新型化合物(变体)以及其对于治疗肿瘤疾病的应用技术领域
本发明涉及有机化学、药学和医学并且涉及使用在治疗显著的激酶，具体地，ALK-
激酶及其突变体的抑制中具有提高的效力以及提高的选择性和生物可用性的新型化合物
家族对肿瘤疾病、慢性炎症疾病及其它疾病的疗法。
背景技术
蛋白激酶代表参与关键细胞过程调控的重要的蛋白质家族，其活性的破坏可以导
致肿瘤疾病、慢性炎性疾病、中枢神经系统疾病等。到目前为止，其治疗意义具有临床前或
临床验证的激酶列表包括：ABL1、ALK、AKT、AKT2、AURKA、BRAF、BCR-ABL、BLK、BRK、C-KIT、C-
MET、C-SRC、CAMK2B、CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、CRAF1、CHEK1、
CHEK2、CLK1、CLK3、CSF1R、CSK、CSNK1G2、CSNK1G3、CSNK2A1、DAPK1、DAPK2、DAPK3、EGFR、
EPHA2、EPHA3、EPHA5、ERBB2、ERBB3、ERBB4、ERK、ERK2、ERK3、FES、FGFR1、FGFR2、FGFR3、
FGFR4、FGFR5、FGR、FLT-1、FYN、GSK3B、HCK、IGF1R、INSR、ITK、JAK1、JAK2、JAK3、JNK1、JNK2、
JNK3、KIT、LCK、LOK、MAP3K5、MAPKAPK2、MARK1、MEK1、MEK2、MET、MKNK2、MST1、NEK2、P38α、P38
δ、P38γ、PAK1、PAK4、PAK6、PAK7、PDPK1、PDGFR、PIK3CG、PIM1、PIM2、PKC、PLK1、PLK4、PRKCQ、
PRKR、PTK2、PTK2B、RET、ROCK1、ROS1、RPS6KA1、SLK、SRC、SRPK1、STK16、SYK、TAK1、TGFBR1、
TIE、TIE2、TNK2、TRK、VEGFR2、WEE1、ZAP70(Karaman,M.W.等人,NatBiotechnol,2008,26,
127-32；Bhagwat,S.S.,PurinergicSignal,2009,5,107-15)。随着新实验数据的出现，该
列表不断增加。
用于治疗与蛋白激酶的异常活性有关的疾病的有希望的方法包括小分子化合物
对它们活性抑制的应用。批准在临床实践中使用的这些抑制剂的实例是：伊马替尼、尼罗替
尼、达沙替尼、舒尼替尼、索拉非尼、拉帕替尼、吉非替尼、厄洛替尼、克唑替尼
(Crizotinib)。当前，大量药物候选激酶抑制剂处于临床试验和临床前开发阶段。
间变性淋巴瘤激酶ALK-是属于胰岛素受体家族的跨膜受体酪氨酸激酶。ALK激酶
在新生儿脑中最强烈地表达，表明了ALK在脑发育中的可能作用(Duyster,J.等人,
Oncogene,2001,20,5623-37)。
间变性淋巴瘤激酶的异常活性是多种肿瘤疾病的病因。例如，3-6％的非小细胞肺
癌(NSCLC)的病因是染色体易位激活了由EML4蛋白和ALK胞内域组成的嵌合蛋白的形成
(Pao,W.等人,LancetOncol,2011,12,175-80；Shaw,A.T.等人,ClinCancerRes,2011,
17,2081-6)。其它染色体易位导致形成了NPM-ALK嵌合蛋白，并导致了约60％的间变性大细
胞淋巴瘤(ALCL)病例(Kutok,J.L.等人,JClinOncol,2002,20,3691-702)。对NSCLC来说
的EML4-ALK或对ALCL来说的NPM-ALK的嵌合蛋白的组成型酪氨酸激酶活性导致负责细胞分
裂的下游信号通路的激活并保护不发生细胞凋亡，并且最终导致细胞瘤性转化(Falini,B.
等人,Blood,1999,94,3509-15；Morris,S.W.等人,BrJHaematol,2001,113,275-95；Bai,
R.Y.等人,Blood,2000,96,4319-27)。ALK-阳性癌是致癌基因依赖性的：使用ALK抑制剂阻
断酶活性导致癌细胞的细胞周期阻滞和细胞凋亡(Christensen,J.G.等人,MolCancer
Ther,2007,6,3314-22)。
ALK抑制是抵抗非小细胞肺癌、间变性大细胞淋巴瘤及其它肿瘤疾病(其病因在于
ALK的组成型活性)的ALK阳性形式的有希望的策略。晚期NSCLC患者中ALK抑制剂克唑替尼
的临床试验显示患者预期寿命增加9个月并且(DiMaio,M.等人,JClinOncol,2009,27,
1836-43)甚至多达2年(Kwak,E.L.等人,NEnglJMed,2010,363,1693-703)。到目前为止，
存在多种已知的ALK抑制剂，包括吲唑异喹啉(WO2005/009389)、噻唑和噁唑酰胺(WO
2005/097765)、吡咯并嘧啶(WO2005/080393)、嘧啶二胺(WO2005/016894)、氨基吡啶和氨
基吡嗪(WO2004/076412；WO2007/066187)、吡啶并吡嗪(WO2007/130468)。
ALK的小分子抑制剂在治疗实践中的使用显示它们效率的一些严重问题。首先，该
问题与抑制剂对ALK突变形式的低活性有关，其可以最终出现在患者中。例如，已知作为非
小细胞肺癌靶标的EML4-ALK基因产物的激酶域对确定对克唑替尼耐受的突变的出现敏感
(突变L1196M、C1156Y、G1269A和F1174L)(Choi,Y.L.等人,NEnglJMed,2010,363,1734-
9；Sasaki,T.等人,CancerRes,2010,70,10038-43)。这些突变的频率达到30％(Doebele,
R.C.等人,ClinCancerRes,2012)。第二，患者预期寿命的提高促进了脑转移形成的可能
性：平均来说，在50％治疗2年的患者中发生转移(Shaw,A.T.等人,LancetOncol,2011,12,
1004-12)。实际上，克唑替尼不会穿过血脑屏障并因此不影响脑转移，尽管相同患者肺部的
原发瘤可能持续恶化(Costa,D.B.等人,JClinOncol,2011,29,e443-5)。因此，能够抑制
激酶突变形式并且能够穿过血脑屏障的新化合物的开发是实际上极其重要的任务。
本发明涉及在蛋白激酶(proteinkinase)以及它们的突变体的抑制中具有提高
的效力并且对肿瘤疾病、慢性炎性疾病以及其它疾病的治疗中的使用有希望的新的化合物
家族。
发明内容
本发明的任务(技术成果)是由于新型化合物穿透血脑屏障的能力，将提供在蛋白
激酶，具体地，ALK-激酶及其突变体形式的抑制中具有提高的效力以及提高的选择性和生
物可用性并且对于在肿瘤疾病、慢性炎症疾病及其它疾病，具体地，中枢神经系统肿瘤的治
疗中使用有希望的新型化合物。
1.本发明化合物的概述
1.1.本发明涉及通式I的化合物，
它们的互变异构体(互变体)、异构体或对映异构体(对映体)或者它们的药用盐、
溶剂化物或水合物，其中：
LA表示CH2或CH(CH3)；
LB表示共价化学键(covalentchemicalbond)、OC0-3-烷基、SC0-3-烷基、NHC(O)
C0-3-烷基、C(O)NHC0-3-烷基、C(O)C0-3-烷基、NHC0-3-烷基、CH2O、CH2S、CH2C(O)NH或CH2NH；
环A表示苯基或含有0-3个N原子和0-1个O或S原子的5-6元杂芳基，并且可选地被
1-4个RA基团取代，
RA独立地选自并且表示卤素、部分或完全卤化的C1-5-烷基、C2-5-烯基、C2-5-炔基、
(CH2)mO(CH2)nH、(CH2)mNH(CH2)nH、(CH2)mC(O)O(CH2)nH、(CH2)mOC(O)(CH2)nH、(CH2)mC(O)NH
(CH2)nH、(CH2)mNHC(O)(CH2)nH、CN、P(O)(RF)2、P(O)2(RF)、P(O)2OH、SRE、S(O)RE、S(O)2RE或S
(O)2OH；
环B表示苯基、C3-8环烷基、含有0-3个N原子和0-1个O或S原子的4-8元饱和或部分
饱和的杂环；或含有0-3个N原子和0-1个O或S原子的5-6元杂芳基环；环B可选地包含1-5个
RB的取代基；
RB独立地选自并且表示卤素、LC-RC、LC-H、部分或完全卤化的C1-5-烷基、C2-5-烯基、
C2-5-炔基或CN；可替换地，两个相邻的RB基团与它们所连接的原子一起可以形成含有0-3个
选自N、O、S、S(O)、S(O)2的杂原子的5-、6-或7-元饱和、部分饱和或不饱和的环，并且RC或RD
可选地被1-4个取代基取代；
LC表示共价化学键、C1-3-烷基、(CH2)mO(CH2)n、(CH2)mNH(CH2)n、(CH2)mC(O)(CH2)n、
(CH2)mC(O)O(CH2)n、(CH2)mOC(O)(CH2)n、(CH2)mC(O)NH(CH2)n或(CH2)mNHC(O)(CH2)n；
RC独立地选自并且表示苯基，C1-6-烷基，C3-7环烷基或含有0-3个N原子、0-2个O原
子和0-2个S原子的3-7元杂脂环基(heteroalicyclyl)；RC可选地含有RD或CH2RD的1-5个取
代基；
RD独立地选自并且表示卤素，(CH2)mCH3，(CH2)mO(CH2)nH，(CH2)mC(O)NH(CH2)nH，
(CH2)mC(O)(CH2)nH，(CH2)mNH2，NHRF，N(RF)2或含有0-3个N原子、0-2个O原子、0-2个S原子的
3-7元杂脂环基，并且RF可选地含有1-3个取代基；
RE独立地选择并且表示C1-3-烷基、NHC1-3-烷基或N(C1-3-烷基)2；
RF独立地选择并且表示C1-3-烷基；
m和n独立地选自0、1、2、3；
2.本发明实施的特征种类
所关心化合物单独的亚类包括式I的化合物，其中：
LA表示CH2或CH(CH3)；
LB表示共价化学键、OC0-3-烷基、SC0-3-烷基、NHC(O)C0-3-烷基、C(O)NHC0-3-烷基、C
(O)C0-3-烷基、NHC0-3-烷基、CH2O、CH2S、CH2C(O)NH或CH2NH；
环A表示苯基，其可选地被1-3个RA基团取代；
RA表示卤素、部分或完全卤化的C1-3-烷基、OC1-3-烷基、S(O)C1-3-烷基、S(O)2C1-3-烷
基、S(O)NHC1-3-烷基、S(O)2NHC1-3-烷基、S(O)N(C1-3-烷基)2、S(O)2N(C1-3-烷基)2或P(O)
(C1-3-烷基)2；
环B表示苯基、C3-7环烷基、含有0-3个N原子和0-1个O或S原子的4-6元饱和或部分
饱和的杂环；或含有0-3个N原子和0-1个O或S原子的5-6元杂芳基环；环B可选地包含1-5个
RB的取代基；
RB独立地选择并且表示LC-RC、LC-H、卤素或部分或完全卤化的C1-3-烷基；可替换
地，两个相邻的RB基团与它们所连接的原子一起可以形成含有0-3个选自N、O、S的杂原子的
5-、6-或7-元饱和、部分饱和或不饱和的环，并且RC或RD可选地被1-4个取代基取代；
LC表示共价化学键、C1-3-烷基、(CH2)mC(O)(CH2)n、(CH2)mC(O)NH(CH2)n或(CH2)mO
(CH2)n；
RC独立地选择并且表示苯基、C1-6-烷基或含有0-2个N原子、0-1个O原子的4-6元杂
脂环基；RC可选地含有1-5个RD或CH2RD的取代基；
RD独立地选择并且表示(CH2)mCH3，(CH2)mO(CH2)nH，(CH2)mC(O)NH(CH2)nH，(CH2)mC
(O)(CH2)nH，(CH2)mNH2，N(RF)2或含有0-2个N原子、0-1个O原子的4-6元杂脂环基；RD可选地含
有C1-3-烷基的1-3个取代基；
m和n独立地选自0、1、2、3。
所关心化合物另一亚类包括式I的化合物，其中：
LA表示CH2或CH(CH3)；
LB表示共价化学键、C(O)NH或NH；
环A表示苯基，其可选地被1-3个RA基团取代；
RA表示Cl、F、CF3或OCH3；
环B表示苯基；含有1-3个N原子的5元杂芳基环；含有1-2个N原子和1个O原子的5元
杂芳基环和含有1-3个N原子的6-元杂芳基环；环B可选地包含1-3个RB的取代基；
RB独立地选择并且表示LC-RC或LC-H；
LC表示共价化学键、CH2、C(O)、C(O)NH、CH2C(O)NH、C(O)NHCH2、C(O)NH(CH2)2或
OCH2；
RC独立地选择并且表示苯基，C1-3-烷基，或含有0-2个N原子和0-1个O原子的4-6元
杂脂环基；RC可选地含有1-3个RD或CH2RD的取代基；
RD独立地选择并且表示CH3、OCH3、OH、CH2C(O)NH2、C(O)CH3、N(RF)2或含有0-2个N原
