一种环氧炔醇类化合物及其制剂和用途技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一类新的光学异构体及其制剂和用途。
背景技术
天然多炔醇主要存在于茄科，桔梗科，五加科，海桐花科，木犀花科，檀香科和伞形科等植物中，另外在担子菌中也有一定的分布。研究表明人参中所含的聚乙炔醇类化合物具有显著抗炎、抗血小板凝聚、抑制细胞氧化酶、抑制白血病细胞生长，抑制血栓形成的作用，此外这些从五加科中提取出来的聚乙炔醇还具有很强的抗肿瘤活性。
已有研究表明 Panaxydol 具有降压和防止动脉粥样硬化和抗细胞增殖的活性。同时一些研究小组发现人参环氧炔醇还具有抗小鼠肉瘤细胞，小鼠白血病细胞，人类结肠癌细胞，人肾细胞癌细胞的细胞株增生的作用。另外人参环氧炔醇也具有一定的抗炎、抗血小板凝聚的药理作用。2007年干丽君等人发现人参环氧炔醇具有抗RASMCs迁移、增殖和基质合成的作用。2008年何晶等人发现人参环氧炔醇具有促进体外培养的SCs NGF、BDNF表达和分泌的作用。Ahn B.I.等发现人参环氧炔醇的细胞毒性大小与该化合物中C-9和C-10的化学结构组成有关。
虽然Panaxydol具有很好的生物活性，但对其不同光学异构体以及其合成、生物活性的研究，至今未见报道。
发明内容
我们在研究过程中，意外的发现一种新的人参环氧炔醇化合物：(3R,9R,10R)-9,10-环氧-1-十七碳烯-4,6-二炔-3-醇，药理学研究表明，本发明化合物具有很好的抗肿瘤作用；通过科学的研究，确定合成本发明化合物的新方法，该方法具有反应步骤少、反应条件温和、收率高和立体选择性好等优点。
本发明通过下述技术方案实现的。
化合物(3R,9R,10R)-9,10-环氧-1-十七碳烯-4,6-二炔-3-醇，其结构式为：
上述化合物的合成方法包括但不限于：以(R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-醇为原料在有机溶剂和金属催化剂催化下与中间体(4R,5R)-4,5-环氧-1-十二碳炔反应得到。
上述化合物的合成方法包括但不限于：取氯化亚铜、溴化亚铜或氯化钯，在N2保护下加入二氯甲烷溶液或氯仿，冷却至-20℃至20℃，依次加入乙胺或正丁胺水溶液，(4R,5R)-4,5-环氧-1-十二碳炔的二氯甲烷溶液或氯仿溶液，(R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-醇的二氯甲烷溶液或氯仿溶液，在加入过程中，同时加入盐酸羟胺的水溶液，反应1-5h后，用二氯甲烷或氯仿萃取2-5次，有机相合并后，经无水硫酸钠或硫酸镁干燥，过滤，浓缩，残余物经硅胶柱层析，洗脱溶剂为石油醚与乙醚体积比=5 : 1，收集洗脱液，浓缩，回收溶剂至尽，即得。
其中(4R,5R)-4,5-环氧-1-十二碳炔的合成方法为：
（1）制备2-癸炔-1-醇
在N2保护下的反应瓶中依次加入四氢呋喃，丙炔醇，六甲基磷酰三胺(HMPA)，将反应液冷却至-90℃至-60℃，加入正丁基锂溶液，滴加完毕后，缓慢升温至-30℃至0℃，搅拌1h至4h，然后加入正溴庚烷，搅拌，升至室温反应16-24h，反应结束后，加入饱和氯化铵的水溶液，并用乙醚、乙酸乙酯或氯仿萃取2-5次，有机相合并后，用饱和氯化钠水溶液洗涤，然后用无水硫酸钠或硫酸镁干燥，过滤，浓缩，残余物经硅胶柱层析，洗脱溶剂为石油醚与乙醚体积比=5 : 1，收集洗脱液，浓缩，回收溶剂至尽，得2-癸炔-1-醇；
（2）制备反-2-癸烯-1-醇
取LiAlH4，THF，在-10℃至0℃下加入2-癸炔-1-醇，回流反应20-24h，TLC监测，反应完毕后加入10% HCl水溶液，乙醚萃取3次，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱层析，洗脱溶剂为石油醚与乙醚体积比=5 : 1，收集洗脱液，浓缩，回收溶剂至尽，得反-2-癸烯-1-醇；
（3）制备(2R,3R)-2,3-环氧-1-癸醇
在氮气保护下的反应瓶中加入活化分子筛或氢化钙，二氯甲烷，在-50℃至-20℃下加入四异丙氧基钛，D-(-)-酒石酸二异丙酯（DIPT）或D-(-)-酒石酸二乙酯（DET），搅拌10-60min加入叔丁基过氧化氢（TBHP）反应1-5h后加入反-2-癸烯-1-醇，-10℃至 -20℃反应48-96h，反应完毕后加入30%NaOH水溶液，室温下搅拌到分层，水层用乙醚、乙酸乙酯、或氯仿溶剂萃取，合并有机相，无水硫酸钠或硫酸镁干燥，浓缩，用柱层析分离，洗脱溶剂为石油醚：乙醚体积比= 2：1，收集洗脱液，浓缩，回收溶剂至尽，制得(2R,3R)-2,3-环氧-1-癸醇；
