一种注射用醒脑静冻干粉针剂及其制备方法 所属领域 本发明属中药制药领域，具体涉及一种注射用醒脑静冻干粉针剂及其制备方法。
背景技术 超临界流体萃取是一种新型萃取分离技术，它能够比较完好地保存中药有效成分不被破坏或发生次生化，尤其适合于对热敏感性强、容易氧化分解的中药成分的提取，具有萃取提取效率高，无污染，无溶剂残留的优点。
环糊精以其特殊的分子结构能与许多客体分子形成包结配合物，因此在药学上主要用来提高药物在制剂中的稳定性，增加难溶性药物在水中的溶解度等，但β-环糊精(β-CD)本身的低溶解度限制了它的应用，在众多的环糊精衍生物中羟丙基β环糊精(HP-β-CD)衍生物被认为是最有前途的高级药物载体材料。HP-β-CD在水中的溶解度为75％，远远大于β-CD1.85％(25℃)，它比β-CD的水溶解度提高近40倍，所以难溶性药物被HP-β-CD包合后，不仅能增加药物的溶解度和溶解速度，还可以提高药物的生物利用度和稳定性。动物实验表明，HP-β-CD本身安全性好，无毒副作用，并且HP-β-CD已被美国药典作为药用辅料收载。因此，采用HP-β-CD包合水溶性小的成分，能很好解决其在注射液中溶解度小的问题。
醒脑静注射液由麝香7.5g、郁金30g、冰片1g、栀子30g组成，是在经典镇惊开窍药物安宫牛黄丸的基础上研制而成。麝香性辛温香窜，能开经络通诸窍，透肌骨，暖五脏；冰片善走能散，通诸窍，散郁火；栀子苦寒，凉心热，全方以麝香开窍醒脑，栀子清热泻火解毒、凉血活血，共同起到开窍醒脑、清热凉血、行气活血、解毒止痛的作用。
醒脑静注射液在临床上主要用于急救性脑病的治疗，对流行性乙型脑炎、肝昏迷、神经系统感染引起的昏迷、抽搐及中毒性脑病有较好疗效，是医院常用急救药之一。但现行的制备工艺存在一定的缺点(卫生部中成药成方制剂部颁标准第17分册)，特别是对麝香的提取只采用水蒸汽蒸馏提取，这样存在较大地浪费，因麝香为名贵中药，价格高，若对其采取进一步的水提，则可使其得到充分利用；现行工艺对郁金和栀子也只用水蒸汽蒸馏进行提取，这样也未达到对这两味药的充分利用；工艺中冰片则采用吐温-80增溶，吐温-80具有溶血作用，所以在静脉注射液中不宜应用。再加上注射液由于稳定性较差，贮存一定时间后往往出现pH值改变，外观色泽变深，甚至出现浑浊和沉淀等，使澄明度不合格，故醒脑静注射液的工艺有待改进与提高。
【发明内容】
针对上述问题，本发明采用超临界流体萃取技术提取麝香中的主要有效成分麝香酮，并采用羟丙基β-环糊精对其进行包合，提高其稳定性，对超临界萃取法提取后的麝香粉末，采用温水浸提法提取其水溶性成分，这样基本上保留了麝香中的有效成分，特别是氨基酸类成分，使麝香的药效得到充分的发挥，节约了资源。
根据栀子和郁金中所含化学成分的理化性质和药理活性，对此二味药采用50％-80％的乙醇提取，然后再采用正丁醇萃取纯化，既兼顾了二味药中水溶性和脂溶性有效成分的提取，同时又达到了与水溶性杂质分离的目的，较只采用水蒸气蒸馏提取对药材的利用率高。冰片在水中几乎不溶，对冰片采用升华法纯化处理后，用羟丙基β-环糊精包合，以增加其在水中的溶解度，同时增加其稳定性，并可防止其挥发，避免了现行工艺中采用吐温-80增溶而导致溶血的缺点。所以本发明的醒脑静注射冻干粉针，具有制备工艺合理、质量稳定、疗效确切的特点。
本发明通过以下技术方案实现：
1、取麝香粉末，置超临界萃取器中，以15-45Mpa的萃取压力，40℃的萃取温度萃取2小时，得麝香酮萃取物；提取后的麝香粉末加温水浸提2次，每次2小时，浸提液合并，滤过，滤液以分子量为5000的超滤膜超滤以除去大分子，超滤液备用。取麝香酮萃取物，加入到饱和的羟丙基β-环糊精溶液中，恒温搅拌一定时间，置冰箱中冷藏过夜，抽滤，低温干燥，得麝香酮HP-β-CD包合物粉末。
