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适于局部给药的包含咪唑喹啉胺及其衍生物的药物组合物.pdf

  • 上传人：r7
  • 文档编号：5624994
  • 上传时间：2019-03-01
  • 格式：PDF
  • 页数：104
  • 大小：2.11MB
    • 摘要
    申请专利号：

    CN201080006838.1

    		 申请日：

    2010.02.05
    公开号：

    CN102307569A

    		 公开日：

    2012.01.04
    当前法律状态：

    授权

    		 有效性：

    有权
    法律详情：

    专利权人的姓名或者名称、地址的变更IPC(主分类):A61K 9/00变更事项:专利权人变更前:希拉寇特公司变更后:尤罗根制药有限公司变更事项:地址变更前:以色列若纳纳变更后:以色列若纳纳|||专利权的转移IPC(主分类):A61K 9/00登记生效日:20151203变更事项:专利权人变更前权利人:泰勒麦迪克斯公司变更后权利人:希拉寇特公司变更事项:地址变更前权利人:瑞士比奥焦变更后权利人:以色列若纳纳|||授权|||实质审查的生效IPC(主分类):A61K 9/00申请日:20100205|||公开
    IPC分类号：

    A61K9/00; A61K47/12; A61K31/4745; A61P13/10; A61P35/00

    		 主分类号：

    A61K9/00
    申请人：

    泰勒麦迪克斯公司
    发明人：

    L·莱尼; R·麦吉; F·帕塔里诺; C·维基奥
    地址：

    瑞士比奥焦
    优先权：

    2009.02.06 EP PCT/EP2009/000834
    专利代理机构：

    北京纪凯知识产权代理有限公司 11245

    		 代理人：

    赵蓉民
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    内容摘要

    本发明总体涉及天然免疫系统调节剂领域，具体涉及包含咪唑喹啉(胺)及其衍生物的药物组合物，其优选适于局部给药，如膀胱内给药。此外，本发明涉及咪唑喹啉(胺)及其衍生物膀胱内治疗膀胱疾病——诸如，膀胱癌和膀胱炎——的应用。本发明还包括这些疾病的治疗方法和本发明药物组合物的给药方法。