（4）(4R,5R)-4,5-环氧-1-三甲基硅基-1-十二碳炔
氮气保护下向反应瓶中加入THF，在-90℃至-70℃加入(2R,3R)-2,3-环氧-1-癸醇，正丁基锂（BuLi）反应，1-5h后加入三氟甲磺酸酐反应1-5h，然后在-90℃至-60℃下加入炔基锂反应1-6h，反应完毕后加入水，分层，水相用乙醚，乙酸乙酯或氯仿溶剂萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠或硫酸镁干燥，浓缩，柱层析分离，洗脱溶剂为石油醚与乙醚体积比=60：1，收集洗脱液，浓缩，回收溶剂至尽得到(4R,5R)-4,5-环氧-1-三甲基硅基-1-十二碳炔；
（5）制备(4R,5R)-4,5-环氧-1-十二碳炔
取(4R,5R)-4,5-环氧-1-三甲基硅基-1-十二碳炔，加入碳酸钾或氟化四丁基铵和甲醇或四氢呋喃，搅拌2h至6h，加入水，并用乙醚、乙酸乙酯或氯仿萃取，有机相合并后，用饱和氯化钠的水溶液洗涤，并用无水硫酸钠或硫酸镁干燥，过滤，浓缩，残余物经硅胶柱层析分离，洗脱溶剂为石油醚与乙醚体积比=60：1，收集洗脱液，浓缩，回收溶剂至尽，得(4R,5R)-4,5-环氧-1-十二碳炔。
其中(R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-醇制备方法为：
（1）制备(R)-5-三甲基硅-1-戊烯-4-炔-3-醇
在N2保护下的反应瓶中依次加入无水甲苯、三甲基硅基乙炔，二乙基锌，回流1h至2h，冷却至室温，加入乙醚，(S)-1,1'-联-2-萘酚，四异丙氧基钛，搅拌1h至2h，加入丙烯醛，继续反应2h至6h，加入饱和氯化铵的水溶液，并用乙醚、乙酸乙酯或氯仿萃取2-5次，有机相合并后，用无水硫酸钠或硫酸镁干燥，过滤，浓缩，残余物经硅胶柱层析，洗脱溶剂为石油醚与乙醚体积比=5 : 1，收集洗脱液，浓缩，回收溶剂至尽，得(R)-5-三甲基硅-1-戊烯-4-炔-3-醇；
（2）制备(R)-5-三甲基硅基-1-戊烯-4-炔-3-3,5二硝基苯甲酸酯
向在氮气保护下的史莱克瓶中加入二氯甲烷，(R)-5-三甲基硅-1-戊烯-4-炔-3-醇，三乙胺，冷却至-10℃ 至0℃，缓慢加入3,5-二硝基苯甲酰氯的二氯甲烷溶液，滴加完毕后，继续搅拌1-4h。反应结束后，加入水，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析，洗脱溶剂为石油醚与乙醚体积比=5 : 1，收集洗脱液，浓缩，回收溶剂至尽，得(R)-5-三甲基硅基-1-戊烯-4-炔-3-3,5二硝基苯甲酸酯；
（3）制备(R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-3,5二硝基苯甲酸酯
取(R)-5-三甲基硅基-1-戊烯-4-炔-3-3,5二硝基苯甲酸酯，N-溴代丁二酰亚胺，硝酸银，丙酮，室温搅拌4-8h，加入水，并用二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析，洗脱溶剂为石油醚与乙醚体积比=5 : 1，收集洗脱液，浓缩，回收溶剂至尽，得(R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-3,5二硝基苯甲酸酯；
（4）制备(R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-醇
向三口瓶中加入(R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-3,5二硝基苯甲酸酯，四氢呋喃，室温下，加入氢氧化钠的水溶液，继续搅拌0.5h-3h，反应结束后，加入水，并用二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析，洗脱溶剂为石油醚与乙醚体积比=5 : 1，收集洗脱液，浓缩，回收溶剂至尽，得(R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-醇。
所述化合物在制备治疗癌症药物的应用。
