发明内容:
本发明所要解决的技术问题是采用现代生化技术,从海洋星虫中
分离得到其活性组分,提供一种具有显著抗疲劳和延缓衰老作用的营
养保健品或药品。
本发明公开的海洋星虫活性组分提取物是选用海洋星虫为原料,
用盐溶液抽提,有机溶剂分级沉淀,超滤,冻干等步骤获取的活性组
分提取物。
该活性组份提取物含有活性成份蛋白质、牛磺酸、微量元素和精
氨酸,其中蛋白质的含量≥55%。
本发明所述活性组分提取物中的蛋白质分子量在1万、2.8万、
3.1万的三种活性蛋白含量占总蛋白含量18%以上,占总提取物活性
组分含量5.67%以上。
本发明所要解决的另一技术问题是公开上述海洋星虫活性组分
提取物的制备方法。
本发明海洋星虫活性组分提取物是通过下述技术方案获得的:
海洋星虫原料清洗干净后匀浆于2~5倍体积的含盐酸盐的缓冲
溶液中,室温提取24h,8000rpm高速离心30min,上清液用终浓度
为20%~70%的无水乙醇分级沉淀,收集20%~70%的无水乙醇沉
淀组分,真空冷冻干燥,干燥物溶解后用截留分子量为1万和10万
的超滤膜分别超滤,收集1~10万的组分,浓缩,冻干,即得到海洋
星虫活性组分。
本发明所述的含盐酸盐的缓冲溶液可选用10~20mmol/L PB溶
液或其它磷酸盐缓冲液,其中含1~2mol/L盐酸盐和1~5mmol/L
EDTA,所述的盐酸盐可选用NaCI、KCI等。
本发明所述活性峰可用MTT细胞活性试验测定或用SDS-PAGE
电泳鉴定。
本发明所要解决的另一技术问题是公开上述海洋星虫活性组分
提取物在制备抗疲劳和延缓衰老保健品或药品中的应用。
本发明海洋星虫活性组分可作为抗疲劳与延缓衰老保健食品及
相关药物的活性成份,根据保健及治疗需要,与食用及药用辅料制成
各种制剂。
本发明海洋星虫的抗疲劳作用研究选用昆明种小鼠为研究对象,
设立低、中、高三个剂量的海洋星虫样品组,剂量分别为0.04、0.09、
0.26g/kg,分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍,另设立蒸馏水
对照组。每组动物数为10只,灌胃给药,灌胃容量为0.4ml/20g。结
果显示,本品对动物体重无明显影响,能够明显延长小鼠负重游泳时
间,明显加快运动后小鼠血乳酸消除,显著降低血清尿素氮含量;说
明海洋星虫提取物具有明显的抗疲劳作用。
本发明海洋星虫的延缓衰老功能的抗氧化作用研究选用SD大鼠
为研究对象,设立低、中、高三个剂量的海洋星虫样品组,剂量分别
为0.04、0.09、0.26g/kg,分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍,
另设立蒸馏水对照组和青年动物对照组。每组动物数为10只,灌胃
给药,灌胃容量为1ml/100g,连续给药30天。结果提示海洋星虫提
取物能够降低SD大鼠血清MDA含量,增加血清SOD活性,说明海
洋星虫提取物具有抗氧化作用。
下面对本发明海洋星虫提取物的抗疲劳和延缓衰老作用作进一
步描述:
本发明海洋星虫活性组分富含蛋白质、牛磺酸、微量元素、精氨
酸等活性物质。
牛磺酸(Taurine),又名2-氨基乙烷亚磺酸,是细胞内含量最高的
游离氨基酸。近年来研究证明它具有平衡细胞渗透压、维持细胞膜稳
定性、调节细胞钙稳态和对抗氧自由基损伤等细胞保护作用。牛磺酸
的主要药理作用活性有:A、解热、镇痛、消炎;B、镇静、安神;C、
保护细胞膜、保肝利胆;D、抗病毒、抗病原菌;E、解毒、解化学
中毒、预防中毒等。牛磺酸的主要生理调节作用有:A、促进大脑发
育,调节神经传导,改善脑功能,抑制和治疗老年性痴呆;B、提高
机体特异性和非特异性免疫;C、增强和改善视力,维持视觉功能;
D、促进营养物质钙、脂类、维生素的吸收;E、改善儿童厌食和睡
眠不良,促进儿童生长发育。
精氨酸能够调节机体细胞因子的水平,促进婴儿生长发育,促进
创伤修复,减少应激时蛋白质的过分降解。精氨酸能够增加胸腺的重
量,刺激胸腺淋巴细胞和胸腺皮质与髓质的各种CD细胞,从而增强