    权利要求书

    1： 药物组合物， 其包含咪唑喹啉 ( 胺 ) 和至少一种选自醋酸和 / 或乳酸的有机酸。
    2： 根据权利要求 1 所述的药物组合物， 进一步包含至少一种热敏剂， 其中所述至少一 种热敏剂优选地选自壳聚糖或其衍生物， 或者选自聚 ( 环氧乙烷 )- 聚 ( 环氧丙烷 )- 聚 ( 环 氧乙烷 ) 共聚物 ( 也被称为 PEO-PPO-PEO 或泊洛沙姆 )。
    3： 根据权利要求 2 所述的药物组合物， 其中所述至少一种热敏剂选自聚 ( 环氧乙 烷 )- 聚 ( 环氧丙烷 )- 聚 ( 环氧乙烷 ) 共聚物 ( 也被称为 PEO-PPO-PEO 或泊洛沙姆 ) 或选 自壳聚糖或其衍生物。
    4： 根据权利要求 3 所述的药物组合物， 其中所述至少一种热敏剂选自聚 ( 环氧乙 烷 )- 聚 ( 环氧丙烷 )- 聚 ( 环氧乙烷 ) 共聚物 ( 也被称为 PEO-PPO-PEO 或泊洛沙姆 )。
    5： 根据权利要求 3 所述的药物组合物， 其中所述至少一种热敏剂选自聚 ( 环氧乙 烷 )- 聚 ( 环氧丙烷 )- 聚 ( 环氧乙烷 ) 共聚物 ( 也被称为 PEO-PPO-PEO 或泊洛沙姆 )， 包括 普流罗尼 F 108 Cast Solid Surfacta ； 普流罗尼 F 108 锭剂 ； 普流罗尼 F 108 颗粒剂 ； 普 流罗尼 F 108NF 颗粒剂 ( 泊洛沙姆 338) ； 普流罗尼 F 127 ； 普流罗尼 F127 颗粒剂 ； 普流罗 尼 F 127NF ； 普流罗尼 F 127NF 500BHT 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 127NF 颗粒剂 ( 泊洛沙姆 407) ； 普流罗尼 F 38 ； 普流罗尼 F 38 锭剂 ； 普流罗尼 F68 ； 普流罗尼 F 68 锭剂 ； 普流罗尼 F 68LF 锭剂 ； 普流罗尼 F 68NF 颗粒剂 ( 泊洛沙姆 188) ； 普流罗尼 F 68 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 77 ； 普 流罗尼 F 77 微锭剂 ； 普流罗尼 F 87 ； 普流罗尼 F 87NF 颗粒剂 ( 泊洛沙姆 237) ； 普流罗尼 F 87 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 88 锭剂 ； 普流罗尼 F 88 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 98 ； 普流罗尼 F 98 颗 粒剂 ； 普流罗尼 L 10 ； 普流罗尼 L 101 ； 普流罗尼 L 121 ； 普流罗尼 L 31 ； 普流罗尼 L 35 ； 普 流罗尼 L 43 ； 普流罗尼 L 44 ； 普流罗尼 L 44NF( 泊洛沙姆 124) ； 普流罗尼 L 61 ； 普流罗尼 L 62 ； 普流罗尼 L 62LF ； 普流罗尼 L 62D ； 普流罗尼 L 64 ； 普流罗尼 L 81 ； 普流罗尼 L 92 ； 普 流罗尼 L44NF INH 表面活性剂 ( 泊洛沙姆 124) ； 普流罗尼 N 3 ； 普流罗尼 P 103 ； 普流罗尼 P 104 ； 普流罗尼 P 105 ； 普流罗尼 P 123 表面活性剂 ； 普流罗尼 P 65 ； 普流罗尼 P 84 ； 普流 罗尼 P 85 ； 和泊洛沙姆 403， 或选自由上述热敏剂中的任意两种或更多种所形成的混合物。
    6： 根据权利要求 1 至 5 任一项所述的药物组合物， 包含醋酸和 / 或乳酸， 其浓度为约 0.025M 至约 0.200M， 优选浓度为约 0.025M 至约 0.100M 或浓度为约 0.100M 至约 0.200M 或 其浓度为约 0.075 至约 1.125M。
    7： 根据权利要求 1 至 6 任一项所述的药物组合物， 包含咪唑喹啉 ( 胺 )， 其量为约 0.005％ (w/v) 至约 5％ (w/v)， 包括量为约 0.01％ (w/v) 至约 5％ (w/v)， 量为约 0.1％ (w/ v) 至约 4％ (w/v)， 量为约 0.1％ (w/v) 至约 3％ (w/v)， 量为约 0.2％ (w/v) 至约 2％ (w/ v)， 量为约 0.2％ (w/v) 至约 1％ (w/v)， 量为约 0.5％ (w/v) 至约 1％ (w/v) 或量为约 0.1％ (w/v) 至约 1％ (w/v)。
    8： 根据权利要求 1 至 7 任一项所述的药物组合物， 其中所述咪唑喹啉 ( 胺 ) 选自如下 (a) 至 (l) 组其中之一限定的化合物 ： a)1H- 咪唑 [4， 5-c] 喹啉 -4- 胺或其衍生物 ； b) 选自下式 (I) 的咪唑喹啉 ( 胺 ) 化合物 ： 2 其中 R1、 R2 和 R3 各自独立地选自氢 ； 三个、 四个或五个碳原子的环烷基 ； 含一个至约十个碳 原子的直链或支链烷基和含一个至约十个碳原子的取代直链或支链烷基， 其中所述取代基 选自含三个至约六个碳原子的环烷基和经含一个至约四个碳原子的直链或支链烷基取代 的含三个至约六个碳原子的环烷基 ； 含一个至约十个碳原子和一个或多个氟原子或氯原子 的氟代或氯代烷基 ； 含两个至约十个碳原子的直链或支链烯基和含两个至约十个碳原子的 取代直链或支链烯基， 其中所述取代基选自含三个至约六个碳原子的环烷基和经含一个至 约四个碳原子的直链或支链烷基取代的含三个至约六个碳原子的环烷基 ； 一个至约六个碳 原子的羟烷基 ； 烷氧基烷基， 其中所述烷氧基部分包含一个至约四个碳原子， 所述烷基部分 包含一个至约六个碳原子 ； 酰氧基烷基， 其中所述酰氧基部分是两个至约四个碳原子的烷 酰氧基或苯甲酰氧基， 所述烷基部分包含一个至约六个碳原子， 条件是任何这种烷基、 取代 烷基、 烯基、 取代烯基、 羟烷基、 烷氧基烷基或酰氧基烷基不具有与氮原子直接相连的完全 碳取代的碳原子 ； 苄基 ； ( 苯基 ) 乙基 ； 和苯基 ； 所述苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取代基在苯 环上被一个或两个部分任选地取代， 所述一个或两个部分独立地选自一个至约四个碳原子 的烷基、 一个至约四个碳原子的烷氧基、 和卤素， 条件是当所述苯环被所述部分中的两个取 代时， 此时所述部分共包含不超过六个碳原子 ； -CHRxRy， 其中 Ry 是氢或碳 - 碳键， 条件是当 Ry 是氢时， Rx 是一个至约四个碳原子的烷 氧基、 一个至约四个碳原子的羟基烷氧基、 两个至约十个碳原子的 1- 炔基、 四氢吡喃基、 烷 氧基烷基——其中所述烷氧基部分包含一个至约四个碳原子， 所述烷基部分包含一个至约 四个碳原子、 2-、 3- 或 4- 吡啶基， 并且进一步的条件是当 Ry 是碳 - 碳键时， Ry 和 Rx 共同形 成经一个或多个取代基任选取代的四氢呋喃基， 所述取代基独立地选自羟基或一个至约四 个碳原子的羟烷基 ； 含一个至约八个碳原子的直链或支链烷基、 含一个至约六个碳原子的直链或支链羟烷 基、 吗啉代甲基、 苄基、 ( 苯基 ) 乙基和苯基， 所述苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取代基在苯环上 被选自甲基、 甲氧基或卤素的部分任选地取代 ； -C(RS)(RT)(X)， 其中 RS 和 RT 独立地选自氢、 一个至约四个碳原子的烷基、 苯基和取代苯 基， 其中所述取代基选自一个至约四个碳原子的烷基、 一个至约四个碳原子的烷氧基、 和卤 素； X 是含一个至约四个碳原子的烷氧基、 烷氧基烷基——其中所述烷氧基部分包含一个 至约四个碳原子， 所述烷基部分包含一个至约四个碳原子、 一个至约四个碳原子的卤烷基、 3 烷基酰胺基——其中所述烷基包含一个至约四个碳原子、 氨基、 取代氨基——其中取代基 是一个至约四个碳原子的烷基或羟烷基、 叠氮基、 一个至约四个碳原子的烷硫基、 或吗啉代 烷基——其中所述烷基部分包含一个至约四个碳原子 ； R4 是氢、 C1-8 烷基、 C1-8 烷氧基或卤素 ； n 为 1、 2、 3或4； a b R 和R 各自独立地是氢、 (C1-C6) 烷基、 羟基 (C1-C6) 烷基、 氨基 (C1-C6) 烷基、 氨基 磺酰基、 (C1-C6) 烷酰基、 芳基或苄基， 其全部被一个或多个氨基任选地取代 ； 或 a b R 和 R 与其所连接的氮共同组成吡咯烷基、 哌啶基或吗啉基 ； 上述式 (I) 五元环中的 虚线表示连接所述五元环的氮与所述五元环的两个氮之间的碳的任选键， 并且当所述键存 1 3 在时， R 或 R 不存在 ； 条件是， Ra 和 Rb 在中央结构部分 N(Ra)(Rb) 的氮处， 或通过 Ra 和 / 或 Rb 提供的任意季 铵离子共同形成季铵离子 ； 或其药学上可接受的盐 ； c) 咪唑喹啉 ( 胺 )， 其选自下式 (II) ： 其中 R11 选自一个至约十个碳原子的烷基、 一个至约六个碳原子的羟烷基、 酰氧基烷基—— 其中所述酰氧基部分是两个至约四个碳原子的烷酰氧基或苯甲酰氧基， 并且所述烷基部分 包含一个至约六个碳原子、 苄基、 ( 苯基 ) 乙基和苯基， 所述苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取代 基在苯环上被一个或两个部分任选地取代， 所述一个或两个部分独立地选自一个至约四个 碳原子的烷基、 一个至约四个碳原子的烷氧基和卤素， 条件是如果所述苯环被所述部分中 的两个取代， 那么所述部分共包含不超过六个碳原子 ； R 21 选自氢、 一个至约八个碳原子的烷基、 苄基、 ( 苯基 ) 乙基和苯基， 所述苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取代基在苯环上被一个或两个部分任选地取代， 所述一个或两个部分独立地选 自一个至约四个碳原子的烷基、 一个至约四个碳原子的烷氧基和卤素， 条件是当苯环被所 述部分中的两个取代时， 此时所述部分共包含不超过六个碳原子 ； 并且每个 R1 独立地选自一个至约四个碳原子的烷氧基、 卤素、 和一个至约四个碳原子的烷基， 以 及 n 是 0 至 2 的整数， 条件是如果 n 是 2， 那么所述 R1 基团共包含不超过六个碳原子 ； 或前述中任一个的药学上可接受的盐 ； d) 咪唑喹啉 ( 胺 )， 其选自下式 (III) ： 4 其中 R12 选自含两个至约十个碳原子的直链或支链烯基和含两个至约十个碳原子的取代直 链或支链烯基， 其中所述取代基选自含一个至约四个碳原子的直链或支链烷基和含三个至 约六个碳原子的环烷基 ； 和经含一个至约四个碳原子的直链或支链烷基取代的含三个至约 六个碳原子的环烷基 ； 以及 R22 选自氢、 含一个至约八个碳原子的直链或支链烷基、 苄基、 ( 苯基 ) 乙基和苯基， 所述 苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取代基在苯环上被一个或两个部分任选地取代， 所述一个或两个 部分独立地选自含一个至约四个碳原子的直链或支链烷基、 含一个至约四个碳原子的直链 或支链烷氧基、 和卤素， 条件是当苯环经两个这样的部分取代时， 此时所述部分共包含不超 过六个碳原子 ； 并且每个 R2 独立地选自含一个至约四个碳原子的直链或支链烷氧基、 卤素和含一个至约四个碳 原子的直链或支链烷基， 以及 n 是 0 至 2 的整数， 条件是如果 n 是 2， 那么所述 R2 基团共包含不超过六个碳原子 ； 或前述中任一个的药学上可接受的盐 ； e) 咪唑喹啉 ( 胺 )， 其选自下式 (IV) ： 其中 R23 选自氢、 一个至约八个碳原子的直链或支链烷基、 苄基、 ( 苯基 ) 乙基和苯基， 所述苄 基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取代基在苯环上被一个或两个部分任选地取代， 所述一个或两个部 分独立地选自一个至约四个碳原子的直链或支链烷基、 一个至约四个碳原子的直链或支链 烷氧基、 和卤素， 条件是当苯环经两个这样的部分取代时， 此时所述部分共包含不超过六个 碳原子 ； 并且每个 R3 独立地选自一个至约四个碳原子的直链或支链烷氧基、 卤素、 和一个至约四个碳原 子的直链或支链烷基， 以及 5 n 是 0 至 2 的整数， 条件是如果 n 是 2， 那么所述 R3 基团共包含不超过六个碳原子 ； 或前述中任一个的药学上可接受的盐 ； f) 咪唑喹啉 ( 胺 )， 其选自下式 (V) ： 其中 R14 是 -CHRxRy， 其中 Ry 是氢或碳 - 碳键， 条件是当 Ry 是氢时， Rx 是一个至约四个碳原子的 烷氧基、 一个至约四个碳原子的羟基烷氧基、 两个至约十个碳原子的 1- 炔基、 四氢吡喃基、 烷氧基烷基——其中烷氧基部分包含一个至约四个碳原子， 烷基部分包含一个至约四个碳 原子、 2-、 3- 或 4- 吡啶基， 并且进一步的条件是当 Ry 是碳 - 碳键时， Ry 和 Rx 共同组成经一 个或多个取代基任选取代的四氢呋喃基， 所述一个或多个取代基取代基独立地选自羟基和 一个至约四个碳原子的羟烷基 ； R24 选自氢、 一个至约四个碳原子的烷基、 苯基和取代苯基——其中取代基选自一个至 约四个碳原子的烷基、 一个至约四个碳原子的烷氧基、 和卤素 ； 以及选自氢、 含一个至约四 个碳原子的直链或支链烷氧基、 卤素、 和含一个至约四个碳原子的直链或支链烷基 ； 或前述中任一个的药学上可接受的盐 ； g) 咪唑喹啉 ( 胺 )， 其选自下式 (VI) ： 其中 R15 选自 ： 氢； 含一个至约十个碳原子的直链或支链烷基和含一个至约十个碳原子的取 代直链或支链烷基， 其中取代基选自含三个至约六个碳原子的环烷基和经含一个至约四个 碳原子的直链或支链烷基取代的含三个至约六个碳原子的环烷基 ； 含两个至约十个碳原子 的直链或支链烯基和含两个至约十个碳原子的取代直链或支链烯基， 其中取代基选自含三 个至约六个碳原子的环烷基和经含一个至约四个碳原子的直链或支链烷基取代的含三个 至约六个碳原子的环烷基 ； 一个至约六个碳原子的羟烷基 ； 烷氧基烷基， 其中烷氧基部分 6 包含一个至约四个碳原子， 烷基部分包含一个至约六个碳原子 ； 酰氧基烷基， 其中酰氧基部 分是两个至约四个碳原子的烷酰氧基或苯甲酰氧基， 烷基部分包含一个至约六个碳原子 ； 苄基 ； ( 苯基 ) 乙基 ； 和苯基 ； 所述苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取代基在苯环上被一个或两个 部分任选地取代， 所述一个或两个部分独立地选自一个至约四个碳原子的烷基、 一个至约 四个碳原子的烷氧基、 和卤素， 条件是当所述苯环经所述部分中的两个取代时， 此时所述部 分共包含不超过六个碳原子 ； R25 是 其中 RS 和 RT 独立地选自氢、 一个至约四个碳原子的烷基、 苯基和取代苯基， 其中所述取代基 选自一个至约四个碳原子的烷基、 一个至约四个碳原子的烷氧基、 和卤素 ； X 选自含一个至约四个碳原子的烷氧基、 烷氧基烷基——其中烷氧基部分包含一个至 约四个碳原子， 烷基部分包含一个至约四个碳原子、 一个至约四个碳原子的羟烷基、 一个至 约四个碳原子的卤烷基、 烷基酰胺基——其中烷基包含一个至约四个碳原子、 氨基、 取代氨 基 —— 其中取代基是一个至约四个碳原子的烷基或羟烷基、 叠氮基、 氯、 羟基、 1- 吗啉基、 1- 吡咯烷基、 一个至约四个碳原子的烷硫基 ； 以及 R5 选自氢、 含一个至约四个碳原子的直链或支链烷氧基、 卤素、 和含一个至约四个碳原 子的直链或支链烷基 ； 或前述中任一个的药学上可接受的盐 ； h) 咪唑喹啉 ( 胺 )， 其选自下式 (VII) ： 其中 m 是 1、 2或3； R16 选自氢 ； 三个、 四个或五个碳原子的环烷基 ； 含一个至约十个碳原子的直链或支链 烷基和含一个至约十个碳原子的取代直链或支链烷基， 其中取代基选自含三个至约六个碳 原子的环烷基和经含一个至约四个碳原子的直链或支链烷基取代的含三个至约六个碳原 子的环烷基 ； 含一个至约十个碳原子和一个或多个氟原子或氯原子的氟代或氯代烷基 ； 含 7 两个至约十个碳原子的直链或支链烯基和含两个至约十个碳原子的取代直链或支链烯基， 