所述的化合物制备的药物制剂。
其中制剂包括口服制剂。
其中制剂包括注射制剂。
本发明合成路线的特点是将(R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-醇与(4R,5R)-4,5-环氧-1-十二碳炔发生Cadiot-Chodkiewcz炔炔偶联反应合成得到目的化合物(3R,9R,10R) -9,10-环氧-1-十七碳烯-4,6-二炔-3-醇。
其中(4R,5R)-4,5-环氧-1-十二碳炔可以按照本发明方法得到：首先以丙炔醇为起始原料，经过亲核取代反应、立体选择性还原、Sharpless不对称环氧化、偶联及脱三甲基硅基五步反应合成中间体(4R,5R)-4,5-环氧-1-十二碳炔。
其中(R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-醇可以按照现有技术合成方法得到，也可以按照本发明方法得到：以丙烯醛为原料在(S)-1,1'-联-2-萘酚和四异丙氧基钛存在下与三甲基硅乙炔反应得到(R)-5-三甲基硅基-1-戊烯-4-炔-3-醇，(R)-5-三甲基硅基-1-戊烯-4-炔-3-醇用3，5-二硝基苯甲酰氯衍生化后用重结晶的方法制得高光学纯度的(R)-5-三甲基硅基-1-戊烯-4-炔-3-3,5二硝基苯甲酸酯，然后再经过溴代反应得到(R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-3,5二硝基苯甲酸酯，(R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-3,5二硝基苯甲酸酯水解可得炔醇片段(R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-醇。
上述人参环氧炔醇的优选全合成路线如下：
本发明提供的(3R,9R,10R)-9,10-环氧-1-十七碳烯-4,6-二炔-3-醇的合成方法具有如下优点：所需的反应步骤少、反应条件温和、每步的收率高、立体选择性好。
本发明所合成的(3R,9R,10R)-9,10-环氧-1-十七碳烯-4,6-二炔-3-醇具有优异的抗肿瘤活性。
本发明可用下述的实施例来作进一步说明，但不仅仅限于这些实施例。
实施例1
制备(3R,9R,10R)-9,10-环氧-1-十七碳烯-4,6-二炔-3-醇
在磁力搅拌氮气保护下的0.0118g(0.12 mmol)氯化亚铜, 0.16mL正丁胺, 0.37mL水, 0.108 g (0.6mmol) (4R,5R)-4,5-环氧-1-十二碳炔的二氯甲烷(9mL)溶液中缓慢加入0.144g (0.9mmol) (R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-醇, 0.2081g (3mmol)盐酸羟胺的水溶液2mL，保持体系呈淡黄色，滴加完毕后，继续反应1h。反应结束后，用二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙醚，5：1)，得淡黄色油状液体0.13 g (产率85%)。[α]D20 = -15.6 ( c = 1.2, CHCl3); 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 5.95 (ddd, J = 17.04, 10.11, 5.31 Hz 1H), 5.44-5.50 (m, 1H), 5.23-5.27 (m, 1H), 4.90-4.94 (m, 1H), 2.81-2.88 (m, 2H), 2.69-2.75 (m, 1H), 2.48-2.56 (m ,1H), 1.93 (brs, 1H), 1.28–1.59 (m, 12H), 0.88 (t, J = 6.96 Hz 3H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3): δ 136.02, 117.12, 76.37, 74.81, 70.89, 66.30, 63.47, 58.37, 55.28, 31.72, 31.49, 29.30, 29.15, 25.83, 22.88, 22.60, 14.05; HRMS (TOF): calcd for [M+Na]+:283.1674, found: 283.1667.