2、取冰片，以升华法精制，用适量60％乙醇溶解，加入到饱和的HP-β-CD溶液中，恒温搅拌一定时间，置冰箱中冷藏过夜，抽滤，低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物粉末。
3、取栀子、郁金药材粉碎成粗粉，用60％-80％的乙醇提取2次，每次1小时，提取液合并，减压回收乙醇至无醇味，加入适量蒸馏水，以正丁醇萃取3次，萃取液合并，减压回收至干，得栀子和郁金提取物。
4、取上述栀子和郁金提取物、冰片HP-β-CD包合物、麝香酮HP-β-CD包合物以及麝香浸提液的超滤液，加入到含适量葡萄糖和葡甲胺的注射用水溶液中，加冻干赋形剂适量，搅拌使溶解，用0.2％的活性炭煮沸10分钟，滤过，滤液再加注射用水至规定量，搅匀，滤液再除菌滤过，分装，冷冻干燥，即得。
5、冻干赋形剂可以是甘露醇、乳糖、葡萄糖中一种或二种的混合物。
本发明通过下述药理试验，进行进一步的说明。
对本发明的一种注射用冻干粉针剂与醒脑静注射液进行药效学对比试验，以对本发明作进一步的说明。因醒脑静为中药急救用药，所以本实验考察了二者对小鼠的促醒作用。
1、试药与实验动物
醒脑静注射液(云南省大理药业有限公司，每支10ml，批号20021104)；注射用安钠咖原料(上海第十四制药厂)；注射用戊巴比妥钠原料(merk公司)；醒脑静冻干粉针剂(自制)。
小鼠：昆明种小白鼠40只，体重18-22g，雌雄各半。
2、醒脑静注射液和本发明的注射用醒脑静冻干粉针剂对小鼠睡眠时间的影响
取小鼠40只，随机分成四组，每组10只，分别尾静脉注射给氯化钠注射液、安钠咖生理盐水溶液(2mg/ml)、醒脑静注射液与醒脑静冻干粉针用适量生理盐水稀释，将二者配成生药量相当的溶液(醒脑静注射液每10ml加生理盐水50ml稀释，注射用醒脑静冻干粉针加生理盐水60ml使溶解)，20ml/kg，每天一次，连续给药2d，于末次给药后15min，小鼠每20g体重腹腔注射戊巴比妥钠生理盐水溶液(3mg/ml)0.3ml，记录小鼠翻正反射消失至恢复的时间，计算各组均值与标准差，进行t检验，与空白对照组比较差异显著性，结果见下表。
组别 动物数 剂量(稀释后) 睡眠时间(min)
生理盐水组 10 0.4ml 29.8±6.5
安钠咖对照组 10 2mg/kg 9.7±5.4**
本发明的注射用醒
10 20ml/kg 12.6±5.8**
脑静冻干粉针剂组
醒脑静注射液组 10 20ml/kg 14.7±6.1*
与生理盐水组比较：*P＜0.05，**P＜0.01
给药剂量为临床用药剂量的10～20倍，且给药时间较短，以求与临床用药时间相平行。实验结果显示，本发明的注射用醒脑静冻干粉针剂和醒脑静注射液均能明显缩短戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间，但本发明的醒脑静冻干粉针剂具有更好的效果。
具体实施形式
实施例1
1、处方 麝香7.5g 郁金30g 冰片1g 栀子30g
2、提取工艺：
(1)、取麝香，研成粉末，置超临界萃取器中，以45Mpa的萃取压力，40℃的萃取温度萃取2小时，得麝香酮萃取物；超临界萃取后的麝香粉末加温水浸提2次，每次2小时，浸提液合并，滤过，滤液以分子量为5000的超滤膜超滤以除去大分子，超滤液备用置超临界萃取罐中提取1.5h，得麝香酮萃取物；提取后的麝香粉末加温水浸提2次，每次2小时，浸提液合并，滤过，滤液以分子量为5000的超滤膜超滤以除去大分子，超滤液备用。取麝香酮萃取物，用适量乙醇溶解，加入到饱和的羟丙基β-环糊精溶液中，40℃恒温搅拌3小时，置冰箱中冷藏过夜，抽滤，低温干燥，得麝香酮HP-β-CD包合物粉末。
(2)、取冰片，以升华法精制，用适量60％乙醇溶解，加入到饱和的HP-β-CD溶液中，30℃恒温搅拌4小时，置冰箱中冷藏过夜，抽滤，低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物粉末。
