一种 5- 甲基 -1， 2， 4- 三氮唑并 [3， 4-b] 苯并噻唑衍生物及 其应用 ( 一 ) 技术领域
本发明涉及一种 5- 甲基 -1， 2， 4- 三氮唑并 [3， 4-b] 苯并噻唑衍生物及其应用。 ( 二 ) 背景技术
作为稠杂环体系中的一员， 苯并噻唑衍生物具有广泛的生物活性， 在新农药创制 中起到重要作用。 据文献报道， 在农用方面， 苯并噻唑及其衍生物具有杀虫、 杀菌、 除草以及 抗病毒等活性。 例如， WO 9406783 揭示了一类 2-(2- 氟乙硫基 )-4， 5， 6， 7- 四取代苯并噻唑 衍生物具有一定的杀虫杀螨活性， 对棉红蜘蛛、 桃蚜、 家蝇、 甜菜夜蛾等均有较好活性 ； 2003 年， Mahran 等 (Pharmazie， 2003， 58(8) ： 527-530) 报道了一系列含取代噻唑环的苯并噻唑 衍生物， 对稻瘟病菌、 小麦叶锈病菌、 立枯病菌等都有一定的杀菌活性 ； 早在 1965 年， 德国 Bayer A G(GB ： 1004469， 1965-09-15) 就开发了芽前除草剂苯噻隆， 在用量 3.2-6.4ga.i./ ha 下， 可有效防除甘菊、 矢车菊、 母菊、 萝卜属、 芥属等 ； 1999 年， 李在国等 ( 应用化学， 1999， 16(2) ： 90-92) 报道了一类 N-(2- 苯并噻唑基 )-α- 氨基膦酸二苯酯类化合物具有较好的 抗烟草花叶病毒 (TMV) 活性。三唑类化合物也具有广泛的农药活性， 已有一批三唑类商品 化农药品种， 如杀虫剂三唑磷、 除草剂三唑磺、 植物生长调节剂多效唑， 尤其是三唑类杀菌 剂 ( 戊唑醇、 氟环唑、 苯醚甲环唑、 丙环唑、 氟硅唑、 粉唑醇、 己唑醇、 三唑醇等 ) 已成为杀菌 剂中最大的一类， 占杀菌剂市场的比例一直维持在 20％左右。鉴于苯并噻唑及三唑类化合 物均具有良好活性， 兼具两者结构的三唑并苯并噻唑类化合物早已引起研究者的关注。美 国伊利诺公司 1979 年公开的三环唑 ( 化学名 ： 5- 甲基 -1， 2， 4- 三氮唑并 [3， 4-b] 苯并噻 唑 ) 即是其中代表， 其对防治稻瘟病有特效。
本发明对三环唑进行结构衍生， 设计并合成了系列 5- 甲基 -1， 2， 4- 三氮唑并 [3， 4-b] 苯并噻唑衍生物， 其结构以及生物活性研究均未见有文献报道， 而且对立枯丝核菌、 香 蕉枯萎病菌及烟草花叶病菌等的抑菌活性优于三环唑。 ( 三 ) 发明内容
本发明的目的在于提供一种 5- 甲基 -1， 2， 4- 三氮唑并 [3， 4-b] 苯并噻唑衍生物 及其用途。
本发明采用的技术方案是 ：
一种 5- 甲基 -1， 2， 4- 三氮唑并 [3， 4-b] 苯并噻唑衍生物， 结构如式 (I) 所示 ：
式 (I) 中， R 为 C1 ～ C8 的烷基、 C1 ～ C3 的烷氧基、 卤素或硝基。
进一步， 本发明苯环上的取代基 R 优选为 1 个或 2 个。
本发明中 R 优选为 C1 ～ C5 的烷基、 甲氧基、 F、 Cl、 Br 或硝基 ； 进一步 R 优选为甲 基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 叔丁基、 正戊基、 F、 Cl、 硝基或甲氧基 ； 更进一步 R 优选为下列之 一： R ＝邻甲基 ； R ＝间甲基 ； R ＝对甲基 ； R ＝对乙基 ； R ＝对正丙基 ； R ＝对异丙基 ； R ＝对 叔丁基 ； R ＝对正戊基 ； R ＝间氯 ； R ＝间氟 ； R ＝对氟 ； R ＝ 2， 4- 二氯 ； R ＝间硝基 ； R ＝对甲 氧基。
本发明 5- 甲基 -1， 2， 4- 三氮唑并 [3， 4-b] 苯并噻唑衍生物优选的制备方法按如 下步骤进行 ： 如式 (II) 所示的 2- 肼基 -4- 甲基苯并噻唑与如式 (III) 所示的取代苯甲酸 在三氯氧磷 (IV) 中于回流状态下进行环合反应， TLC 监测至反应结束后， 反应液经分离纯 化制得所述的 5- 甲基 -1， 2， 4- 三氮唑并 [3， 4-b] 苯并噻唑衍生物 ；