(3R,9R,10R)-9,10-环氧-1-十七碳烯-4,6-二炔-3-醇为活性成分，与药剂学上可以使用的药用辅料制备成药物制剂；包括但不限于口服制剂或注射制剂。
实施例2
制备(3R,9R,10R)-9,10-环氧-1-十七碳烯-4,6-二炔-3-醇
在磁力搅拌氮气保护下的0.0177g (0.12 mmol)溴化亚铜, 0.16mL乙胺, 0.37mL水, 0.108g (0.6mmol) (4R,5R)-4,5-环氧-1-十二碳炔的氯仿(9mL)溶液中缓慢加入0.144g (0.9mmol) (R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-醇, 0.2081g (3mmol)盐酸羟胺的水溶液2mL，保持体系呈淡黄色，滴加完毕后，继续反应1h。反应结束后，用氯仿萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙醚，5：1)，得淡黄色油状液体0.13 g (产率85%)。[α]D20 = -15.6 ( c = 1.2, CHCl3); 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 5.95 (ddd, J = 17.04, 10.11, 5.31 Hz 1H), 5.44-5.50 (m, 1H), 5.23-5.27 (m, 1H), 4.90-4.94 (m, 1H), 2.81-2.88 (m, 2H), 2.69-2.75 (m, 1H), 2.48-2.56 (m ,1H), 1.93 (brs, 1H), 1.28–1.59 (m, 12H), 0.88 (t, J = 6.96 Hz 3H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3): δ 136.02, 117.12, 76.37, 74.81, 70.89, 66.30, 63.47, 58.37, 55.28, 31.72, 31.49, 29.30, 29.15, 25.83, 22.88, 22.60, 14.05; HRMS (TOF): calcd for [M+Na]+:283.1674, found: 283.1667。
(3R,9R,10R)-9,10-环氧-1-十七碳烯-4,6-二炔-3-醇为活性成分，与药剂学上可以使用的药用辅料制备成药物制剂；包括但不限于口服制剂或注射制剂。
上述(4R,5R)-4,5-环氧-1-十二碳炔、(R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-醇可以按照下述文献方法制备：
（1）Reference: (a) Journal of Agricultural and Food Chemistry 57(22):11030-11040. (b) Heterocycles (2004), 62, 857-868。
（2）HETEROCYCLES,Vol.62,2004,pp.857-868
ASYMMETRIC SYNTHESIS OF PANAXYDOL AND ITSSTEREOISOMERS。
（3）Journal of Agricultural and Food Chemistry 57(22):11030-11040
Structure Determination of Bisacetylenic Oxylipins in Carrots (Daucus carota L.) and Enantioselective Synthesis of Falcarindiol 。
等等。
也可以按照本发明合成方法制备：
实施例3
(4R,5R)-4,5-环氧-1-十二碳炔的合成方法为
（1）制备2-癸炔-1-醇（化合物2）
在氮气保护下向250mL反应瓶中依次加入50mL四氢呋喃，5.32mL (90mmol) 丙炔醇，39.5mL (225mmol) 六甲基磷酰三胺后在 -78℃下缓慢滴加 72mL (180mmol）正丁基锂溶液。0.5h滴加完毕，升温至-30℃搅拌3h，加入 7.07mL (45mmol) 正溴庚烷，搅拌 20min 后，升至室温继续反应21h。反应结束后，加入30mL饱和氯化铵的水溶液，并用乙醚（30mL′3）萃取，合并有机相。有机相用饱和氯化钠的水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗产物经硅胶（200-300目）柱层析(石油醚：乙醚，5：1)，得无色油状液体6.22g（产率90%）；1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 4.23-4.26 (m, 2H), 2.17-2.24 (m, 2H), 1.65-1.70 (m, 1H), 1.26-1.39 (m, 8H), 0.88 (t, J = 6.9 Hz, 3H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3): δ 86.44, 78.25, 51.20, 31.65, 28.77, 28.73, 28.55, 22.55, 18.66, 13.97; HRMS (TOF) calcd for [M+H]+: 155.1436; found: 155.1432；
（2）制备反-2-癸烯-1-醇（化合物10）