其中取代基选自含三个至约六个碳原子的环烷基和经含一个至约四个碳原子的直链或支 链烷基取代的含三个至约六个碳原子的环烷基 ； 一个至约六个碳原子的羟烷基 ； 烷氧基烷 基， 其中烷氧基部分包含一个至约四个碳原子， 烷基部分包含一个至约六个碳原子 ； 酰氧基 烷基， 其中酰氧基部分是两个至约四个碳原子的烷酰氧基或苯甲酰氧基， 并且烷基部分包 含一个至约六个碳原子， 条件是任意这种烷基、 取代烷基、 烯基、 取代烯基、 羟烷基、 烷氧基 烷基或酰氧基烷基不具有与氮原子直接相连的完全碳取代的碳原子 ； 苄基 ； ( 苯基 ) 乙基 ； 和苯基 ； 所述苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取代基在苯环上被一个或两个部分任选地取代， 所 述一个或两个部分独立地选自一个至约四个碳原子的烷基、 一个至约四个碳原子的烷氧 基、 和卤素， 条件是当所述苯环经所述部分中的两个取代时， 此时所述部分共包含不超过六 个碳原子 ； 以及 -CHRxRy， 其中 Ry 是氢或碳 - 碳键， 条件是当 Ry 是氢时， Rx 是一个至约四个碳原子的烷 氧基、 一个至约四个碳原子的羟基烷氧基、 两个至约十个碳原子的 1- 炔基、 四氢吡喃基、 烷 氧基烷基——其中烷氧基部分包含一个至约四个碳原子， 烷基部分包含一个至约四个碳原 子、 2-、 3- 或 4- 吡啶基， 并且进一步的条件是当 Ry 是碳 - 碳键时， Ry 和 Rx 共同组成经一个 或多个取代基任选取代的四氢呋喃基， 所述一个或两个取代基独立地选自羟基和一个至约 四个碳原子的羟烷基， R26 选自氢、 含一个至约八个碳原子的直链或支链烷基、 含一个至约六个碳原子的直链 或支链羟烷基、 吗啉代甲基、 苄基、 ( 苯基 ) 乙基和苯基， 所述苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取代 基在苯环上被选自甲基、 甲氧基和卤素的部分任选地取代 ； 和 -C(RS)(RT)(X)， 其中 RS 和 RT 独立地选自氢、 一个至约四个碳原子的烷基、 苯基、 和取代苯基， 其中取代基选 自一个至约四个碳原子的烷基、 一个至约四个碳原子的烷氧基和卤素 ； X 选自含一个至约四个碳原子的烷氧基、 烷氧基烷基——其中烷氧基部分包含一个至 约四个碳原子， 烷基部分包含一个至约四个碳原子、 一个至约四个碳原子的卤烷基、 烷基酰 胺基——其中烷基包含一个至约四个碳原子、 氨基、 取代氨基——其中取代基是一个至约 四个碳原子的烷基或羟烷基、 叠氮基、 一个至约四个碳原子的烷硫基、 和吗啉代烷基——其 中烷基部分包含一个至约四个碳原子， 以及 R6 选自氢、 氟、 氯、 含一个至约四个碳原子的直链或支链烷基和含一个至约四个碳原子 和至少一个氟或氯原子的直链或支链氟代或氯代烷基 ； 及其药学上可接受的盐 ； i) 咪唑喹啉 ( 胺 )， 其选自下式 (VIII) ： 8 其中 R17 选自氢 ； -CH2RW， 其中 RW 选自含一个至约十个碳原子的直链烷基、 支链烷基或环烷 基、 含两个至约十个碳原子的直链或支链烯基、 含一个至约六个碳原子的直链或支链羟烷 基、 烷氧基烷基——其中烷氧基部分包含一个至约四个碳原子， 烷基部分包含一个至约六 个碳原子——和苯基乙基 ； 以及 -CH ＝＝ CRZRZ， 其中各 RZ 独立地是一个至约六个碳原子的直链烷基、 支链烷基或环烷 基； R27 选自氢、 含一个至约八个碳原子的直链或支链烷基、 含一个至约六个碳原子的直链 或支链羟烷基、 烷氧基烷基——其中烷氧基部分包含一个至约四个碳原子， 烷基部分包含 一个至约六个碳原子、 苄基、 ( 苯基 ) 乙基和苯基， 所述苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取代基在 苯环上被选自甲基、 甲氧基和卤素的部分任选地取代 ； 以及吗啉代烷基， 其中烷基部分包含 一个至约四个碳原子 ； R67 和 R77 独立地选自 氢和一个至约五个碳原子的烷基， 条件是 R67 和 R77 共包含不超过六个碳原子， 并且进一 步的条件是当 R77 是氢时， 此时 R67 不是氢， 并且 R27 不是氢或吗啉代烷基， 以及进一步的条件 是当 R67 是氢时， 那么 R77 和 R27 不是氢 ； 及其药学上可接受的盐 ； j) 咪唑喹啉 ( 胺 )， 其选自下式 (IX) ： 其中 Z 选自 ： -(CH2)p-， 其中 p 为 1 至 4 ； 9 -(CH2)a-C(RDRE)(CH2)b-， 其中 a 和 b 是整数， 并且 a+b 为 0 至 3， RD 是氢或一个至四个碳 原子的烷基， RE 选自一个至四个碳原子的烷基、 羟基、 -ORF——其中 RF 是一个至四个碳原子 的烷基、 和 -NRGR′ G——其中 RG 和 R′ G 独立地是氢或一个至四个碳原子的烷基 ； 以及 -(CH2)a-(Y)-(CH2)b-， 其中 a 和 b 是整数， 并且 a+b 为 0 至 3， Y 是 O、 S 或 -NRJ-——其 中 RJ 是氢或一个至四个碳原子的烷基 ； 以及其中 q为0或1； 和 R8 选自一个至四个碳原子的烷基、 一个至四个碳原子的烷氧基和卤素， 及其药学上可接受的盐 ； k) 咪喹莫特， 其具有特定式 1- 异丁基 -1H- 咪唑 [4， 5-c] 喹啉 -4- 胺， 选自下式 (X) ： l) 瑞喹莫德， 其包含下式 (XI)
    9： 根据权利要求 1 至 8 任一项所述的药物组合物， 还包含一种或多种环糊精， 所述环糊 精选自 α- 环糊精、 β- 环糊精、 γ- 环糊精、 δ- 环糊精和 ε- 环糊精， 优选选自 β- 环糊 精， 包括羟丙基 -β- 环糊精 (HP-β-CD)。
    10： 根据权利要求 9 所述的药物组合物， 包含所述环糊精 ( 一种或多种 )， 其量为约 0.1％ (w/v) 至约 30％ (w/v)， 通常量为约 1％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 优选量为约 2％ (w/ v) 至约 20％ (w/v)， 更优选量为约 5％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 甚至更优选量为约 5％ (w/ v) 至约 15％ (w/v)， 以及最优选量为约 10％ (w/v) 至约 15％ (w/v) 或量为约 2％ (w/v) 至 约 6％ (w/v)。
    11： 根据权利要求 2 至 10 任一项所述的药物组合物， 其中所述至少一种热敏剂呈现特 定的 “下部临界会溶温度” (LCST)， 其范围为约 15℃至约 35℃， 更优选范围为约 15℃至约 30℃， 甚至更优选范围为约 15 或 20℃或 25℃至约 30℃， 最优选范围为约 15 或 20℃至约 25℃。
    12： 根据权利要求 2 至 11 任一项所述的药物组合物， 包含所述至少一种热敏剂， 其量 为约 0.1％ (w/v) 至约 40％ (w/v)， 通常量为约 2％ (w/v) 至约 30％ (w/v)， 优选量为约 5％ 10 (w/v) 至约 30％ (w/v)， 更优选量为约 10％ (w/v) 至约 30％ (w/v)， 以及最优选量为约 10％ (w/v) 至约 25％ (w/v) 或量为约 10％ (w/v) 至约 20％ (w/v)。
    13： 根据权利要求 12 所述的药物组合物， 其中所述热敏剂中任意两种作为混合物包 含在所述药物组合物中， 其比率为约 1 ∶ 20 至约 20 ∶ 1， 包括比率为约 1 ∶ 20、 2 ∶ 20、 3 ∶ 30、 4 ∶ 20、 5 ∶ 20、 6 ∶ 20、 7 ∶ 20、 8 ∶ 20、 9 ∶ 20、 10 ∶ 20、 11 ∶ 20、 12 ∶ 20、 13 ∶ 20、 14 ∶ 20、 15 ∶ 20、 16 ∶ 20、 17 ∶ 20、 18 ∶ 20、 19 ∶ 20、 20 ∶ 20( ＝ 1 ∶ 1)， 或比率为约 20 ∶ 20、 19 ∶ 20、 18 ∶ 20、 17 ∶ 20、 16 ∶ 20、 15 ∶ 20、 14 ∶ 20、 13 ∶ 20、 12 ∶ 20、 11 ∶ 20、 10 ∶ 20、 9 ∶ 20、 8 ∶ 20、 7 ∶ 20、 6 ∶ 20、 5 ∶ 20、 4 ∶ 20、 3 ∶ 20、 2 ∶ 20 或约 1 ∶ 20， 或 由上述比值的任意两个组成的范围。
    14： 根据权利要求 2 至 13 任一项所述的药物组合物， 其中所述至少一种热敏剂是泊洛 沙姆 407 和 / 或泊洛沙姆 188 或泊洛沙姆 407 和泊洛沙姆 188 的混合物。
    15： 根据权利要求 14 所述的药物组合物， 其中所述至少一种热敏剂是泊洛沙姆 407， 其 量为约 10％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 或量为约 12％ (w/v) 至约 25％ (w/v)。
    16： 根据权利要求 15 所述的药物组合物， 其中所述至少一种热敏剂是泊洛沙姆 407， 其 ( 总 ) 量为约
    17： 5％ (w/v)/(w/w) 至约 22.5％ (w/v)/(w/w)， 优选 ( 总 ) 量为约 17.5％ (w/v)/(w/w)、 约
    18： 0％ (w/v)/(w/w)、 约 18.5％ (w/v)/(w/w)、 约
    19： 0％ (w/v)/(w/w)、 约 19.5％ (w/v)/(w/w)、 约
    20： 0％ (w/v)/(w/w)、 约 20.5％ (w/v)/(w/w)、 约
    21： 0％ (w/v)/(w/ w)、 约 21.5％ (w/v)/(w/w)、 约 22.0％ (w/v)/(w/w)， 或约 22.5％ (w/v)/(w/w)， 或由这些值 的任意两个组成的范围。 17. 根据权利要求 14 所述的药物组合物， 其中所述至少一种热敏剂是泊洛沙姆 407 和 泊洛沙姆 188 的混合物， 其 ( 总 ) 量为约 22.5％ (w/v)/(w/w) 至约 27.5％ (w/v)/(w/w)， 更 优选总量为约 25％ (w/v)/(w/w)， 并且泊洛沙姆 407 ∶泊洛沙姆 188 的比率为约 15 ∶ 5、 16 ∶ 4、 17 ∶ 3、 18 ∶ 2、 19 ∶ 1 或 20 ∶ 1 或由这些比值的任意两个组成的范围， 更优选比 率为约 9.5 ∶ 0.5、 约 9 ∶ 1、 约 8.5 ∶ 1.5 或约 8 ∶ 2， 或由这些值的任意两个组成的范围。 18. 根据权利要求 1 至 17 任一项所述的药物组合物， 包含醋酸和 / 或乳酸， 其浓度为约 0.025 至约 0.2M， 优选浓度为约 0.075 至约 1.125M ； 咪唑喹啉 ( 胺 )， 其量为约 0.1％ (w/v) 至约 1％ (w/v) ； 环糊精 ( 一种或多种 )， 其量为约 2％ (w/v) 至约 6％ (w/v) ； 和泊洛沙姆 407， 其量为约 10％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 优选量为约 12％ (w/v) 至约 25％ (w/v)。 19. 权利要求 1 至 18 任一项所述的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物在制备用于治疗皮肤疾 病的药物组合物中的应用， 所述皮肤疾病包括癌前病症， 包括光化性角化症、 生殖器疣 ( 湿 疣 )、 VIN( 外阴上皮内瘤 )、 VAIN( 阴道上皮内瘤 )、 传染性软疣、 皮肤癌——包括基底细胞 癌、 鲍恩病、 鳞状细胞癌、 浅表恶性黑素瘤、 膀胱疾病——包括膀胱癌和膀胱炎、 癌症——包 括腹膜癌和卵巢癌。 20. 根据权利要求 19 所述的应用， 用于膀胱疾病的膀胱内治疗。 21. 根据权利要求 20 所述的应用， 其中所述膀胱疾病是膀胱炎和膀胱癌。 22. 治疗皮肤疾病的方法， 所述皮肤疾病包括癌前病症， 包括光化性角化症、 生殖器疣 ( 湿疣 )、 VIN( 外阴上皮内瘤 )、 VAIN( 阴道上皮内瘤 )、 传染性软疣、 皮肤癌——包括基底细 胞癌、 鲍恩病、 鳞状细胞癌、 浅表恶性黑素瘤、 膀胱疾病——包括膀胱癌和膀胱炎、 癌症—— 包括腹膜癌和卵巢癌， 包括向需要其的患者给予权利要求 1 至 18 任一项所述的药物组合 11 物， 。 23. 治疗膀胱疾病的方法， 包括向需要其的患者给予权利要求 1 至 18 任一项所述的药 物组合物。 24. 根据权利要求 23 所述的方法， 其中所述药物组合物被膀胱内给予。 25. 根据权利要求 23 或 24 任一项所述的方法， 其中所述膀胱疾病是膀胱炎和膀胱癌。
    22： 5％ (w/v)/(w/w)， 优选 ( 总 ) 量为约 17.5％ (w/v)/(w/w)、 约 18.0％ (w/v)/(w/w)、 约 18.5％ (w/v)/(w/w)、 约 19.0％ (w/v)/(w/w)、 约 19.5％ (w/v)/(w/w)、 约 20.0％ (w/v)/(w/w)、 约 20.5％ (w/v)/(w/w)、 约 21.0％ (w/v)/(w/ w)、 约 21.5％ (w/v)/(w/w)、 约 22.0％ (w/v)/(w/w)， 或约 22.5％ (w/v)/(w/w)， 或由这些值 的任意两个组成的范围。 17. 根据权利要求 14 所述的药物组合物， 其中所述至少一种热敏剂是泊洛沙姆 407 和 泊洛沙姆 188 的混合物， 其 ( 总 ) 量为约 22.5％ (w/v)/(w/w) 至约 27.5％ (w/v)/(w/w)， 更 优选总量为约 25％ (w/v)/(w/w)， 并且泊洛沙姆 407 ∶泊洛沙姆 188 的比率为约 15 ∶ 5、 16 ∶ 4、 17 ∶ 3、 18 ∶ 2、 19 ∶ 1 或 20 ∶ 1 或由这些比值的任意两个组成的范围， 更优选比 率为约 9.5 ∶ 0.5、 约 9 ∶ 1、 约 8.5 ∶ 1.5 或约 8 ∶ 2， 或由这些值的任意两个组成的范围。 18. 根据权利要求 1 至 17 任一项所述的药物组合物， 包含醋酸和 / 或乳酸， 其浓度为约 0.025 至约 0.2M， 优选浓度为约 0.075 至约 1.125M ； 咪唑喹啉 ( 胺 )， 其量为约 0.1％ (w/v) 至约 1％ (w/v) ； 环糊精 ( 一种或多种 )， 其量为约 2％ (w/v) 至约 6％ (w/v) ； 和泊洛沙姆 407， 其量为约 10％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 优选量为约 12％ (w/v) 至约 25％ (w/v)。 19. 权利要求 1 至 18 任一项所述的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物在制备用于治疗皮肤疾 病的药物组合物中的应用， 所述皮肤疾病包括癌前病症， 包括光化性角化症、 生殖器疣 ( 湿 疣 )、 VIN( 外阴上皮内瘤 )、 VAIN( 阴道上皮内瘤 )、 传染性软疣、 皮肤癌——包括基底细胞 癌、 鲍恩病、 鳞状细胞癌、 浅表恶性黑素瘤、 膀胱疾病——包括膀胱癌和膀胱炎、 癌症——包 括腹膜癌和卵巢癌。 20. 根据权利要求 19 所述的应用， 用于膀胱疾病的膀胱内治疗。 21. 根据权利要求 20 所述的应用， 其中所述膀胱疾病是膀胱炎和膀胱癌。 22. 治疗皮肤疾病的方法， 所述皮肤疾病包括癌前病症， 包括光化性角化症、 生殖器疣 ( 湿疣 )、 VIN( 外阴上皮内瘤 )、 VAIN( 阴道上皮内瘤 )、 传染性软疣、 皮肤癌——包括基底细 胞癌、 鲍恩病、 鳞状细胞癌、 浅表恶性黑素瘤、 膀胱疾病——包括膀胱癌和膀胱炎、 癌症—— 包括腹膜癌和卵巢癌， 包括向需要其的患者给予权利要求 1 至 18 任一项所述的药物组合 11 物， 。
    23： 治疗膀胱疾病的方法， 包括向需要其的患者给予权利要求 1 至 18 任一项所述的药 物组合物。
    24： 根据权利要求 23 所述的方法， 其中所述药物组合物被膀胱内给予。
    25： 根据权利要求 23 或 24 任一项所述的方法， 其中所述膀胱疾病是膀胱炎和膀胱癌。