式 (III) 中， R 为 C1 ～ C8 的烷基、 C1 ～ C3 的烷氧基、 卤素或硝基 ；
本发明所述如式 (II) 所示的 2- 肼基 -4- 甲基苯并噻唑、 如式 (III) 所示的取代苯 甲酸及如 (IV) 所示的三氯氧磷的投料物质的量之比为 1 ∶ 1.0 ～ 1.3 ∶ 20.0 ～ 50.0 ； 优 选的如式 (II) 所示的 2- 肼基 -4- 甲基苯并噻唑、 如式 (III) 所示的取代苯甲酸及如 (IV) 所示的三氯氧磷的投料物质的量之比为 1 ∶ 1.0 ～ 1.1 ∶ 20.0 ～ 35.0。
本发明采用薄层色谱 (TLC) 法监测反应完成情况， 反应时间通常为 3 ～ 12 小时。 具体反应时间与反应物有关。
本发明所述反应液分离纯化方法为 ： 反应结束后， 反应液浓缩除去三氯氧磷， 残余 物用重结晶溶剂重结晶得到如式 (I) 所示的 5- 甲基 -1， 2， 4- 三氮唑并 [3， 4-b] 苯并噻唑 衍生物。
所述重结晶溶剂优选为乙醇、 乙酸乙酯、 正己烷、 石油醚中的一种或两种以上的混 合液。
本发明还提供所述的 5- 甲基 -1， 2， 4- 三氮唑并 [3， 4-b] 苯并噻唑衍生物作为杀 菌剂的应用。发明人在实施例中采用含药马铃薯琼脂培养基 (PDA) 法对合成的化合物进 行了立枯丝核菌 (Rhizoctonia solani)、 西瓜壳二孢菌 (Ascochyta citrullina Smith)、 香 蕉 枯 萎 病 菌 (Fusarium oxysporum f.sp.cubense) 和 烟 草 炭 疽 病 (Colletotrichum nicotianae) 的杀菌活性测定， 普筛浓度为 50mg/L。结果表明， 化合物 (I) 对所有供试菌种
均表现出一定的抑制活性 ； 绝大部分式 (I) 化合物对立枯丝核菌、 香蕉枯萎病菌和烟草炭 疽病的抑制活性优于对照药剂三环唑， 部分化合物对立枯丝核菌、 香蕉枯萎病菌和烟草炭 疽病具有中等抑制活性， 如化合物 Ic(R ＝对甲基 )、 If(R ＝对异丙基 )、 Ii(R ＝间氯 ) 对立 枯丝核菌抑制率均大于 50％， 化合物 Ij(R ＝间氟 ) 对香蕉枯萎病菌抑制率为 50.3％， 化合 物 Ia(R ＝邻甲基 )、 Ie(R ＝对正丙基 )、 If(R ＝对异丙基 )、 Ik(R ＝对氟 ) 对烟草炭疽病 的抑制率均在 50％以上。
与现有技术相比， 本发明的有益效果体现在 ：
本发明提供了一类新型的 5- 甲基 -1， 2， 4- 三氮唑并 [3， 4-b] 苯并噻唑衍生物， 该 衍生物制备简单， 表现出良好的抑菌活性。 ( 四 ) 具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明， 但本发明的保护范围并不限于此。
实施例 1 衍生物 Ia(R ＝邻甲基 ) 的合成
将 2- 肼基 -4- 甲基苯并噻唑 (1.80g， 10mmol)、 邻甲基苯甲酸 (10mmol) 加入 50mL 反应烧瓶中， 再加入三氯氧磷 (200mmol)， 搅拌， 加热至回流， 反应 5 小时。TLC 检测至反应 结束， 反应液浓缩脱去三氯氧磷， 残余物用 10mL 乙醇重结晶， 得到淡黄色固体 1.73g， 即衍 生物 Ia。熔点 139 ～ 141℃， 收率为 62.0％。 1
该化合物的 H NMR 和元素分析数据如下所述， 1
H NMR(CDCl3)δ ： 1.75(s， 3H， CH3)， 2.20(s， 3H， CH3)， 7.09 ～ 7.54(m， 7H， Ph-H) ；
Elemental anal.(％ )， calcd.for C16H13N3S ： C， 68.79 ； H， 4.69 ； N， 15.04 ； found ： C， 68.62 ； H， 4.57 ； N， 15.10。