(3)、取栀子、郁金药材，粉碎成粗粉，用60％的乙醇提取2次，每次1小时，提取液合并，减压回收乙醇至无醇味，加入适量蒸馏水，以正丁醇萃取3次，萃取液合并，减压回收至干，得栀子和郁金提取物。
3、冻干冻干粉针剂的制备：取上述栀子和郁金提取物、冰片HP-β-CD包合物、麝香酮HP-β-CD包合物以及麝香浸提液的超滤液，加入到含适量葡萄糖和葡甲胺的注射用水溶液中，搅匀，用0.2％的活性炭煮沸10分钟，滤过，滤液再除菌滤过，再加注射用水至规定量，分装，冷冻干燥，即得。
实施例2
1、处方 麝香7.5g 郁金30g 冰片1g 栀子30g
2、提取工艺：
(1)、取麝香，研成粉末，置超临界萃取器中，以15Mpa的萃取压力，40℃的萃取温度萃取2小时，得麝香酮萃取物；超临界萃取后的麝香粉末加温水浸提2次，每次2小时，浸提液合并，滤过，滤液以分子量为5000的超滤膜超滤以除去大分子，超滤液备用置超临界萃取罐中提取1.5h，得麝香酮萃取物；提取后的麝香粉末加温水浸提2次，每次2小时，浸提液合并，滤过，滤液以分子量为5000的超滤膜超滤以除去大分子，超滤液备用。取麝香酮萃取物，用适量乙醇溶解，加入到饱和的羟丙基β-环糊精溶液中，40℃恒温搅拌3小时，置冰箱中冷藏过夜，抽滤，低温干燥，得麝香酮HP-β-CD包合物粉末。
(2)、取冰片，以升华法精制，用适量60％乙醇溶解，加入到饱和的HP-β-CD溶液中，30℃恒温搅拌4小时，置冰箱中冷藏过夜，抽滤，低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物粉末。
(3)、取栀子、郁金药材，粉碎成粗粉，用80％的乙醇提取2次，每次1小时，提取液合并，减压回收乙醇至无醇味，加入适量蒸馏水，以醋酸乙酯萃取3次，萃取液合并，减压回收至干，得栀子和郁金提取物。
3冻干冻干粉针剂的制备：取上述栀子和郁金提取物、冰片HP-β-CD包合物、麝香酮HP-β-CD包合物以及麝香浸提液的超滤液，加入到含适量葡萄糖和葡甲胺的注射用水溶液中，再加注射用水至规定量，搅匀，用0.2％的活性炭煮沸10分钟，滤过，滤液再除菌滤过，分装，冷冻干燥，即得。
实施例3
1、处方 麝香7.5g 郁金30g 冰片1g 栀子30g
2、提取工艺：
(1)、取麝香，研成粉末，置超临界萃取器中，以25Mpa的萃取压力，40℃的萃取温度萃取2小时，得麝香酮萃取物；超临界萃取后的麝香粉末加温水浸提2次，每次2小时，浸提液合并，滤过，滤液以分子量为5000的超滤膜超滤以除去大分子，超滤液备用置超临界萃取罐中提取1.5h，得麝香酮萃取物；提取后的麝香粉末加温水浸提2次，每次2小时，浸提液合并，滤过，滤液以分子量为5000的超滤膜超滤以除去大分子，超滤液备用。取麝香酮萃取物，用适量乙醇溶解，加入到饱和的羟丙基β-环糊精溶液中，40℃恒温搅拌3小时，置冰箱中冷藏过夜，抽滤，低温干燥，得麝香酮HP-β-CD包合物粉末。
(2)、取冰片，以升华法精制，用适量60％乙醇溶解，加入到饱和的HP-β-CD溶液中，30℃恒温搅拌4小时，置冰箱中冷藏过夜，抽滤，低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物粉末。
(3)、取栀子、郁金药材，粉碎成粗粉，用70％的乙醇提取2次，每次1小时，提取液合并，减压回收乙醇至无醇味，加入适量蒸馏水，以正丁醇萃取3次，萃取液合并，减压回收至干，得栀子和郁金提取物。
3冻干冻干粉针剂的制备：取上述栀子和郁金提取物、冰片HP-β-CD包合物、麝香酮HP-β-CD包合物以及麝香浸提液的超滤液，加入到含适量葡萄糖和葡甲胺的注射用水溶液中，再加注射用水至规定量，搅匀，用0.2％的活性炭煮沸10分钟，滤过，滤液再除菌滤过，分装，冷冻干燥，即得。