缓释激素诱导条斑星鲽精子成熟和活力提升方法.pdf

上传人：罗明

文档编号：5625619

上传时间：2019-03-01

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一种激素诱导条斑星鲽精子成熟和活力提升方法，选择性成熟的亲鱼，背部肌肉埋植鲑鱼促性腺激素释放激素(sGnRH)35g/kg，促进精子达到最终成熟，提升精子活力至85-90以上，受精率提高4-7倍。该方法对亲鱼生殖胁迫低，亲鱼成活和性腺成熟率高，产卵效果好，可获得批量优质受精卵。本发明是一套完整的控制技术方法。当精液质量开始下降后，对亲鱼进行二次埋植，重复效果较好。本方法可保证苗种人工繁殖规模化生产。

摘要
申请专利号：	CN201010230926.1	申请日：	2010.07.20
公开号：	CN101889558A	公开日：	2010.11.24
当前法律状态：	撤回	有效性：	无权
法律详情：	发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):A01K 61/00公开日:20101124\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):A01K 61/00申请日:20100720\|\|\|公开
IPC分类号：	A01K61/00	主分类号：	A01K61/00
申请人：	中国水产科学研究院黄海水产研究所
发明人：	徐永江; 柳学周; 孙中之; 刘新富; 陈超; 王妍妍; 兰功钢
地址：	266071 山东省青岛市市南区南京路106号
优先权：
专利代理机构：	青岛联智专利商标事务所有限公司 37101	代理人：	袁和善
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内容摘要

一种激素诱导条斑星鲽精子成熟和活力提升方法，选择性成熟的亲鱼，背部肌肉埋植鲑鱼促性腺激素释放激素(sGnRH)35μg/kg，促进精子达到最终成熟，提升精子活力至85％-90％以上，受精率提高4-7倍。该方法对亲鱼生殖胁迫低，亲鱼成活和性腺成熟率高，产卵效果好，可获得批量优质受精卵。本发明是一套完整的控制技术方法。当精液质量开始下降后，对亲鱼进行二次埋植，重复效果较好。本方法可保证苗种人工繁殖规模化生产的顺利进行。

权利要求书

1.一种缓释激素诱导条斑星鲽精子成熟和活力提升方法，其特征在于它的方法是选择性成熟的雄性条斑星鲽亲鱼，对其进行外源激素的诱导，促进精子最终成熟并提升精子活力。2.根据权利要求1所述的缓释激素诱导条斑星鲽精子成熟和活力提升方法，其特征在于所述的雄性条斑星鲽亲鱼，是在人工温光调控措施下可挤出乳白色精液的成熟雄性亲鱼。3.根据权利要求1所述的缓释激素诱导条斑星鲽精子成熟和活力提升方法，其特征在于所述的外源激素，是鲑鱼促性腺激素释放激素sGnRH。4.根据权利要求3所述的缓释激素诱导条斑星鲽精子成熟和活力提升方法，其特征在于所述的鲑鱼促性腺激素释放激素sGnRH，埋植剂量为35μg/kg，其方式为背部肌肉埋植。5.根据权利要求4所述的缓释激素诱导条斑星鲽精子成熟和活力提升方法，其特征在于所述背部肌肉埋植，位置为靠近头部侧线上方2cm处；每隔10天重复埋植一次，每尾雄鱼可重复两次。

说明书

缓释激素诱导条斑星鲽精子成熟和活力提升方法

技术领域：

本发明属条斑星鲽生殖调控技术，是一种利用外源激素促进条斑星鲽雄性亲鱼精子最终成熟并提升精子活力的方法。

背景技术：

条斑星鲽(Verasper moseri)为一种冷水性底栖大型鲽类，主要分布于日本茨城县以北的太平洋沿岸和若狭湾以北的日本海沿岸，我国黄海和渤海以前也有分布，现在已多年未见渔获。条斑星鲽自然海域中多生活在近岸水域或海湾内，生活水深一般为10-30m，生存水温1-20℃，适宜生长水温13-20℃，适宜生长盐度25-33，在适宜的养殖条件下，经一年的养成，体重可达到900克/尾以上，生长速度快，成活率高，饵料转换率高，养殖成本低，病害发生率低，是一种优良的养殖鱼类，可在我国北方地区进行广泛养殖。2007年，条斑星鲽人工繁育技术获得突破，为该名优鱼种养殖的产业化开发奠定了良好的基础。