子、0-1个O原子的4-6元杂脂环基，并且RD可选地含有1-3个RF的取代基；
RF表示CH3。
所关心化合物的下一亚类包括式I的化合物，其中LB表示共价化学键、NH或C(O)
NH。
另外，所关心化合物的亚类还包括式I的化合物，其中环A是苯环。
2.1.所关心化合物单独的亚类包括式I的化合物，其中环B表示苯基。
所关心化合物的另一亚类包括式I的化合物，其中环B表示C3-7环烷基。
所关心化合物的另一亚类包括式I的化合物，其中环B表示含有0-3个N原子和0-1
个O或S原子的4-6-元饱和或部分饱和的杂环。
所关心化合物的另一亚类包括式I的化合物，其中环B表示含有0-3个N原子和0-1
个O或S原子的5-6元杂芳基环。
2.2.所关心化合物单独的类包括式I的化合物，其中LB接头是NHC0-3-烷基或CH2NH。
以下化合物是该类的说明性实例：
2.3.所关心化合物的另一类包括式I的化合物，其中LB接头是C(O)C0-3-烷基。以下
化合物是该类的说明性实例：
2.4.所关心化合物的另一类包括式I的化合物，其中LB接头是C(O)NHC0-3-烷基。以
下化合物是该类的说明性实例：
2.5.所关心化合物的另一类包括式I的化合物，其中LB接头表示OC0-3-烷基、SC0-3-
烷基、CH2O或CH2S。以下化合物是该类的说明性实例：
2.6.所关心化合物的另一类包括式I的化合物，其中LB接头表示NHC(O)C0-3-烷基
或CH2C(O)NH。以下化合物是该类的说明性实例：
2.7.本发明的另一个优选实施方式包括式I的化合物，其中LB接头表示共价化学
键。式IA显示了该化合物亚类：
2.8.本发明的优选实施方式中的一个包括式I、IA的化合物以及本发明的其它类
和亚类，其中环B表示苯基，其可选地被1-5个RB的取代基取代。具有RB取代基的苯基的说明
性实例如下所示：
2.9.本发明的另一个实施方式包括式I、IA的化合物以及本发明的其它类和亚类，
其中环B表示C3-7环烷基，其可选地被1-5个RB的取代基取代。以下化合物是该实施方式的非
限制性实例：
2.10.本发明的另一个实施方式包括式I和IA的化合物，其中环B表示含有C原子、
0-3个N原子和0-1个O或S原子的4-6-元饱和或部分饱和的杂环；可选地被1-5个RB的取代基
取代。以下化合物是该类的非限制性实例：
2.11.本发明单独的优选实施方式包括式I、IA的化合物以及本发明的其它类和亚
类，其中环B表示含有0-3个N原子和0-1个O或S原子的5-或6-元杂芳基环；可选地被1-4个RB
的取代基取代。
2.12.特别关心的实施方式包括式I、IA的化合物以及本发明的其它亚类，其中环B
表示含有C原子和1-3个N原子并且可选地被1-3个RB的取代基取代的5-元杂芳基环。具有以
下B环的化合物是该类的非限制性实例：
被RB取代的上述环B的变体的非限制性实例如下所示：
该类化合物的非限制性实例具有以下式：
2.13.特别关心的本发明另一亚类包括式I、IA的化合物以及本发明的其它类和亚
类，其中环B表示含有C原子、1-2个N原子和1个O原子的5-元杂芳基环，其可选地被1-3个RB
的取代基取代。具有以下B环的化合物是该类的非限制性实例：
被RB取代的上述环B的变体的非限制性说明性实例如下所示：
该类化合物的非限制性说明性实例具有以下式：
2.14.特别关心的上述实施方式的单独的变体包括式I、IA的化合物以及本发明的
其它类和亚类，其中环B表示含有1-3个N原子并且可选地被1-3个RB的取代基取代的6-元杂
芳基环。含有以下环B结构的化合物是该类的非限制性实例：
其中p选自0、1、2、3。
被RB取代的上述环B的变体的非限制性说明性实例如下所示：
该类化合物的非限制性说明性实例具有以下式：
2.15.本发明的实施方式之一包括式I和IA的化合物，其中环A表示苯基，其可选地
被1-3个RA基团取代。
2.16.式I和IA的化合物亚类或者属于其它上述亚类的亚类是特别关心的，其中RA
基团表示卤素、部分或完全卤化的-C1-3-烷基、-O-C1-3-烷基、S(O)C1-3-烷基、S(O)2C1-3-烷
基、S(O)NHC1-3-烷基、S(O)2NHC1-3-烷基、S(O)N(C1-3-烷基)2、S(O)2N(C1-3-烷基)2或者P(O)
(C1-3-烷基)2。
2.17.式I和IA的化合物亚类或者属于其它上述亚类的亚类是特别关心的，其中RA
基团表示Cl、F、CF3或OCH3。
2.18.式I和IA的化合物亚类是特别关心的，其中环A表示苯基并且环B表示5-6-元
杂芳基。这些化合物的非限制性说明性实例包括以下给出的式的化合物：
2.19.式I的化合物的亚类是特别关心的，其中环A表示苯基，LB接头表示C(O)NH，
并且环B表示苯基。
2.20.式I的化合物的亚类是特别关心的，其中环A表示苯基，LB接头表示NH，并且
环B表示苯基。
特别关心的本发明的化合物具有以下特性中的一种或多种：
-分子量小于1000，优选地小于750，并且最优选地小于650g/mol(不包括任何共结
晶或溶剂化试剂的重量，和对于盐来说的反离子的重量)；或者
-相对于天然或突变体(特别是临床显著的突变体)激酶的抑制活性，特别是相对
于激酶ALK、MET、ROS1、EGFR或其它所关心的激酶的抑制活性，具有1μM或更小的IC50值(通过
确定激酶抑制的任何科学上合理的实验所产生)，优选地，具有500nM或更小的IC50，并且最
佳地具有250nM或更小的IC50；或者
-相对于给定激酶的抑制活性，具有比其它所关心的激酶的相应IC50值小至少100
倍的IC50；或者
-相对于肿瘤细胞，具体的体外或使用科学上可用的模型的动物研究的细胞毒作
用或抑制细胞作用(优选的化合物抑制培养细胞Ba/F3NPM-ALK、Ba/F3EML4-ALK、Karpas
299、SU-DHL-1、NCI-H3122或NCI-H2228生长的效率超过克唑替尼(Crizotinib)的效率，优
选地，效率比克唑替尼好至少两倍，并且最优选地效率比克唑替尼好至少10倍)。
还提供了用于治疗和/或预防与蛋白激酶的异常活性有关的疾病的方法，所述方
法包括给予含有本发明的化合物的药物制剂。
具体地，这样的疾病可以包括肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑
色素瘤(cutaneousorintraocularmelanoma)、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛管癌、胃癌、肾
癌、乳腺癌、输卵管癌、粘膜癌和宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's
lymphoma)、食管癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、
尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性髓细胞性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或
输尿管癌、肾上皮细胞癌、肾盂癌、横纹肌肉瘤、中枢神经系统中的肿瘤形成、原发性中枢神
经系统淋巴瘤(原发性CNS淋巴瘤，primaryCNSlymphoma)、脊髓肿瘤、脑干胶质瘤(脑干神
经胶质瘤)、垂体腺瘤及其组合。
这样的疾病还可以表示非小细胞肺癌、间变性大细胞淋巴瘤、弥漫性B细胞淋巴瘤
(diffuseB-celllymphoma)、炎性肌纤维母细胞瘤、成神经细胞瘤、横纹肌肉瘤、未分化甲
状腺癌、多形性胶质母细胞瘤(glioblastomamultiforme)、肝胆管型肝癌
(cholangiocarcinoma)、胃腺癌、慢性粒单核细胞白血病(慢性单核细胞性白血病，chronic
myelomonocyticleukemia)、尤因氏肉瘤、炎性乳腺癌、乳头状肾上皮细胞癌(carcinoma
ofpapillaryrenalepithelium)、鳞状细胞癌。
另外，本发明提供了包含至少一种化合物(作为本发明的主题)、其盐、水合物或其
它溶剂化物和至少一种药用载体、佐剂、稀释剂和/或赋形剂的药物制剂。这些制剂设计用
于治疗和/或预防与蛋白激酶的异常活性有关的疾病，并且可以给予需要的受试者，以便抑
制癌症肿瘤的生长、发展或扩散，所述肿瘤包括实体瘤(例如，前列腺癌、结肠癌、胰腺癌、卵
巢癌、乳腺癌、食道癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、脑肿瘤疾病，包括成胶质细胞瘤和成神经细
胞瘤；软组织癌症疾病，包括横纹肌肉瘤等)，多种形式的淋巴瘤，如被称为间变性大细胞淋
巴瘤(ALCL)的非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)，多种形式的白血病及其它形式的癌症，包括对使用
克唑替尼(Crizotinib)或其它激酶抑制剂治疗耐受的那些，并且通常用于治疗和预防由受
本发明所述的化合物抑制的一种或多种激酶所引起的身体疾病或不利状况。
本发明还涉及癌症的治疗方法，根据本发明，所述方法包括将(作为单一疗法或与
一种或多种抗癌试剂、一种或多种试剂结合以减轻不良事件、辐射等)治疗有效量的作为本
发明主题的化合物给予需要停止、减缓或逆转癌症(包括实体瘤及其它形式的癌症，如白血
病)的生长、发展或传播的人或动物体。这种给予表示由受所公开的化合物或它们的药理学
可用的衍生物之一抑制的一种或多种激酶所引起的疾病的治疗和预防的方法。本发明的化
合物的“给予”包括如本文所述，使用任何对于身体可用的试剂或给药途径向受体递送本发
明所述的化合物、前体药物或这样的化合物的其它药理学可用的衍生物。通常，每周向患者
给予一次或几次所述化合物，例如，每天给药、每隔一天给药、一周给药5天等。口服和静脉
内给药是特别关心的。
本发明还包括式I、IA中任一种的化合物或本发明任何其它化合物的制备。
另外，本发明还包括本发明的化合物或其药理学可用的衍生物在制备用于治疗慢
性或急性形式癌症(包括原发性或转移性淋巴瘤和实体瘤，包括本文提及的癌症类型，并且
包括对一种或多种治疗方式抵抗或耐受的癌症类型)的医学产品中的应用。本发明所述的
化合物可以用于抗癌药的生产。本发明所述的化合物还可以用于制备通过抑制一种或多种
激酶包括但不限于激酶，如ALK、EGFR、MET、ROS1来减轻或预防多种病症的医学产品。
本发明还包括包含本发明的化合物的组合物，其包括任何所述类或亚类的化合
物，具体地，上述式的任何化合物等，所述化合物优选地处于治疗有效量，与至少一种治疗
可用的载体、佐剂或稀释剂组合。
本发明所述的化合物还可以用作多种激酶鉴定的标准品和试剂，所述激酶包括但
不限于ALK、EGFR、MET、ROS1激酶，以及用于研究激酶在生物和病理现象中的作用；用于研究
通过这些激酶进行的信号转导的胞内通路，用于新型激酶抑制剂的比较性评价；和用于在
细胞系模型和动物模型中研究多种类型的癌症。
3.定义
除非另作说明，否则以下定义在本文中适用。此外，除非另外说明，否则独立选择
官能团的所有情况。这通过对给定定义使用基本符号来表示，两种情况可以是相同或不同
的(例如，R、R’、R”；Y、Y’、Y”等)。
3.1.在本文中术语“脂肪族的”表示饱和和不饱和的(但不是芳香族的)直链(即，
无支链)、支链、环状或多环非芳香烃链-残基，其可以可选地被一个或多个官能团取代。除
非另外明确指明，否则烷基、其它脂肪族基团、烷氧基和酰基通常含有1-8个(即C1-8)，并且
在大多数情况下1-6个(C1-6)相邻的脂肪族碳原子。举例来说，这些脂肪族基团包括甲基、乙
基、异丙基、环丙基、亚甲基、甲基环丙基、环丁基甲基、环戊基衍生物等，其可以含有一个或
多个取代基。因此，术语“脂肪族的”旨在包括烷基、烯基、炔基、环烷基和环烯基片段。
在本文中术语“烷基”表示无支链和支链的、环状或多环烷基。类似一致性适用于
其它类术语，如“烯基”、“炔基”等。此外，“烷基”、“烯基”、“炔基”以及类似基团可以是取代
的或未取代的。
3.2.在本文中术语“烷基”是指通常具有1至8个，优选地1至6个碳原子的基团。例
如，“烷基”可以表示甲基、乙基、正丙基、异丙基、异己基、环己基等。作为说明，取代的烷基
包括但不限于以下基团：氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、苄基、取代的苄基、苯乙基、取代的苯
乙基等。术语C1-6烷基表示含有1至6个碳原子的烷基，并且包括C1、C2、C3、C4、C5和C6-烷基。
3.3.术语“烷氧基”是指通过桥氧原子连接至分子的如上定义的烷基。例如，术语
