一种含溴的苯并吡喃类化合物及其制备和应用.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102199157 A (43)申请公布日 2011.09.28 CN 102199157 A *CN102199157A* (21)申请号 201110069917.3 (22)申请日 2011.03.17 C07D 493/04(2006.01) A61K 31/352(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 3/04(2006.01) (71)申请人 鲁东大学 地址 264025 山东省烟台市芝罘区红旗中路 186 号 (72)发明人 柳全文 张婷 乔青安 吕菊波 (54) 发明名称 一种含溴的苯并吡喃类化合物及其制备和应 用 (57)。

2、 摘要 本发明涉及一种从海洋红藻中分离得到的含 溴苯并吡喃化合物的结构、 制备方法及其在药物 中的应用。 该化合物可作为PTP1B抑制剂， 用于治 疗糖尿病、 肥胖症。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 CN 102199161 A1/1 页 2 1. 一 种 含 溴 的 苯 并 吡 喃 类 化 合 物， 其 特 征 在 于， 英 文 名 称 ： 2， 7-dibromo-3， 8-dihydroxy-5， 10-dihydro-chromeno5， 4， 3-cdechromene ； 中 文 名 称 ： 。

3、2， 7- 二 溴 -3， 8- 二羟基 -5， 10- 二氢 - 苯并吡喃并 5， 4， 3-cde 苯并吡喃 ； 该化合物的结构式如下 ： 2. 一种权利要求 1 所述化合物的制备方法， 其特征在于 ： 将多管藻 (Polysiphonia urceolata) 用约 60 -99的乙醇浸泡提取， 减压回收乙醇， 得浓缩膏， 然后加入水进行 充分混悬， 先后用氯仿和乙酸乙酯进行萃取， 合并氯仿和乙酸乙酯萃取物， 上硅胶柱进行色 谱层析， 先后用氯仿 - 丙酮和氯仿 - 甲醇为洗脱剂， 并以葡聚糖凝胶 Sephadex-LH20 进行 纯化， 从中得到本发明化合物 ： 2， 7- 二溴 -3。

4、， 8- 二羟基 -5， 10- 二氢 - 苯并吡喃并 5， 4， 3-cde 苯并吡喃。 3.一种权利要求1所述化合物的应用， 其特征在于 ： 作为蛋白质酪氨酸磷酸酯酶PTP1B 抑制剂。 4. 按照权利 3 所述化合物的应用， 其特征在于 ： 用于制备治疗糖尿病、 治疗肥胖的药 物。 权 利 要 求 书 CN 102199157 A CN 102199161 A1/4 页 3 一种含溴的苯并吡喃类化合物及其制备和应用 技术领域 0001 本发明涉及一种从海洋红藻中分离得到的化合物的结构、 制备方法及其在药物中 的应用。该化合物可作为 PTP1B 抑制剂， 用于治疗糖尿病、 肥胖症。 背景技。

5、术 0002 随着分子生物学的快速发展， 治疗糖尿病的药物的研究也逐渐转向针对分子靶点 的新型药物。糖尿病在临床上分两类， 1 型和 2 型， 1 型为胰岛素依赖型糖尿病 (IDDM)， 2 型 为非胰岛素依赖型糖尿病 (NIDDM)， 患者中约 90为 2 型糖尿病。且由于改革开放 30 多年 来， 我国居民生活方式的转变， 加之工作强度的下降， 缺乏运动， 肥胖人数增加， 糖尿病患病 人数呈逐年上升趋势。 0003 大量的最新的研究报道证实， 胰岛素抵抗是 2 型糖尿病发展变化过程中的关键因 素， 能有效改善胰岛素抵抗的药物成为 2 型糖尿病新药研究的主要方向之一。 0004 研究证明， 。

6、蛋白质酪氨酸磷酸酯酶 (PTP1B) 主要作用于胰岛素受体并且负调控胰 岛素信号转导通路， 是研究糖尿病治疗药物确切的靶点。对此最为有力的证据来自 PTP1B 基因敲除小鼠， Elchebly 等报道， 运用同源重组的方法产生的 PTP1B 基因敲除的小鼠生长 正常， 有正常的生殖力， 对胰岛素敏感性比含 PTP1B 基因的小鼠显著增强， 而且这一增强作 用与肝脏和骨骼肌中胰岛素受体及胰岛素受体底物 I 磷酸化水平的增强相关 Elchebly M.， eta1.Science， 283， 1544-1548。 不仅如此， PTP1B基因敲除的小鼠对食物诱导的体重增 加和胰岛素抵抗也有拮抗作用，。

