一种中药组合物及其制备方法 【技术领域】
本发明涉及一种中药组合物及其制备方法,特别是涉及一种减少和预防产后出血的中药组合物及其制备方法。
背景技术
产后出血是产科的常见病,约占分娩产妇的2%-10%,严重出血病例大约占分娩产妇1%左右,依然是产妇死亡的重要原因之一,子宫收缩乏力(uterineatony),母体软组织损伤,胎盘组织的残留等是产后出血的发病原因,其中子宫收缩乏力,是产后出血的最主要原因,约占产后出血病例的90%以上,多数因出血而死亡的病例,归因于不能控制出血,因此,缩宫药物的及时使用十分关键。第三产程及时应用缩宫药物,可以减少出血量的40%,可以使产后出血的发生率从10%左右减少到6%左右,因此,缩宫药物已经成为产后的常规用药。当前临床应用的缩宫药物有缩宫素(oxytocin)、麦角新碱(methylergonovine)和前列腺素(prostaglandins)等制剂,这些药物都有程度不同的副作用。例如前列腺素类制剂的前列腺素样作用,可引起颤抖发热(Shivering and pyrexia),升高血压(increasedbloodpressure)。胃肠道常见的副作用是腹痛、呕吐、泄泻(abdominalpain)等缩宫素有诱发高血压、水钠潴留、过敏等副作用,缩宫素另一个问题是其效应与产妇子宫平滑肌的缩宫素受体分布多少有关,也就是说存在着效应个体差异。麦角类制剂副作用表现在持续性的收缩血管,可造成胸痛、抽搐(convulsions)、头痛、心律减慢、心律失常、呕吐、恶心、呼吸浅表,还可以引起子宫强直性收缩。可见现行的缩宫药物存在不同程度的副作用。
技术内容
本发明目的在于提供一种减少和预防产后出血且无毒副作用的中药组合物及其制备方法;本发明目的还在于提供本发明药物的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的:
本发明药物原料药:
当归4-15重量份 炮姜1-3重量份 甘草1-3重量份
本发明原料药优选比例为:当归12重量份、炮姜2重量份、甘草2重量份。
本发明原料药中加入蒲黄1-3重量份效果更好,优选蒲黄2重量份。
本发明药物还可以是原料药的提取物制成:当归挥发油1-3重量份 炮姜酸沉物2-4重量份 甘草提取物2-3重量份优选当归挥发油1重量份 炮姜酸沉物3重量份 甘草提取物2重量份
上述原料药地提取物中炮姜酸沉物可用炮姜和蒲黄酸沉物1-3重量份替代,优选炮姜和蒲黄酸沉物3重量份。
本发明药物制备方法为:当归加1/4-1/6量的NaCl及4-8倍量水,水蒸气蒸馏6-10小时,以油水分离器提取挥发油,得当归挥发油备用;
蒲黄和/或炮姜,加60-80%乙醇提取2-3次,每次加4-6倍量醇,回流提取1-3小时,滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至含生药0.2g/ml,离心,药液再浓缩至相对密度为1.06的溶液,加热,用HCI调pH3~4,静置,取沉淀,水洗,烘干,得蒲黄和/或炮姜酸沉物备用;
甘草,加水煎煮提取2-3次,每次6-9倍量水,煎煮1-2小时,滤过,合并滤液,浓缩至含生药0.3g/ml,加硫酸调pH3~4酸沉,静置,取沉淀,烘干,加加相当于粗品0.5~2倍量的浓氨水调成糖浆状,再加入相当于粗品1~4倍量的冰醋酸,加热溶解,放置,加入甘草酸结晶,析晶,过滤,结晶用0.5~2倍量冰醋酸洗涤,烘干,得甘草提取物备用;
上述当归挥发油加入上述提取物混合,可制成临床可接受的剂型,如片剂、胶囊、口服液体制剂、颗粒剂等。
本发明当归、炮姜、甘草、蒲黄或它们的提取物制成的胶囊剂质量控制方法为:
鉴别:取软胶囊内容物0.1g,加醋酸乙酯5ml,超声处理10-220分钟,滤过,滤液作为供试品溶液;另取当归对照药材1g,加醋酸乙酯10ml,超声处10-20分钟,滤过,滤液作为对照药材溶液;照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验,吸取上述两种溶液各2~5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以9-12∶1石油醚(沸程为60~90℃)-醋酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
取软胶囊内容物0.1g,加甲醇25ml,超声处理6-10秒钟使溶解,滤过,滤液作为供试品溶液;另取异鼠李素-3-0-新橙皮糖苷对照品,加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液,作为对照品溶液;照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,36-40∶60-64甲醇-0.1%三氟乙酸溶液为流动相;检测波长为230nm;吸取上述两种溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,供试品溶液主峰保留时间应与对照品峰保留时间一致。