“烷氧基”表示-O-烷基，其中所述烷基以直链(无支链)或支链或以环的形式含有1至8个碳
原子。作为说明，烷氧基包括但不限于以下基团：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、正丁氧基、叔丁
氧基等。
3.4.术语“卤代烷基”包括支链和直链饱和烃链，其中一个或多个氢原子被卤素取
代。卤代烷基的实例包括但不限于以下基团：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基、-C(CF3)2CH3
等。
3.5.术语“烯基”是指通常具有2至8个，更通常地具有2至6个碳原子并且包括直链
和支链烃链或环，并且具有一个或多个碳-碳双键并且布置在环或链中的任何稳定位点的
基团。例如，“烯基”可以表示但不限于以下基团：丙-2-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基等。术语
“炔基”是指通常具有2至8个，更通常地具有2至6个碳原子并且包括直链和支链烃链或环，
并且具有一个或多个碳-碳三键的基团。例如，“炔基”可以表示但不限于以下基团：丙-2-炔
基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、己-2-炔基、己-5-炔基等。
3.6.术语“环烷基”是指在单环、双环或多环(即环)结构中具有3至12个，通常3至
10个碳原子的基团。作为说明，环烷基包括但不限于以下基团：环丙基、环丁基、环戊基等，
它们在其它脂肪族、杂脂肪族或杂环取代基的情况下可被取代。术语“环烷基”和“碳环”是
等价的。术语“环烯基”是指在含有一个或多个不饱和碳-碳双键的单环或多环结构中具有3
至13个，通常5至8个碳原子的烯基基团。例如，“环烯基”可以表示但不限于以下基团：环戊
烯基，环己烷等。
3.7.在本文中术语“杂脂肪族”表示脂肪族取代基，其包含氧、硫、氮、磷或硅原子
以代替一个或多个碳原子。杂脂肪族取代基可以是无支链的、支链的或环状的，并且包括非
环单元，如CH3OCH2CH2O-，以及杂环，如吗啉代、吡咯烷基等。
3.8.本文所使用的术语“杂环”、“杂环基”或“杂环的”表示具有5至14个，通常5至
10个环原子的非芳族环体系，所述环体系中存在一个或多个碳环，通常1至4个碳环，在所述
碳环中，存在杂原子，如N、O或S的取代。杂环的实例包括但不限于以下基团：四氢呋喃-2-
基、四氢呋喃-3-基、四氢噻吩-2-基(tetrahydrothiophen-2-yl)、吗啉-2-基、硫代吗啉-4-
基、哌嗪-1-基、哌嗪-2-基、苯并吡咯酮-1-基、苯并低聚氧杂戊环基(benzoxolanil)等。另
外，如本文所使用的术语“杂环”或“杂环的”在一定意义上涵盖了其中含有杂原子的非芳香
环与一个或多个芳香环或非芳香环，如二氢吲哚基、苯并二氢吡喃基等连接的基团，其中基
团原子或连接点位于含有杂原子的非芳香环处。术语“杂环”、“杂环基”或“杂环的”还适用
于可以被取代的饱和或部分饱和的环。
3.9.单独或作为较大单元的部分使用的术语“芳基”，如“芳烷基”、“芳烷氧基”或
“芳氧烷基”是指含有芳香环的基团，或者具有6至14个碳原子的多环芳香族体系。可用的环
状芳基的实例包括但不限于以下基团，如苯基、萘基、菲基、蒽基、菲基等，以及萘-1-基、萘-
2-基、蒽-1-基和蒽-2-基。此外，如本文所使用的，术语“芳基”包括其中芳香环连接至一个
或多个非芳香环，如茚满基、菲啶基或四氢萘基的基团，其中基团原子或连接位置属于芳香
环。
3.10.如本文所使用的术语“杂芳基”表示具有5-14个环原子的稳定杂环和聚杂环
芳香族部分。杂芳基可以是取代的或未取代的并且可以含有一个或多个环。可能的取代基
无限制地包括任何先前提到的取代基。典型的杂芳基环的实例包括5-和6-元单环基，如噻
吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基等；和多环杂环基，如苯并
[b]噻吩基、萘并[2,3-b]噻吩基、噻嗯基、异苯并呋喃基、苯并吡喃基、异氮茚基、苯并咪唑、
蝶啶基(pteridinyl)等(参见，例如，A.RKatritzky,HandbookofHeterocyclic
Chemistry)。此外，杂芳基包括其中杂芳环连接至一个或多个芳香环或非芳香环的基团，并
且基团原子或连接点属于杂芳环。实施例包括四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[3,4-d]
嘧啶基。术语“杂芳基”还包括具有可能的取代基的环。可以与术语“杂芳基环”或“杂芳香族
的”等价使用术语“杂芳基”。
3.11.芳基(包括芳烷基、芳烷氧基或芳氧烷基等的芳基部分)或者杂芳基(包括杂
芳烷基或杂芳烷氧基单元等的杂芳基部分)可以含有一个或多个取代基。芳基或杂芳基的
不饱和碳原子上的适合取代基的实例包括卤素(F、Cl、Br或I)、烷基、烯基、炔基、-CN、-R、-
OR、-S(O)pR(其中p选自0、1、2)、-SO2NRR’、-NRR’、-(CO)YR、-O(CO)YR、-NR(CO)YR’、-S(CO)
YR，其中每次出现的Y表示单独的-O-、-S-、-NR-或共价化学键；因此，-YR包括-R、-OR、-SR
和-NRR’，并且-(CO)YR包括-C(＝O)R、-C(＝O)OR和-C(＝O)NRR’。其它取代基包括-YC(＝
NR)NR’R”、-COCOR、-COMCOR(其中M-含有1-4个碳原子的脂肪族基)、-YP(＝O)(Y’R)(Y”
R’)、-NO2、-NRSO2R’和-NRSO2NR’R”。为了进一步说明，其中Y是-NR的取代基因此尤其是包
括-NRC(＝O)R’、-NRC(＝O)NR’R”、-NRC(＝O)OR’和-NRC(＝NH)NR’R”。
取代基R、R’和R”包括氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环。应
注意，取代基R又可以是取代的或未取代的。因此，取代基R包括但不限于卤代烷基和卤芳基
(如氯甲基、三氯甲基或卤苯基)；烷氧基烷基和烷氧芳基(如甲氧基乙基、单-、二-和三-烷
氧苯基；亚甲二氧基苯基或亚乙基二氧基苯基)；烷基氨基。另外，说明性实例包括1,2-亚甲
基-二氧基(1,2-methylene-dioxy)、1,2-亚乙基二氧基(1,2-乙二氧基，1,2-
ethylenedioxy)、保护的OH(如酰氧基)、苯基、取代的苯基、-O-苯基、-O-(取代)苯基、-苄
基、-取代的苄基、-O-苯乙基、-O-(取代)苯乙基等。此外，取代基的实例包括氨基、烷基氨
基、二烷基氨基、氨羰基、卤素、烷基、烷基氨基羰基、烷基氨基羰基氧基、二烷基氨基羰基氧
基、烷氧基、硝基、氰基、羧基、烷氧羰基、烷基羰基、羟基、卤代烷氧基和卤代烷基。
脂肪族、杂脂肪族或非芳香族杂环基还可以包含一个或多个取代基。这些基团的
适合的取代基的实例包括所有以上提及的芳基或杂芳基的碳原子的取代基，并且另外包括
以下饱和碳原子的取代基：＝O、＝S、＝NR、＝NNRR’、＝NNHC(O)R、＝NNHCOR或＝NNHSO2R，其
中R表示氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环。脂肪族、杂脂肪族或杂环基团的
说明性实例包括氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨羰基、卤素、烷基、烷基氨基羰基、二烷基氨
基羰基、烷基氨基羰基氧基、烷氧基、硝基、氰基、羧基、烷氧羰基、烷基羰基、羟基、卤代烷氧
基或卤代烷基。
芳香族或非芳香族杂环的氮原子上的取代基的说明性实例包括R、-NRR’、-C(＝O)
R、-C(＝O)OR、-C(＝O)NRR’、-C(＝NR)NR’R”、-COCOR、-COMCOR(其中M-含有1-4个碳原子的
脂肪族基)、-CN、-NRSO2R’和-NRSO2NR’R’，其中R表示氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂
芳基和杂环。
3.12.本发明仅涵盖了取代基和衍生物的那些组合，其形成了稳定的或化学可行
的化合物。稳定的或化学可行的化合物是具有足以使其制备和检测的稳定性的化合物。本
发明优选的化合物是足够稳定的，并且在不存在化学反应性条件的情况下在高达40℃的温
度下保持至少1周不分解。
3.13.除非另作说明，否则本发明的某些化合物可以以互变异构形式存在并且本
发明包括这些化合物的所有这些互变异构形式。
3.14.除非另有说明，否则本文所述结构还表示其所有立体异构体，即对每个不对
称中心的R-和S-异构体。此外，单独的立体化学异构体以及对映异构体和这些化合物的非
对映异构混合物也是本发明的主题。因此，本发明包括每个非对应异构体或对映异构体，其
在很大程度上不含其它异构体(>90％，并且优选地>95％的摩尔纯度)，以及这些异构体的
混合物。
可以根据标准程序通过外消旋物质的分离获得具体的光学异构体，例如，通过使
用光学活性的酸或碱获得非对映异构体的盐，然后通过结晶分离非对映异构体的混合物，
接着从这些盐中分离光学活性的碱。适当的酸的实例是酒石酸、二乙酰酒石酸、二苯甲酰酒
石酸、二甲苯酒石酸和樟脑磺酸。用于分离光学异构体的另一种技术在于手性色谱柱的使
用。此外，另一种分离方法包括通过将本发明的化合物与活化形式的光学纯的酸或光学纯
的异氰酸酯反应来合成共价非对映异构体分子。可以通过常规方法分离所得非对应异构
体，如色谱法、蒸馏、结晶或升华，然后将其水解以获得对映体纯的化合物。
可以使用光学活性的初始材料制备本发明的光学活性化合物。这些异构体可以处
于其游离酸、游离碱、酯或盐的形式。
3.15.本发明的化合物可以以放射性标记形式存在，即这些化合物可以含有一个
或多个原子，其原子量或质量数不同于最常见的天然同位素的原子量或质量数。氢、碳、磷、
氯的放射性同位素分别包括3H、14C、32P、35S和36Cl。含有那些放射性同位素和/或其它原子的
其它放射性同位素的本发明的化合物在本发明的范围内。由于易于制备和检测，氚(即3H)
和碳(即14C)放射性同位素是特别优选的。
可以通过本领域技术人员熟知的方法制备本发明的放射性标记的化合物。可以通
过本文所述的程序，通过用各自标记的试剂简单代替未标记的试剂来制备标记化合物。
具体实施方式
4.合成概述
可以使用如下所述的合成方法制备本发明的化合物。这些方法不是穷举的并且允
许引入合理的改变。可以使用适合的溶剂和材料进行所指明的反应。在实现用于合成具体
物质的这些常用方法时，应考虑物质中存在的官能团以及它们对反应过程的影响。对于一
些物质，必需改变步骤顺序或优先选择一些替代合成方案中的一种。
将保护基-官能团引入用于必需化学反应的化学选择性流动的化合物分子中。在
有机合成中保护基是重要的。在有机合成中所使用的一些试剂可以直接与可改造分子的多
个官能团相互作用。在该情况下，如果必需实施与仅一种类型的官能团的反应而不影响其
它官能团，则应通过保护基团修饰(“保护”)后者。叔丁氧羰基(Boc)可以是保护基团的实
例。
可以在标准方法下根据方案I-XIII实施本发明化合物的合成。
4.1.可以根据方案I制备大部分式I和IA的化合物-化合物I-1、I-2、I-3和I-4的中
间体。
第一阶段包括合成单-Boc-取代的乙二胺，其中通过在第二阶段的还原胺化获得
它的中间体I-1。在存在碱的情况下，该中间体与3,4,6-三氯哒嗪的相互作用导致产生了哒
嗪环4位上的氯原子取代。所得化合物与三氟乙酸的相互作用导致保护性Boc基的去除。下
一阶段包括分子内亲核取代反应，其导致制备了双环产物，所述产物与Boc-酸酐相互作用
导致产生了中间体I-2。在存在钯催化剂的情况下，该中间体在甲醇中的羰化导致获得了甲
酯I-3，其通过氢氧化锂水解，随后酸化导致获得了酸I-4。
方案I
方案I中环A如发明说明书p.1.1.中所定义，并且取代基R是-H或-CH3。
4.2.可以在方案IIa下，从中间体I-4制备式IA的化合物，其中环A如发明说明书
p.1.1中所定义，取代基R是-H或-CH3，环B表示1,2,4-噁二唑，LB表示共价化学键，并且取代
基RB连接至3位并且是根据发明说明书p.1.1定义的。
方案IIа
在第一阶段，使用HATU酸I-4和偕胺肟(amidoxime)激活的反应导致形成了O-酰基
酰胺肟，然后通过在DMF中加热使其环化，从而形成了相应的噁二唑。在最后阶段，除去保护
性Boc基。
可以根据方案IIb，从中间体I-2制备式IA的化合物，其中环A如发明说明书p.1.1
