一种从荷叶中同步提取槲皮素和荷叶碱的方法.pdf

本发明公开了一种从荷叶中同步提取槲皮素和荷叶碱的方法，本发明先用碱水提取荷叶黄酮r后再用高纯熟度甲醇在碱性环境中提取荷叶生物碱，既达到交黄酮和生物碱初步分离的目的，也达到资源的充分利用；碱提液几乎不损耗生物碱，但醇提液中尚可提取部分未提尽的黄酮，醇提液回收醇浓缩后用酸溶解生物碱，黄酮类物不溶于酸，经过滤再将生物碱和黄酮类物质分离，滤渣为含量黄酮类物质，回收利用，滤液酸水经碱化得生物碱沉淀。碱提取液经酸沉后过滤得黄酮粗品与醇提部分的酸不溶物（黄酮类)合并处理，以提取槲皮素。将醇提部分的碱化碱水和碱提部分的上清液合并上大孔吸附树脂柱，用D101树脂吸附，回收废液中残留的部分生物碱和黄酮类，以提高收率，降低成本。

权利要求书
1.  一种从荷叶中同步提取槲皮素和荷叶碱的方法，其特征在于：由于荷叶碱不溶于水，类似生物碱也难溶于碱水，而荷叶黄酮溶于热水,易溶于碱水;本发明先用碱水提取荷叶黄酮r后再用高纯熟度甲醇在碱性环境中提取荷叶生物碱，既达到交黄酮和生物碱初步分离的目的，也达到资源的充分利用；碱提液几乎没有生物碱，醇提液中尚有部分黄酮，醇提液回收醇浓缩后用酸溶解生物碱，黄酮类物不溶于酸，经过滤除去生物碱中的黄酮类物质，酸水碱化得生物碱沉淀，碱提取液经酸沉后过滤得黄酮粗品与醇提部分的酸不溶物（黄酮类)合并处理，将醇提部分的碱化碱水和碱提部分的上清液合并上柱，用D101树脂吸附，回收废液中残留的部分生物碱和黄酮类，以提高收率，降低成本。

2.  根据权利要求权1所述的提取方法，其特征在于：将荷叶粉末加0.1～5%（优选0.5～1%）的氢氧化钠溶液，料液比为1：10～20（优选1：10～15），升温60～70℃提取0.5～1小时，过滤得碱提取液，滤液用盐酸调PH至1～3（优选1～1.5），静置沉降过夜，分离上清液，下层沉淀物用板框压滤，滤饼A待处理（A为总黄酮粗品），滤液与上清液合并（含量有部分黄酮和生物碱），用碱调PH到12～13上大孔吸附树脂柱柱（D101大孔吸附树脂柱）。

3.  根据权利要求权1所述的提取方法，其特征在于：上述2项碱提后的荷叶渣压干后加入90%甲醇提取荷叶生物碱，料液比为1:6~12(优选1：8），提取2次，温度70℃左右，提取时间1～1.5小时，提取完毕，过滤得甲醇提取液，合并提取液，减压回收醇至无醇，得浓缩浸膏B，将B用2%的盐酸溶解，过滤除去酸不溶物（为粗黄酮回收利用），滤液碱化，有大量沉淀产生，静置析晶沉降后，过滤得滤渣C（生物碱）待后步处理，滤液碱水与2项碱水合并上大孔吸附树脂柱（D101大孔吸附树脂柱）。

4.  碱水上柱完毕，吸附树脂饱和后，用净水漂洗树脂至无色，流出液PH呈中性，再用85%以上的甲醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，减压浓缩，得洗脱液浸膏D（含生物碱和黄酮）。

5.  合并滤渣C和浸膏D，用2%的盐酸溶解，过300目滤布，滤渣（黄酮)回收利用，滤液用碱调PH至8～9，用氯仿萃取3-4次，收集合并氯仿萃取液，加热回收氯仿至干，残渣用热乙醇溶解，冷却析晶，抽滤得荷叶碱粗晶，再用乙醇重结晶可得高纯度的荷叶碱精品。