取软胶囊内容物1g,加乙醇25ml,超声处理30分钟,滤过,滤液浓缩近干,加乙醇定容至2ml,作为供试品溶液;另取6-姜酚对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录V1 B)试验,吸取上述两种溶液各2~5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以1-2∶1-2环己烷—乙醚为展开剂,展开,取出,晾干,喷以香草醛硫酸试液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
取软胶囊内容物0.2g,加乙醚10ml,加热回流20-40分钟,放冷,弃去乙醚层,残留物加甲醇5ml使溶解,作为供试品溶液;另取甘草酸铵对照品,加甲醇制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验,吸取上述两种溶液各2~5μl,分别点于同一硅胶GP254薄层板上,以14-16∶0.8-1.2∶0.8-1.2∶1-3醋酸乙酯—甲酸—冰醋酸—水为展开剂,展开,取出,晾干,置254nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。含量测定:当归、炮姜照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定,色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,65-67∶30-31甲醇-0.1%三氟乙酸溶液为流动相;检测波长为218nm;理论板数按藁本内酯峰计算应不低于3000;
校正因子测定,取于五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的萘对照品适量,加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含0.1mg的溶液,摇匀,作为内标溶液;另取藁本内酯对照品10mg,精密称定,置于100ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液A;再取6-姜酚对照品15mg,精密称定,置100ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液B;精密量取对照品溶液A,25ml及对照品溶液B5ml,置50ml量瓶中,精密加入内标溶液2ml,加甲醇稀释至刻度,摇匀;精密吸取10μl,注入液相色谱仪,计算校正因子;取软胶囊内容物,混匀,取约0.1g,精密称定,置50ml量瓶中,加甲醇40ml超声处理20-40秒钟使溶解,精密加入内标溶液2ml,加甲醇稀释至刻度,摇匀;精密吸取10μl,注入液相色谱仪,测定,即得,软胶囊每粒含当归以藁本内酯(C12H14O2)计,不得少于15mg;含炮姜以6-姜酚(C17H24O3)计,不得少于2.8mg;
甘草照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI O)测定,色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;65-68∶31-34∶0.8-1.2甲醇0.2mol/L醋酸铵溶液—冰醋酸为流动相;检测波长为250nm,理论板数按甘草酸单铵盐峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备,取甘草酸单铵盐对照品约10mg,精密称定,置50ml量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg,折合甘草酸为0.1959mg;供试品溶液的制备,取软胶囊内容物,混匀,取约0.1g,精密称定,置50ml量瓶中,加流动相40-50ml,超声处理20-40秒钟使溶解,放冷,加流动相至刻度,摇匀,滤过,即得;精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,分别注入液相色谱仪,测定,即得,软胶囊每粒含甘草以甘草酸(C42H62NO16)计,不得少于48.0mg。
本发明药物组合物制成的软胶囊具有活血化瘀,温经止痛作用,用于子宫收缩乏力,减少和预防产后出血,子宫复位不全。第三产程结束后立即服用,每两小时1粒或根据宫缩程度调整给药间隙。产后可根据临床症状继续给药,一次1粒,一日3次,每粒装0.53g。
本发明药物组合物制成的软胶囊药效学试验
1、止血作用
灌胃给予本发明软胶囊中间体(94mg/kg、187mg/kg以提取物计算)可缩短断尾引起的出血时间及凝血时间(P<0.01,P<0.001)
2、镇痛作用
热板法:灌胃给予本发明软胶囊中间体47mg/kg的镇痛效应出现的时间为60分钟,120分钟观察不到。
镇痛效应;94mg/kg,给药后30分钟即出现镇痛作用,效应可维持列60分钟,120分钟未观察到镇痛作用;
187mg/kg,30、60、120分钟均观察到镇痛作用,表明谊剂量30分钟出现效应,效应可维持到120分钟;
扭体试验:94mg/kg、187mg/kg可对抗疼痛性扭体(P<0.05,P<0.01)。
3、抗炎作用
本发明软胶囊中间体94mg/kg、187mg/kg能抑制巴豆油外涂引起的小鼠耳廓肿胀(P<0.05 P<0.01);
明显桔抗角又菜胶引起的大鼠足跖肿胀,32mg/kg、于给药后2小时观察到抗炎效应;65mg/kg于给药后1小时,2小时观察到抗炎效压;130mg/kg于给药后1、2、3小时观察到抗炎效应.