实施例 2 衍生物 Ib(R ＝间甲基 ) 的合成
将 2- 肼基 -4- 甲基苯并噻唑 (1.80g， 10mmol)、 间甲基苯甲酸 (11mmol) 加入 50mL 反应烧瓶中， 再加入三氯氧磷 (250mmol)， 搅拌， 加热至回流， 反应 9 小时。TLC 检测至反应 结束， 反应液浓缩脱去三氯氧磷， 残余物用 15mL 乙酸乙酯重结晶， 得到淡黄色固体 1.96g， 即衍生物 Ib。熔点 164 ～ 165℃， 收率为 70.2％。 1
该化合物的 H NMR 和元素分析数据如下所述， 1
H NMR(CDCl3)δ ： 2.45(s， 3H， CH3)， 2.66(s， 3H， CH3)， 7.25 ～ 7.50(m， 7H， Ph-H) ；
Elemental anal.( ％ )， calcd.for C16H13N3S ： C， 68.79 ； H， 4.69 ； N， 15.04 ； found ： C， 68.55 ； H， 4.53 ； N， 15.18。
实施例 3 衍生物 Ic(R ＝对甲基 ) 的合成
将 2- 肼基 -4- 甲基苯并噻唑 (1.80g， 10mmol)、 对甲基苯甲酸 (10.5mmol) 加入 50mL 反应烧瓶中， 再加入三氯氧磷 (300mmol)， 搅拌， 加热至回流， 反应 12 小时。TLC 检 测至反应结束， 反应液浓缩脱去三氯氧磷， 残余物用 15mL 正己烷重结晶， 得到淡黄色固体 2.02g， 即衍生物 Ic。熔点 157 ～ 160℃， 收率为 72.5％。 1
该化合物的 H NMR 和元素分析数据如下所述， 1
H NMR(CDCl3)δ ： 1.86(s， 3H， CH3)， 2.48(s， 3H， CH3)， 7.10 ～ 7.53(m， 7H， Ph-H) ；
Elemental anal.(％ )， calcd.for C16H13N3S ： C， 68.79 ； H， 4.69 ； N， 15.04 ； found ： C， 68.55 ； H， 4.54 ； N， 15.17。实施例 4 衍生物 Id(R ＝对乙基 ) 的合成
将 2- 肼基 -4- 甲基苯并噻唑 (1.80g， 10mmol)、 对乙基苯甲酸 (11mmol) 加入 50mL 反应烧瓶中， 再加入三氯氧磷 (350mmol)， 搅拌， 加热至回流， 反应 12 小时。TLC 检测至反应 结束， 反应液浓缩脱去三氯氧磷， 残余物用 15mL 石油醚重结晶， 得到淡黄色固体 2.02g， 即 衍生物 Id。熔点 152 ～ 153℃， 收率为 69.0％。 1
该化合物的 H NMR 和元素分析数据如下所述， 1
H NMR(CDCl3)δ ： 1.31(t， J ＝ 7.5， 3H， CH2CH3)， 2.42(s， 3H， CH3)， 2.54(q， 2H， CH2CH3)， 7.12 ～ 7.63(m， 7H， Ph-H) ；
Elemental anal.(％ )， calcd.for C17H15N3S ： C， 69.59 ； H， 5.15 ； N， 14.32 ； found ： C， 69.45 ； H， 5.08 ； N， 14.47。
实施例 5 衍生物 Ie(R ＝对正丙基 ) 的合成
将 2- 肼基 -4- 甲基苯并噻唑 (1.80g， 10mmol)、 对正丙基苯甲酸 (10.6mmol) 加入 50mL 反应烧瓶中， 再加入三氯氧磷 (250mmol)， 搅拌， 加热至回流， 反应 7 小时。TLC 检测至 反应结束， 反应液浓缩脱去三氯氧磷， 残余物用 15mL 乙醇重结晶， 得到淡黄色固体 2.07g， 即衍生物 Ie。熔点 118 ～ 120℃， 收率为 67.5％。 该化合物的 1H NMR 和元素分析数据如下所述， 1
H NMR(CDCl3)δ ： 0.97(t， J ＝ 7.5， 3H， CH2CH2CH3)， 1.70 ～ 1.74(m， 2H， CH2CH2CH3)， 1.85(s， 3H， CH3)， 2.71(t， J ＝ 7.5， 2H， CH2CH2CH3)， 7.10 ～ 7.55(m， 7H， Ph-H) ；