人工养殖和温光调控条件下，条斑星鲽雄性亲鱼常常会表现出精液粘稠度过高、精子活动率低(30％-40％)、精子寿命短(1-6min)等症状，严重影响了卵子受精率和批量受精卵的获取，阻碍了人工繁育技术的发展。结合精子结构观察研究结果，其原因可能在于环境异常导致的脑垂体促性腺激素(GtH)释放不足，从而血浆中性类固醇激素水平较低，部分精子未能达到最终成熟(Mylonas et al.，1997)。先前的研究表明，在具有小叶型精巢的硬骨鱼类雄鱼中，精液需借助内源性性激素(GTH)的调控而稀释，排放到输精管中最终排出体外，如果因环境胁迫导致性激素释放不足将会导致精液质量降低(Billard et al.，1982)。因此，从内分泌角度出发，利用外源激素调控脑垂体活动，促进促性腺激素释放和血浆性类固醇激素升高可大大提高精子达到最终成熟的比率和活力。目前，对于亲鱼的缓释激素诱导，国内外采用的都是肌肉埋植法和注射法，尚未有其它诱导方法的报道。

发明内容：

本发明的目的：提供一种利用外源激素促进条斑星鲽雄性亲鱼精子最终成熟并提升精子活力的方法，该方法是对繁殖期采得精液的雄鱼，于背部肌肉埋植鲑鱼促性腺激素释放激素(sGnRH)，提升精子质量，提高受精率，获得批量受精卵。

为实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

选择性成熟的雄性条斑星鲽亲鱼，对其进行外源激素的诱导，促进精子最终成熟并提升精子活力。

所述的雄鱼：在人工温光调控措施下，可挤出乳白色精液的成熟雄性亲鱼。

所述的外源激素是：鲑鱼促性腺激素释放激素(sGnRH)。

所述的复方鲑鱼促性腺激素释放激素sGnRH埋植剂量为35μg/kg，其方式为背部肌肉埋植。

所述的埋植其方式为背部肌肉埋植，埋植背部为靠近头部侧线上方2cm处。每隔10天重复一次，每尾雄鱼可埋植2次。

本发明具有以下优点：

1、本发明利用处于正常繁殖期的性成熟的可采得乳白色精液的雄性亲鱼，采用激素诱导，可大大提高精子达到最终成熟的比例，显著提升精子活力，提高受精率，获得批量优质受精卵，保证人工繁殖的顺利进行。

2、本发明采用背部肌肉埋植方法，对亲鱼生殖刺激小，便于生产实践操作。

3、本发明采用复方鲑鱼促性腺激素释放激素(35μg/kg)诱导亲鱼，外源激素可使血浆中性类固醇激素在较长时间内保持较高表达水平，96h后精液粘稠度明显下降，精子活动率、快速活动率和精子受精大为提高，效果良好。激素效应时间约为72-96h，诱导的效果可维持4-6天，在第一次激素埋植10天后可进行二次埋植，效果可以重复。

4、本发明为条斑星鲽苗种规模化繁育提供了技术保障，对于养殖的产业化发展具有重要意义。

具体实施方式：

实施例：

目前，尚未有关于条斑星鲽雄鱼精巢年周期发育、精子特性以及精子质量的报道，随着条斑星鲽养殖业的兴起，苗种生产业者对受精卵稳定获得技术的需求显得越来越迫切。

本研究在于2009年3月-4月在青岛忠海水产有限公司进行，具体实施过程如下：

1).亲鱼选择：挑选人工温光调控下正处于排精期可采得乳白色精液的条斑星鲽雄鱼8尾(全长25-33cm，体重540-680g)，亲鱼以MS222(150mg/L)麻醉后人工挤压采得精液，镜检发现精液粘稠度高，精子活动率都低于45％，精子快速活动率低于30％，精子寿命1-6min。

2).激素埋植：亲鱼分为两组，每组4尾，埋植sGnRH。使用专用埋植器具，按照35μg/kg的剂量，在靠近头部侧线上方约2cm处肌肉埋植。

3).取样检测及受精检验：埋植激素后亲鱼置于单独培育池内培育，培育条件同未埋植缓释激素的亲鱼。在埋植后24h、48h、72h、96h、192h分别采集精液，并在0h，48h、96h和192h分别采集1.0ml血液样品。观察精液粘稠度并立刻在镜下检查记录精子密度、精子活动率、快速活动率和精子寿命。血液样品以12000rpm离心后收集血清，放射免疫法测定性类固醇激素睾酮(T)的含量。在不同时间采集精液后，利用新鲜的优质卵子进行受精实验，检验精液的受精效果。

4).实验结果：激素进入鱼体96h后，亲鱼精子质量明显提升。具体表现为：精液粘稠度显著下降，精子活动率提高到90.5-98.2％，快速活动率提高至84.7％-92.1％，精子寿命11.06-14.3min，血浆睾酮表达水平由29.5ng/dl(oh)上升到290ng/ml(96h)，并在192h仍保持在194.8ng/dl。受精率由0-13.4％(激素诱导前)上升至45.7-78.3％(96h)，效果较为显著。

10天后，当精液质量开始下降后，对亲鱼进行二次埋植，重复效果较好。