    说明书


    适于局部给药的包含咪唑喹啉 ( 胺 ) 及其衍生物的药物组 合物

        本发明总体涉及天然免疫系统调节剂领域， 具体涉及包含咪唑喹啉 ( 胺 ) 及其衍 生物的药物组合物， 其优选适于局部给药， 如膀胱内给药。 此外， 本发明涉及咪唑喹啉 ( 胺 ) 及其衍生物膀胱内治疗膀胱疾病——诸如， 举例来说， 膀胱癌和膀胱炎——的应用。 本发明 还包括这些疾病的治疗方法和本发明药物组合物的给药方法。
         诱导和 / 或增强天然免疫系统和适应性免疫系统——取决于触发类型——的免疫 应答在治疗和预防多种疾病的现代医药中起重要作用。因此， 免疫调节组合物在本领域中 被广泛应用， 其针对的是称为模式识别受体的少数受体。这些模式识别受体通常识别保守 分子模式， 所述保守分子模式辨别外源生物如病毒、 细菌、 真菌和寄生虫与其宿主细胞。如 今已知， 模式识别受体包括所谓 Toll 样受体 (TLR) 家族成员等等， 该 Toll 样受体 (TLR) 家 族是第一个被详细研究的模式识别受体家族。
         TLR 是识别细胞外环境或内体内腔的配体的跨膜蛋白质。在配体结合后， 它们通 过细胞质衔接蛋白转导信号， 这导致宿主防御应答的触发， 并且促使抗微生物肽、 促炎趋化 因子和细胞因子、 抗病毒细胞因子等产生。迄今为止， 已在人类中鉴定了至少 10 个 Toll 样 受体成员 (TLR1-10)， 在鼠中鉴定了至少 13 个 Toll 样受体成员 (TLR1-13)。人类的那些 Toll 样受体 (TLRs) 包括 TLR1-TLR2， 其识别三酰基脂肽 ； Toll 样受体 TLR1-TLR6， 其识别 二酰基脂肽 ； Toll 样受体 TLR2， 其识别肽聚糖 ； Toll 样受体 TLR3， 其已知识别 dsRNA——一 种病毒产物 ； Toll 样受体 TLR4， 其配体为已知的革兰氏阴性细菌的 LPS( 脂多糖 ) ； Toll 样 受体 TLR5， 其识别细菌的鞭毛蛋白 ( 一种或多种 ) ； Toll 样受体 TLR7/8， 其已知配体包括 咪唑喹啉、 鸟苷类似物和 ssRNA ； Toll 样受体 TLR9， 其识别在细菌、 病毒和原生动物基因组 中而非脊椎动物基因组中常发现的未甲基化 CpG 基序 ； TLR9 还识别疟色素——一种血红蛋 白的消化产物 ； 最后， Toll 样受体 TLR10 显示与 MyD88——常见的 Toll IL-1 受体结构域 连接物——直接相关 ( 参见 ： 例如， Hasan 等人， The Journal of Immunology， 2005， 174 ： 2942-2950)。在识别微生物病原体后， 这些 TLR 通常触发细胞内的信号传导通路， 该信号传 导通路导致炎性细胞因子 ( 例如， TNF-α、 IL-6、 IL-1-β 和 IL-12)、 I 型干扰素 (IFN-β 和 多种 IFN-α) 及趋化因子 (Kawai， T. 和 S.Akira(2006).″ TLR Signalling.″ Cell Death Differ 13(5) ： 816-25) 的诱导。
         在 上 述 TLR 中， TLR3、 TLR7 和 TLR9 具 有 巨 大 的 重 要 性。TLR7 识 别 小 的 合 成 免 疫 调 节 物， 包 括 咪 喹 莫 特 (imiquimod)、 R-848、 洛 索 立 宾 (loxoribine) 和 溴 匹 立 明 (bropirimine)， 其全部已被用于或有希望用于对抗病毒感染和癌症的临床应用。此外， 浆 细胞样树突细胞表达 TLR7 和 TLR9， 并通过产生大量干扰素 (IFN-α) 对 TLR7 和 TLR9 配体 响应。这些结果表明， TLR3、 TLR7 和 TLR9 在检测和对抗病毒感染中可能起重要作用。
         上述免疫调节物的具体实例包括咪喹莫特 ( 在以下描述中也被称为 R-837、 TMX、 TMX-101)， 其属于咪唑喹啉 ( 胺 ) 免疫调节物类。 免疫调节分子咪喹莫特 (1- 异丁基 -1H- 咪 唑 [4， 5-c] 喹啉 -4- 胺 ) 经证实在肿瘤、 病毒及炎性疾病中具有临床功效。咪喹莫特的免 疫刺激活性机制被认为实质上部分是由于多种重要的细胞因子 ( 例如， 干扰素、 白细胞介
         素、 肿瘤坏死因子等 ) 的诱导造成免疫应答增强。虽然咪喹莫特作用的确切机制还未知， 但咪喹莫特与 Toll 样受体 7(TLR7) 的结合被认为是激活免疫系统中的一个重要步骤。由 咪喹莫特通过 TLR-7 刺激的细胞分泌细胞因子 ( 主要是干扰素 -α(IFN-α)、 白细胞介 素 -6(IL-6) 和肿瘤坏死因子 -α(TNF-α))， 该细胞因子有助于剂的抗病毒、 抗肿瘤和抗炎 性特性。
         已显示咪喹莫特是有效的免疫调节剂， 其目前被用作生殖器疣和浅表型基底细胞 癌的一线局部治疗 (Purdon CH， Azzi CG， Zhang J， Smith EW， Maibach HI.Penetration enhancement of transdermal delivery--current permutations and limitations. Crit Rev Ther Drug Carrier Syst.2004 ； 21 ： 97-132 ； Chang YC， Madkan V， Cook-Norris R， Sra K， Tyring S.Current and potential uses of Imiquimod.South Med J.2005 ； 98 ： 914-20 ； Wagstaff AJ， Perry CM.Topical Imiquimod ： a review of its use in the management of anogenital warts， actinic keratoses， basal cell carcinoma and other skin lesions.Drugs.2007 ； 67 ： 2187-210)。此外， 咪喹莫特已被用于治疗包括黑 素瘤和基底细胞癌在内的恶性皮肤损伤 (Wagstaff AJ， Perry CM.Topical imiquimod ： a review of its use in the management of anogenital warts， actinic keratoses， basal cell carcinoma and other skin lesions.Drugs.2007 ； 67 ： 2187-210)。咪喹莫特在体 外和体内诱导促炎性细胞因子和将免疫细胞吸引至局部给药位点的趋化因子 (Barnetson RS， Satchell A， Zhuang L， Slade HB， Halliday GM.Imiquimod induced regression of clinically diagnosed superficial basal cell carcinoma is associated with early infiltration by CD4 T cells and dendritic cells.Clinical and experimental dermatology， 2004 ； 29 ： 639-43)(Chan M， Hayashi T， Kuy CS et al.Synthesis and Immunological Characterization of Toll-Like Receptor 7 Agonistic Conjugates. Bioconjugate chemistry.2009)。
         另 外， 咪 唑 喹 啉 已 显 示 针 对 膀 胱 癌 细 胞 的 细 胞 毒 性 效 应， 并诱导其分泌促 炎 性 细 胞 因 子 (Smith EB， Schwartz M， Kawamoto H et al.Antitumor effects of imidazoquinolines in urothelial cell carcinoma of the bladder.The Journal of urology.2007 ； 177 ： 2347-51)。进一步要说明的是， 咪唑喹啉在原位膀胱癌小鼠模型 中具有抗肿瘤效应 (Smith EB， Schwartz M， Kawamoto H et al.Antitumor effects of imidazoquinolines in urothelial cell carcinoma of the bladder.The Journal of urology.2007 ； 177 ： 2347-51)。
         此 外， 显 示 TLR-7 也 在 鼠 和 人 膀 胱 癌 细 胞 系 中 被 表 达， 并且咪唑喹啉通过降 低细胞存活力和诱导细胞凋亡和细胞因子生成， 对膀胱上皮细胞癌细胞具有有效直接 的 生 物 学 效 应 (Smith EB， Schwartz M， Kawamoto H， et al.Antitumour effects of Imidazoquinolines in urothelial cell carcinoma of the bladder.J Urol 2007 ； 177 ： 2347)。直接效应似乎是 c-Myc 下降调节的结果， 并且可能与咪唑喹啉的免疫调节作用协 同作用 (Liu H， Schwartz MJ， Hwang DH， Scherr OS.Tumour growth inhibition by an imidazoquinoline is associated with c-Myc down-regulation in urothelial cell carcinoma.BJU Int 2008 ； 101 ： 894-901)。此外， 免疫活性原位小鼠模型中的最初结果表 明了体内抗肿瘤效应 (Smith EB， Schwartz M， Kawamoto H， et al.Antitumour effectsof Imidazoquinolines in urothelial cell carcinoma of the bladder.J Urol 2007 ； 177 ： 2347 ； Liu H， Schwartz MJ， Hwang DH， Scherr OS.Tumour growth inhibition by an imidazoquinoline is associated with c-Myc down-regulation in urothelial cell carcinoma.BJU Int 2008 ； 101 ： 894-901)。 因此， 咪唑喹啉作为膀胱内药剂对膀胱癌具有治 疗潜力。
         虽然已知免疫调节物如咪喹莫特的一些有益效应， 但通过在特定位置局部给予这 些免疫调节物治疗具体病症来提供治疗益处的能力可受多种因素阻碍。 这些因素包括这些 免疫调节物在给予之前、 期间或甚至之后在制剂中的不溶性和 / 或降解， 还包括制剂的物 理不稳定性， 包括如下因素 ： 诸如， 组分的分离、 活性成分的增稠、 沉淀 / 凝聚及类似因素， 以及免疫调节物 ( 一种或多种 ) 在给予后向周围组织或细胞的差的渗透。具体地， 免疫调 节物咪喹莫特的溶解性至关重要， 其在药物组合物中——具体而言在液体或半液体组合物 中——的应用由于其疏水性而受到限制。尽管咪喹莫特在极性有机溶剂如 DMSO、 二甲基甲 酰胺和 N- 甲基 -2- 吡咯烷酮中可以以低浓度溶解， 但这些溶剂由于其多种毒性效应而不允 许在人体或人体中给予咪喹莫特。然而， 无毒溶剂如水或乙醇， 仅略微溶解咪唑喹啉 ( 胺 ) 成员如咪喹莫特， 并且仅允许在人体或人体中以低 ( 亚治疗 ) 浓度给予咪喹莫特。 因此， 根据本发明的第一个方面， 需要提供药物组合物， 具体为液体或半液体制 剂， 其允许显著地溶解咪唑喹啉 ( 胺 ) 如咪喹莫特， 并且因此在给予需要其的对象时允许较 高有效浓度的免疫调节物如咪喹莫特。具体地， 在本领域需要提供用于局部给药模式的这 种液体或半液体制剂， 其不呈现毒性效应， 但呈现制剂溶解性提高， 优选制剂物理不稳定性 降低。
         然而， 免疫调节物， 具体是咪唑喹啉 ( 胺 ) 类成员如咪喹莫特， 治疗肿瘤和病毒疾 病的应用也受其多种副作用的限制。例如， 据报道咪喹莫特会引起 ： 例如， 焦虑、 贫血、 血 管性水肿、 心律失常、 毛细血管渗漏综合征、 心力衰竭、 心肌病、 脑血管意外、 抑郁症、 呼吸困
         难、 多形性红斑、 剥脱性皮炎、紫癜综合征、 特发性血小板减少性紫癜、 失眠、 局部缺血、 白细胞减少、 肝功能异常、 淋巴瘤、 恶性多发性硬化症、 轻瘫、 蛋白尿、 肺水肿、 癫痫 (seizure)、 昏厥、 血小板减少和甲状腺炎。
         为减少这种严重副作用——其在一些情况下可威胁生命——的风险， 目前主要以 局部给药代替全身给药。 在此背景下， 全身给药的途径一般包括 ： 例如， 经皮、 口服或肠胃外 途径——包括皮下、 静脉内、 肌肉内、 动脉内、 真皮内和腹膜内注射和 / 或鼻内给药途径。这 种全身给药通常导致免疫调节物在整个人体全面分布， 从而明显提高了副作用的风险。相 反， 局部给药途径一般包括 ： 例如， 局部给药途径还有真皮内、 经皮、 皮下或肌肉内注射， 或 病灶内、 颅内、 肺内、 心脏内和舌下注射， 其中这种给药通常在病痛部位上进行， 使药物直接 作用， 同时显著减少设想在全身给药时发生的全身性副作用。
         在上述限定的免疫调节物， 具体为咪唑喹啉 ( 胺 )， 如咪喹莫特或其衍生物的背景 下， 由于上述这些化合物的理化性质和全身给药后的副作用而对局部给药的特定要求， 限 制了其治疗应用和用其治疗的疾病数量。目前， 多数可用咪喹莫特或其衍生物治疗的疾病 是特定的皮肤疾病， 包括皮肤癌， 如基底细胞癌、 Bowen 病、 浅表鳞状细胞癌和生殖器疣 ( 尖 锐湿疣 )。可用免疫调节物——具体为咪唑喹啉 ( 胺 )， 如咪喹莫特——治疗的更突出的疾 病包括膀胱疾病， 具体为膀胱癌和膀胱炎。在此背景下， 膀胱癌指几类膀胱 ( 恶性或非恶性 ) 肿瘤疾病中的任一种。由于大 多数国家的人口迅速老化， 其是世界上增长最快的癌症之一。在美国每年有超过 60,000 人被新诊断为膀胱癌， 其中 80 ％患有非侵入性膀胱癌。由于膀胱癌的死亡率相对低， 美 国和欧洲的患者总数在 400,000 以上。因此， 膀胱癌是西方社会男性中第五常见的恶性 肿瘤。多数膀胱癌病例被诊断为非侵入性浅表肿瘤， 其可能通过外科和免疫治疗而治愈 (Schenk-Braat EA， Bangma CH.Immunotherapy for superficial bladder cancer.Cancer Immunol Immunother.2005 ； 54 ： 414-23)。
         迄今为止， 多数非侵入性 ( 浅表 ) 膀胱癌患者用所谓的 “卡介苗 (BCG) 方案” 通 过膀胱内途径给予进行治疗。然而， 这种 BCG 方案是由减毒形式的细菌结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis) 组成的未经表征的产品， 因此显示差的安全性。
         此外， 通过经尿道切除术可去除浅表生长的肿瘤， 但复发率高。为延长外科切 除 术 后 无 肿 瘤 的 间 隔， 用 牛 分 枝 杆 菌 (Mycobacterium bovis) 卡 介 苗 (BCG)—— 抗 结 核感染的疫苗株 —— 膀胱内治疗目前被用作辅助治疗方案 (Alexandroff AB， Jackson AM， O ′ Donnell MA， James K.BCG immunotherapy of bladder cancer ： 20 years on.Lancet.1999 ； 353 ： 1689-94、 De Jager R， Guinan P， Lamm D et al.Long-term complete remission in bladder carcinoma in situ with intravesical TICE bacillus Calmette Guerin.Overview analysis of six phase II clinical trials.Urology.1991 ； 38 ： 507-13、 Totterman TH， Loskog A， Essand M.The immunotherapy of prostate and bladder cancer.BJU international.2005 ； 96 ： 728-35)。