中所定义，取代基R是-H或-CH3，环B表示1,2,4-噁二唑，LB表示共价化学键，并且根据发明说
明书p.1.1定义的取代基RB连接至5位。
方案IIb
在第一阶段，通过氰化锌的作用进行钯催化的氯原子对腈基的亲核取代。在甲醇
中用羟胺处理所得的腈，从而导致产生了偕胺肟IIb-2。在存在碱的情况下，通过相应酰基
氯对所得偕胺肟酰基化，在甲苯中加热产物并通过用三氟乙酸处理除去保护性Boc基，从而
导致产生了目标化合物。
4.3.可以根据方案III，从中间体I-3制备式IA的化合物，其中环A如发明说明书
p.1.1中所定义，R是-H或-CH3，环B表示1,2,3-噁二唑，LB表示共价化学键。
方案III
在第一阶段，甲酯I-3与肼的反应导致获得了相应酰肼，然后用羧酸咪唑使其酰基
化，从而形成双酰肼。将中间体III-2与三氯氧化磷反应，其中发生环化，同时形成目标化合
物。
4.4.可以根据方案IV，从中间体I-2制备式IA的化合物，其中环A如发明说明书
p.1.1中所定义，取代基R是-H、-CH3，环B是1,2,4-三唑，并且LB表示共价化学键。
方案IV
在第一阶段，甲酯I-3与肼的反应导致形成了相应酰肼，然后使其与氨基醚反应。
加热所得中间体导致形成三唑，并且在最后阶段从所述三唑除去保护性Boc-基团。
4.5.方案Va可以用于合成式IA的化合物，其中环A如发明说明书p.1.1中所定义，
取代基R是-H、-CH3，LB表示共价化学键，并且环B如发明说明书p.1.1中所定义。
方案Va
通过铃木反应，中间体I-2与频那醇硼烷(pinacolborane)的钯催化反应导致形成
了中间体，除去保护基，从所述中间体获得了目标化合物。
可替换地，方案Vb可以用于合成式IA的化合物，其中LB表示共价化学键：
方案Vb
在第一阶段，与肼的反应导致形成了环酰肼，然后通过乙酸中的溴的作用使其氧
化。用N-氯代琥珀酰亚胺使所得中间体氯化。用三氯氧化磷(phosphorusoxychloride)处
理该反应产物。所得中间体与乙二胺I-1的Boc-取代的衍生物的相互作用，在三氟乙酸作用
下保护性Boc-基的去除以及后续环化导致获得了目标产物。
4.6.方案VIa或VIb可以用于合成式I的化合物，其中环A如发明说明书p.1.1中所
定义，取代基R是-H、-CH3，LB表示C(O)NHC0-3-烷基，并且环B如发明说明书p.1.1中所定义。
在第一阶段，使用HATU和与胺化合物的反应活化羧酸，从而导致产生了酰胺。在三
氟乙酸的作用下，保护性Boc-基的去除导致产生了目标化合物。
方案VIb
在存在胺化合物的情况下，使用一氧化碳的化合物I-2的钯-催化羰化导致产生了
酰胺，从中除去保护性Boc-基导致产生了目标化合物。
根据化合物I-5的方案VIc(化合物I-5是根据方案VIa或VIb制备的)，进行了式I的
化合物的合成，其中环A如发明说明书p.1.1中所定义，取代基R是-H、-CH3，LB表示CH2NH，并
且环B如发明说明书p.1.1中所定义。
方案VIc
使用乙硼烷的化合物I-5的还原导致产生了目标化合物。
4.7.方案VIIa或VIIb可以用于合成式I的化合物，其中环A如发明说明书p.1.1中
所定义，取代基R是-H、-CH3，LB表示NH，并且环B如发明说明书p.1.1中所定义。
在氨基化合物的作用下氯原子的钯-催化亲核取代，接着保护性Boc-基的去除导
致产生了目标化合物。
在氨基化合物的作用下氯原子的亲核取代，接着保护性Boc-基的去除导致产生了
目标化合物。
4.8.可以在方案VIIIa下合成式I的化合物，其中环A如发明说明书p.1.1中所定
义，取代基R是-H、-CH3，LB表示-X-，环B如发明说明书p.1.1中所定义，并且X表示-O-或-S-。
方案VIIIa
在醇化物(醇根，alcoholate)或硫醇盐(硫醇根，thiolate)阴离子(通过氢化钠与
相应的醇的相互作用制备)的作用下氯原子的亲核取代，接着保护性Boc-基的去除导致产
生了目标化合物。
在方案VIIIb下进行式I的化合物的合成，其中环A如发明说明书p.1.1中所定义，
取代基R是-H、-CH3，LB表示-X-C1-3-烷基，并且环B是可选地具有1-5个RB的取代基的苯基，并
且X表示-O-或-S-。
方案VIIIb
在醇化物或硫醇盐的作用下初始化合物中氯原子的亲核取代，接着保护性Boc-基
的去除导致产生了目标化合物。
4.9.可以在方案IX下合成式I的化合物，其中环A如发明说明书p.1.1中所定义，取
代基R是-H、-CH3，LB表示-NHC(O)C0-3-烷基，并且环B如发明说明书p.1.1中所定义。
方案IX
氯原子对叠氮基的亲核取代，以及在三苯基膦作用下的后续断裂导致获得了氨基
化合物，使用相应羧酸氯化物使其酰基化，随后除去了保护基团，从而导致产生了目标化合
物。
4.10.可以在方案X下合成式I的化合物，其中环A如发明说明书p.1.1中所定义，取
代基R是-H、-CH3，LB表示-CH2X-，环B如发明说明书p.1.1中所定义，并且X表示O或S。
方案X
在第一阶段，在硼烷-二甲硫醚复合物的作用下进行了酸I-4向苯甲醇的还原。所
得醇的甲磺硫化，然后在相应醇化物或硫醇盐的作用下的亲核取代以及保护基的去除导致
获得了目标化合物。
4.11.可以在方案XI下合成式I的化合物，其中环A如发明说明书p.1.1中所定义，
取代基R是-H、-CH3，LB表示-CH2C(O)NH，环B如发明说明书p.1.1中所定义，并且X表示O或S。
方案XI
在氰化钾的作用下甲磺酸盐I-6的亲核取代以及所得腈在碱性介质中的水解导致
产生了芳基乙酸。所得芳基乙酸的所得胺的酰基化以及保护基的去除导致获得了目标化合
物。
4.12.可以在方案XII下合成式I的化合物，其中环A如发明说明书p.1.1中所定义，
取代基R是-H、-CH3，LB表示-NHC0-3-烷基，并且环B如发明说明书p.1.1中所定义。
方案XII
在相应氨基化合物的作用下，化合物I-2的氯原子对氨基的钯-催化取代以及保护
基的后续去除导致获得了目标化合物。
4.13.可以在方案XIII下合成式I的化合物，其中环A如发明说明书p.1.1中所定
义，取代基R是-H、-CH3，LB表示-C(O)C0-3-烷基，并且环B如发明说明书p.1.1中所定义。
第一阶段包括在氰化铜(I)的作用下氯原子对氰基的取代。所得腈对各自有机镁
化合物的暴露导致获得了目标化合物。
可以基于以上所述的合成方法、实验方法的实例以及熟知的技术和材料获得本发
明所述的所有化合物。
5.应用、制剂、给药
5.1.药物应用；适应症
本发明所述的化合物可以用于治疗病理发生涉及蛋白激酶的疾病。具体地，本发
明所述的化合物能够抑制酪氨酸激酶ALK、ROS1、MET、EGFR，它们参与癌症的生长、发展和扩
散。另外，已表明构成本发明的一些化合物对癌细胞系具有体外抗增殖活性，所述癌细胞系
如例如Karpas-299、SU-DHL-1、NCI-H3122或NCI-H2228。这些化合物对于多种类型癌症(包
括实体瘤和淋巴瘤两者)的治疗是关心的，具体地，对于对其它治疗形式耐受的癌症的治疗
是关心的。
可以使用本发明所述的化合物治疗的癌症类型包括实体瘤(例如，前列腺癌、结肠
癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、食道癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、脑肿瘤疾病，包括成胶质细胞
瘤和成神经细胞瘤、软组织癌，包括横纹肌肉瘤等)、多种形式的淋巴瘤，如被称为间变性大
细胞淋巴瘤(ALCL)的非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、多种形式的白血病以及病理发生与ALK、
MET、EGFRROS1活性有关的其它形式的癌症。
由于异常ALK-激酶活性是多种肿瘤学疾病的病因，因此我们认为作为单一疗法或
与当前抗NSCLC、ALCL以及其它以上所列癌症的化疗剂组合的药物，ALK抑制剂的使用将使
得能够实现显著并且长期的症状缓解；ALK抑制剂还可以用作旨在防止需要这样的治疗的
患者中可能的复发的维持疗法。
5.2.药物方法
本发明的主题还包括向需要适当治疗的受试者给予治疗有效量的通式I的化合物
的环A。
“治疗有效量”是指可检测地杀死癌细胞或者抑制它们的生长或通过身体的扩散
速度、肿瘤的尺寸或个数或者其它癌症特征所需的化合物的量。根据患者类型、年龄和一般
状况、疾病严重程度、抗癌剂的特征、药物给予方法、与其它药物的组合治疗等，受试者之间
精确所需的量可以是不同的。
可以以对于杀死癌细胞或抑制它们的生长有效的任意量和通过任何给药途径向
患者给予包含所述化合物的物质或药物制剂。
优选地，以适合于向患者给药的形式配制单剂量的本发明的抗癌化合物。就本发
明而言，术语“剂量单位形式”表示适合于患者治疗的抗癌剂的量。在当前实践下，根据深入
的医学报告，由主治医师确定本发明所述的化合物和制剂的总日剂量。对于任何具体患者
或生物，具体的治疗有效剂量水平将取决于一些因素，其包括病症类型、疾病严重程度、具
体医学产品的活性、药物制剂的特性、患者的年龄、体重、一般医学状况、性别和饮食、施用
方法和时间表、化合物的代谢和/或排泄速度、治疗持续时间、与本发明所述的化合物组合
或一起给予使用的医学产品以及医学中熟知的类似因素。
以所需剂量将医学产品与特别适合的药用载体混合，可以将作为本发明本质的制
剂口服、直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(通过皮肤贴片、粉剂、软膏剂或滴剂)、
舌下、颊部、作为鼻腔或口腔喷雾等给予人或其它动物。
给予一次或处于几个单个剂量形式的化合物的有效全身剂量通常在每kg患者体
重0.01至500mg化合物的范围内，优选地，0.1至125mg/kg。通常，以约50-2000mg/患者的日
剂量将所述化合物给予需要这种治疗的患者。一天、一周(或在其它时间段内)可以进行一
次或几次给药，或者可以定期进行。例如，可以以每周为基础(例如，每周一)向患者一天给
予所述化合物一次或几次，持续不确定的时间或几周(例如，4-10周)。另外，可以在数日的
确定期间内(例如，2-10天)将所述化合物每天给予患者，然后是无物质给予的时期(例如，
1-30天)。可以不确定地重复该循环，或将该循环重复预定的循环数，例如，4-10次循环。举
例来说，可以将本发明所述的化合物每天给予患者，持续5天，然后停止9天等，重复该循环
不确定的次数或在4-10次循环期间重复。
在特定病症或病况的治疗和预防中将有效的化合物的量将具体地基于影响医学
产品有效剂量的熟知因素。此外，可以可选地使用体外或体内测量以确定最适剂量范围。确
定有效剂量的大致形式包括剂量-反应的曲线外推法，其将取决于体外测试模型或对动物
的模型。根据熟知的因素，包括给药途径和患者的年龄、体重、性别和一般医学状况；疾病的
性质、严重性和临床状况；相伴的疗法的使用(或不使用)；以及患者细胞中遗传变化的性质
和程度，通过主治医师确定精确的剂量水平。
当对于特定疾病或病症的状况的治疗和抑制给药时，根据具体应用的化合物、药
物在体内的给予途径、这种给药的期限和严重性；疾病状况以及与经历治疗的患者有关的
不同数目的身体因素，本发明的化合物的有效剂量可以是不同的。在大多数情况下，可以以
约0.01mg/kg至500mg/kg，通常0.1至125mg/kg的每日剂量，通过向患者给予环A化合物实现
满意的结果。取决于对患者的给药形式，可以预期估计的每日剂量是不同的。因此，在肠胃
外给药的情况下，剂量水平通常在10至20％口服剂量水平的范围内。
在当本发明所述的化合物用作组合疗法方案的一部分的情况下，组合疗法的每种
成分的剂量给予环A所需的治疗期。可以将形成组合疗法的一部分的化合物以含有所有组
分的剂量形式和以单个成分剂量的形式同时给予患者；另外，可以在治疗期内的不同时间
将所述组合的化合物给予患者，或可以将它们中的一种作为另一种的预处理给予。
5.3.关于所述化合物
本发明所述的化合物可以在处理期间以游离形式，或者如果需要，以药用盐或其
它衍生物的形式存在。如本文所使用的，术语“药用盐”是指在提出的医学判断内适合于接
触人和动物的组织使用而无过度毒性、刺激、过敏反应等并且对应于合理的利益和风险比
的这样的盐。在医学中，胺、羧酸、膦酸酯及其它类型化合物的药用盐是熟知的。这些盐的性
质的详细说明由BergeS.M.等人,в“PharmaceuticalSalts”J.PharmaceuticalScience,
66:1-19(1977)提供，其作为参考并入本文。可以在本发明所述的化合物的分离和纯化期间