6.  将滤饼A与3项和5项的酸溶过滤渣合并，用1～10%（优选1～2%）的硫酸溶解，加热水解40～60min，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，冷却后过滤沉淀，滤饼用少量的水洗酸，洗净后抽干，得槲皮素粗品，再用乙醇重结晶可制高纯度的槲皮素精品。

说明书一种从荷叶中同步提取槲皮素和荷叶碱的方法
技术领域
植物提取生物技术。 
背景技术
荷叶为睡莲科植物莲NelumbonuciferaGaertn 的叶，又名莲叶，藕叶，在我国南北方均有种植，民间广泛用于食物及药物中。因其使用价值较大且来源广泛，近来人们加大对其活性化学成分和药理方面的研究，进一步明确其所含化学成分（如黄酮、生物总碱等）与药效之间的关系。荷叶中含有以槲皮素（Quercetin）为主要成分的黄酮类物质, 且含量非常丰富。荷叶生物碱的发现始于19 世纪初, 是研究最早也是最多的一类天然有机化合物, 自日本学者福田真雄等从荷叶中分离出荷叶碱( Nuc ifer ine), 莲碱( Roem e rine) 及O- 去甲基荷叶碱( O- Nornuc ifer ine) 3个单体成分以来, 至今已从叶中分离出16个生物碱化合物。槲皮素具有较好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用。此外还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉，增加冠脉血流量等作用。用于治疗慢性支气管炎。对冠心病及高血压患者也有辅助治疗作用。抗肿瘤作用与抗血小板聚集：槲皮素能显著抑制促癌剂的作用、抑制离体恶性细胞的生长、抑制艾氏腹水癌细胞DNA、RNA和蛋白质合成。荷叶的生物碱具有强烈的抗有丝分裂的作用"从而具有较强的抑菌功能。荷叶提取物可加强胰岛素的作用并抑制血糖的吸收，这可能与荷叶中含较丰富的黄酮类化合物有关。荷叶具有较好的减肥降脂功能和抗氧化清除自由基作用。这些研究成果将为荷叶在食品、药品中的应用提供科学依据。荷叶为天然药食两用植物，荷叶中含有丰富的黄酮和生物碱等生物活性因子，其 “三降”和减肥等功效近年来倍受关注。市场上推出了名目繁多有关荷叶的保健食品和茶饮料，这些产品大多为复方制剂，或荷叶粗提物，产品质量参差不齐，活性有效成分无数据可控。 
目前，研究提取荷叶中的黄酮和生物碱的文献报道较多，但大都处于试验室阶段，至今为止，荷叶中黄酮和生物碱的提取还没有工业化生产，其技术仍处于研究探索阶段。 
本发明的目的在于提供一种从荷叶中同步提取槲皮素和荷叶碱的方法，该方法不仅可以运用于大规模工业生产，而且分离精制出高纯度的槲皮素和荷叶碱，以达到药用标准。 
发明内容
本发明的技术方案是：一种从荷叶中同步提取槲 皮素和荷叶碱的方法，其特征在于：包括以下步骤， 
1.将新鲜荷叶清洗、风干，粉碎，过20目，得荷叶粉末；
2.将荷叶粉末加0.5%的氢氧化钠溶液，料液比为1：15，升温60～70℃提取0.5～1小时，过滤得碱提取液，滤液用盐酸调PH至1～1.5，静置沉降过夜。
3.分离上清液，下层沉淀物用板框压滤，滤饼A待处理（A为总黄酮粗品），滤液与上清液合并（含量有部分生物碱），用碱调PH到12～13上柱（D101大孔吸附树脂柱）。 
4.上述2项荷叶渣压干后加入90%甲醇提取荷叶生物碱，料液比为1：8，提取2次，温度70℃左右，提取时间1～1.5小时，提取完毕，过滤得甲醇提取液，合并提取液，减压回收醇至无醇，得浓缩浸膏B。 
5.将B用2%的盐酸溶解，过滤除去酸不溶物，滤液碱化，有大量沉淀产生，静置析晶沉降后，过滤得滤渣C（生物碱）待后步处理。滤液与3项碱水合并上柱（D101大孔吸附树脂柱）。 
6.碱水上柱完毕，吸附树脂饱和后，用净水漂洗树脂至无色，流出液PH呈中性。再用85%以上的甲醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，减压浓缩，得洗脱液浸膏D。 
7.合并滤渣C和浸膏D，用2%的盐酸溶解，过300目滤布，滤液用碱调PH至8～9，用氯仿萃取3-4次，收集合并氯仿萃取液，加热回收氯仿至干，残渣用热乙醇溶解，冷却析晶，抽滤得荷叶碱粗晶。再用乙醇重结晶可得高纯度的荷叶碱精品。 
8.将滤饼A用2%的硫酸溶解，加热水解40～60min，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，冷却后过滤沉淀，滤饼用少量的水洗酸，洗净后抽干，得槲皮素粗品，再用乙醇重结晶可制高纯度的槲皮素精品。 
  