         但是， 牛分枝杆菌 BCG 治疗诱导膀胱非特异性局部炎症， 伴有多种促炎性细胞 因子 (IL-2、 IL-6、 IL-8 和 TNFα)(De Boer EC， Rooijakkers SJ， Schamhart DH， Kurth KH.Cytokine gene expression in a mouse model ： the first instillations with viable bacillus Calmette-Guerin determine the succeeding Th1 response.The Journal of urology.2003 ； 170 ： 2004-8) 和进而发动免疫细胞在膀胱上皮浸润的趋化因子 (Suttmann H， Riemensberger J， Bentien G 等人， Neutrophil granulocytes are required for effective Bacillus Calmette-Guerin immunotherapy of bladder cancer and orchestrate local immune responses.Cancer research.2006 ； 66 ： 8250-7.Simons MP， O′ Donnell MA， Griffith TS.Role of neutrophils in BCG immunotherapy for bladder cancer.Urologic oncology.2008 ； 26 ： 341-5)。BCG 灌注引起免疫系统的非特异性刺激， 这诱导激活的 T 细胞局部浸润膀胱壁， 该激活的 T 细胞由细胞介导的免疫原性产生 (Bohle A， Brandau S.Immune mechanisms in bacillus Calmette-Guerin immunotherapy for superficial bladder cancer.The Journal of urology.2003 ； 170 ： 964-9)。
         膀 胱 的 非 肌 肉 侵 入 性 膀 胱 上 皮 细 胞 癌 (NMIBC) 的 发 病 率 高 (Babjuk M， Oosterlinck W， Sylvester R， Kaasinen E， A， Palou-Redorta J ； European Association of Urology(EAU).EAU guidelines on non-muscle-invasive urothelial carcinoma of the bladder.Eur Urol 2008 ； 54 ： 303-14)， 并且由于最初经尿道切除术 后的复发率高而患病率甚至更高。在处于肿瘤复发和 / 或进展为肌肉侵入性疾病高风 的患者中， 需要至少一年的膀胱内 BCG 免疫治疗 (Babjuk M， Oosterlinck W， Sylvester R， Kaasinen E， A， Palou-Redorta J ； European Association of Urology (EAU).EAU guidelines on non-muscle-invasive urothelial carcinoma of the bladder.Eur Urol 2008 ； 54 ： 303-14)。然而， BCG 仅部分有效， 并且可发生严重的局部和全身副作用 (Witjes JA， Palou J， Soloway M， Lamm 0， Brausi M， Spermon JR， Persad R， Buckley R， Akaza H， Colombel M， A.Clinical Practice recommendations for the prevention and management of intravesical therapy-associated adverse events.Eur.Urol SuppI2008 ； 7： 667-74)。 因此， 开发新的膀胱内治疗方案以降低肿瘤复发和 NMIBC 的进展仍 很重要。
         作为另一种膀胱疾病， 膀胱炎通常包括膀胱的炎症， 并且在正常无菌的下尿路 ( 尿道和膀胱 ) 被细菌感染， 并变得肿痛和发炎时发生。 鉴于感染蔓延到肾脏的风险以及由 于老年群体和糖尿病患者的并发症发生率高， 迅速治疗几乎总是被推荐。 为控制细菌感染， 通常用抗生素治疗膀胱炎。治疗常用的抗生素包括例如， 呋喃妥因、 甲氧苄氨嘧啶 - 磺胺甲 基异 唑、 阿莫西林、 头孢菌素、 环丙沙星或左氧氟沙星和多西环素。 然而， 这种抗生素治疗 通常破坏肠道菌群的正常平衡， 引起腹泻。 此外， 也可发生抗生素诱导通常作为正常阴道菌 群组成存在的细菌群破坏， 并且可导致外阴阴道区念珠菌 (Candida) 属的酵母菌种过度生 长。
         对于这些疾病， 具体而言， 对于膀胱疾病如非侵入性癌症和 / 或膀胱炎的治疗， 提 供通过免疫系统的激活而起作用的可选剂将是期望的。但是， 即使上述限定的免疫调节 物——具体为咪喹莫特或其衍生物可用于治疗这些疾病， 给药却可因上述全身给药后严重 的副作用而受到限制。 而且， 当局部给予时， 这种免疫调节物， 具体为咪喹莫特或其衍生物， 由于其 ( 药学上具有挑战性的 ) 理化性质， 通常不以治疗有效量存在于体内。这种药物组 合物在本领域中也还未被述及， 表明在本领域中具有突出挑战。 如技术人员所知， 为提供这 种特定药物组合物， 必须考虑多个药学方面， 如剂量、 赋形剂相容性、 溶解性、 稳定性、 无菌 生产、 扩大规模的可行性、 导管递送、 成本和患者依从性 ； 以及药理方面， 如生物活性、 膜渗 透性、 效果持续时间、 低的全身循环 ( 以便避免全身副作用 ) 和毒性。 至于许多其他活性剂， 提供包含期望活性剂和释放该剂的药物组合物从而确保局部药物递送， 是每一位药剂师的 主要挑战之一。此外， 必须考虑例如咪唑喹啉 ( 胺 ) 的 ( 重要 ) 理化性质， 具体为这类化合 物的疏水性， 其 ( 鉴于本领域所述的方法 ) 通常导致起 TLR-7 配体作用的被给予免疫调节 物化合物体内浓度不足。
         因此， 根据第二个方面， 迫切需要提供适于特定局部递送上述限定的免疫调节 物——具体为咪喹莫特或其衍生物——的药物组合物， 例如， 用于治疗膀胱疾病， 例如， 通 过膀胱内给药途径。 总之， 如上所概述， 咪喹莫特是有效治疗肿瘤、 病毒和炎性疾病的活性剂。 然而， 咪 唑喹啉 ( 胺 ) 如咪喹莫特及其衍生物在制备药物中的应用受其溶解性特征的严格限制。此 外， 如若全身给药， 咪唑喹啉 ( 胺 ) 如咪喹莫特引起多种副作用。因此， 通过使用适当的药 物组合物， 以允许活性剂特定地递送到目标器官的制剂给予这种剂， 是最重要的。因此， 提 供以足够的溶解量包含咪唑喹啉 ( 胺 ) 如咪喹莫特的特定药物组合物以有效治疗本文所述 的疾病是非常期望的。此外， 如果将咪唑喹啉 ( 胺 ) 如咪喹莫特及其衍生物配制在适于局 部——具体为膀胱内——给药的制剂中以便对抗膀胱疾病， 从而显著降低严重全身副作用 的风险， 将是优选的。
         因此， 本发明的目标是提供适于以治疗有效量包含免疫调节物——具体为咪唑喹 啉 ( 胺 ) 如咪喹莫特——的药物组合物。此外， 本发明进一步的目标是提供适于在制备用 于通过膀胱内给药膀胱内治疗膀胱疾病——具体为非侵入性膀胱癌和膀胱炎——的药物 中使用的药物组合物。
         本发明的目标 ( 一个或多个 ) 是通过所附的权利要求实现的。具体地， 本发明的 目标 ( 一个或多个 ) 通过如下药物组合物实现， 该药物组合物包含 (a) 咪唑喹啉 ( 胺 ) 或 其衍生物， 例如， 咪喹莫特或其衍生物 ； 和 (b) 至少一种有机酸， 该有机酸选自醋酸和 / 或乳 酸或其混合物。
         因此， 根据本发明的一个优选实施方式， 药物组合物包含咪唑喹啉 ( 胺 ) 和至少一 种有机酸， 该有机酸选自醋酸和 / 或乳酸。
         对于一些实施方式， 以下条件中的一个或多个适用 ：
         - 排除用于局部应用的药物组合物，
         - 排除包含油的药物组合物，
         - 排除被制成 w/o( 油包水 ) 或 o/w( 水包油 ) 制剂的药物组合物，
         - 排除这样的药物组合物 ： 其被制成油相中含按重量计 4％的咪喹莫特 (1- 异丁 基 -1H- 咪唑 [4， 5-c]- 喹啉 -4- 胺 ) 和水相中含按重量计 1 ％的乳酸 (85 ％ ) 的乳状液 (cream)，
         - 排除用于肠胃外给药的药物组合物，
         - 排除含甘油和 / 或山梨醇的药物组合物，
         - 排除这样的用于肠胃外给药的药物组合物 ： 包 含 按 重 量 计 1 ％ 的 1- 异 丁 基 -1H- 咪唑 [4， 5-c]- 喹啉 -4- 胺和 / 或按重量计 1％的 1-(2- 羟基 -2- 甲基丙基 )-1H- 咪 唑 [4， 5-c] 喹啉 -4- 胺或 N-[4-(4- 氨基 -2- 乙基 -1H- 咪唑 [4， 5-c] 喹啉 -1- 基 ) 丁基 ] 甲 基磺酰胺 (methanesulfoneamide) 和按重量计 1％或 2％的乳酸 (85％ ) 或按重量计 0.6％ 的醋酸，
         - 排除包含醋酸和山梨醇酐单油酸酯 20 肉豆蔻酸酯或肉豆蔻酸异丙酯的药物组 合物， 和/或
         - 排除包含咪喹莫特壳聚糖纳米颗粒的药物组合物， 咪喹莫特壳聚糖纳米颗粒通 过混合壳聚糖醋酸溶液与咪喹莫特而得到。
         根据本发明的另一优选实施方式， 药物组合物还包含至少一种热敏剂， 其中所述 至少一种热敏剂优选选自壳聚糖或其衍生物， 或选自聚 ( 环氧乙烷 )- 聚 ( 环氧丙烷 )- 聚 ( 环氧乙烷 ) 共聚物 ( 也被称为 PEO-PPO-PEO 或泊洛沙姆 )。
         根据本发明的进一步优选的实施方式， 所述至少一种热敏剂选自壳聚糖或其衍生 物， 或选自聚 ( 环氧乙烷 )- 聚 ( 环氧丙烷 )- 聚 ( 环氧乙烷 ) 共聚物 ( 也被称为 PEO-PPO-PEO 或泊洛沙姆 )， 包括普流罗尼 (Pluronic)F 108 Cast Solid Surfacta ； 普流罗尼 F 108 锭剂 (Pastille) ； 普流罗尼 F 108 颗粒剂 (Prill) ； 普流罗尼 F 108NF 颗粒剂 ( 泊洛沙 姆 338) ； 普流罗尼 F 127 ； 普流罗尼 F 127 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 127NF ； 普流罗尼 F 127 NF 500 BHT 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 127NF 颗粒剂 ( 泊洛沙姆 407) ； 普流罗尼 F 38 ； 普流罗尼 F 38 锭剂 ； 普流罗尼 F 68 ； 普流罗尼 F 68 锭剂 ； 普流罗尼 F 68 LF 锭剂 ； 普流罗尼 F 68NF 颗粒剂 ( 泊洛沙姆 188) ； 普流罗尼 F 68 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 77 ； 普流罗尼 F 77 微锭剂(Micropastille) ； 普流罗尼 F 87 ； 普流罗尼 F 87NF 颗粒剂 ( 泊洛沙姆 237) ； 普流罗尼 F 87 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 88 锭剂 ； 普流罗尼 F 88 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 98 ； 普流罗尼 F 98 颗 粒剂 ； 普流罗尼 L 10 ； 普流罗尼 L 101 ； 普流罗尼 L 121 ； 普流罗尼 L 31 ； 普流罗尼 L 35 ； 普 流罗尼 L 43 ； 普流罗尼 L 44 ； 普流罗尼 L 44NF( 泊洛沙姆 124) ； 普流罗尼 L 61 ； 普流罗尼 L 62 ； 普流罗尼 L 62LF ； 普流罗尼 L 62D ； 普流罗尼 L 64 ； 普流罗尼 L 81 ； 普流罗尼 L 92 ； 普 流罗尼 L44NF INH 表面活性剂 ( 泊洛沙姆 124) ； 普流罗尼 N 3 ； 普流罗尼 P 103 ； 普流罗尼 P 104 ； 普流罗尼 P 105 ； 普流罗尼 P 123 表面活性剂 ； 普流罗尼 P 65 ； 普流罗尼 P 84 ； 普流 罗尼 P 85 ； 以及泊洛沙姆 403， 或选自由上面限定热敏剂中的任意两种或更多种所组成的 混合物。
         根据本发明的另一优选实施方式， 所述至少一种热敏剂选自聚 ( 环氧乙烷 )- 聚 ( 环氧丙烷 )- 聚 ( 环氧乙烷 ) 共聚物 ( 也被称为 PEO-PPO-PEO 或泊洛沙姆 )， 包括普流罗 尼 F 108 Cast Solid Surfacta ； 普流罗尼 F 108 锭剂 ； 普流罗尼 F 108 颗粒剂 ； 普流罗 尼 F 108NF 颗粒剂 ( 泊洛沙姆 338) ； 普流罗尼 F 127 ； 普流罗尼 F 127 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 127NF ； 普流罗尼 F 127NF 500BHT 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 127NF 颗粒剂 ( 泊洛沙姆 407) ； 普流 罗尼 F 38 ； 普流罗尼 F 38 锭剂 ； 普流罗尼 F 68 ； 普流罗尼 F 68 锭剂 ； 普流罗尼 F 68LF 锭 剂； 普流罗尼 F 68NF 颗粒剂 ( 泊洛沙姆 188) ； 普流罗尼 F 68 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 77 ； 普流 罗尼 F 77Micro 锭剂 ； 普流罗尼 F 87 ； 普流罗尼 F 87NF 颗粒剂 ( 泊洛沙姆 237) ； 普流罗尼 F 87 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 88 锭剂 ； 普流罗尼 F 88 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 98 ； 普流罗尼 F 98 颗 粒剂 ； 普流罗尼 L 10 ； 普流罗尼 L 101 ； 普流罗尼 L 121 ； 普流罗尼 L 31 ； 普流罗尼 L 35 ； 普 流罗尼 L 43 ； 普流罗尼 L 44 ； 普流罗尼 L 44NF( 泊洛沙姆 124) ； 普流罗尼 L 61 ； 普流罗尼 L 62 ； 普流罗尼 L 62LF ； 普流罗尼 L 62D ； 普流罗尼 L 64 ； 普流罗尼 L 81 ； 普流罗尼 L 92 ； 普 流罗尼 L44NF INH 表面活性剂 ( 泊洛沙姆 124) ； 普流罗尼 N 3 ； 普流罗尼 P 103 ； 普流罗尼 P 104 ； 普流罗尼 P 105 ； 普流罗尼 P 123 表面活性剂 ； 普流罗尼 P 65 ； 普流罗尼 P 84 ； 普流罗 尼 P 85 ； 以及泊洛沙姆 403， 或选自由上述热敏剂中的任意两种或更多种所组成的混合物。
         在本发明的背景下， 本发明药物组合物包含至少一种有机酸作为第一组份， 该有 机酸选自醋酸和 / 或乳酸或其混合物。虽然技术人员已知有机酸 “醋酸” 和 “乳酸” 通常用 于配制药物组合物， 但是本发明的发明人惊讶地发现， 这些短链羧酸尤其适合有效溶解咪 唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物， 该发现还未在本领域公开或论述过。此外， 发现醋酸和乳酸呈现 明显优于任何其他 ( 羧 ) 酸的溶解特性。更加特别甚至更加令人惊讶的是， 醋酸 (CH3COOH) 和 / 或乳酸 (2- 羟基丙酸 ) 溶解咪唑喹啉 ( 胺 ) 是其他短链 ( 羧 ) 酸， 即， 磷酸、 琥珀酸和 柠檬酸的 3 至 100 倍。
         不受任何理论所束缚， 这些令人惊讶的效果具体归因于本文所用咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物例如咪喹莫特的特定结构， 以及尤其是醋酸和乳酸与咪唑喹啉 ( 胺 ) 化合物的 特定相互作用， 这导致意想不到的加合物结构。术语 “咪唑喹啉 ( 胺 )” 既指咪唑喹啉的总 类， 更具体地在优选实施方式中， 也指咪唑喹啉胺的子类。
         由于本文所用的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物具有碱性官能团， 具体为胺部分， 现有 技术文献假定咪唑喹啉 ( 胺 ) 可以溶解在 pH 值低于该类化合物的 pKa 的任何酸性溶液中， 例如， 以咪喹莫特为例， 即， 可以溶解在 pH 值约 4 的任何酸性溶液中。然而， 本发明的发明 人指出， 本文所用的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物的溶解性不仅仅取决于溶液的 pH。不受任何理论束缚， 那些优越的特性似乎通过相互作用而实现， 所述相互作用发生在本文所用的 咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物与具体选自醋酸和 / 或乳酸的 ( 有机 ) 酸之间， 从而形成两组 分间特定的加合物。显然， 这种相互作用似乎不在本文所用的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物 与任何其他 ( 有机 ) 酸之间发生。因此， 假定本发明令人惊讶的结果， 具体为本文所用的咪 唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物在有机酸醋酸和 / 或乳酸中的特别优越的溶解特性， 似乎取决于 仅通过乳酸和醋酸而非任何其他 ( 有机 ) 酸实现的特定结构特性。因此， 乳酸和 / 或醋酸 形成加合物结构中的阴离子， 而咪唑喹啉 ( 胺 ) 是带正电荷的阳离子。