机体免疫功能。
锌是目前研究最多,保健功能作用最为清楚的微量元素,具有抗
生物过氧化、促进发育、提高机体免疫功能、增强骨骼发育、防止性
功能减退、辅助降低血糖等多种保健作用。
蛋白质是机体生命活动的重要物质基础,是提供机体组织蛋白的
主要原料,是构成机体的主要结构成分,是体内的一个重要载体;同
时蛋白质作为酶、抗体、激素等,在生命活动中对细胞的生长分化的
调控以及遗传信息的表达,起着重要的作用;是各种代谢不可缺少的
物质基础。我们的研究表明海洋星虫提取物蛋白质含量在55%以上,
其中分子量在1万左右,2.8万,3.1万三种活性蛋白含量约占总蛋白
的18%,海洋星虫提取物中三种活性蛋白的含量为5.67%。我们发
现这三种蛋白具有非常显著的抗疲劳、抗衰老功效
用本发明海洋星虫提取物进行有关功效试验:
1、海洋星虫提取物能够显著提高机体免疫功能
研究发现海洋星虫提取物灌胃给药对小鼠脾脏和胸腺重量指数
有显著增强作用,高剂量组P值均小于0.01(如表1);能显著促进
小鼠淋巴细胞转化,给药剂量为0.2g/kg·d时显著提高淋巴细胞转化
率(P<0.05),给药剂量为1.0g/kg·d时非常显著提高淋巴细胞转化
率(P<0.01)(如表2)。说明海洋星虫提取物对机体免疫功能具有显
著的促进作用。
表1 海洋星虫提取物灌胃给药对小鼠脾脏和胸腺指数的影响
组别 动物数(只) 剂量 给药方式(天) 脾指数(mg/g) 胸腺指数
(g/kg·d) (mg/g)
生理盐水 9 0 Po×20 4.04±0.33 2.22±0.47
海洋星虫 11 0.2 Po×20 4.24±0.57 2.27±0.85
海洋星虫 10 1.0 Po×20 4.66±0.74** 2.33±0.35**
表2 海洋星虫提取物灌胃给药对小鼠淋巴细胞转化率的影响
组别 动物数(只) 剂量(g/kg·d) 给药方式(天) 淋转率 P值
生理盐水 9 0 Po×20 0.047±0.028
海洋星虫 11 0.2 Po×20 0.092±0.062 <0.05
海洋星虫 10 1.0 Po×20 0.142±0.111 <0.01
2、海洋星虫提取物具有显著的抗疲劳作用
(1)海洋星虫提取物能够显著延长小鼠负重游泳时间
采用小鼠负重游泳试验,结果如表3。昆明种小鼠口服给药30天
后,负重游泳时间显著延长,给药中剂量组负重游泳时间与对照组相
比有显著性延长(P<0.05)。高剂量组负重游泳时间与对照组相比有
非常显著延长(P<0.01)。
表3 样品对小鼠负重游泳时间的影响(X±SD)
剂量(g/kg.d) 动物数(只) 负重游泳时间(秒)
对照组 10 456±125
0.04 10 527±180
0.09 10 577±152*
0.26 10 687±136**
(2)海洋星虫提取物能够显著加快动物血乳酸的消除
昆明种小鼠口服给药30天后,在末次给药后30分钟、负重(2
%体重)游泳后0分钟、游泳后热风吹干并安静30分钟后,分别测
定小鼠血乳酸水平。结果如图1所示,运动前和运动后0分钟各给药
组动物血乳酸水平与对照组动物均无明显差异(P>0.05),给药组动
物运动后30分钟血乳酸水平随着给药剂量的增加而逐渐下降,高剂
量组下降非常显著(P<0.05)。
(3)海洋星虫提取物能够显著降低运动小鼠血清尿素氮
昆明种小鼠口服给药30天后,在末次给药后30分钟,将小鼠放
入30℃水温游泳90分钟,热风烘干,安静后,取血清测尿素氮。结
果见图2,随着给药剂量的增加,小鼠血清尿素氮逐渐下降,高剂量
组有显著性差异。
上述结果提示经口给予小鼠不同剂量的海洋星虫提取物30天
后,小鼠负重游泳时间明显延长,运动后小鼠血乳酸消除明显加快,
血清尿素氮含量下降显著;说明海洋星虫提取物具有明显的抗疲劳作
用。
3、海洋星虫提取物具有显著的延缓衰老作用
1)海洋星虫提取物具有显著的抗氧化作用
20月龄的SD雄性大白鼠为研究对象,分为低、中、高三剂量组,
另设老龄动物对照组和青年动物对照组(给予蒸馏水),每组10只动