实施例1.    取粉碎成20目左右的干燥荷叶粉末5kg，加0.5%的氢氧化钠水溶液75L,升温至70℃加热40min，过滤得滤液，滤液用盐酸调PH值至1.5～2，静置沉降过夜，药渣压干后加90%的甲醇40L加热至70℃提取1小时，过滤后等同条件提取第二遍，合并两遍的醇提取液，减压回收甲醇，浓缩得醇提浸膏B，将B用2%的盐酸溶解，过滤（300目）除去不溶物，滤液用碱碱化（调PH11-12），析出沉淀，过滤沉淀得滤渣C，滤液上柱（D101大孔吸附树脂柱）。将上述沉降过夜的下层沉淀过板框压滤，得滤饼A（总黄酮粗品276G）待处理。滤液与上清液合并，用碱调PH值至8-9上D101大孔吸附树脂柱，进行吸附。树脂吸附饱和后用清水漂洗树脂干净，再用90%甲醇洗脱，收集洗脱液，回收甲醇，浓缩成稠浸膏D。合并C、D，用2%的盐酸溶解，过滤除去酸不溶物，溶液用碱调PH8-9，用氯仿萃取3-4次，合并氯仿萃取液，回收氯仿至干，残余膏用乙醇加热溶解，置冷析晶，抽滤得荷叶碱粗晶22G，HPLC检测纯度约为83.5%，用乙醇重结晶两次，得精品18G，提取得率0.38%，总收率75%，HPLC检测纯度约为95.6%。  取滤饼A276G用2%的硫酸5L溶解，加热水解45min,冷却，抽滤，滤饼用水洗酸后抽干，得槲皮素粗品62g,  HPLC检测纯度约为75.2%，用乙醇多次重结晶，得制得纯度95%的槲皮素精品。   
实施例2.   取粉碎成20目左右的干燥荷叶粉末50kg，加0.5%的氢氧化钠水溶液800L,升温至70℃加热60min，过滤得滤液，滤液用盐酸调PH值至1.5～2，静置沉降过夜，药渣压干后加90%的甲醇400L加热至70℃回流提取1小时，过滤后等同条件提取第二遍，合并两遍的醇提取液，减压回收甲醇，浓缩得醇提浸膏B，将B用2%的硫酸溶解，过滤（300目）除去不溶物，滤液用碱碱化（调PH11-12），析出沉淀，过滤沉淀得滤渣C，滤液上柱（D101大孔吸附树脂柱）。将上述沉降过夜的下层沉淀过板框压滤，得滤饼A（总黄酮粗品2870G）待处理。滤液与上清液合并，用碱调PH值至8-9上D101大孔吸附树脂柱，进行吸附。树脂吸附饱和后用清水漂洗树脂干净，再用90%甲醇洗脱，收集洗脱液，回收甲醇，浓缩成稠浸膏D。合并C、D，用2%的硫酸溶解，过滤除去酸不溶物，溶液用碱调PH8-9，用二氯甲烷萃取3-4次，合并氯仿萃取液，回收溶剂至干，残余膏用乙醇加热溶解，置冷析晶，抽滤得荷叶碱粗晶235G，HPLC检测纯度约为81.5%，用乙醇重结晶两次，得精品210G，提取得率0.42%，总收率82%，HPLC检测纯度约为93.6%。  取滤饼A276G用2%的硫酸50L溶解，加热水解45min,冷却，抽滤，滤饼用水洗酸后抽干，得槲皮素粗品590g,  HPLC检测纯度约为78.2%。
             