Elemental anal.(％ )， calcd.for C18H17N3S ： C， 70.33 ； H， 5.57 ； N， 13.67 ； found ： C， 70.10 ； H， 5.44 ； N， 13.82。
实施例 6 衍生物 If(R ＝对异丙基 ) 的合成
将 2- 肼基 -4- 甲基苯并噻唑 (1.80g， 10mmol)、 对异丙基苯甲酸 (10.8mmol) 加 入 50mL 反应烧瓶中， 再加入三氯氧磷 (240mmol)， 搅拌， 加热至回流， 反应 10 小时。TLC 检 测至反应结束， 反应液浓缩脱去三氯氧磷， 残余物用 20mL 石油醚重结晶， 得到淡黄色固体 1.97g， 即衍生物 If。熔点 126 ～ 128℃， 收率为 64.2％。 1
该化合物的 H NMR 和元素分析数据如下所述， 1
H NMR(CDCl3)δ ： 1.32(d， J ＝ 7.0， 6H， CH(CH 3)2)， 1.84(s， 3H， CH3)， 3.01 ～ 3.04(m， 1H， CH(CH3)2)， 7.10 ～ 7.57(m， 7H， Ph-H) ；
Elemental anal.(％ )， calcd.for C18H17N3S ： C， 70.33 ； H， 5.57 ； N， 13.67 ； found ： C， 70.07 ； H， 5.49 ； N， 13.80。
实施例 7 衍生物 Ig(R ＝对叔丁基 ) 的合成
将 2- 肼基 -4- 甲基苯并噻唑 (1.80g， 10mmol)、 对叔丁基苯甲酸 (10mmol) 加入 50mL 反应烧瓶中， 再加入三氯氧磷 (200mmol)， 搅拌， 加热至回流， 反应 12 小时。 TLC 检测至 反应结束， 反应液浓缩脱去三氯氧磷， 残余物用 10mL 乙酸乙酯与 5mL 乙醇的混合液重结晶， 得到淡黄色固体 1.86g， 即衍生物 Ig。熔点 205 ～ 207℃， 收率为 57.8％。 1
该化合物的 H NMR 和元素分析数据如下所述， 1
H NMR(CDCl3)δ ： 1.39(s， 9H， C(CH3)3)， 1.84(s， 3H， CH3)， 7.10 ～ 7.58(m， 7H， Ph-H) ；
Elemental anal.(％ )， calcd.for C19H19N3S ： C， 70.99 ； H， 5.96 ； N， 13.07 ； found ：
C， 70.70 ； H， 5.88 ； N， 13.19。
实施例 8 衍生物 Ih(R ＝对正戊基 ) 的合成
将 2- 肼基 -4- 甲基苯并噻唑 (1.80g， 10mmol)、 对正戊基苯甲酸 (11mmol) 加入 50mL 反应烧瓶中， 再加入三氯氧磷 (350mmol)， 搅拌， 加热至回流， 反应 12 小时。 TLC 检测至 反应结束， 反应液浓缩脱去三氯氧磷， 残余物用 10mL 乙醇与 10mL 正己烷的混合液重结晶， 得到淡黄色固体 1.74g， 即衍生物 Ih。熔点 100 ～ 101℃， 收率为 52.0％。 1
该化合物的 H NMR 和元素分析数据如下所述， 1
H NMR(CDCl 3 ) δ ： 0.93(t ，J ＝ 7.0 ， 3H ，(CH 2 ) 4 CH 3 ) ， 1.33 ～ 1.70(m ， 6H ， CH2(CH2)3CH3)， 1.85(s， 3H， CH3)， 2.72(t， J ＝ 7.5， 2H， CH2(CH2)3CH3)， 7.10 ～ 7.55(m， 7H， Ph-H) ；
Elemental anal.(％ )， calcd.for C20H21N3S ： C， 71.61 ； H， 6.31 ； N， 12.53 ； found ： C， 71.45 ； H， 6.17 ； N， 12.70。