7、 Klaman 等所做的实验也得到相似的结果， 发现 PTP1B 基因 敲除的小鼠之所以对食物诱导的体重增加有抵抗作用， 并非减少脂肪细胞的数量， 而是由 于脂肪细胞体积的减少 Klaman L.D.， et al.Molecular and Cellular Biology， 20(15) ： 5479-5489。这些实验充分证明了 PTP1B 在胰岛素敏感性方面的重要作用和影响脂肪储存 的作用。同时也从实验上明确了它是治疗 2 型糖尿病和肥胖症方面是一个药物作用靶点。 0005 从药物发现的历史来分析， 在认识了药物的作用靶点之后， 找到某种类型能够作 用于这一靶点的先导化合物， 则显得尤。

8、其重要。海洋中资源丰富， 生态环境独特， 很多海藻 能产生一些活性显著的次生代谢产物。发明人为了寻找具有 PTP1B 酶抑制剂作用的先导化 合物， 从海洋红藻多管藻中得到一个结构新颖的新化合物， 活性测试表明其对 PTP1B 酶具 有良好的抑制作用， 可用于治疗 2 型糖尿病及肥胖。 发明内容 0006 本发明目的是提供一种从海洋红藻多管藻中提取分离纯化得到的新化合物， 经活 性测定有 PTP1B 酶抑制剂活性。本发明的另一目的是提供该化合物的制备方法。 0007 一种新化合物， 其结构如下 ： 0008 说 明 书 CN 102199157 A CN 102199161 A2/4 页 4 0。

9、009 英 文 名 称 ： 2， 7-dibromo-3， 8-dihydroxy-5， 10-dihydro-chromeno5， 4， 3-cde chromene ； 中文名称 ： 2， 7- 二溴 -3， 8- 二羟基 -5， 10- 二氢 - 苯并吡喃并 5， 4， 3-cde 苯并 吡喃。 0010 上述化合物的制备方法为 ： 将多管藻用约 60 -99的乙醇浸泡提取， 减压回收 乙醇， 得浓缩膏， 然后加入水进行充分混悬， 先后用氯仿和乙酸乙酯进行萃取， 合并氯仿和 乙酸乙酯萃取物， 上硅胶柱进行色谱层析， 先后用氯仿 - 丙酮和氯仿 - 甲醇为洗脱剂， 并以 葡聚糖凝胶 Sep。

10、hadex-LH20 进行纯化， 从中得到本发明化合物， 经核磁共振 NMR、 质谱 MS 及红外光谱 IR 等波谱手段进行分析， 确定此化合物为 2， 7-dibromo-3， 8-dihydroxy-5， 10-dihydro-chromeno5， 4， 3-cdechromene。 0011 上述新化合物可作为蛋白质酪氨酸磷酸酯酶 PTP1B 抑制剂， 用于制备蛋白质酪氨 酸磷酸酯酶 PTP1B 抑制剂的药物， 可用于制备治疗各种糖尿病、 肥胖症的药物。 0012 本发明具有如下优点 ： 0013 本发明化合物为一种新化合物， 结构新颖， 易于制备和工业化应用， 本发明化合物 对蛋白质酪。

11、氨酸磷酸酯酶 PTP1B 有较好的抑制作用， 本发明化合物作为选择性的 PTP1B 抑 制剂在糖尿病和肥胖症的治疗中有重要的价值。 具体实施方式 0014 实施例 1 0015 本发明通过下列步骤实施 ： 0016 本发明通过对海洋生物多管藻 (Polysiphonia urceolata) 进行提取分离。多管 藻阴凉风干， 取 10Kg， 以 95乙醇在室温下浸提 3 次， 每次用乙醇 20 升， 然后合并乙醇浸提 液， 在温度 45减压回收乙醇至无乙醇味， 加热适量蒸馏水使之混悬， 先后分别用氯仿和 乙酸乙酯各萃取 4-6 次， 在温度 45条件下， 分别减压回收氯仿和乙酸乙酯， 合并氯仿。

12、和 乙酸乙酯萃取液， 得棕褐色浸膏 150g。将 150g 浸膏上硅胶柱， 以氯仿丙酮不同比例为洗 脱剂 (100 0， 50 1， 20 1， 10 1， 5 1， 2 1， 0 100) 进行洗脱， 分别收集， 并以 薄层板展开进行检测 ( 三氯化铁试液为显色剂 ) 并合并， 共分成 8 个粗分部位 (1-8)。取 第 3 个部位 (16.0g) 上硅胶柱， 以氯仿丙酮 (9 1) 为洗脱剂， 分成 3 个流分 (3-1、 3-2、 3-3)， 取流分 3-2( 约 4g) 上硅胶柱， 以氯仿甲醇 (20 1) 为洗脱剂得本发明化合物， 并 以凝胶柱 Sephadex-LH20 纯化 ( 。

13、用甲醇洗脱 ) 得纯化合物约 90 毫克。经波谱分析， 此化合 物为 ： 0017 2， 7-dibromo-3， 8-dihydroxy-5， 10-dihydro-chromeno5， 4， 3-cdechromene( 英 文 ) ； 2， 7- 二溴 -3， 8- 二羟基 -5， 10- 二氢 - 苯并吡喃并 5， 4， 3-cde 苯并吡喃 ( 中文 )。 0018 上述化合物具有如下理化特征 ： 0019 化合物为针状晶体， 分子式为 C14H8Br2O4； 说 明 书 CN 102199157 A CN 102199161 A3/4 页 5 0020 紫外光谱 UV(MeOH) 。