         根据本发明的优选实施方式， 上述本发明的药物组合物包含选自醋酸和 / 或乳酸 或其混合物的有机酸， 浓度为约 0.025M 至约 0.200M， 优选浓度为约 0.025M 至约 0.100M 或 浓度为约 0.100M 至约 0.200M， 或浓度为约 0.075M 至约 0.125M， 例如， 浓度为约 0.025M 至约 0.200M、 约 0.030M 至约 0.200M、 约 0.035M 至约 0.200M、 约 0.040M 至约 0.200M、 约 0.045M 至 约 0.200M、 约 0.050M 至约 0.200M、 约 0.055M 至约 0.200M、 约 0.060M 至约 0.200M、 约 0.065M 至 约 0.200M、 约 0.070M 至 约 0.200M、 约 0.075M 至 约 0.200M、 约 0.080M 至 约 0.200M、 约 0.085 至约 0.200M、 约 0.090M 至约 0.200M、 约 0.095M 至约 0.200M、 约 0.095M 至约 0.200M、 约 0.100M 至 约 0.200M、 约 0.125M 至 约 0.200M、 约 0.130M 至 约 0.200M、 约 0.135M 至 约 0.200M、 约 0.140M 至约 0.200M、 约 0.145M 至约 0.200M、 约 0.0150M 至约 0.200M、 约 0.155M 至 约 0.200M、 约 0.160M 至 约 0.200M、 约 0.165M 至 约 0.200M、 约 0.170M 至 约 0.200M、 约 0.175M 至约 0.200M、 约 0.180M 至约 0.200M、 约 0.185M 至约 0.200M、 约 0.190M 至约 0.200M、 或约 0.195M 至约 0.200M， 或优选浓度为约 0.050M 至约 0.100M， 例如， 浓度为约 0.055M 至约 0.100M、 约 0.060M 至约 0.100M、 约 0.065M 至约 0.100M、 约 0.070M 至约 0.100M、 约 0.075M 至约 0.100M、 约 0.080M 至约 0.100M、 约 0.085M 至约 0.100M、 约 0.090M 至约 0.100M、 或约 0.095M 至约 0.100M， 或浓度为约 0.025M 至约 0.100M， 例如， 浓度为约 0.025M 至约 0.100M、 约 0.030M 至 约 0.100M、 约 0.035M 至 约 0.100M、 约 0.040M 至 约 0.100M、 约 0.045M 至 约 0.100M、 约 0.050M 至约 0.100M、 约 0.055M 至约 0.100M、 约 0.060M 至约 0.100M、 约 0.065M 至 约 0.100M、 约 0.070M 至约 0.100M、 约 0.075M 至约 0.100M、 约 0.080M 至约 0.100M、 约 0.085 至约 0.200M、 约 0.090M 至约 0.100M、 约 0.095M 至约 0.100M、 约 0.095M 至约 0.100M， 或浓 度为约 0.100M 至约 0.200M， 例如， 浓度为约 0.100M 至约 0.200M、 约 0.125M 至约 0.200M、 约 0.130M 至 约 0.200M、 约 0.135M 至 约 0.200M、 约 0.140M 至 约 0.200M、 约 0.145M 至 约 0.200M、 约 0.0150M 至约 0.200M、 约 0.155M 至约 0.200M、 约 0.160M 至约 0.200M、 约 0.165M 至 约 0.200M、 约 0.170M 至 约 0.200M、 约 0.175M 至 约 0.200M、 约 0.180M 至 约 0.200M、 约 0.185M 至约 0.200M、 约 0.190M 至约 0.200M、 或约 0.195M 至约 0.200M， 或浓度为约 0.075M 至约 0.125M， 例如， 约 0.08M 至约 0.125M、 约 0.085M 至约 0.125M、 约 0.09M 至约 0.125M、 约 0.095M 至约 0.125M、 约 0.1M 至约 0.125M、 或约 0.075M 至约 0.120M、 约 0.075M 至约 0.115M、 约 0.075M 至约 0.110M、 约 0.075M 至约 0.105M、 约 0.075M 至约 0.105M 或 of 约 0.08M 至约 0.120M， 例如， 约 0.085M 至约 0.115M、 约 0.09M 至约 0.110M、 约 0.095M 至约 0.105M、 或约 0.1M。在此背景下， 显示了溶液中溶解的本文所用咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物的量与酸浓 度直接相关， 即， 与醋酸和乳酸的浓度直接相关。因此， 较高浓度的醋酸和 / 或乳酸或二者 混合物可以优选在上述限定的范围内优选用于溶解。
         根据本发明一个具体实施方式， 上述限定的本发明药物组合物包含 ( 两种有机酸， 其选自 ) 醋酸和乳酸的混合物， 二者优选一起呈现用于本发明药物组合物的上述限定 的有机酸的 “共同浓度” ， 其一般为约 0.025M 至约 0.200M 或约 0.075M 至约 0.125M， 上述限 定的任意其他浓度。在此背景下， 术语 “有机酸的共同浓度” 意为用于这种混合物的两种有 机酸醋酸和乳酸的摩尔浓度导致上述限定的浓度。甚至更优选的是， 上述限定的 ( 两种有 机酸， 其选自 ) 醋酸和乳酸混合物的两种组分包含如下比率的醋酸∶乳酸 ： 约 1 ∶ 30 至约 30 ∶ 1， 例如， 约 2 ∶ 30、 约 3 ∶ 30、 约 4 ∶ 30、 约 5 ∶ 30、 约 6 ∶ 30、 约 7 ∶ 30、 约 8 ∶ 30、 约 9 ∶ 30、 约 10 ∶ 30、 约 11 ∶ 30、 约 12 ∶ 30、 约 13 ∶ 30、 约 14 ∶ 30、 约 15 ∶ 30、 约 16 ∶ 30、 约 17 ∶ 30、 约 18 ∶ 30、 约 19 ∶ 30、 约 20 ∶ 30、 约 21 ∶ 30、 约 22 ∶ 30、 约 23 ∶ 30、 约 24 ∶ 30、 约 25 ∶ 30、 约 26 ∶ 30、 约 27 ∶ 30、 约 28 ∶ 30、 约 29 ∶ 30、 约 30 ∶ 29、 约 30 ∶ 28、 约 30 ∶ 27、 约 30 ∶ 26、 约 30 ∶ 25、 约 30 ∶ 24、 约 30 ∶ 23、 约 30 ∶ 22、 约 30 ∶ 21、 约 30 ∶ 20、 约 30 ∶ 19、 约 30 ∶ 18、 约 30 ∶ 17、 约 30 ∶ 16、 约 30 ∶ 15、 约 30 ∶ 14、 约 30 ∶ 13、 约 30 ∶ 12、 约 30 ∶ 11、 约 30 ∶ 10、 约 30 ∶ 9、 约 30 ∶ 8、 约 30 ∶ 7、 约 30 ∶ 6、 约 30 ∶ 5、 约 30 ∶ 4、 约 30 ∶ 3、 约 30 ∶ 2 或约 30 ∶ 1。本文公开了醋酸∶乳酸的范围， 其可在任意上述值的基础上组成， 例如， 1 ∶ 30 至 30 ∶ 24、 1 ∶ 30 至 23 ∶ 30、 30 ∶ 12 至 30 ∶ 1、 30 ∶ 8 至 30 ∶ 1 等。
         根据本发明一个更具体的实施方式， 上述限定的本发明药物组合物仅包含醋酸或 乳酸作为酸组分。在任何情况下， 具体实施方式涉及的上述本发明组合物除醋酸和 / 或乳 酸外不包含任何其他酸， 无论有机酸或无机酸。 在另一个具体的实施方式中， 药物组合物仅 包含醋酸 ( 不包含乳酸 ) 作为 ( 有机 ) 酸组分， 并且更优选除醋酸外根本不含其他酸， 无论 是有机酸或无机酸。取而代之， 药物组合物可 ( 在另一个具体的实施方式中 ) 仅包含乳酸 ( 不包含醋酸 ) 作为 ( 有机 ) 酸， 并且更优选除乳酸外根本不包含其他酸， 无论是有机酸或 无机酸。还有另一个优选的实施方式中， 药物组合物可以只包含醋酸和 / 或乳酸作为有机 酸组分， 但至少一种另外的无机酸可被包含在本发明的药物组合物中， 例如磷酸、 HCl 等。
         根据本发明另一个具体的实施方式， 本文所述的本发明药物组合物仅包含乳酸作 为酸组分， 优选呈现本发明药物组合物如上所述的乳酸浓度， 一般为约 0.025M 至约 0.200M 或约 0.075M 至约 0.125M 或上述任意其他浓度。在该具体实施方式中， 甚至更优选的是， 上 述本发明的药物组合物除乳酸外不包含任何其他酸， 无论是有机酸或无机酸。 在此背景下， 本发明的发明人惊奇地发现， 乳酸在溶解本文所用的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物的方面甚 至比醋酸更加有效。令人惊讶的是， 乳酸在使本文所用的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物溶解 方面比醋酸有效二倍。同样发现， 乳酸中本文所用的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物的溶解性 不会由于添加表面活性剂如吐温 (Tween) 或普流罗尼——其通常在药物组合物中起溶解性 增强剂的作用——而提高。该发现表明， 本文所用的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物没有陷入 由表面活性剂形成的微团， 从而支持了这样的假定 ： 这些咪唑喹啉 ( 胺 ) 通过形成特定结构 的加合物与乳酸相互作用。
         根据本发明另一个具体的实施方式， 本文所述的本发明药物组合物包含如下浓 度的乳酸 ： 约 0.075M 至约 0.125M， 例如， 约 0.08M 至约 0.125M、 约 0.085M 至约 0.125M、 约 0.09M 至约 0.125M、 约 0.095M 至约 0.125M、 约 0.1M 至约 0.125M、 或约 0.075M 至约 0.120M、 约 0.075M 至 约 0.115M、 约 0.075M 至 约 0.110M、 约 0.075M 至 约 0.105M、 约 0.075M 至 约 0.105M ； 或约 0.08M 至约 0.120M， 例如， 约 0.085M 至约 0.115M、 约 0.09M 至约 0.110M、 约0.095M 至约 0.105M 或约 0.1M。
         根据本发明更具体的实施方式， 本文限定的本发明药物组合物通常包含如下 pH 值： 约 3 至约 8， 优选为约 3 至约 7， 更优选为约 3 至约 6， 甚至更优选为约 3 至约 5， 以及最 优选 pH 值为约 3.5 至约 4， 包括如下范围的 pH 值 ： 约 3.5 至约 4.9、 约 3.5 至约 4.8、 约 3.6 至约 4.7、 约 3.6 至约 4.6、 约 3.7 至约 4.5、 约 3.7 至约 4.4、 约 3.8 至约 4.3、 约 3.8 至约 4.2 或约 3.9 至约 4.1。可在上述限定的 pH 值下制备和给予本发明的药物组合物。如有必 要， 对于具体治疗和给药要求可进一步调整 pH 值， 例如， 调至更中性的 pH 值， 约 5、 6 或 7(pH 5 至 7)， 例如， 使用本文公开的缓冲液和添加剂进行。
         在本发明的背景下， 本发明的药物组合物包含另外的组分——咪唑喹啉 ( 胺 ) 化 合物， 如咪喹莫特或其衍生物， 作为生物 ( 治疗 ) 活性剂。在本发明的背景下， 术语 “本文所 用的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物” 优选指如下限定的咪唑喹啉 ( 胺 )。
         根据一个具体的实施方式， 本发明的药物组合物包含选自下式 (I) 的咪唑喹啉 (胺)：
         其中
         R1、 R2 和 R3 分别独立地选自 ： 氢； 三个、 四个或五个碳原子的环烷基 ； 含一个至约十 个碳原子的直链或支链烷基和含一个至约十个碳原子的取代直链或支链烷基， 其中该取代 基选自含三个至约六个碳原子的环烷基和经含一个至约四个碳原子的直链或支链烷基取 代的含三个至约六个碳原子的环烷基 ； 含一个至约十个碳原子和一个或多个氟原子或氯原 子的氟代或氯代烷基 ； 含两个至约十个碳原子的直链或支链烯基和含两个至约十个碳原子 的取代直链或支链烯基， 其中该取代基选自含三个至约六个碳原子的环烷基和经含一个至 约四个碳原子的直链或支链烷基取代的含三个至约六个碳原子的环烷基 ； 一个至约六个碳 原子的羟烷基 ； 烷氧基烷基， 其中烷氧基部分包含一个至约四个碳原子， 以及烷基部分包含 一个至约六个碳原子 ； 酰氧基烷基， 其中酰氧基部分是两个至约四个碳原子的完酰氧基或 苯甲酰氧基， 以及烷基部分包含一个至约六个碳原子， 条件是任意这样的烷基、 取代烷基、 烯基、 取代烯基、 羟烷基、 烷氧基烷基或酰氧基烷基的完全碳取代的碳原子没有与氮原子直 接相连 ； 苄基 ； ( 苯基 ) 乙基 ； 以及苯基 ； 所述苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取代基在苯环上经 一个或两个部分任选地取代， 所述部分独立地选自一个至约四个碳原子的烷基、 一个至约 四个碳原子的烷氧基和卤素， 条件是当所述苯环经所述部分中的两种取代时， 则该部分共 包含不超过六个碳原子 ；
         -CHRxRy， 其中 Ry 是氢或碳碳键， 条件是当 Ry 是氢时， Rx 是一个至约四个碳原子的 烷氧基、 一个至约四个碳原子的羟基烷氧基、 两个至约十个碳原子的 1- 炔基、 四氢吡喃基、 烷氧基烷基——其中烷氧基部分包含一个至约四个碳原子以及烷基部分包含一个至约四 个碳原子、 2-、 3- 或 4- 吡啶基， 并且进一步的条件是当 Ry 是碳碳键时， Ry 和 Rx 共同组成经 一个或多个取代基任选取代的四氢呋喃基， 该一个或多个取代基取代基独立地选自一个至 约四个碳原子的羟基或羟烷基 ；
         含一个至约八个碳原子的直链或支链烷基、 含一个至约六个碳原子的直链或支链 羟烷基、 吗啉代甲基、 苄基、 ( 苯基 ) 乙基和苯基， 该苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取代基在苯环 上被选自甲基、 甲氧基或卤素的部分任选地取代 ；
         -C(RS)(RT)(X)， 其中 RS 和 RT 独立地选自 ： 氢、 一个至约四个碳原子的烷基、 苯基和 取代苯基， 其中该取代基选自一个至约四个碳原子的烷基、 一个至约四个碳原子的烷氧基、 和卤素 ；
         X 是含一个至约四个碳原子的烷氧基、 烷氧基烷基——其中烷氧基部分包含一个 至约四个碳原子以及烷基部分包含一个至约四个碳原子、 一个至约四个碳原子的卤烷基、 烷基酰胺基——其中烷基包含一个至约四个碳原子、 氨基、 取代氨基——其中该取代基是 一个至约四个碳原子的烷基或羟烷基、 叠氮基、 一个至约四个碳原子的烷硫基、 或吗啉代烷 基——其中烷基部分包含一个至约四个碳原子 ；
         R4 是氢、 C1-8 烷基、 C1-8 烷氧基、 或卤素 ；
         n 为 1、 2、 3或4； a b
         R 和 R 分别独立地是氢、 (C1-C6) 烷基、 羟基 (C1-C6) 烷基、 氨基 (C1-C6) 烷基、 氨基 磺酰基、 (C1-C6) 烷酰基、 芳基或苄基， 它们全部经一个或多个氨基任选地取代 ； 或 a b
         R 和 R 与其所连接的氮一起组成吡咯烷基 (pyrrolidino)、 哌啶基 (piperidino)、 或吗啉基 (morpholino) ； 上式 (I) 五元环中的虚线表示使五元环的氮与五元环两个氮之间 的碳连接的任选键， 并且当该键存在时， R1 或 R3 其中任一个不存在 ；
         条件是 Ra 和 Rb 在中心结构成分 N(Ra)(Rb) 的氮上共同形成季铵离子， 或者 Ra 和 Rb 通过 Ra 和 / 或 Rb 提供的任意季铵离子共同形成季铵离子 ；
         或其药学上可接受的盐。 药学上可接受的盐在本发明的含义中一般指醋酸或乳酸 盐。