实施例3.   取粉碎成20目左右的干燥荷叶粉末10kg，加1%的氢氧化钠水溶液150L,升温至70℃加热60min，过滤得滤液，滤液用盐酸调PH值至1.5～2，静置沉降过夜，药渣压干后加85%的甲醇85L加热至70℃回流提取1.5小时，过滤后等同条件提取第二遍，合并两遍的醇提取液，减压回收甲醇，浓缩得醇提浸膏B，将B用1%的硫酸溶解，过滤（300目）除去不溶物，滤液用碱碱化（调PH11-12），析出沉淀，过滤沉淀得滤渣C，滤液上柱（D101大孔吸附树脂柱）。将上述沉降过夜的下层沉淀过板框压滤，得滤饼A（总黄酮粗品560G）待处理。滤液与上清液合并，用碱调PH值至8-9上D101大孔吸附树脂柱，进行吸附。树脂吸附饱和后用清水漂洗树脂干净，再用90%甲醇洗脱，收集洗脱液，回收甲醇，浓缩成稠浸膏D。合并C、D，用2%的硫酸溶解，过滤除去酸不溶物，溶液用碱调PH8-9，用二氯甲烷萃取3-4次，合并氯仿萃取液，回收溶剂至干，残余膏用乙醇加热溶解，置冷析晶，抽滤得荷叶碱粗晶46G，HPLC检测纯度约为85.5%，用乙醇重结晶两次，得精品39G，提取得率0.39%，总收率76.6%，HPLC检测纯度约为97.1%。  取滤饼A560G用2%的硫酸10L溶解，加热水解60min,冷却，抽滤，滤饼用水洗酸后抽干，得槲皮素粗品130g,  HPLC检测纯度约为88.2%。   
实施例4.   取粉碎成20目左右的干燥荷叶粉末500kg，加0.5%的氢氧化钠水溶液8000L,升温至75℃加热60min，过滤得滤液，滤液用盐酸调PH值至1.5～2，静置沉降过夜，药渣压干后加90%的甲醇4000L加热至70℃回流提取1小时，过滤后等同条件提取第二遍，合并两遍的醇提取液，减压回收甲醇，浓缩得醇提浸膏B，将B用2%的硫酸溶解，过滤（300目）除去不溶物，滤液用碱碱化（调PH11-12），析出沉淀，过滤沉淀得滤渣C，滤液上柱（D101大孔吸附树脂柱）。将上述沉降过夜的下层沉淀过板框压滤，得滤饼A（总黄酮粗品29.6KG）待处理。滤液与上清液合并，用碱调PH值至8-9上D101大孔吸附树脂柱，进行吸附。树脂吸附饱和后用清水漂洗树脂干净，再用90%甲醇洗脱，收集洗脱液，回收甲醇，浓缩成稠浸膏D。合并C、D，用2%的硫酸溶解，过滤除去酸不溶物，溶液用碱调PH8-9，用氯仿萃取3-4次，合并氯仿萃取液，回收氯仿至干，残余膏用乙醇加热溶解，置冷析晶，抽滤得荷叶碱粗晶2.12G，HPLC检测纯度约为84.5%，用乙醇重结晶两次，得精品2.27KG，提取得率0.44%，总收率87%，HPLC检测纯度约为97.6%。  取滤饼A29.6KG用2%的硫酸50L溶解，加热水解45min,冷却，抽滤，滤饼用水洗酸后抽干，得槲皮素粗品6.7g,  HPLC检测纯度约为88.2%。
附图1 工艺流程图  。