吸取上清液 1mL， 加到处理过的 ODS 小柱上 (ODS 填料 1.0g， 填装到内径为 1cm 的玻璃柱中， 先用甲醇 8mL 洗脱， 再用水 8mL 说 明 书 CN 103575822 A 10 9/10 页 11 洗脱， 备用 )， 先用 5% 甲醇水溶液 8mL 水洗脱， 再用 60% 甲醇水溶液 8mL 洗脱， 收集 60% 甲醇 洗脱液， 置于 10mL 量瓶中， 以 。

36、60% 甲醇水溶液定容， 摇匀， 经 0.45m 微孔滤膜过滤， 取续滤 液作为供试溶液。 0135 色谱条件 0136 色谱柱 ： Thermo Hypersil Gold C18(250mm4.6mm， 5m) ； 0137 流动相 ： 0.05% 甲酸水溶液 (A)- 乙腈 (B)， 按如下梯度进行洗脱 ： 0138 0 20min， 8%B 相 20%B 相 ； 0139 20 38min， 20%B 相 22%B 相 ； 0140 38 45min， 22%B 相 28%B 相。 0141 流速 ： 1.0mLmin-1； 0142 检测波长 ： 010min， 220nm ； 10。

37、45min， 230nm。 0143 柱温 ： 30 ； 0144 进样量 ： 10L。 0145 在上述色谱条件下， 分别取对照品、 供试品溶液进样分析， 经过计算， 检测出的糖 敏灵制剂中的化学成分为没食子酸、 原儿茶素、 芍药内酯苷、 芍药苷和苯甲酸。它们的含量 分别为 0.8696mgg-1、 5.43010-2mgg-1、 1.535mgg-1、 3.150mgg-1、 0.8210mgg-1。 0146 实施例 5 ： 0147 对照品溶液和供试品溶液的制备 0148 对照品溶液的制备 0149 同实施例 1。 0150 供试品溶液的制备取糖敏灵丸 2.0g， 精密称定， 置具塞锥。

38、形瓶中， 精密加入水 100mL， 称重， 超声 (180W， 355%kHz) 处理 30min， 放冷至室温， 用水补足减失的重量， 摇匀， 经 0.45m 微孔滤膜过滤， 取续滤液作为供试溶液。 0151 色谱条件 0152 色谱柱 ： Thermo Hypersil Gold C18(250mm4.6mm， 5m) ； 0153 流动相 ： 0.05% 磷酸水溶液 (A)- 乙腈 (B)， 按如下梯度进行洗脱 ： 0154 0 20min， 8%B 相 20%B 相 ； 0155 20 38min， 20%B 相 22%B 相 ； 0156 38 45min， 22%B 相 30%B 。

39、相 ； 0157 4555min， 30%B 相 50%B 相 ； 0158 5560min， 50%B 相 65%B 相。 0159 流速 ： 1.0mLmin-1； 0160 检测波长 ： 010min， 220nm ； 1045min， 230nm。 0161 柱温 ： 35 ： 0162 进样量 ： 10L。 0163 在上述色谱条件下， 分别取对照品、 供试品溶液进样分析， 经过计算， 检测出的糖 敏灵制剂中的化学成分为没食子酸、 原儿茶素、 芍药内酯苷、 芍药苷和苯甲酸。它们的含量 分别为 0.6236mgg-1、 3.25010-2mgg-1、 1.405mgg-1、 2.133。

40、mgg-1、 0.5040mgg-1。 0164 实施例 6 ： 说 明 书 CN 103575822 A 11 10/10 页 12 0165 对照品溶液和供试品溶液的制备 0166 对照品溶液的制备 0167 同实施例 1。 0168 供试品溶液的制备取糖敏灵丸 2.0g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入甲醇 100mL， 称重， 超声 (180W， 355%kHz) 处理 30min， 放冷至室温， 用甲醇补足减失的重量， 摇 匀， 离心 (10000rmin-1)2min， 经 0.45m 微孔滤膜过滤， 取续滤液作为供试溶液。 0169 色谱条件 0170 色谱柱 ： The。

41、rmo Hypersil Gold C18(250mm4.6mm， 5m) ； 0171 流动相 ： 0.05% 磷酸水溶液 (A) 乙腈 (B)， 按如下梯度进行洗脱 ： 0172 0 20min， 8%B 相 20%B 相 ； 0173 20 38min， 20%B 相 22%B 相 ； 0174 38 45min， 22%B 相 30%B 相 ； 0175 4555min， 30%B 相 50%B 相 ； 0176 5560min， 50%B 相 65%B 相 ； 0177 6075min， 65%B 相 75%B 相。 0178 流速 ： 1.0mLmin-1； 0179 检测波长 ：。

42、 010min， 220nm ； 1045min， 230nm。 0180 柱温 ： 35 ； 0181 进样量 ： 10L。 0182 在上述色谱条件下， 分别取对照品、 供试品溶液进样分析， 经过计算， 检测出的糖 敏灵制剂中的化学成分为没食子酸、 原儿茶素、 芍药内酯苷、 芍药苷和苯甲酸。它们的含量 分别为 0.6237mgg-1、 5.20210-2mgg-1、 1.042mgg-1、 1.553mgg-1、 0.6228mgg-1。 说 明 书 CN 103575822 A 12 1/2 页 13 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103575822 A 13 2/2 页 14 图 3 说 明 书 附 图 CN 103575822 A 14 。