         根据一个更具体的实施方式， 本发明的药物组合物包含作为咪唑喹啉或其衍生物 的咪唑喹啉胺， 如 1H- 咪唑 [4， 5-c] 喹啉 -4- 胺， 其通常选自下式 (II) 至 (VI) 其中之一 ：
         例如， 这样的化合物可选自式 (II)
         其中
         R11 选自一个至约十个碳原子的烷基、 一个至约六个碳原子的羟烷基、 酰氧基烷 基——其中酰氧基部分是两个至约四个碳原子的烷酰氧基或苯甲酰氧基以及烷基部分包 含一个至约六个碳原子、 苄基、 ( 苯基 ) 乙基和苯基——所述苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取 代基在苯环上经一个或两个部分任选地取代， 该部分独立地选自一个至约四个碳原子的烷 基、 一个至约四个碳原子的烷氧基和卤素， 条件是如果所述苯环经所述部分中的两种取代， 那么所述部分共同包含不超过六个碳原子 ；
         R21 选自氢、 一个至约八个碳原子的烷基、 苄基、 ( 苯基 ) 乙基和苯基——所述苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取代基在苯环上经一个或两个部分任选地取代， 该部分独立地选自一 个至约四个碳原子的烷基、 一个至约四个碳原子的烷氧基和卤素， 条件是当苯环经所述部 分中的两种取代时， 此时该部分共同包含不超过六个碳原子 ； 并且分别地
         R1 独立地选自一个至约四个碳原子的烷氧基、 卤素和一个至约四个碳原子的烷 基， 以及
         n 是 0 至 2 的整数， 条件是如果 n 是 2， 那么所述 R1 基团共同包含不超过六个碳原 子；
         或前述中任一个的药学上可接受的盐 ；
         或可以选自式 (III)
         其中
         R12 选自含两个至约十个碳原子的直链或支链烯基和含两个至约十个碳原子的取 代直链或支链烯基， 其中该取代基选自含一个至约四个碳原子的直链或支链烷基和含三个 至约六个碳原子的环烷基 ； 和经含一个至约四个碳原子的直链或支链烷基取代的含三个至
         约六个碳原子的环烷基 ； 以及
         R22 选自氢、 含一个至约八个碳原子的直链或支链烷基、 苄基、 ( 苯基 ) 乙基和苯 基——所述苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取代基在苯环上经一个或两个部分任选地取代， 该部 分独立地选自含一个至约四个碳原子的直链或支链烷基、 含一个至约四个碳原子的直链或 支链烷氧基和卤素， 条件是当苯环经两个这样的部分取代时， 此时该部分共同包含不超过 六个碳原子 ； 并且分别地
         R2 独立地选自含一个至约四个碳原子的直链或支链烷氧基、 卤素和含一个至约四 个碳原子的直链或支链烷基， 以及
         n 是 0 至 2 的整数， 条件是如果 n 是 2， 那么所述 R2 基团共同包含不超过六个碳原 子；
         或前述中任一个的药学上可接受的盐 ；
         或可以选自式 (IV)
         其中
         R22 选自氢、 一个至约八个碳原子的直链或支链烷基、 苄基、 ( 苯基 ) 乙基和苯 基——所述苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取代基在苯环上经一个或两个部分任选地取代， 该部 分独立地选自一个至约四个碳原子的直链或支链烷基、 一个至约四个碳原子的直链或支链 烷氧基和卤素， 条件是当苯环经两个这样的部分取代时， 此时该部分共同包含不超过六个 碳原子 ； 并且分别地
         R3 独立地选自一个至约四个碳原子的直链或支链烷氧基、 卤素和一个至约四个碳 原子的直链或支链烷基， 以及
         n 是 0 至 2 的整数， 条件是如果 n 是 2， 那么所述 R3 基团共同包含不超过六个碳原 子；
         或前述中任一个的药学上可接受的盐 ；
         或可以选自式 (V)
         其中
         R14 是 -CHRxRy， 其中 Ry 是氢或碳 - 碳键， 条件是当 Ry 是氢时， Rx 是一个至约四个碳 原子的烷氧基、 一个至约四个碳原子的羟基烷氧基、 两个至约十个碳原子的 1- 炔基、 四氢 吡喃基、 烷氧基烷基——其中烷氧基部分包含一个至约四个碳原子以及烷基部分包含一个 至约四个碳原子、 2-、 3- 或 4- 吡啶基 ； 并且进一步的条件是当 Ry 是碳 - 碳键时， Ry 和 Rx 共 同形成经一个或多个取代基任选取代的四氢呋喃基， 该一个或多个取代基取代基独立地选 自羟基和一个至约四个碳原子的羟烷基 ；
         R24 选自氢、 一个至约四个碳原子的烷基、 苯基和取代苯基——其中该取代基选自 一个至约四个碳原子的烷基、 一个至约四个碳原子的烷氧基、 和卤素 ； 以及选自氢、 含一个 至约四个碳原子的直链或支链烷氧基、 卤素和含一个至约四个碳原子的直链或支链烷基 ；
         或前述中任一个的药学上可接受的盐 ；
         或可以选自式 (VI)
         其中
         R15 选自 ： 氢； 含一个至约十个碳原子的直链或支链烷基和含一个至约十个碳原子 的取代直链或支链烷基， 其中该取代基选自含三个至约六个碳原子的环烷基和经含一个至 约四个碳原子的直链或支链烷基取代的含三个至约六个碳原子的环烷基 ； 含两个至约十个 碳原子的直链或支链烯基和含两个至约十个碳原子的取代直链或支链烯基， 其中该取代基 选自含三个至约六个碳原子的环烷基和经含一个至约四个碳原子的直链或支链烷基取代 的含三个至约六个碳原子的环烷基 ； 一个至约六个碳原子的羟烷基 ； 烷氧基烷基， 其中烷
         氧基部分包含一个至约四个碳原子以及烷基部分包含一个至约六个碳原子 ； 酰氧基烷基， 其中酰氧基部分是两个至约四个碳原子的烷酰氧基或苯甲酰氧基以及烷基部分包含一个 至约六个碳原子 ； 苄基 ； ( 苯基 ) 乙基 ； 以及苯基 ； 所述苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取代基在 苯环上经一个或两个部分任选地取代， 该一个或两个部分部分独立地选自一个至约四个碳 原子的烷基、 一个至约四个碳原子的烷氧基和卤素， 条件是当所述苯环经所述部分中的两 种取代时， 此时该部分共同包含不超过六个碳原子 ；
         R25 是
         其中
         RS 和 RT 独立地选自氢、 一个至约四个碳原子的烷基、 苯基和取代苯基——其中所 述取代基选自一个至约四个碳原子的烷基、 一个至约四个碳原子的烷氧基和卤素 ；
         X 选自含一个至约四个碳原子的烷氧基、 烷氧基烷基——其中烷氧基部分包含一 个至约四个碳原子以及烷基部分包含一个至约四个碳原子、 一个至约四个碳原子的羟烷 基、 一个至约四个碳原子的卤烷基、 烷基酰胺基——其中烷基包含一个至约四个碳原子、 氨 基、 取代氨基 —— 其中取代基是一个至约四个碳原子的烷基或羟烷基、 叠氮基、 氯、 羟基、 1- 吗啉基、 1- 吡咯烷基、 一个至约四个碳原子的烷硫基 ； 以及
         R5 选自氢、 含一个至约四个碳原子的直链或支链烷氧基、 卤素和含一个至约四个 碳原子的直链或支链烷基 ；
         或前述中任一个的药学上可接受的盐。
         根据另一个具体的实施方式， 本发明的药物组合物包含作为咪唑喹啉或其衍生物 的咪唑喹啉 ( 胺 )， 其来自下式 (VII) ：
         其中
         m 是 1、 2或3；
         R16 选自氢 ； 三个、 四个或五个碳原子的环烷基 ； 含一个至约十个碳原子的直链或 支链烷基和含一个至约十个碳原子的取代直链或支链烷基， 其中该取代基选自含三个至约
         六个碳原子的环烷基和经含一个至约四个碳原子的直链或支链烷基取代的含三个至约六 个碳原子的环烷基 ； 含一个至约十个碳原子和一个或多个氟原子或氯原子的氟代或氯代烷 基； 含两个至约十个碳原子的直链或支链烯基和含两个至约十个碳原子的取代直链或支链 烯基， 其中该取代基选自含三个至约六个碳原子的环烷基和经含一个至约四个碳原子的直 链或支链烷基取代的含三个至约六个碳原子的环烷基 ； 一个至约六个碳原子的羟烷基 ； 烷 氧基烷基， 其中烷氧基部分包含一个至约四个碳原子， 以及烷基部分包含一个至约六个碳 原子 ； 酰氧基烷基， 其中酰氧基部分是两个至约四个碳原子的烷酰氧基或苯甲酰氧基， 以及 烷基部分包含一个至约六个碳原子， 条件是任何这样的烷基、 取代烷基、 烯基、 取代烯基、 羟 烷基、 烷氧基烷基或酰氧基烷基不具有与氮原子直接相连的完全碳取代的碳原子 ； 苄基 ； ( 苯基 ) 乙基 ； 以及苯基 ； 所述苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取代基在苯环上经一个或两个部 分任选地取代， 该一个或两个部分独立地选自一个至约四个碳原子的烷基、 一个至约四个 碳原子的烷氧基和卤素， 条件是当所述苯环经所述部分中的两种取代时， 此时该部分共同 包含不超过六个碳原子 ； 以及 -CHRxRy， 其中 Ry 是氢或碳 - 碳键， 条件是当 Ry 是氢时， Rx 是 一个至约四个碳原子的烷氧基、 一个至约四个碳原子的羟基烷氧基、 两个至约十个碳原子 的 1- 炔基、 四氢吡喃基、 烷氧基烷基——其中烷氧基部分包含一个至约四个碳原子以及烷 基部分包含一个至约四个碳原子、 2-、 3- 或 4- 吡啶基， 并且进一步的条件是当 Ry 是碳 - 碳 键时， Ry 和 Rx 共同形成经一个或多个取代基任选取代的四氢呋喃基， 该取代基选自羟基和 一个至约四个碳原子的羟烷基，
         R26 选自氢、 含一个至约八个碳原子的直链或支链烷基、 含一个至约六个碳原子的 直链或支链羟烷基、 吗啉代甲基、 苄基、 ( 苯基 ) 乙基和苯基， 该苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基取 代基在苯环上经选自甲基、 甲氧基和卤素的部分任选地取代 ； 以及
         -C(RS)(RT)(X)， 其中
         RS 和 RT 独立地选自氢、 一个至约四个碳原子的烷基、 苯基和取代苯基——其中该 取代基选自一个至约四个碳原子的烷基、 一个至约四个碳原子的烷氧基和卤素 ；
         X 选自含一个至约四个碳原子的烷氧基、 烷氧基烷基——其中烷氧基部分包含一 个至约四个碳原子以及烷基部分包含一个至约四个碳原子、 一个至约四个碳原子的卤烷 基、 烷基酰胺基——其中烷基包含一个至约四个碳原子、 氨基、 取代氨基——其中该取代基 是一个至约四个碳原子的烷基或羟烷基、 叠氮基、 一个至约四个碳原子的烷硫基和吗啉代 烷基——其中烷基部分包含一个至约四个碳原子， 以及
         R6 选自氢、 氟、 氯、 含一个至约四个碳原子的直链或支链烷基和含一个至约四个碳 原子和至少一个氟或氯原子的直链或支链氟代或氯代烷基 ；
         以及其药学上可接受的盐。
         根据另一个具体的实施方式， 本发明的药物组合物包含作为咪唑喹啉或其衍生物 的咪唑喹啉 ( 胺 )， 其来自下式 (VIII) ：
         其中
         R17 选自氢 ； -CH2RW， 其中 RW 选自含一个至约十个碳原子的直链烷基、 支链烷基或环 烷基、 含两个至约十个碳原子的直链或支链烯基、 含一个至约六个碳原子的直链或支链羟 烷基、 烷氧基烷基——其中烷氧基部分包含一个至约四个碳原子以及烷基部分包含一个至 约六个碳原子、 和苯基乙基 ； 以及 -CH ＝＝ CRZRZ， 其中各 RZ 独立地是一个至约六个碳原子的 直链烷基、 支链烷基或环烷基 ；
         R27 选自氢、 含一个至约八个碳原子的直链或支链烷基、 含一个至约六个碳原子的 直链或支链羟烷基、 烷氧基烷基——其中烷氧基部分包含一个至约四个碳原子以及烷基部 分包含一个至约六个碳原子、 苄基、 ( 苯基 ) 乙基和苯基——所述苄基、 ( 苯基 ) 乙基或苯基 取代基在苯环上经选自甲基、 甲氧基和卤素的部分任选地取代 ； 和吗啉代烷基， 其中烷基部 分包含一个至约四个碳原子 ；
         R67 和 R77 独立地选自
         氢和一个至约五个碳原子的烷基， 条件是 R67 和 R77 共同包含不超过六个碳原子， 以 及进一步的条件是当 R77 是氢时， 此时 R67 不是氢和 R27 不是氢或吗啉代烷基， 以及进一步的 条件是当 R67 是氢时， 此时 R77 和 R27 不是氢 ；
         及其药学上可接受的盐。
         根据另一个具体的实施方式， 本发明的药物组合物包含作为咪唑喹啉或其衍生物 的咪唑喹啉 ( 胺 )， 其来自下式 (IX) ：
         其中 Z 选自 ：-(CH2)p-， 其中 p 为 1 至 4 ；
         -(CH2)a-C(RDRE)(CH2)b-， 其中 a 和 b 是整数， 并且 a+b 为 0 至 3， RD 是氢或一个至 四个碳原子的烷基， 以及 RE 选自一个至四个碳原子的烷基、 羟基、 -ORF——其中 RF 是一个至 四个碳原子的烷基、 和 -NRG R′ G——其中 RG 和 R′ G 独立地是氢或一个至四个碳原子的烷 基； 以及
         -(CH2)a-(Y)-(CH2)b-， 其中 a 和 b 是整数， 并且 a+b 为 0 至 3， Y 是 O、 S 或 -NRJ-—— 其中 RJ 是氢或一个至四个碳原子的烷基 ；
         并且其中
         q为0或1； 以及
         R8 选自一个至四个碳原子的烷基、 一个至四个碳原子的烷氧基、 和卤素，
         及其药学上可接受的盐 .
         根据更优选的实施方式， 本发明的药物组合物包含作为咪唑喹啉 ( 胺 ) 的具体化 合物， 咪喹莫特， 其优选具有具体式 1- 异丁基 -1H- 咪唑 [4， 5-c] 喹啉 -4- 胺， 甚至更优选 包含下列具体结构 ：
         根据更优选的实施方式， 本发明的药物组合物包含作为咪唑喹啉 ( 胺 ) 的具体化 合物， 瑞喹莫德 (resiquimod)， 其优选包含下列具体结构 ：
         根据本发明的药物组合物也可包含一种以上上述定义的咪唑喹啉 ( 胺 ) 的混合 物， 通常为 2 至 4 种咪唑喹啉 ( 胺 )， 其可以例如选自上述公开根据式 (I) 至 (XI) 的化合物 中的任一种。优选地， 包含一种以上咪唑喹啉 ( 胺 ) 的这种药物活性组合物中至少一种治 疗活性组分相应于式 (XI) ： 咪喹莫特。
         在上述定义的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物的背景下， 优选下列进一步的限定可以 适用 ：
         ●在包含整数 n 并且 n 可为 0、 1 或 2 的式中， n 优选为 0 或 1。
         ●上述取代基 R11-R17 在本文中通常称为 “1- 取代基” 。在一个实施方式中， 1- 取 代基优选是含一个至六个碳原子的烷基和含一个至六个碳原子的羟烷基， 例如， 1- 取代基 是 2- 甲基丙基或 2- 羟基 -2- 甲基丙基。
         ●上述取代基 R21-R27 在本文中通常称为 “2- 取代基” 。在一个实施方式中， 2- 取 代基优选是氢、 一个至六个碳原子的烷基、 烷氧基烷基——其中烷氧基部分包含一个至四 个碳原子以及烷基部分包含一个至四个碳原子、 和一个至四个碳原子的羟烷基， 例如， 2- 取 代基是氢、 甲基、 丁基、 羟甲基、 乙氧基甲基或甲氧基乙基。
         ●术语 “烷基” 优选包括直链或支链 C1-10 烷基， 例如， 甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 戊基、 异丙基、 异丁基、 1- 甲基丙基、 3- 甲基丁基、 己基及类似基团。
         ●术语 “低级烷基” 优选包括直链或支链 C1-6 烷基， 例如， 甲基、 乙基、 丙基、 1- 甲基 乙基、 丁基、 1- 甲基丙基、 2- 甲基丙基、 1， 1- 二甲基乙基、 戊基、 1- 甲基丁基、 2- 甲基丁基、 3- 甲基丁基、 1， 1- 二甲基丙基、 1， 2- 二甲基丙基、 2， 2- 二甲基丙基及类似基团。
         ●术语 “烯基” 优选指二价直链或支链烃链 ( 例如， 亚乙基 -CH2-CH2-)。
         ●术语 “C3-7 环烷基” 优选包括如下基团 ： 如环丙基、 环戊基、 环己基、 环庚基和类似 基团， 以及烷基取代的 C3-7 环烷基优选直链或支链 C1-6 烷基， 如甲基、 乙基、 丙基、 丁基或戊 基， 以及 C5-7 环烷基， 如环戊基或环己基及类似基团。