实施例 9 衍生物 Ii(R ＝间氯 ) 的合成
将 2- 肼基 -4- 甲基苯并噻唑 (1.80g， 10mmol)、 间氯苯甲酸 (10mmol) 加入 50mL 反 应烧瓶中， 再加入三氯氧磷 (200mmol)， 搅拌， 加热至回流， 反应 3 小时。TLC 检测至反应结 束， 反应液浓缩脱去三氯氧磷， 残余物用 10mL 石油醚与 5mL 正己烷的混合液重结晶， 得到淡 黄色固体 1.51g， 即衍生物 Ii。熔点 181 ～ 183℃， 收率为 50.5％。 该化合物的 1H NMR 和元素分析数据如下所述， 1
H NMR(CDCl3)δ ： 2.64(s， 3H， CH3)， 7.18 ～ 7.96(m， 7H， Ph-H) ；
Elemental anal.( ％ )， calcd.for C15H10ClN3S ： C， 60.10 ； H， 3.36 ； N， 14.02 ； found ： C， 59.87 ； H， 3.27 ； N， 14.22。
实施例 10 衍生物 Ij(R ＝间氟 ) 的合成
将 2- 肼基 -4- 甲基苯并噻唑 (1.80g， 10mmol)、 间氟苯甲酸 (10.5mmol) 加入 50mL 反应烧瓶中， 再加入三氯氧磷 (300mmol)， 搅拌， 加热至回流， 反应 8 小时。TLC 检测至反应 结束， 反应液浓缩脱去三氯氧磷， 残余物用 15mL 乙醇重结晶， 得到淡黄色固体 2.01g， 即衍 生物 Ij。熔点 167 ～ 169℃， 收率为 71.0％。 1
该化合物的 H NMR 和元素分析数据如下所述， 1
H NMR(DMSO-d6)δ ： 2.43(s， 3H， CH3)， 7.04 ～ 7.80(m， 7H， Ph-H) ；
Elemental anal.(％ )， calcd.for C15H10FN3S ： C， 63.59 ； H， 3.56 ； N， 14.83 ； found ： C， 63.38 ； H， 3.41 ； N， 14.97。
实施例 11 衍生物 Ik(R ＝对氟 ) 的合成
将 2- 肼基 -4- 甲基苯并噻唑 (1.80g， 10mmol)、 对氟苯甲酸 (10.2mmol) 加入 50mL 反应烧瓶中， 再加入三氯氧磷 (280mmol)， 搅拌， 加热至回流， 反应 11 小时。TLC 检测至反应 结束， 反应液浓缩脱去三氯氧磷， 残余物用 20mL 乙酸乙酯重结晶， 得到淡黄色固体 1.99g， 即衍生物 Ik。熔点 179 ～ 181℃， 收率为 70.4％。 1
该化合物的 H NMR 和元素分析数据如下所述， 1
H NMR(DMSO-d6)δ ： 2.42(s， 3H， CH3)， 7.02 ～ 8.00(m， 7H， Ph-H) ；
Elemental anal.(％ )， calcd.for C15H10FN3S ： C， 63.59 ； H， 3.56 ； N， 14.83 ； found ： C， 63.42 ； H， 3.44 ； N， 14.93。
实施例 12 衍生物 Il(R ＝ 2， 4- 二氯 ) 的合成
将 2- 肼基 -4- 甲基苯并噻唑 (1.80g， 10mmol)、 2， 4- 二氯苯甲酸 (10.5mmol) 加入 50mL 反应烧瓶中， 再加入三氯氧磷 (300mmol)， 搅拌， 加热至回流， 反应 12 小时。 TLC 检测至 反应结束， 反应液浓缩脱去三氯氧磷， 残余物用 20mL 乙醇重结晶， 得到淡黄色固体 2.09g， 即衍生物 Il。熔点 151 ～ 153℃， 收率为 62.8％。 1
该化合物的 H NMR 和元素分析数据如下所述， 1
H NMR(CDCl3)δ ： 1.96(s， 3H， CH3)， 7.16 ～ 7.67(m， 6H， Ph-H) ；
Elemental anal.( ％ )， calcd.for C15H9Cl2N3S ： C， 53.90 ； H， 2.71 ； N， 12.57 ； found ： C， 53.72 ； H， 2.63 ； N， 12.76。