在配有温度计，磁力搅拌器的250 ml 三口瓶中加入 3.42g (90mmol) LiAlH4，100ml THF，在0°C下加入9.24g (60mmol) 化合物2，回流反应20h。TLC监测，反应完毕后加入30ml 10%HCl水溶液，乙醚萃取，无水硫酸钠干燥脱溶浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙醚，5 : 1)，得无色油状液体7.95g，收率85%；1H NMR (300 MHz, CDCl3); δ5.57-5.74(m, 2H), 4.08 (t, J = 4.96 Hz, 2H), 2.00-2.07 (m, 2H), 1.27-1.39 (m, 10H), 0.88 (t, J = 6.95 Hz, 3H); 13C NMR(75 MHz, CDCl3); δ 133.4, 128.8, 63.7, 33.2, 31.7, 29.1,29.1, 29.1,22.6, 14.0.HRMS(TOF): calcd for [M+Na]+:179.1412;found: 179.1409；
（3）制备(2R,3R)-2,3-环氧-1-癸醇（化合物11）
氮气保护下在250mL圆底瓶中加入0.26g氢化钙，140mL二氯甲烷。在-20°C下用注射器加入1.8g (6.4mmol) 四异丙氧基钛, 1.8g (8.9 mmol) D-(-)-酒石酸二乙酯（DET）。搅拌10min加入23mL (128mmol)叔丁基过氧化氢（TBHP）反应1h后加入化合物10 10g (64mmol）-10°C反应8h。反应完毕后加入50mL 30%NaOH溶液，室温下搅拌到分层。水层用氯仿萃取，合并有机相。无水硫酸钠干燥，浓缩，用柱层析分离（石油醚：乙醚, 2：1），得白色固体9.4g(收率85%)；经Mosher酯法测得ee值大于99%；mp 49.0-50.0℃； [α]D20 = 35.7 (c = 1.4, CHCl3); 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ3.87-3.94 (m, 1H), 3.58-3.66 (m, 1H), 2.90-2.97 (m, 2H), 1.86-1.90 (m, 1H ), 1.28-1.60 (m, 12H), 0.88(t, J = 6.95 Hz 3H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3): δ 61.78, 58.60, 56.03, 31.62, 21.44, 29.22, 29.05, 25.80, 22.48,13.91; HRMS (TOF): calcd for [M+H]+:173.1534; found: 173.1542；
或者：制备(2R,3R)-2,3-环氧-1-癸醇（化合物11）
氮气保护下在250mL圆底瓶中加入5g活化分子筛，140mL二氯甲烷。在-20°C下用注射器加入1.8g (6.4mmol) 四异丙氧基钛, 2.0g (8.9 mmol) D-(-)-酒石酸二异丙酯（DIPT）。搅拌10min加入23mL (128mmol)叔丁基过氧化氢（TBHP）反应1h后加入化合物10 10g (64mmol）-10°C反应8h。反应完毕后加入50mL 30%NaOH溶液，室温下搅拌到分层。水层用乙醚萃取，合并有机相。无水硫酸钠干燥，浓缩，用柱层析分离（石油醚：乙醚, 2：1），得白色固体9.4g(收率85%)；经Mosher酯法测得ee值大于99%；mp 49.0-50.0℃；[α]D20 = 35.7 (c = 1.4, CHCl3); 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ3.87-3.94 (m, 1H), 3.58-3.66 (m, 1H), 2.90-2.97 (m, 2H), 1.86-1.90 (m, 1H ), 1.28-1.60 (m, 12H), 0.88(t, J = 6.95 Hz 3H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3): δ 61.78, 58.60, 56.03, 31.62, 21.44, 29.22, 29.05, 25.80, 22.48,13.91; HRMS (TOF): calcd for [M+H]+:173.1534; found: 173.1542；
（4）制备(4R,5R)-4,5-环氧-1-三甲基硅基-1-十二碳炔（化合物12）
250mL史莱克反应瓶氮气置换三次后加入45 mL THF，在-78°C下用注射器加入化合物11 3.09g，8.64mL正丁基锂（BuLi）(2.5M in hexane)反应，1h后加入2.95mL三氟甲磺酸酐继续反应1h，然后在-78°C下加入新制的炔基锂反应1h。反应完毕后加入水30mL分层，水相用乙醚萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离（石油醚：乙醚，60：1），得无色的液体2.9g（收率65%）；[α]D20 = -0.6 (c = 1.4, CDCl3). 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 2.80-2.87 (m,2H), 2.59-2.67 (m, 1H ), 2.37-2.44 (m, 1H), 1.25-1.59 (m, 12H), 0.88(t, J = 6.97 Hz 3H), 0.16 (s, 9H). 13C NMR (300 MHz, CDCl3): δ 101.30, 86.90, 58.43, 55.92, 31.73, 29.43, 29.19, 27,56, 26,42, 22.61, 19,92, 14.03, 0.026. HRMS (TOF): calcd for [M+H]+: 253.1988, found:253.1992；
（5）(4R,5R)-4,5-环氧-1-十二碳炔（化合物13）