原位制备所述盐，并且可以分别通过将本发明所述的化合物的游离酸或游离碱分别与适当
的碱或酸反应获得所述盐。药用无毒的酸性盐的实例可以包括通过无机酸(如盐酸、氢溴
酸、磷酸、硫酸和高氯酸)或通过有机酸(如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、琥珀酸或丙二酸)形
成的或通过本领域中使用的其它方法(例如，通过离子交换)获得的氨基的盐。其它药用盐
包括己二酸盐、藻朊酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸
盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊基丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基磺酸
盐、乙烷磺酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸
盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂烷硫酸盐、苹
果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕
榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸
盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐
等。典型的碱金属和碱土金属的盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。另外，药用盐可以含有(如果需
要)使用反离子(如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和
芳基磺酸盐)获得的铵、季铵和胺的无毒阳离子。
此外，如本文所使用的术语“药用酯”是指在人体内易于分解为母体化合物或其盐
的体内可水解酯。适合的酯基包括例如药用脂肪族羧酸，具体地，烷酸、烯酸、环烷酸和二烯
酸(alkadieneacid)的衍生物，其中每个烷基或烯基组分通常具有不超过6个碳原子。具体
的酯的实例可以包括甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸脂和丁二酸乙酯
(ethylsuccinate)的衍生物。明显地，还可以通过本发明所述的化合物的羟基或羧酸基形
成酯。
本发明的上下文中，术语“药用前体药物形式”是指构成本发明本质的化合物的这
些前体药物，其适合于人和动物的使用而无过度毒性、刺激、过敏反应等并且对应于合理的
利益和风险比。术语“前体药物”是指体内转化(例如，在血液中水解)以形成上式所示的母
体化合物的化合物。
5.4.药物组合物
本发明还涉及包含至少一种本文所述的化合物(或其前体药物、药用盐或其它药
用衍生物)和一种或多种药用载体、稀释剂和/或赋形剂的药物制剂。这些制剂还可以含有
一种或多种其它治疗剂。另一方面，可以将本发明所述的化合物与一种或多种其它治疗方
案结合(例如，与克唑替尼(Crizotinib)或其它激酶抑制剂、干扰素、骨髓移植、法呢基转移
酶抑制剂(farnesyltransferaseinhibitor)、二膦酸酯、沙利度胺、肿瘤疫苗、激素治疗、
抗体、辐射等结合)给予需要适当疗法的患者。例如，用于和本发明的化合物共同给药或者
与本发明的化合物一起包含在药物制剂中的其它治疗剂可以包括一种或多种抗癌剂。
本发明主张的药物制剂包括本发明所述的化合物以及适合于特定剂量形式的药
用载体，其可以包括任何溶剂、稀释剂、分散剂或混悬液、表面活性剂、等张剂、增稠剂和乳
化剂、防腐剂、粘结剂、润滑剂等。除了当常规载体基质与本发明的化合物不相容时的情况
(例如，在任何不利的生物事件以及与药物制剂的任何其它成分(多种成分)的其它不利相
互作用出现期间)外，这些制剂的应用在本发明的范围内。可以用作药用载体的材料包括但
不限于单糖和寡糖以及它们的衍生物；麦芽、明胶；滑石；赋形剂，如可可脂和和栓剂腊
(suppositorywax)；油剂，如花生油、棉花子油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；二
醇类，如丙二醇；酯类，如油酸乙酯和十二烷酸乙酯；琼脂；缓冲循环剂，如氢氧化镁和氢氧
化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇和磷酸盐缓冲液。另外，制剂可以含有
其它无毒相容性润滑剂，如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁，以及结肠循环剂(colocycle
Agent)、分离液、成膜剂、甜味剂、风味循环剂(flavocycleagent)和芳香剂、防腐剂和抗氧
化剂。
5.5.药物制剂
本发明的主题还涉及药物形式-药物组合物的种类，以治疗有效剂量对特定给药
途径优化所述组合物的组成。可以以建议剂量口服、局部、直肠、眼内、肺部(例如，以吸入喷
雾的形式)或者血管内、鼻内、腹膜内、皮下、肌内、胸骨内和通过输注技术将本发明的制剂
引入身体中。
本发明的药物形式可以含有本文所述的式的化合物或其药用盐，和其它药物，例
如，选自下述：激酶抑制剂、抗抑郁剂、抗肿瘤剂、抗病毒剂、抗炎剂、抗真菌剂或抗血管增生
化合物和任何药用载体、佐剂或稀释剂。术语“药用载体或佐剂”是指可以与作为本发明本
质的化合物一起给予患者并且不破坏该化合物的药理学活性并且以足以递送治疗量的化
合物的剂量给药时无毒的载体或佐剂。
本发明的药物形式可以包括通过使用脂质体或微囊化方法、药物纳米形式制备方
法以及制药学中已知的其它实例获得的组合物。
5.6.组合疗法中化合物的使用
尽管本发明所述的化合物可以作为单个活性药物试剂给予，但是它们也可以与本
发明的一种或多种化合物或一种或多种其它试剂组合使用。在组合口服给药的情况下，所
述治疗剂可以表示同时或在不同阶段顺序给予的不同的药物形式，或者所述治疗剂可以组
合成一个药物形式。
术语“组合疗法”表示相对于与其它药物试剂组合的本发明的化合物，以一定程度
提供药物组合的有益作用的所有试剂的顺序或同时给予。具体地，共同给予是指例如以具
有固定活性物质比例的单一丸剂、胶囊剂、注射剂或其它形式共递送，以及以多个对于每种
化合物分别不同的药物形式共递送。
因此，本发明所述的化合物的给予可以与肿瘤的预防和治疗领域的技术人员已知
的其它疗法一起进行，所述其它疗法包括放射疗法、抑制细胞剂和细胞毒性剂、其它抗肿瘤
剂以及用于抑制医学产品之一的症状或不良事件的试剂的使用。
如果药物形式是固定剂量，则该组合使用了可接受剂量范围内的本发明所述的化
合物。当这些药物的组合不可能时，本发明的物质还可以与其它抗肿瘤剂或细胞毒性剂顺
序给予患者。本发明不局限于给药顺序；本发明的化合物可以与其它抗肿瘤药或细胞毒性
药的给予一起、之前或之后给予患者。
实施例
1.3-氯-5-(2-氯-3,6-二氟代苯)-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的制备
1).将17.7g(100mM)的2-氯-3,6-二氟苯甲醛溶于150ml无水甲醇，加入0.1ml冰乙
酸和16.0g(100mM)的叔丁基-2-氨乙基氨基甲酸酯。将反应混合物在室温下搅拌4小时，然
后冷却至0℃，加入13.3g(350mM)氢化硼钠，维持设定温度(0℃)并在室温下保持过夜。除去
溶剂，将2.5M氢氧化钠溶液(～80ml)加入至残余物中至pH～10，并用二氯甲烷(3×200ml)
萃取，用饱和NaHCO3溶液(2×200ml)清洗合并的萃取液，并然后用水中和反应，并干燥，除
去溶剂，通过色谱法分离残余物。制备：24.9g(78％)1a。
2).向10.1g(55mM)3,4,6-三氯哒嗪在80ml无水N-甲基吡咯烷酮中的溶液中加入
16.0g(50mM)的1a和9.6ml(55mM)的Hunig氏碱。在70℃在氩气氛中将反应混合物搅拌90小
时(TLC控制)。真空除去N-甲基吡咯烷酮，将残余物溶于300ml二氯甲烷并用饱和NaHCO3溶
液清洗(2×150ml)，然后用水中和反应，干燥，真空下除去溶剂，从二乙醚重结晶出残余物。
制备：15.7g(67％)1b。
3).将9.4g(20mM)1b在100ml无水二氯甲烷中的溶液冷却至-5℃并加入25ml20％
(v/v)的三氟乙酸在无水二氯甲烷中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌18小时，除去溶
剂，用无水乙醚(3×75ml)清洗残余物并干燥。制备：9.2g(96％)1c。
4).将8.7ml(0.05摩尔)Hunig氏碱加入至9.6g(20mM)1c在无水N-甲基吡咯烷酮中
的搅拌溶液中，并将所得混合物在100℃静置10小时(TLC控制)，冷却，真空下除去溶剂，将
200ml饱和NaHCO3溶液加入至残余物中并过滤所形成的沉淀物，用水清洗(3×50ml)，干燥
并通过色谱法分离。制备：1.7g(25％)的化合物1，m/z＝330.03。
2.3-(3-(5-(2,6-二氯-3-氟代苄基)-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪-3-基)-1,
2,4-噁二唑-5-基)丙酸酯的制备。
1).将1.4g(12mM)氰化锌和0.37g(0.5mM，5摩尔％)与二氯甲烷复合的Pd(dppf)加
入至4.48g(10mM)2a在40ml无水N-甲基吡咯烷酮中的溶液中，并在100℃在氩气氛中搅拌12
小时(TLC控制)。将所得混合物倒入200ml1M氰化钾溶液。用二氯甲烷(3×100ml)萃取所得
溶液。合并有机相，用水清洗至中性反应，干燥并在真空下除去溶剂。通过色谱法分离残余
物。制备27％的2b。
2).将2.2g(5mM)2b溶于30ml乙醇并加入0.7ml(10mM)50％的羟胺水溶液。将所得
混合物在45℃下搅拌6小时。除去溶剂。制备：0.94g(95％)的偕胺肟2c，其使用时无需进一
步纯化。
3).将0.94g(2mM)的偕胺肟2c溶于30ml无水乙腈并加入0.38ml(2.2mM)Hunig氏碱
和0.31g(2.1mM)丁二酸的酰氯单甲酯。将反应混合物在室温下搅拌4小时，除去溶剂，将残
余物用水(2×5ml)在过滤器上清洗，干燥并加入20ml甲苯，回流2小时(TLC控制)。将甲苯蒸
馏，将残余物溶于二氯甲烷(30ml)并加入1ml20％三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液。使反应
混合物静置过夜。将30ml饱和NaHCO3溶液加入至反应混合物中，用水清洗至中性反应并干
燥。真空下除去溶剂，通过色谱法分离残余物。制备：42％的化合物2，m/z＝446.07。
3.5-(5-(1-(2,6-二氯-3-氟代苄基)乙基)-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪-3-
基)-3-环己基-1,2,4-噁二唑的制备。
1).将9mg(20mM)3a悬浮于20ml乙腈中，加入3.5g(22mM)羰二咪唑并搅拌1小时。将
3.1g(22mM)的环己基偕胺肟(通过标准程序从环己烷羧酸腈制备)加入至反应混合物。将反
应混合物搅拌2小时，然后除去溶剂。将30ml无水DMF加入至残余物，并在100℃在氩气氛中
搅拌6小时。真空下除去溶剂，将残余物溶于二氯甲烷，用水清洗，干燥，除去溶剂，通过色谱
法分离残余物。制备：42％的3b。
2).将3.4g(6mM)3b溶于10ml无水二氯甲烷并加入5ml20％的三氟乙酸在二氯甲
烷中的溶液。将反应混合物搅拌8小时，除去溶剂，将20ml饱和NaHCO3水溶液加入至残余物，
过滤所形成的沉淀物，用水清洗并干燥。制备：94％的化合物3，m/z＝460.16。
4.4-((5-(5-(2-氯-3,6-二氟苄基)-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪-3-基)-1,
3,4-噁二唑-2-基)甲基)-吗啉的制备
1).将9g(20mM)4a溶于20ml甲醇并加入2.2ml(45mM)的水合肼。将反应混合物搅拌
4小时。除去溶剂，并与5ml水一起研磨残余物，过滤，用水清洗(2×10ml)并干燥。制备：97％
的4b。
2).将8.2g(18mM)4b溶于10ml无水乙腈，加入2.8ml(20mM)三乙胺，然后滴加3.5g