4、缩宫作用
(1)在体研究
十二指肠给予产后麻醉状态下的家兔坤血妄软胶囊中间体17mg/kg,34mg/kg,67mg/kg(以提取物计算),均可显著增加在体子宫的收缩(P<0.05P<0.01)。起效时间在给药后40-50分钟,效应高峰出现于给药后60-70分钟,持续时间在20-40分钟范围.坤血安不增加子宫的收缩频率。经十二指肠给予本发明软胶囊,能明显增加怀孕未期家兔于宫体的平滑肌动作电位脉冲的发放(P<0.01),对怀孕末期家免予宫颈平滑肌肌电活动则无显著的影响(p>0.05)。提示本发明软胶囊具有增加宫缩作用,可以发挥催产、止血的效应;本发明软胶囊对宫颈的电活动无明显影响,表明它不干预产道舒缩,有利于胎儿的娩出。本发明软胶囊诱发的子宫体收缩具有节律性,温和而持久。
(2)离体试验本发明软胶囊中间体能明显增加小鼠离体子宫的收缩力,浴槽内药物在6×10-5mg/ml时,对子宫收缩力无明显的影响,6×10-4mg/ml浓度时,能明显增加离体小鼠子宫的收缩力,6×10-3mg/ml及6×10-2mg/ml浓度时收缩力明显增加,呈剂量依赖关系,6×10-2mg/ml时,干扰因素使得变异系数明显增加。量效关系研究表明,6×10-6-6×10-1mg/mL均可收缩小鼠离体子宫,量效关系明确,ED50=0.44mg/ml,由于作用温和而持久,较难达到最大收缩效应;2×10-2μ/m缩宫素产生最大收缩效压,作用强烈,ED50=0.95×10-3μ/mL。
5、缩宫作用的时—效关系初步研究
小鼠整体给予坤血妄软胶囊中间体,定时采集血清,观察给药后血清对于宫收缩效应的变化,结果表明,给药后30分钟,子宫收缩力增加,60分钟时达到效应峰值,90分钟后效应衰减,180分钟时效应消失,表明一次灌胃给药的起效时间在30分钟左右,峰效应出现在给药后60分钟左右,效应维持时间为90分钟左右。
下述实施例均能实现上述效果。
实施例1:
当归 12000g 蒲黄 2000g
炮姜 2000g 甘草 2000g
当归加1/5量的NaCl及6倍量水,水蒸气蒸馏8.0小时,以油水分离器提取挥发油,备用;
蒲黄、炮姜2味,加70%乙醇提取二次,第一次加6倍量醇,回流提取2.0小时,第二次加4倍量醇,回流提取2.0小时,滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至含生药0.2g/ml,离心,药液再浓缩至相对密度为1.06的溶液,加热,用HCI调pH3~4,静置,取沉淀,水洗,烘干,备用;
甘草,加水煎煮提取二次,第一次9倍量水,煎煮1.5小时,第二次加6倍量水,煎煮1.5小时,滤过,合并滤液,浓缩至含生药0.3g/ml,加硫酸调pH3~4酸沉,静置,取沉淀,烘干,加浓氨水调成糖浆状,再用冰醋酸加热溶解,放置,加入少量甘草酸结晶,析晶,过滤,结晶用少量冰醋酸洗涤,烘干,备用;
上述当归挥发油加入聚乙二醇-400 274.3g,甘油13.7g,混匀,与上述提取物混合,溶解,胶体磨研磨10分钟,过筛,压制法成型,制成软胶囊1000粒。
实施例2:
当归 12000g 炮姜 2000g 甘草 2000g
当归加1/4量的NaCl及6倍量水,水蒸气蒸馏8.0小时,以油水分离器提取挥发油,备用;
炮姜加80%乙醇提取3次,第一次加6倍量醇,回流提取1.5小时,第二次加5倍量醇,回流提取1.5小时,第3次加4倍量醇,回流提取1.5小时滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至含生药0.2g/ml,离心,药液再浓缩至相对密度为1.06的溶液,加热,用HCI调pH3~4,静置,取沉淀,水洗,烘干,备用;
甘草,加水煎煮提取3次,第一次9倍量水,煎煮2小时,第二次加8倍量水,煎煮1.5小时,第三次7倍量水,煎煮1.5小时,滤过,合并滤液,浓缩至含生药0.3g/ml,加硫酸调pH3~4酸沉,静置,取沉淀,烘干,加浓氨水调成糖浆状,再用冰醋酸加热溶解,放置,加入少量甘草酸结晶,析晶,过滤,结晶用少量冰醋酸洗涤,烘干,备用;
上述当归挥发油加入加入食用植物油288克,或其他分散介质288克,混匀,按常规工艺制成颗粒剂1000袋,每袋10g,每袋含相当生药量16g。