物。连续口服给药30天后于第31天,摘眼球取血,离心取血清。测
定血中过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)含量和血中超氧化物歧
化酶(SOD)活力。
海洋星虫提取物对SD大鼠体重的影响如表4所示。样品各剂量
组与老年对照组相比,均无显著性差异。海洋星虫提取物对SD大鼠
血清过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)含量的影响如图3,与老龄
对照组比较,各给药组随着给药剂量的增MDA含量逐渐下降,高剂
量组下降明显。海洋星虫提取物对SD大鼠血清超氧化物歧化酶
(SOD)活力的影响如图4,与老龄对照组比较,各给药组随着给药
剂量的增SOD活性逐渐上升,高剂量组上升显著。
表4 海洋星虫提取物对SD大鼠体重的影响
组别 动物数 初始体重 中期体重 终期体重
老年对照 10 485±14 512±12 541±16
低剂量(0.04g/kg.d) 10 480±16 511±18 538±15
中剂量(0.09g/kg.d) 10 482±16 510±18 541±18
10 480±18 513±16 546±20
高剂量(0.26g/kg.d) 10 78±4* 140±11* 187±11*
青年对照
上述结果提示海洋星虫提取物能够降低SD大鼠血清MDA含量,
增加血清SOD活性,说明海洋星虫提取物具有抗氧化作用。
2)海洋星虫提取物能够明显延长果蝇生存时间
八小时新羽化果蝇成虫为研究对象,每组400只,雌雄各半。设
0.006%、0.017%、0.052%和0.156%四个剂量组和一个对照组(普通
玉米粉),每组样本数为200只。在气温25±1℃条件下培养,每四天
更换新鲜配制的培养基一次,每两天观察记录果蝇生存数和死亡数,
直到全部果蝇死亡为止。计算出半数死亡时间、平均寿命和平均最高
寿命等三个指标。结果如表5所示。高剂量的海洋星虫能够显著延长
雌雄果蝇的平均寿命和雄果蝇平均最高寿命,说明海洋星虫提取物具
有延年益寿之功效。
表5 海洋星虫提取物对果蝇生存的影响
样品浓 平均体重 半数死亡时间 平均寿命 平均最高寿命
度(%) (μg) (天) (天) (天)
雄 雌 雄 雌 雄 雌 雄 雌
0 611 632 55 69 55±9 68±9 72±4 80±2
0.006 609 633 55 71 55±12 68±10 73±3 80±2
0.017 613 628 55 71 56±11 68±10 74±4 80±2
0.052 612 629 57 72 56±11 70±8 74±2 81±2
0.156 609 635 58 72 59±11* 71±7* 76±4* 81±2
上述试验结果海洋星虫提取物具有抗氧化和延年益寿的功效,说
明海洋星虫提取物具有延缓衰老作用。
4、结论
本发明海洋星虫提取物采用广西北海无污染天然的海洋星虫提
取精制而成。富含多种营养成分,如含有人体必需的8种氨基酸及多
种具有重要生物学功能的活性蛋白质,含有丰富天然牛磺酸及人体所
需矿物质及微量元素,广泛适用于儿童、老人及病人,具有多种保健
功能。我们及上海预防医学研究中心的检测结果说明海洋星虫具有明
显的抗疲劳和延缓衰老功效,海洋星虫提取物能够增强动物在应激状
态下的耐力,显著提高衰老期小鼠存活率,增强机体SOD活性,具
有明显的抗衰老作用。具有双向调节功能。具有抗衰老及延年益寿功
能。
陆地冬虫夏草因其独特的疗效、滋补作用被誉为诸虚百损之圣
药,备受历代医家重视,在国内外享有盛名。俗语云“宁得虫草一把,
不要金玉满车”足显其名贵。但是,近年来由于青藏高原气候条件的
破坏,使冬虫夏草的主要产地青海省出现了暖冬和长期干旱,导致了
冬虫夏草产量的锐减,并使该品面临灭绝的危险。
海洋星虫在功效成分上与冬虫夏草极其类似,作为正濒临灭绝的
陆地冬虫夏草的唯一天然替代品,其资源丰富,又可人工养殖,成本
低廉,开发海洋星虫必将成为21世纪的黄金产业。