(18mM)吗啉乙酸的咪唑盐(imidazolide)(通过吗啉乙酸和羰二咪唑的标准方法制备)在
20ml乙腈中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌2小时。除去溶剂，用水清洗(2×5ml)残余
物，干燥并在下一阶段使用而无需进一步纯化。制备：83％的4c。
3).将7g(12mM)的二酰基肼4c溶于10mlPOCl3，并将反应混合物在50℃搅拌4小时
(TLC控制)，冷却并倒入冰中，使用NaHCO3碱化。将所得混合物用二氯甲烷(2×100ml)萃取，
用水清洗合并的有机相至中性反应，除去溶剂，通过色谱法分离残余物。制备：31％的化合
物4，m/z＝463.13。
5.2-(5-(5-氯-2-甲氧苄基)-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪-3-基)-5-(哌啶-
4-基)-1,3,4-噁二唑的制备。
1).将9g(20mM)5a溶于20ml甲醇并加入2.2ml(45mM)的水合肼。将反应混合物搅拌
4小时。除去溶剂，并与5ml水一起研磨残余物，过滤，用水清洗(2×10ml)并干燥。制备：97％
的5b。
2).将8.1g(18mM)酰肼5b溶于10ml无水乙腈，加入2.8ml(20mM)三乙胺，然后滴加
5g(18mM)Boc-烟酸的咪唑盐(imidazolide)(通过烟酸和羰基二咪唑的标准方法制备)在
20ml乙腈中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌2小时。除去溶剂，用水清洗(2×5ml)残余
物，干燥并在下一阶段使用而无需进一步纯化。制备：78％的5c。
3).将9.9g(15mM)的二酰基肼5c溶于10mlPOCl3，并将反应混合物在50℃搅拌4小
时(TLC控制)，冷却并倒入冰中，使用NaHCO3碱化。将所得混合物用二氯甲烷(2×100ml)萃
取，用水清洗合并的有机相至中性反应，除去溶剂，通过色谱法分离残余物。制备：24％的化
合物5，m/z＝441.17。
6.3-[5-(1-甲基乙基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-[1-(2,5-二氯苯基)乙基]-5,6,
7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的制备。
1).将9.3g(20mM)6a溶于20ml甲醇并加入2.2ml(45mM)的水合肼。将反应混合物搅
拌4小时。除去溶剂，并与5ml水一起研磨残余物，过滤，用水清洗(2×10ml)并干燥。制备：
95％的6b。
2).将7.9g(18mM)酰肼6b溶于10ml无水乙腈，加入2.8ml(20mM)三乙胺，然后滴加
2.5g(18mM)异丁烷酸(isobutaneacid)的咪唑盐(imidazolide)(通过异丁烷酸和羰二咪
唑的标准方法制备)在20ml乙腈中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌2小时。除去溶剂，用
水清洗(2×5ml)残余物，干燥并在下一阶段使用而无需进一步纯化。制备：83％的6c。
3).将8g(15mM)的二酰基肼6c溶于10mlPOCl3，并将反应混合物在50℃搅拌4小时
(TLC控制)，冷却并倒入冰中，使用NaHCO3碱化。将所得混合物用二氯甲烷(2×100ml)萃取，
用水清洗合并的有机相至中性反应，除去溶剂，通过色谱法分离残余物。制备：31％的化合
物6，m/z＝418.11。
7.2-(4-(5-(5-(2,6-二氯-3-氟代苄基)乙基)-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪-
3-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-基)乙醇的制备。
1).将9.4g(20mM)7a溶于20ml甲醇并加入2.2ml(45mM)的水合肼。将反应混合物搅
拌4小时。除去溶剂，并与5ml水一起研磨残余物，过滤，用水清洗(2×10ml)并干燥。制备：
95％的7b。
2).将50ml无水乙醇加入至2.8g(20mM)4-氰-1-甲基哌啶在50ml无水二乙醚中的
溶液。将反应混合物冷却至0℃并加入45mM氯化氢在100ml乙醚中的溶液。将反应混合物搅
拌8小时，除去溶剂，将残余物溶于200ml无水乙醇，并分批加入2.8g(40mM)乙醇钠，从而将
温度维持在低于+10℃。将反应混合物搅拌30分钟，过滤出沉淀物，将8.5g(18mM)酰肼7b加
入至滤液并搅拌2小时。除去溶剂，将50ml无水甲苯加入至残余物，并将所得混合物回流8小
时。除去溶剂，通过色谱法分离残余物。制备：28％的7c。
3).将20ml20％的三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液加入至3.1g(5mM)三嗪7c在50ml
无水二氯甲烷中的溶液。将反应混合物搅拌8小时，除去溶剂，将20ml饱和NaHCO3水溶液加
入至残余物。过滤出所得沉淀物，用水清洗并干燥。制备：98％的化合物7，m/z＝506.15。
8.5-(2,5-二氯苄基)-3-(5-(三氟甲基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)-6,7-二氢吡嗪
[2,3-c]哒嗪的制备。
1).将9.4g(20mM)8a溶于20ml甲醇并加入2.2ml(45mM)的水合肼。将反应混合物搅
拌4小时。除去溶剂，并与5ml水一起研磨残余物，过滤，用水清洗(2×10ml)并干燥。制备：
95％的8b。
2).将8.5g(18mM)酰肼8b加入至2.8g(20mM)三氟乙酰胺在50ml无水二噁烷中的溶
液并搅拌2小时，然后回流8小时。除去溶剂，通过色谱法分离残余物。制备：31％的8c。
3).将20ml20％的三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液加入至2.8g(5mM)三嗪8c在50ml
无水二氯甲烷中的溶液。将反应混合物搅拌8小时，除去溶剂，将20ml饱和NaHCO3水溶液加
入至残余物。过滤出所得沉淀物，用水清洗并干燥。制备：92％的化合物8，m/z＝447.04。
9.3-(5-氮杂环丁烷-3-基甲基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)-5-(1-(2,5-二氯苯基)
乙基)-6,7-二氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的制备。
1).将9.3g(20mM)9a溶于20ml甲醇并加入2.2ml(45mM)的水合肼。将反应混合物搅
拌4小时。除去溶剂，并与5ml水一起研磨残余物，过滤，用水清洗(2×10ml)并干燥。制备：
95％的9b。
2).将40mM无水乙醇加入至4.3g(20mM)1-对甲氧基苄基-3-氰甲基氮杂环丁二烯
(cyanomethylazete)在100ml乙醚中的溶液。将反应混合物冷却至0℃，并加入45mM氯化氢
在100ml乙醚中的溶液。将反应混合物搅拌8小时，除去溶剂，将残余物溶于200ml无水乙醇
并分批加入2.7g(40mM)乙醇钠，从而将温度维持在低于+10℃。将反应混合物搅拌30分钟，
过滤出沉淀物，将以上阶段获得的8.4g(18mM)酰肼9b加入至滤液并搅拌2小时。除去溶剂，
将50ml无水甲苯加入至残余物，并将所得混合物回流8小时。除去溶剂，通过色谱法分离残
余物。制备：14％的9c。
3).将1.1g(2mM)三嗪9c在20ml无水三氟乙酸中的溶液搅拌8小时，除去溶剂，将
10ml饱和NaHCO3水溶液加入至残余物。过滤出所得沉淀物，用水清洗并干燥。制备：53％的
化合物9，m/z＝444.13。
10.5-(1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙基)-N-(4-(吡咯烷-1-羰基)苯基)-5,6,7,8-
四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪-3-甲酰胺的制备。
1).将吡咯烷(320mg，4.5mM)加入至4-硝基苯甲酸(500mg，3mM)、HATU(1.71g，
4.5mM)和Hunig氏碱(1.16g，9mM)在DMF中的溶液。在室温下将反应混合物搅拌过夜。除去溶
剂，通过色谱法分离残余物。制备：0.52g(79％)的10a。
2).将10％Pd/C(200mg)加入至1.7mg10a在甲醇中的溶液。在室温下，将混合物氢
化1小时。过滤反应混合物，从滤液除去溶剂。制备：0.28mg(87％)的10b。
3).将HATU(0.2mg，55mM)，然后是Hunig氏碱(95mg，0.73mM)加入至10c(174mg，
0.37mM)在10mlDMF中的溶液。将混合物在室温下搅拌30分钟并加入10b(104mg，0.55mM)。
将反应混合物在室温下搅拌1.5小时。除去溶剂，通过色谱法分离残余物。制备10d(169mg，
71％)。
4).将1ml无水三氟乙酸加入至10d(169mg，0.26mM)在3ml二氯甲烷中的溶液。将反
应混合物在室温下搅拌1小时，除去溶剂，将10ml饱和NaHCO3水溶液加入至残余物至pH＝9。
用二氯甲烷(4×5ml)萃取所得混合物。干燥合并的有机相，除去溶剂，通过色谱法分离残余
物。制备：41％的化合物10(58mg)，m/z＝542.14。
11.5-(5-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(4-(4-(二甲基氨)哌啶-1-基)-2-甲氧基苯
基)-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪-3-胺的制备。
1).将N,N-二甲基哌啶-4-胺(374mg，2.92mM)和K2CO3(0.808g，5.84mM)加入至5-
氟-2-硝基苯胺(500mg，2.92mM)在3mlDMF中的溶液。将反应混合物在120℃下搅拌18小时。
将饱和NaHCO3溶液加入至反应混合物，用乙酸乙酯萃取所得混合物。通过色谱法纯化有机
相。制备：88％(0.712g)的11a。
2).在氩气氛中将化合物11a(250mg，0.9mM)溶于10ml乙醇中，加入10％Pd/C
(0.06g)。在2个大气压下，氢化4小时。通过硅藻土过滤器(才利特(Celite))过滤反应混合
物并加入氯化氢在乙醇中的溶液。浓缩滤液以制备11b(200mg，88％)。
3).将40mg(0.16mM)11b加入至化合物11c(74mg，0.16mM)在1ml2-甲氧乙醇中的
溶液。将反应混合物在110℃搅拌18小时。将饱和Na2CO3溶液加入至混合物，用乙酸乙酯萃取
溶液并通过色谱法分离。制备：23％(25mg)化合物11d。
4).将1ml无水三氟乙酸加入至11d(175mg，0.26mM)在3ml二氯甲烷中的溶液。将反
应混合物在室温下搅拌1小时，除去溶剂，将10ml饱和NaHCO3水溶液加入至残余物至pH＝9。
用二氯甲烷(4×5ml)萃取所得混合物。干燥合并的有机相，除去溶剂，通过色谱法分离残余
物。制备：45％的化合物11(67mg)，m/z＝575.24。
12.5-(1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙基)-3-(6-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-5,6,7,
8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的制备。
1).将1g(4.2mM)2,5-二溴吡啶和吡咯烷(1.5ml)的混合物加热至110℃，90分钟。
真空除去过量的吡咯烷，将残余物加入至NaHCO3的水溶液。用乙酸乙酯萃取所得混合物。除
去溶剂以制备：55％(0.52g)的12a。
2).将0.52g(2.3mM)的12a在15mlTHF中的溶液冷却至-78℃并滴加1.7ml1.6M的
正丁基锂在己烷中的溶液。将反应混合物搅拌30分钟，然后加入2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲
基-1,3,2-二杂氧戊硼烷(511mg，2.7mM)。将混合物在室温下静置2小时。用NaHCO3的水溶液