实施例3:
当归挥发油 40.0g 炮姜酸沉物 120.0g
甘草提取物 80.0g
制备方法:当归加1/4量的NaCl及6倍量水,水蒸气蒸馏8.0小时,以油水分离器提取挥发油,得当归挥发油备用;
炮姜加80%乙醇提取3次,第一次加6倍量醇,回流提取1.5小时,第二次加5倍量醇,回流提取1.5小时,第3次加4倍量醇,回流提取1.5小时滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至含生药0.2g/ml,离心,药液再浓缩至相对密度为1.06的溶液,加热,用HCI调pH3~4,静置,取沉淀,水洗,烘干,得炮姜酸沉物备用;
甘草,加水煎煮提取3次,第一次9倍量水,煎煮2小时,第二次加8倍量水,煎煮1.5小时,第三次7倍量水,煎煮1.5小时,滤过,合并滤液,浓缩至含生药0.3g/ml,加硫酸调pH3~4酸沉,静置,取沉淀,烘干,加浓氨水调成糖浆状,再用冰醋酸加热溶解,放置,加入少量甘草酸结晶,析晶,过滤,结晶用少量冰醋酸洗涤,烘干,得甘草提取物备用;
上述当归挥发油以常规辅料包裹后加入上述提取物混合,按常规工艺制成颗粒剂1000袋,每袋10g,每袋含相当生药提取物量0.24g。
实施例4:
当归挥发油 40.0g 炮姜和蒲黄酸沉物 120.0g
甘草提取物 80.0g 聚乙二醇-400 274.3g
甘油 13.7g
当归加1/5量的NaCl及6倍量水,水蒸气蒸馏8.0小时,以油水分离器提取挥发油,得当归挥发油备用;
蒲黄和炮姜2味,加70%乙醇提取二次,第一次加6倍量醇,回流提取2.0小时,第二次加4倍量醇,回流提取2.0小时,滤过,合并滤液,回收乙醇,浓缩至含生药0.2g/ml,离心,药液再浓缩至相对密度为1.06的溶液,加热,用HCI调pH3~4,静置,取沉淀,水洗,烘干,得蒲黄和炮姜酸沉物备用;
甘草,加水煎煮提取二次,第一次9倍量水,煎煮1.5小时,第二次加6倍量水,煎煮1.5小时,滤过,合并滤液,浓缩至含生药0.3g/ml,加硫酸调pH3~4酸沉,静置,取沉淀,烘干,加加相当于粗品1倍量的浓氨水调成糖浆状,再加入相当于粗品2倍量的冰醋酸,加热溶解,放置,加入少量甘草酸结晶,析晶,过滤,结晶用1倍量冰醋酸洗涤,烘干,备用;
上述当归挥发油加入聚乙二醇-400 274.3g,甘油13.7g
上述当归挥发油加入聚乙二醇-400,甘油混匀,与上述提取物混合,溶解,胶体磨研磨10分钟,过筛,压制法成型,制成软胶囊1000粒。
实施例5:
本发明软胶囊质量控制方法
鉴别:取软胶囊内容物0.1g,加醋酸乙酯5ml,超声处理20分钟,滤过,滤液作为供试品溶液。另取当归对照药材1g,加醋酸乙酯10ml,超声处20分钟,滤过,滤液作为对照药材溶液;照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验,吸取上述两种溶液各2~5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以10∶1石油醚60~90℃-醋酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
取软胶囊内容物0.1g,加甲醇25ml,超声处理数秒钟使溶解,滤过,滤液作为供试品溶液;另取异鼠李素-3-0-新橙皮糖苷对照品,加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液,作为对照品溶液;照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,38∶62甲醇-0.1%三氟乙酸溶液为流动相;检测波长为230nm;吸取上述两种溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图;供试品溶液主峰保留时间应与对照品峰保留时间一致;