实施例 13 衍生物 Im(R ＝间硝基 ) 的合成
将 2- 肼基 -4- 甲基苯并噻唑 (1.80g， 10mmol)、 间硝基苯甲酸 (10mmol) 加入 50mL 反应烧瓶中， 再加入三氯氧磷 (350mmol)， 搅拌， 加热至回流， 反应 8 小时。TLC 检测至反应 结束， 反应液浓缩脱去三氯氧磷， 残余物用 20mL 石油醚重结晶， 得到淡黄色固体 2.05g， 即 衍生物 Im。熔点 183 ～ 184℃， 收率为 66.0％。 1
该化合物的 H NMR 和元素分析数据如下所述， H NMR(DMSO-d6)δ ： 2.44(s， 3H， CH3)， 7.05 ～ 7.65(m， 7H， Ph-H) ；
Elemental anal.(％ )， calcd.for C15H10N4O2S ： C， 58.05 ； H， 3.25 ； N， 18.05 ； found ： C， 57.87 ； H， 3.16 ； N， 18.22。
实施例 14 衍生物 In(R ＝对甲氧基 ) 的合成
将 2- 肼基 -4- 甲基苯并噻唑 (1.80g， 10mmol)、 对甲氧基苯甲酸 (11mmol) 加入 50mL 反应烧瓶中， 再加入三氯氧磷 (200mmol)， 搅拌， 加热至回流， 反应 12 小时。 TLC 检测至 反应结束， 反应液浓缩脱去三氯氧磷， 残余物用 10mL 乙醇重结晶， 得到淡黄色固体 1.62g， 即衍生物 In。熔点 160 ～ 162℃， 收率为 55.0％。 1
该化合物的 H NMR 和元素分析数据如下所述， 1
H NMR(CDCl3)δ ： 2.19(s， 3H， CH3)， 3.91(s， 3H， OCH3)， 6.96 ～ 8.38(m， 7H， Ph-H) ；
Elemental anal.(％ )， calcd.for C16H13N3OS ： C， 65.06 ； H， 4.44 ； N， 14.23 ； found ： C， 64.90 ； H， 4.39 ； N， 14.31。
实施例 15 杀菌活性测试
供试靶标： 立 枯 丝 核 菌 (Rhizoctonia solani)、 西 瓜 壳 二 孢 菌 (Ascochyta citrullina Smith)、 香蕉枯萎病菌 (Fusarium oxysporum f.sp.cubense) 和烟草炭疽病 (Colletotrichum nicotianae)， 上述菌种保存于 4 ～ 8℃冰箱内， 试验前 2 ～ 3d 从试管斜 面接种到培养皿内， 适宜温度下培养， 备用。
恢复室培养条件 ： 供试靶标及加样后靶标的培养温度为 25±5 ℃， 相对湿度为 65±5％。
采用含药马铃薯琼脂培养基 (PDA) 法对实施例 1 ～ 14 合成的化合物及对照药剂 三环唑进行了上述靶标病菌的杀菌活性测定， 普筛浓度为 50mg/L。
具体的， 测试方法参照 《农药生物活性评价 SOP》 。
立枯丝核菌、 西瓜壳二孢菌、 香蕉枯萎病菌和烟草炭疽病 ： 参照生测标准方法 NY/ T1156.2-2006， 采用含药培养基法 ： 取各 500mg/L 化合物药液 2mL， 加入冷却至 45℃的 18mL
8的 PDA 中， 制成终浓度为 50mg/L 的含药培养基平板。然后从培养好的试验病菌菌落边缘取 6.5mm 直径菌丝块， 移至含药培养基上， 每处理 4 次重复。处理完毕， 置于 28℃的恒温生化 培养箱中培养， 4 天后测量菌落直径， 计算生长抑制率。
生长抑制率 ( ％ ) ＝ [( 空白对照菌落直径 - 处理菌落直径 )/ 空白对照菌落直 径 ]×100％
测试结果见表 1。
表 1 5- 甲基 -1， 2， 4- 三氮唑并 [3， 4-b] 苯并噻唑衍生物的杀菌活性
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