使反应淬灭。用乙酸乙酯萃取混合物，使用Na2SO4干燥并除去溶剂。将所得硼酸盐以未纯化
形式用于后续反应。制备：190mg(30％)的12b。
3).将223mg(0.5mM)的12c和165mg(0.6mM)的12b溶于6:1的甲苯和乙醇的混合物。
将25mgPd(PPh3)4和1ml2MNa2CO3溶液加入至所述溶液。将所得混合物在80℃加热8小时。
将反应混合物用CH2Cl2稀释，使用MgSO4干燥，过滤，浓缩并通过凝胶色谱纯化。制备：28％
(78mg)的12c。
4).将1ml无水三氟乙酸加入至12d(145mg，0.26mM)在3ml二氯甲烷中的溶液。将反
应混合物在室温下搅拌1小时，除去溶剂，将10ml饱和NaHCO3水溶液加入至残余物至pH＝9。
用二氯甲烷(4×5ml)萃取所得混合物。干燥合并的有机相，除去溶剂，通过色谱法分离残余
物。制备：45％的化合物12(54mg)，m/z＝472.13。
13.(R)-3-氯-5-(1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙基)-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪
的制备
1).将4.3ml(～0.025摩尔)N,N-二异丙基乙胺加入至4.18g(0.02摩尔)(S)-1-(2,
6-二氯-3-氟苯基)乙醇在50ml无水二氯甲烷中的溶液，将该混合物冷却至-5℃并滴加
1.6ml(0.021摩尔)甲磺酰氯化物在10ml无水二氯甲烷中的溶液，维持预定温度。将反应混
合物在0℃搅拌2小时，并在室温下再搅拌4小时，然后将10ml饱和NaHCO3溶液加入至反应混
合物，分离有机相并用水清洗至中性反应，干燥溶液并除去溶剂。制备：5.3g(93％)的13a，
其在下一阶段中使用时无需进一步纯化。
2).在0℃将3.20g(0.02摩尔)叔丁基2-氨乙基氨基甲酸酯和3.5ml(0.02摩尔)N,
N-二异丙基乙胺在20ml无水乙腈中的混合物溶液加入至5.17g(0.018摩尔)13a在25ml无水
乙腈中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌18小时，除去溶剂，将残余物溶于200ml乙醚并
用饱和NaHCO3清洗(2×50ml)，然后用水清洗至中性反应。将溶液干燥并除去溶剂，在真空
中干燥残余物并通过色谱法(CН2Cl2->CH2Cl2:MeOH(4:1))分离。制备：4.86(77％)的13b。
3).将2.1ml(0.012摩尔)N,N-二异丙基乙胺和2.20(0.012摩尔)的3,4,6-三氯哒
嗪加入至3.51(0.01摩尔)13b在10ml无水N-甲基吡咯烷鎓中的溶液；将反应混合物在氩气
氛中无水进入的条件下在85℃搅拌200小时(TLC控制)。真空下除去溶剂，将残余物溶于
300ml二氯甲烷并用饱和NaHCO3清洗(1×50ml)，然后用水清洗至中性反应。干燥溶液并除
去溶剂，真空干燥残余物并通过色谱法分离(CН2Cl2→CH2Cl2:MeOH(4:1))。制备：2.84g
(57％)的13c。
4).将20ml20％的三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液加入至2.50g(5mM)13c在100ml
二氯甲烷中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌14小时，加入200ml二氯甲烷和150饱和
NaHCO3溶液，分离有机相，用水清洗至中性反应，干燥并除去溶剂，将残余物溶于10ml无水
N-甲基吡咯烷酮，加入1.2ml(～0.07摩尔)N,N-二异丙基-乙胺，并将反应混合物在氩气氛
中在无水进入的条件下在100℃搅拌60小时(TLC控制)。真空除去溶剂，将残余物溶于300ml
二氯甲烷并用饱和NaHCO3清洗(2×100ml)，然后用水清洗至中性反应，干燥，除去溶剂，将
残余物真空干燥并通过色谱法分离(己烷：乙酸乙酯1:1→CH2Cl2→CH2Cl2:MeOH(9:1))。制
备：415mg(23％)化合物13，m/z＝360.01，和418mg化合物13d。
14.3-氯-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的非手性5-取代衍生物的合成的实施
例
与化合物1类似地合成了3-氯-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的非手性5-取代衍
生物，所述化合物1的合成方法如上所述。表中提供了所制备的化合物的实例。
15.3-氯-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,5-c]哒嗪的5-取代衍生物的手性对映异构体的
混合物的合成的实施例
与化合物1类似地合成了3-氯-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的5-取代衍生物的
手性对映异构体的混合物，所述化合物1的合成方法如上所述。表中提供了所制备的化合物
的实例。
16.3-氯-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的手性5-取代衍生物的合成的实施例
与化合物13类似地合成了3-氯-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的手性5-取代衍
生物，所述化合物13的合成方法如上所述。表中提供了所制备的化合物的实例。
17.3-(5-苄基-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,5-c]哒嗪-3-基)-1,2,4-噁二唑的5-取代
衍生物的合成的实施例
与化合物2类似地从相应Boc-保护的3-氯-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的5-取
代衍生物合成了3-(5-苄基-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪-3-基)-1,2,4-噁二唑的5-取
代衍生物，所述化合物2的制备方法如上所述。表中提供了所制备的化合物的实例。
18.3-(5-苄基-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,5-c]哒嗪-3-基)-1,2,4-噁二唑的5-取代
衍生物的合成的实施例
与化合物3类似地从相应Boc-保护的3-氯-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的5-取
代衍生物合成了5-(5-取代的-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪-3-基)-1,2,4-噁二唑的3-
取代衍生物，所述化合物3的合成方法如上所述。表中提供了所制备的化合物的实例。
19.2-(5-取代的-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪-3-基)-1,3,4-噁二唑的5-取
代衍生物的合成的实施例
与化合物4类似地从相应Boc-保护的3-氯-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的5-取
代衍生物合成了5-(5-取代的-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪-3-基)-1,3,4-噁二唑的2-
取代衍生物，所述化合物4的合成方法如上所述。以下提供了所制备的化合物的实例。
20.3-(5-取代的-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪-3-基)-1,2,4-三唑的5-取代
衍生物的合成的实施例
与化合物7类似地从相应Boc-保护的3-氯-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的5-取
代衍生物合成了3-(5-取代的-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪-3-基)-1,2,4-三唑的5-取
代衍生物，所述化合物7的合成方法如上所述。表中提供了所制备的化合物的实例。
21.5-取代的-N-苯基-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪-3-甲酰胺的取代衍生物
的合成的实施例
与化合物10类似地从相应Boc-保护的3-氯-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的5-
取代衍生物合成了5-取代的-N-苯基-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪-3-甲酰胺的取代衍
生物，所述化合物10的合成方法如上所述。表中提供了所制备的化合物的实例。
22.5-取代的-N-苯基-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪-3-酰胺的取代衍生物的
合成的实施例
与化合物11类似地从相应Boc-保护的3-氯-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的5-
取代衍生物合成了5-取代的-N-苯基-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪-3-酰胺的取代衍生
物，所述化合物11的合成方法如上所述。表中提供了所制备的化合物的实例。
23.5-取代的-3-苯基-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的取代衍生物的合成的实
施例
与化合物12类似地从相应Boc-保护的3-氯-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的5-
取代衍生物合成了5-取代的-3-苯基-5,6,7,8-四氢吡嗪[2,3-c]哒嗪的取代衍生物，所述
化合物12的合成方法如上所述。表中提供了所制备的化合物的实例。
24.化合物生物活性的特征
通过多种方法研究了本发明所述的化合物的生物活性。例如，研究了这些化合物
的激酶活性抑制。一些化合物在纳摩尔浓度对激酶ALK、ALKL1196M、EGFR、ROS1、MET显示了
显著抑制活性。另外，一些化合物在1-1000nM的浓度对细胞Karpas-299、SU-DHL-1、NCI-
H2228、NCI-H3122显示了显著的抗增殖活性。
具有抑制和抗增殖活性的化合物的说明性实例如下所示。
通过以下非限制性实施例进一步说明了本发明。
24.1.激酶的抑制
已对于本发明所述的化合物研究了对肿瘤疾病、慢性炎性疾病以及其它疾病的治
疗所关心的激酶抑制能力。根据所述方法研究了它的抑制的激酶列表包括(但并不在根本
上限于)激酶ALK、JAK2、BRAF、MET、TIE-2、FLT3、ABL、LCK、LYN、SRC、FYN、SYK、ZAP70、ITK、
TEC、BTK、EGFR、ERB2、PDGFRa、PDGFRb、KFR、IGF-1R、FLT1、TEK、AKT、ROS1、EPHA1以及突变体
形式，包括赋予对现有肿瘤疾病治疗方法的耐受性的那些，例如，突变体形式ALKL1196M、
C1156Y、F1174L、G1269A(Choi,Y.L.等人,NEnglJMed,2010,363,1734-9；Sasaki,T.等
人,CancerRes,2010,70,10038-43；Doebele,R.C.等人,ClinCancerRes,2012)。
在杆状病毒(baculovirus)(例如，Sf21)感染的昆虫细胞或大肠杆菌(E.Coli)细
胞中表达了连接到谷胱甘肽-S-转移酶(GST)或聚组氨酸片段上的处于激酶域或全长蛋白
形式的激酶。在从细胞分离后，根据已知的方法通过亲和色谱将蛋白质纯化至几乎完全均
一。在一些情况下，在活性测量前，将激酶与纯化或部分纯化的调控多肽共表达或混合。
根据已知的规程确定激酶的活性和抑制。将ATP对标记的33PO4在连接于微量滴定
板携带基底的生物活性表面的合成底物聚(Glu,Tyr)4:1或聚(Arg,Ser)3:1上的转移率作
为对酶活性的量度。在培育一段时间(120分钟)后，用0.5％的磷酸清洗携带基底，加入液体