取软胶囊内容物1g,加乙醇25ml,超声处理30分钟,滤过,滤液浓缩近干,加乙醇定容至2ml,作为供试品溶液;另取6-姜酚对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录V1 B)试验,吸取上述两种溶液各2~5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以1∶1环己烷—乙醚为展开剂,展开,取出,晾干,喷以香草醛硫酸试液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
取软胶囊内容物0.2g,加乙醚10ml,加热回流30分钟,放冷,弃去乙醚层,残留物加甲醇5ml使溶解,作为供试品溶液;另取甘草酸铵对照品,加甲醇制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验,吸取上述两种溶液各2~5μl,分别点于同一硅胶GP254薄层板上,以15∶1∶1∶2醋酸乙酯—甲酸—冰醋酸—水为展开剂,展开,取出,晾干,置254nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
含量测定:当归、炮姜照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定,色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,67∶33甲醇-0.1%三氟乙酸溶液为流动相;检测波长为218nm,理论板数按藁本内酯峰计算应不低于3000;
校正因子测定,取于五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的萘对照品适量,加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含0.1ing的溶液,摇匀,作为内标溶液;另取藳本内酯对照品10mg,精密称定,置于100ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液A;再取6-姜酚对照品15mg,精密称定,置100ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液B;精密量取对照品溶液A25ml及对照品溶液B5ml,置50ml量瓶中,精密加入内标溶液2ml,加甲醇稀释至刻度,摇匀;精密吸取10μl,注入液相色谱仪,计算校正因子;
测定法,取软胶囊装量差异项下的内容物,混匀,取约0.1g,精密称定,置50ml量瓶中,加甲醇40ml,经功率1200W,频率50kHz超声处理30秒钟使溶解,精密加入内标溶液2ml,加甲醇稀释至刻度,摇匀;精密吸取10μl,注入液相色谱仪,测定,即得,软胶囊每粒含当归以藳本内酯(C12H14O2)计,不得少于15mg;含炮姜以6-姜酚(C17H24O3)计,不得少于2.8mg;
甘草照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VIO)测定,色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;67∶33∶1甲醇0.2mol/L醋酸铵溶液—冰醋酸为流动相;检测波长为250nm;理论板数按甘草酸单铵盐峰计算应不低于3000;
对照晶溶液的制备 取甘草酸单铵盐对照品约10mg,精密称定,置50ml量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,即得,每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg,折合甘草酸为0.1959mg;
供试品溶液的制备,取软胶囊内容物,混匀,取约0.1g,精密称定,置50ml量瓶中,加流动相45ml,超声处理30秒钟使溶解,放冷,加流动相至刻度,摇匀,滤过,即得,测定法,精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,分别注入液相色谱仪,测定,即得,软胶囊每粒含甘草以甘草酸(C42H62NO16)计,不得少于48.0mg。