向25mL单口瓶中加入0.32g (1.3mmol)化合物12，0.39g(2.6 mmol)无水碳酸钾，6mL无水甲醇，室温搅拌4h。反应结束后，加入5mL水，并用乙醚萃取，有机相合并后，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙醚，60：1)，得淡黄色油状液体0.19g (产率80%)；[α]D20 = 14.6 (c = 1.2, CHCl3). 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 2.84-2.89 (m, 2H), 2.57-2.65 (m, 1H), 2.38-2.47 (m, 1H), 2.04 (t, J = 2.71 Hz 1H), 1.28-1.62 (m, 12H), 0.88 (t, J = 7.00 Hz 3H); 13C NMR (300 MHz, CDCl3). δ 78.94, 70.34, 58.23, 55.63, 31.70, 31.53, 29.27, 29.13, 25.86, 22.56, 21.92, 14.00; HRMS (TOF) calcd for [M+K]+: 219.1151, found: 219.1138；
或者：(4R,5R)-4,5-环氧-1-十二碳炔（化合物13）
向25mL单口瓶中加入0.32g (1.3mmol)化合物12，2.6mL (2.6 mmol)氟化四丁基铵的四氢呋喃溶液，6mL四氢呋喃，室温搅拌4h。反应结束后，加入5mL水，并用乙酸乙酯萃取，有机相合并后，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙醚，60：1)，得淡黄色油状液体0.19g (产率80%)；[α]D20 = 14.6 (c = 1.2, CHCl3). 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 2.84-2.89 (m, 2H), 2.57-2.65 (m, 1H), 2.38-2.47 (m, 1H), 2.04 (t, J = 2.71 Hz 1H), 1.28-1.62 (m, 12H), 0.88 (t, J = 7.00 Hz 3H); 13C NMR (300 MHz, CDCl3). δ 78.94, 70.34, 58.23, 55.63, 31.70, 31.53, 29.27, 29.13, 25.86, 22.56, 21.92, 14.00; HRMS (TOF) calcd for [M+K]+: 219.1151, found: 219.1138。
实施例4
(R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-醇制备方法为：
（1）制备(R)-5-三甲基硅基-1-戊烯-4-炔-3-醇（化合物23）
向在氮气保护下的250 mL史莱克瓶中加入无水甲苯12mL，三甲基硅基乙炔3.31mL(24mmol)，二乙基锌16mL (24mmol)在80°C下反应1h，待降至室温后加入四异丙氧基钛1.79mL、无水乙醚96mL、(S)-1,1'-联-2-萘酚0.68g配位1h, 然后加入丙烯醛0.4mL继续反应4h。反应结束后，加入饱和氯化铵的水溶液20 mL，水相用乙醚萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙醚，5：1)，得淡黄色油状液体0.73 g (产率80%)。[α]D20 = -37.6 (c = 1.3, CHCl3). 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 5.97 (ddd, J = 17.01, 10.11, 5.28 Hz 1H), 5.44-5.51 (m, 1H), 5.21-5.26 (m, 1H), 4.85-4.89 (m, 1H) 1.88-1.91 (m, 1H), 0.19 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3): δ 136.66, 116.57, 104.12, 91.14, 63.51, 0.22; HRMS (TOF): calcd for [M+H]+: 155.0892, found: 155.0890.
（2）制备(R)-5-三甲基硅基-1-戊烯-4-炔-3-3,5二硝基苯甲酸酯(化合物24)
向在氮气保护下的100mL史莱克瓶中加入40mL二氯甲烷，2.07g (13.5mmol)化合物23，2.8mL (20 mmol)三乙胺，冷却至0°C，缓慢加入3.73 g, (16mmol)3,5-二硝基苯甲酰氯的二氯甲烷溶液10mL。滴加完毕后，继续搅拌1h。反应结束后，加入10mL水，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙醚，5：1)，得白色固体3.69g (产率80%)。mp 99.0-100.0oC; [α]D20 = -49.6 ( c = 1.1, CHCl3); 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 9.24-9.25 (m, 1H), 9.19-9.20 (m, 2H), 6.19-6.21 (m, 1H), 6.04 (ddd, J = 16.89, 9.99, 5.85 Hz 1H), 5.68-5.73 (m, 1H), 5.45-5.49 (m, 1H), 0.21 (s, 9H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3): δ 161.28, 148.67, 133.54, 131.77, 129.62, 122.54, 120.74, 98.53, 94.33, 67.28 -0.4. HRMS (TOF) calcd for [M+H]+:349.0856, found: 349.0845.