闪烁剂，并根据液体闪烁检测器中闪烁计数的量确定转移的磷酸盐的量。IC50对应于将转移
至底物并与携带基底连接的33P的量降低50％的物质浓度。
基于测量磷酸盐向包含酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸并且以溶解或固定化形式存在的
肽或多肽的转移程度，其它方法也可以用于确定激酶抑制。
本发明所述的化合物对多种激酶具有纳摩尔IC50值，所述激酶包括ALK、MET、EGFR
和ROS1。另外，本文所述的化合物是选择性的，并且在高达1000nM的浓度不显著抑制激酶，
如ABL、AKT2、AURA、AURC、AXL、CDK2、CTK、FAK、IGF1R、IR、IRR、ITK、mTOR、MUSK、PKA、PKCθ、
RON、SYK、SRC、TYRO3、ZAP70。
以下是抑制ALK激酶的IC50值小于100nM的化合物列表。
抑制激酶ALKL1196M的突变体形式的IC50值小于100nM的化合物列表
抑制激酶ROS1的IC50值小于1μM的化合物列表
抑制激酶EGFR(d746-750)的突变体形式的IC50值小于10μM的化合物列表
抑制激酶MET的IC50值小于10μM的化合物列表
24.2.使用细胞培养物的实验
本发明的某些化合物显示出细胞毒性或者抑制肿瘤及其它癌细胞系的生长，并因
此可以用于治疗癌症及其它增殖性疾病。
用于确定抗肿瘤活性的细胞方法是熟知的并且可以用于比较本文所述的化合物
的特征。一般说来，对细胞增殖和活细胞数目的实验产生了与代谢活性细胞数目成正比的
可检测信号。可以使用任何特征确定化合物的抗肿瘤活性，从而反映暴露于化合物后细胞
代谢活性的降低。通常，该方法使用膜完整性(例如，台盼蓝消除分析)和DNA合成(例如，
BrdU或3H-胸苷掺入的确定)作为细胞存活力的测量。
用于确定细胞增殖的一些方法使用转化为细胞增殖过程中所检测的化合物的试
剂。用于该测定的优选试剂是四唑盐，其包括例如MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二
苯四唑溴化物)、MTS(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-
2H-四唑)、XTT(2,3-双(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-2H-四唑-5-苯胺基甲酰)、INT(2-(4-
碘苯基)-3-(4-硝基苯)-5-苯基四唑)、NBT(2H-四唑,2,2’-(3,3’-二甲氧基[1,1’-二苯
基]-4,4’-二基)双[3-(4-硝基苯)-5-苯基，二氯化合物)(Bernas,T.等人,Biochim
BiophysActa,1999,1451,73-81)。四唑盐向蓝色甲(formazan)衍生物的酶促转化产物
的量的测量是易于通过光谱方法检测的，并且实施以确定细胞增殖。
一般说来，确定细胞增殖的优选方法包括在存在或没有测试物质的情况下在选择
用于生长的培养基中的细胞培育。详细描述了多种原核和真核细胞的生长条件(Ausubel等
人,CurrentProtocolsinMolecularBiology.WileyandSons.2003)。将四唑盐加入至
细胞以确定培育后的细胞增殖，然后确定所形成的甲的数目。通过所处理的细胞的光密
度确定所形成的甲衍生物的数目。
癌细胞系可以用于确定化合物的抗增殖活性，所述癌细胞系如COLO205、DLD-1、
HCT-15、HT29(结肠癌)；HEPG2(肝癌)；K-562(白血病)；A549、NCI-H249、NCI-H2228、NCI-
H3122(肺癌)；Karpas-299、SU-DHL-1(淋巴瘤)；MCF7、MDA-MB-231(乳腺癌)；SAOS-2(骨肉
瘤)；OVCAR-3(卵巢癌)；PANC-1(胰癌)；DU-145、PC-3(前列腺癌)；ACHN、CAKI-1(肾癌)；MG-
63(肉瘤)。
尽管哺乳动物细胞对用于确定化合物的抗增殖活性是优选的，但是也可以将低等
真核细胞如酵母用于该目的。优选地，应使用人、大鼠、小鼠、兔、低等猴、仓鼠和豚鼠细胞
系，这是因为这些生物的细胞系是研究最好的并且表征充分的。
以下是确定化合物对细胞活性的实例。在该实验中，使用细胞系Ba/F3(小鼠前B细
胞)，并通过载体pClneoTM(PromegaCorp.,MadisonWI)稳定转染，所述载体编码了嵌合蛋
白质NPM-ALK，并传递了对G418抗性的选择。对于其中不进行转染的对照系细胞存活来说，
需要白介素IL-3。同时，在不存在IL-3的情况下，表达NPM-ALK的Ba/F3细胞(Ba/F3-NPM-
ALK)是活的，这是因为NPM-ALK的激酶活性导致负责细胞增殖的信号通路的激活。因此，
NPM-ALK激酶的预期抑制阻断了细胞生长信号，其本身在化合物抗增殖活性中是有表现的。
然而，通过加入过量的IL-3，在独立于ALK的机制下引起细胞生长，从而可以克服抗增殖活
性。使用FLT3激酶的类似实验的实例描述于(Weisberg,E.等人,CancerCell,2002,1,433-
43)中。
如下所示，确定了化合物的抑制能力：将细胞Ba/F3-NPM-ALK转移至96-孔板(每孔
15000个)，重复两次。将分析物溶于DMSO中，然后用DMSO和营养培养基将溶液稀释至所需浓
度，对于DMSO的最终浓度不超过按体积计的1％，并将所述溶液转移至具有细胞的孔中。化
合物的最终浓度在0.5nM至10μM的范围内。以和溶液试剂加入量相同的量，将DMSO用作对
照。在将细胞与化合物培育3天后，确定活细胞数目。向其中加入MTT溶液，进行培育，并在
540和620nm确定光密度(活细胞数目与这些波长下的光密度的比率成正比)。根据最足以描
述实验数据的通过计算机处理选择的曲线确定IC50。
可以使用所使用的细胞系确定抗增殖活性，其中重组激酶活性对存活是必需的并
且激酶活性的抑制导致了细胞死亡，其可以通过改变ATP浓度来固定。通过以下程序确定化
合物的抗增殖活性：在含有10％胎牛血清和抗生素的营养培养基RPMI-1640中培养表达受
体酪氨酸激酶例如，ALK的细胞。在对数生长期进行细胞再接种。将细胞转移至384孔培养平
板(每孔5000个细胞)中的50μl生长培养基中，重复两次。将50nl测试化合物的溶液加入至
每个孔中并将细胞在37℃在含有5％CO2的加湿气氛中培育48小时。通过加入15μl试剂
CellTiter-Glo并测量发光性确定存活细胞数目。根据最足以描述实验数据的通过计算机
处理选择的曲线确定IC50。
此外，可以根据以下程序对间变性大细胞淋巴瘤的细胞系KARPAS-299研究本发明
所述的化合物的抗增殖活性。将在RPMI1640生长培养基中培养的KARPAS-299细胞转移至
96孔培养平板(每孔10000个细胞)，重复两次，并以多个浓度(每个孔中的最终容积-100μl)
将分析物在生长培养基中的溶液加入至它们。将固体溶于DMSO中，然后用DMSO将溶液稀释
至所需浓度，与等体积的生长培养基混合并转移至具有细胞的孔中。化合物的最终浓度在
0.5nM至10μM的范围内。DMSO用作对照(以和加入物质的溶液相同的量)。在将细胞与化合物
培育72小时后，确定活细胞数目。出于此目的，除去旧的培养基，将含有5mg/mlPBS的100μl
新鲜培养基和40μlMTS溶液加入至每个孔中。将板在37℃培育2小时，然后将100μlDMSO加
入至每个孔中并混合1分钟。然后，在490nm确定光密度，并与对照(不包含分析物)比较计算
增殖抑制百分比。
具有抗增殖活性的化合物的说明性实例如下所示：
а)-与不存在化合物时相比，实验条件下活细胞数目降低2倍的化合物浓度。
24.3.使用动物的实验
然后，在哺乳动物生物中体内研究在细胞实验中显示出抗增殖活性的化合物。大
部分实验是在啮齿动物如小鼠和大鼠体内进行的。通常，将肿瘤移植到免疫性降低的小鼠
中以减少排异可能性。这些小鼠是例如无胸腺裸鼠和SCID-小鼠(具有严重联合免疫缺陷的
小鼠)。
通常，皮下植入肿瘤，并以特定剂量和特定方案向测试动物注射药物预制剂。通过
肿瘤尺寸的减小确定测试化合物的有效性，这是在常规时间间隔下测量的。将一些肿瘤植
入到身体的其它位点(例如，腹膜内)，并且有效性标准是生物存活的平均时间。通常，在动
物研究过程中比较不同的肿瘤模型，药物预制剂的给药方法和剂量施用方案。
非小细胞肺癌动物模型中的有效性
将雄性无胸腺小鼠用于研究。在氯胺酮-赛拉嗪(ketamine-xylazine)麻醉下，将1
×107个的量的NCI-H3122细胞以0.2mlMatrigel溶液(BDPharmingen)的形式施用于小鼠
左腿。细胞注射后1周，将小鼠分为治疗组和对照组，并根据肿瘤大小随机分配。根据公式V
＝0.5×W2×L计算肿瘤体积。对照动物每天接受0.3ml0.5％的甲基纤维素溶液，治疗组动
物接受0.3ml含有测试剂量药物的0.5％的甲基纤维素混悬液。通过管饲法给予溶液。治疗
持续20天。在治疗后，计算治疗/对照组的平均体积的比值(％T/C)以确定肿瘤生长抑制的
有效性。使用Dunnett氏检验，对数据收集进行统计显著性分析。以下介绍了30mg/kg剂量时
测试化合物的有效性。
间变性大细胞淋巴瘤动物模型中的有效性
将由于Karpas-299细胞的引入而发展出肿瘤的SCID-小鼠用于研究。当肿瘤尺寸
达到220mm3时，将动物分成治疗组和对照组，并通过肿瘤尺寸随机分配。对照动物每天接受
0.3ml0.5％的甲基纤维素溶液，治疗组动物接受0.3ml含有测试剂量药物的0.5％的甲基
纤维素混悬液。通过管饲法给予溶液。治疗持续23天。在治疗后，计算治疗/对照组的平均体
积的比值(％T/C)以确定肿瘤生长抑制的有效性。使用Dunnett氏检验，对数据收集进行统
计显著性分析。以下介绍了30mg/kg剂量时测试化合物的有效性。
25.药物制剂的实施例
以下列组合物的形式，在本发明中提及的物质可以用于人类疾病的预防和治疗
(“物质”表示活性成分)：
片剂Img/片
物质…………………………………100
乳糖Ph.Eur…………………………182.75
交联羧甲纤维素钠…………………12.0
玉米淀粉(5％w/v面团)……………2.25
硬脂酸镁……………………………3.0
片剂IImg/片剂
物质…………………………………50
乳糖Ph.Eur…………………………223.75
交联羧甲纤维素钠…………………6.0
玉米淀粉……………………………15
聚乙烯吡咯烷酮(5％w/v面团)……2.25
硬脂酸镁……………………………3.0
片剂IIImg/片
物质1.0
乳糖Ph.Eur…………………………93.25
交联羧甲纤维素钠…………………4.0
玉米淀粉(5％w/v面团)……………0.75
硬脂酸镁……………………………1.0-76
胶囊剂mg/胶囊剂
物质…………………………………10
乳糖Ph.Eur…………………………488.5
镁……………………………………1.5
用于注射剂I的组合物(50mg/ml)
物质…………………………………5.0％w/v
1M氢氧化钠溶液……………………15.0％w/v
1M氯化氢溶液至pH7.6
聚乙二醇400…………………………4.5％w/v
注射水至100％
用于注射剂II的组合物(10mg/ml)
物质…………………………………1.0％w/v
磷酸钠BP……………………………3.6％w/v
M氢氧化钠溶液………………………15.0％w/v
注射水至100％
用于注射剂III的组合物(1mg/ml，具有pH6的缓冲剂)
物质…………………………………0.1％w/v
磷酸钠BP……………………………2.26％w/v
柠檬酸………………………………0.38％w/v
聚乙二醇400…………………………3.5％w/v
气溶胶Img/ml
物质…………………………………10
三油酸山梨聚糖酯…………………13.5
三氯氟甲烷…………………………910.0
二氯-二氟-甲烷……………………490.0
软膏剂ml
物质…………………………………40mg
乙醇…………………………………300μl
水……………………………………300μl
1-十二烷基氮杂环庚烷酮…………50μl
丙二醇………………………………多至1ml
可以根据常规药物技术制备这些组合物。可以使用例如苯二甲酸乙酸纤维素对片
剂(1)-(3)包裹肠溶衣。喷雾组合物(8)可以结合常规分散剂使用；单油酸脱水山梨糖醇酯、
山梨糖醇聚油酸酯(sorbitanpoluoleat)、聚山梨酯80、聚甘油油酸酯或油酸可以用作助
悬剂来替代三油酸山梨聚糖酯。