14、： max(log)229.2(log4.86)， 289.6(log4.46)， 320.0(log3.76)nm ； 0021 红外光谱 IR(KBr)max： 3490， 2921， 1615， 1500， 1417， 1340， 1240， 1091， 1016， 952， 928， 875cm-1； 0022 低分辨质谱 EI-MS ： 402400398(M+4+ M+2+ M+ 1 2 1) ； 0023 高分辨质谱 HREIMS ： m/z found 397.8790(M+)， ( 计算值 C14H879Br2O4， 397.8789) ； 0024 核磁共振氢谱 1H NM。

15、R(400MHz， acetone-d 6) ： 7.10(2H， s， H-1， H-6)， 5.35(2H， d， J 13.2Hz， H-5b， H-10a)， 5.21(2H， d， J 13.2Hz， H-5a， H-10b) ； 0025 核磁共振碳谱 13C NMR(100MHz， acetone-d 6) ： 144.4(s， C-3， C-8)， 137.3(s， C-3a， C-8a)， 122.6(d， C-1， C-6)， 121.2(s， C-5a， C-10a)， 115.1(s， C-10b， C-10c)， 110.6(s， C-2， C-7)， 68.5(t，。

16、 C-5， C-10)。 0026 实施例 2 PTP1B 抑制剂活性测试 ： 0027 测试原理 ： 利用分子生物学手段在大肠杆菌系统表达人源蛋白质酪氨酸磷酸酯 酶 1B(hPTP1B) 催化活性域， 经纯化后的 hPTP1B 重组蛋白能水解底物对硝基苯磷酸二钠盐 (pNPP) 的磷酯键， 得到的产物在 410nm 处有很强的光吸收， 因此可以通过直接检测 410nm 处光吸收的变化以观察酶的活性变化以及化合物对酶活性的抑制情况。 标准的测活体系如 下 ： 10mM Tris.HCl， PH7.6， 10mM pNPP， 2 DMSO， 100nM hPTP1B。 0028 0029 观察指。

17、标 ： 动态测定波长为 410nm 处的光吸收， 时间为 3 分钟， 其动力学曲线一级 反应的斜率作为酶的活性指标。 0030 实验结果的评判与解释 ： 0031 筛选结果是当化合物的浓度为 10g/ml 时对酶活性的百分抑制率， 抑制活性高 于 50时， 按常规筛选出 IC50， 阳性对照正钒酸钠的 IC50为 2M。 0032 实验结果 ： 本发明化合物对 PTP1B 酶抑制活性的 IC50为 4.9M 0033 实验结论 ： 通过分子生物学试验， 可以看出该化合物对蛋白质酪氨酸磷酸酯酶 PTP1B 有较好的抑制作用。 0034 由于本发明的化合物具有抑制蛋白质酪氨酸磷酸酯酶 PTP1B 。

18、的活性， 按照常规的 制药技术， 可以将其制备成任何一种常规药剂， 例如， 片剂， 丸剂， 胶囊剂， 颗粒剂， 口服液， 注射用粉针剂等。 0035 实施例 3 对正常小鼠糖耐量的影响 0036 实验方法雄性小鼠 40 只， 体重 24-28g， 测空腹血糖值后， 随机分为 4 组 ： 生理盐水 对照组 ； 本发明化合物两个剂量组低、 高剂量组(20、 50mg/kg) ； 拜糖平(18mg/kg)组。 各 组分别 ig0.5mL 药液， 10min 后 ig 淀粉 (10g/kg)0.5mL， 分别于给淀粉后 0.5、 1、 2h 尾部取 血测血糖值。 0037 实验结果由表 1 可见， 正。

19、常小鼠给淀粉后 0.5、 1h 血糖显著升高。本发明化合物能 说 明 书 CN 102199157 A CN 102199161 A4/4 页 6 够显著降低小鼠给淀粉后 0.5、 1h 血糖值。 0038 表 1TPPU 对正常小鼠糖耐量的影响 (xs， ， n 10) 0039 0040 与对照组相比， *P 0.05 *P 0.01 0041 应用例 1 0042 取实施例 1 制备的化合物 1 克， 加入赋形剂药用淀粉 29 克， 混合均匀， 制颗粒， 整 粒压片， 制得片剂 100 片， 每片含化合物 10 毫克。 0043 应用例 2 0044 取实施例 1 制备的化合物 2 克， 加入到蒸馏水 1998 克， 加入矫味剂和防腐剂适量， 制成口服液， 每毫升含化合物 10 毫克。 说 明 书 CN 102199157 A 。