（3）制备(R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-3,5二硝基苯甲酸酯(化合物25)
向100 mL三口瓶中加入3.1g(8.9 mmol) 化合物20，1.9026g (10.7mmol)N-溴代丁二酰亚胺，0.3058g(1.8mmol)硝酸银，35 mL丙酮，室温搅拌4h。反应结束后，加入10mL水，并用二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙醚，5：1)，得淡黄色固体2.62g (产率83%)，重结晶（二氯甲烷/正己烷），得无色固体。mp 89.0-90.0oC; [α]D20 = -45.2 (c = 1.3, CHCl3); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.19-9.26 (m, 3H), 6.17-6.20 (m, 1H), 5.99-6.10 (m, 1H), 5.68 (d, J=16.9Hz 1H,), 5.49 (d, J=10.0Hz, 1H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 161.3, 148.7, 133.2, 131.2, 129.6, 122.7, 121.2, 74.3, 67.5, 50.0; HRMS (TOF): calcd for [M+Na]+:376.9385, found: 376.9376.
（4）制备(R)-5-溴-1-戊烯-4-炔-3-醇（化合物26）
向100mL三口瓶中加入1.770g (5mmol)化合物21，20 mL四氢呋喃，室温下，缓慢加入12.5mL 2 mol/L的氢氧化钠水溶液，继续搅拌30min。反应结束后，加入10mL水，并用二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析(石油醚：乙醚，5：1)，得无色油状液体0.68g (产率85%)。[α]D20 = -41.8 (c =1.4, CHCl3); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 5.90-6.01 (m, 1H), 5.44-5.50 (m, 1H), 5.24-5.28 (m, 1H), 4.88-4.93 (m, 1H), 1.99 (d, 1H, J=6.6Hz); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 136.2, 116.9, 78.8, 63.9, 46.8.
药理实施例
试验药物：
试验药物1：(3R,9R,10S)-9,10-环氧-1-十七碳烯-4,6-二炔-3-醇的抗癌活性(天然化合物)；
试验药物2：(3R,9R,10R)-9,10-环氧-1-十七碳烯-4,6-二炔-3-醇的抗癌活性(本发明化合物）；
试验药物及细胞株
化合物均用二甲基亚砜（DMSO）配制。
细胞株：人肝癌Bel7402细胞株，人卵巢癌A2780细胞株，人结肠癌HCT-8细胞株，人胃癌BGC823细胞株，人乳腺癌MCF-7细胞株。细胞均在含10％胎牛血清的RPMI1640培养液（含青霉素100U/ml，链霉素100μg/ml）中生长，培养条件为37℃、5％CO2，饱和湿度。用含0.25％胰蛋白酶和0.02％EDTA液消化传代。
试验方法
采用MTT方法对化合物的抗肿瘤活性进行评价。
取对数生长期的上述肿瘤细胞，消化计数后调至所需密度接种于96孔细胞培养板中，培养24h后，加入不同浓度的待测化合物，同时设阳性对照药组及溶剂对照组，每个药物浓度设3平行孔。药物作用细胞72h后，弃去培养液，每孔加入MTT(0.5mg/ml)液100μl，继续培养4h，弃去MTT液，每孔加入DMSO 150μl，混和振荡器振荡，于酶标仪570 nm波长处测定吸光度值。用如下公式计算细胞的存活率，细胞存活率（％）＝（给药细胞OD平均值/溶剂对照细胞OD平均值）×100%。用量效关系软件计算半数抑制浓度（IC50）。
试验结果：见表1。
表1不同化合物对不同组织来源肿瘤细胞株抑瘤活性
试验结论：上述抗肿瘤活性试验表明，本发明化合物的IC50均低于10，而天然化合物的IC50全部大于40以上，充分说明本发明化合物具有更好的抗肿瘤活性。
上述实施例包括但不限于上述。