         ●术语 “低级烷氧基” 优选包括 C1-6 烷氧基， 如甲氧基、 乙氧基或丙氧基及类似基 团。
         ●术语 “低级烷酰基” 优选包括 C1-6 烷酰基， 如甲酰基、 乙酰基、 丙酰基、 丁酰基、 戊 酰基或己酰基及类似基团。
         ●术语 “C7-11 芳酰基” 包括诸如苯甲酰基或萘甲酰基的基团 ；
         ●术语 “低级烷氧基羰基” 优选包括 C2-7 烷氧基羰基， 如甲氧基羰基、 乙氧基羰基或 丙氧基羰基及类似基团。
         ●术语 “低级烷基氨基” 优选意为经 C1-6 烷基取代的氨基， 如甲基氨基、 乙基氨基、 丙基氨基、 丁基氨基及类似基团。
         ●术语 “二 ( 低级烷基 ) 氨基” 优选意为经相同或不同的 C1-6 烷基取代的氨基 ( 例 如， 二甲基氨基、 二乙基氨基、 乙基甲基氨基 )。
         ●术语 “低级烷基氨基甲酰基” 优选意为经 C1-6 烷基取代的氨基甲酰基 ( 例如， 甲 基氨基甲酰基、 乙基氨基甲酰基、 丙基氨基甲酰基、 丁基氨基甲酰基 )。
         ●术语 “二 ( 低级烷基 ) 氨基甲酰基” 优选意为经相同或不同的 C1-6 烷基取代的氨 基甲酰基 ( 例如， 二甲基氨基甲酰基、 二乙基氨基甲酰基、 乙基甲基氨基甲酰基 )。
         ●本文所述的术语 “卤原子” 优选意为如氟原子、 氯原子、 溴原子或碘原子的卤原 子。
         ●本文所述的术语 “芳基” 优选指 C6-10 单环或稠环芳基， 如苯基、 茚基或萘基及类 似基团。
         ●本文定义的术语 “杂环的” 优选指含至少一种杂原子——例如， 0-3 个氮原子、 0-1 个氧原子 (-O-) 和 0-1 个硫原子 (-S-)——的单环饱和杂环基团或不饱和单环或稠杂 环基团。在此背景下， 饱和单环杂环基团的非限制性实例包括 5 或 6 元饱和杂环基团， 如四 氢呋喃基、 吡咯烷基、 吗啉基、 哌啶基、 哌嗪基或吡唑烷基。 不饱和单环杂环基团的非限制性实例包括 5 或 6 元不饱和杂环基团， 如呋喃基、 吡咯基、 吡唑基、 咪唑基、 噻唑基、 噻吩基、 吡 啶基或嘧啶基。 不饱和稠杂环基团的非限制性实例包括不饱和双环杂环基团， 如吲哚基、 异 吲哚基、 喹啉基、 苯并噻唑基 (benzothizolyl)、 苯并二氢吡喃基、 苯并呋喃基及类似基团。
         ●此外， 本文所述的烷基、 芳基和杂环基团可经一个或多个取代基任选地取代， 其中该取代基相同或不同， 并且包括低级烷基 ； C1-6 烷氧基， 如甲氧基、 乙氧基或丙氧基 ； 羧 基； C2-7 烷氧基羰基， 如甲氧基羰基、 乙氧基羰基或丙氧基羰基和卤素 ； 环烷基， 并且包括 C3-6 环烷基 ； 羟基 ； C1-6 烷氧基 ； 氨基 ； 氰基 ； 芳基 ； 取代芳基， 如 4- 羟基苯基、 4- 甲氧基苯 基、 4 氯苯基或 3， 4- 二氯苯基 ； 硝基羟基和卤羟基 ； 羟基 C1-6 亚烷基， 如羟甲基、 2- 羟乙基或 3- 羟丙基 ； 低级烷氧基 ； C1-6 烷氧基 C1-6 烷基， 如 2- 甲氧基乙基、 2- 乙氧基乙基或 3- 甲氧 基丙基 ； 氨基 ； 烷基氨基 ； 二烷基氨基 ； 氰基 ； 硝基 ； 酰基 ； 羧基 ； 低级烷氧基羰基 ； 卤素 ； 巯 基； C1-6 烷硫基， 如甲硫基、 乙硫基、 丙硫基或丁硫基 ； 取代 C1-6 烷硫基， 如甲氧基乙硫基、 甲 硫基乙硫基、 羟乙硫基或氯乙硫基 ； 芳基 ； 取代 C6-10 单环或稠环芳基， 如 4- 羟基苯基、 4- 甲 氧基苯基、 4- 氟苯基、 4- 氯苯基或 3， 4- 二氯苯基 ； 5-6 元不饱和杂环， 如呋喃基、 吡咯基、 吡唑基、 咪唑基、 噻唑基、 噻吩基、 吡啶基或嘧啶基 ； 以及双环不饱和杂环， 如吲哚基、 异吲哚 基、 喹啉基、 苯并噻唑基、 苯并二氢吡喃基、 苯并呋喃基或苯二甲酰亚氨基 (phthalimino)。 而且， 本文定义的杂环可用一个或多个取代基任选地取代， 其中取代基相同或不同， 并且包 括 C1-6 烷基 ； 羟基 C1-6 亚烷基 ； C1-6 烷氧基 C1-6 亚烷基 ； 羟基 ； C1-6 烷氧基 ； 和氰基。 最后， 本领域技术人员会理解， 本发明背景中的上述咪唑喹啉 ( 胺 ) 也可具有手性 中心， 并且可以以旋光和外消旋形式分离。一些化合物可以呈现多晶现象。要理解的是， 本 发明包括上述咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物的任何外消旋、 旋光、 多晶型、 或立体异构形式或 其混合物， 它们具有本文所述的有用特性， 本领域周知如何制备旋光形式 ( 例如， 通过重结 晶技术拆分外消旋形式， 通过从旋光原料合成， 通过手性合成或通过利用手性固定相进行 层析分离 ) 和如何应用本文所述的标准试验或应用本领域周知的其他类似试验测定烟碱 激动剂活性。
         根据一个实施方式， 根据本发明的药物组合物通常包含本文定义的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物， 优选咪喹莫特或其衍生物， 其量为约 0.005％ (w/v) 至约 5％ (w/v)， 优选 量为约 0.01％ (w/v) 至约 5％ (w/v)， 更优选量为约 0.1％ (w/v) 至约 4％ (w/v)， 甚至更优 选量为约 0.1％ (w/v) 至约 3％ (w/v)， 更进一步优选量为约 0.2％ (w/v) 至约 2％ (w/v)， 以及最优选量为约 0.2％ (w/v) 至约 1％ (w/v) 或甚至量为约 0.5％ (w/v) 至约 1％ (w/v)， 其中当例如以液体或半液体制剂提供时， 可在本文定义的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物—— 优选咪喹莫特或其衍生物——的重量的基础上， 相对于本发明的药物组合物的总体积， 确 定以％ (w/v) 限定的量。可选地， 可以％ (w/w) 限定上述量， 其中可在本文定义咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物——优选咪喹莫特或其衍生物——的重量的基础上， 相对于本发明的药 物组合物的总重量， 确定以％ (w/w) 限定的量。
         根据一个具体的优选实施方式， 根据本发明的药物组合物通常包含本文定义的咪 唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物， 优选咪喹莫特或其衍生物， 其量为约 0.005％ (w/v) 至约 1％、 2％、 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 0.01％ (w/v) 至约 1％、 2％、 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其 量为约 0.1％ (w/v) 至约 1 ％、 2％、 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 0.2％ (w/v) 至约 1％、 2 ％、 3 ％、 4 ％或 5 ％ (w/v)， 其量为约 0.3 ％ (w/v) 至约 1 ％、 2 ％、 3 ％、 4 ％或 5 ％ (w/v)， 其
         量为约 0.4％ (w/v) 至约 1％、 2％、 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 0.5％ (w/v) 至约 1％、 2 ％、 3 ％、 4 ％或 5 ％ (w/v)， 其量为约 0.6 ％ (w/v) 至约 1 ％、 2 ％、 3 ％、 4 ％或 5 ％ (w/v)， 其 量为约 0.7％ (w/v) 至约 1％、 2％、 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 0.8％ (w/v) 至约 1％、 2％、 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 0.9％ (w/v) 至约 1％、 2％、 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量 为约 1.0％ (w/v) 至约 2％、 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 1.1％ (w/v) 至约 2％、 3％、 4％ 或 5％ (w/v)， 其量为约 1.2％ (w/v) 至约 2％、 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 1.3％ (w/v) 至约 2％、 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 1.4％ (w/v) 至约 2％、 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量 为约 1.5％ (w/v) 至约 2％、 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 1.6％ (w/v) 至约 2％、 3％、 4％ 或 5％ (w/v)， 其量为约 1.7％ (w/v) 至约 2％、 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 1.8％ (w/v) 至约 2％、 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 1.9％ (w/v) 至约 2％、 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量 为约 2.0％ (w/v) 至约 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 2.1％ (w/v) 至约 3％、 4％或 5％ (w/ v)， 其量为约 2.2％ (w/v) 至约 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 2.3％ (w/v) 至约 3％、 4％ 或 5％ (w/v)， 其量为约 2.4％ (w/v) 至约 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 2.5％ (w/v) 至 约 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 2.6％ (w/v) 至约 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 2.7％ (w/v) 至约 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 2.8％ (w/v) 至约 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为 约 2.9％ (w/v) 至约 3％、 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 3.0％ (w/v) 至约 4％或 5％ (w/v)， 其 量为约 3.1％ (w/v) 至约 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 3.2％ (w/v) 至约 4％或 5％ (w/v)， 其 量为约 3.3％ (w/v) 至约 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 3.4％ (w/v) 至约 4％或 5％ (w/v)， 其 量为约 3.5％ (w/v) 至约 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 3.6％ (w/v) 至约 4％或 5％ (w/v)， 其 量为约 3.7％ (w/v) 至约 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 3.8％ (w/v) 至约 4％或 5％ (w/v)， 其 量为约 3.9％ (w/v) 至约 4％或 5％ (w/v)， 其量为约 4.0％ (w/v) 至约 5％ (w/v)， 其量为约 4.1％ (w/v) 至约 5％ (w/v)， 其量为约 4.2％ (w/v) 至约 5％ (w/v)， 其量为约 4.3％ (w/v) 至约 5％ (w/v)， 其量为约 4.4％ (w/v) 至约 5％ (w/v)， 其量为约 4.5％ (w/v) 至约 5％ (w/ v)， 其量为约 4.6％ (w/v) 至约 5％ (w/v)， 其量为约 4.7％ (w/v) 至约 5％ (w/v)， 其量为约 4.8％ (w/v) 至约 5％ (w/v)％或其量为约 4.9％ (w/v) 至约 5％ (w/v)。也可以％ (w/w) 确 定上述值。术语 “％ (w/v)” 和 “％ (w/w)” 均优选如上所定义。
         根据另一个具体的优选实施方式， 根据本发明的药物组合物通常包含本文定义的 咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物， 优选咪喹莫特或其衍生物， 其量为约 0.1％ (w/v) 至约 1％ (w/ v)。
         根据一个更具体的优选实施方式， 根据本发明的药物组合物通常包含本文定义的 咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物， 优选咪喹莫特或其衍生物， 其量为约 0.005％ (w/v) 至约 0， 5％ (w/v)， 其量为约 0.01％ (w/v) 至约 0.5％ (w/v)， 其量为约 0.1％ (w/v) 至约 0.6％ (w/v)， 其量为约 0.2％ (w/v) 至约 0.7％ (w/v)， 其量为约 0.3％ (w/v) 至约 0.8％ (w/v)， 其量为 约 0.4％ (w/v) 至约 0.9％ (w/v)， 其量为约 0.5％ (w/v) 至约 1.0％ (w/v)， 其量为约 0.6％ (w/v) 至约 1.1％ (w/v)， 其量为约 0.7％ (w/v) 至约 1.2％ (w/v)， 其量为约 0.8％ (w/v) 至 约 1.3％ (w/v)， 其量为约 0.9％ (w/v) 至约 1.4％ (w/v)， 其量为约 1.1％ (w/v) 至约 1.5％ (w/v)， 其量为约 1.2％ (w/v) 至约 1.6％ (w/v)， 其量为约 1.3％ (w/v) 至约 1.7％ (w/v)， 其量为约 1.4％ (w/v) 至约 1.8％ (w/v)， 其量为约 1.5％ (w/v) 至约 1.9％ (w/v)， 其量为 约 1.6％ (w/v) 至约 2.0％ (w/v)， 其量为约 1.7％ (w/v) 至约 2.1％ (w/v)， 其量为约 1.8％(w/v) 至约 2.2％ (w/v)， 其量为约 1.9％ (w/v) 至约 2.3％ (w/v)， 其量为约 2.0％ (w/v) 至 约 2.5％ (w/v)， 其量为约 2.1％ (w/v) 至约 2.6％ (w/v)， 其量为约 2.2％ (w/v) 至约 2.7％ (w/v)， 其量为约 2.3％ (w/v) 至约 2.8％ (w/v)， 其量为约 2.4％ (w/v) 至约 2.9％ (w/v)， 其量为约 2.5％ (w/v) 至约 3.0％ (w/v)， 其量为约 2.6％ (w/v) 至约 3.1％ (w/v)， 其量为 约 2.7％ (w/v) 至约 3.2％ (w/v)， 其量为约 2.8％ (w/v) 至约 3.3％ (w/v)， 其量为约 2.9％ (w/v) 至约 3.4％ (w/v)， 其量为约 3.0％ (w/v) 至约 3.5％ (w/v)， 其量为约 3.1％ (w/v) 至 约 3.6％ (w/v)， 其量为约 3.2％ (w/v) 至约 3.7％ (w/v)， 其量为约 3.3％ (w/v) 至约 3.8％ (w/v)， 其量为约 3.4％ (w/v) 至约 3.9％ (w/v)， 其量为约 3.5％ (w/v) 至约 4.0％ (w/v)， 其量为约 3.6％ (w/v) 至约 4.1％ (w/v)， 其量为约 3.7％ (w/v) 至约 4.2％ (w/v)， 其量为 约 3.8％ (w/v) 至约 4.3％ (w/v)， 其量为约 3.9％ (w/v) 至约 4.4％ (w/v)， 其量为约 4.0％ (w/v) 至约 4.5％ (w/v)， 其量为约 4.1％ (w/v) 至约 4.6％ (w/v)， 其量为约 4.2％ (w/v) 至 约 4.7％ (w/v)， 其量为约 4.3％ (w/v) 至约 4.8％ (w/v)， 其量为约 4.4％ (w/v) 至约 4.9％ (w/v)％或其量为约 4.5％ (w/v) 至约 5.0％ (w/v)。也可以％ (w/w) 确定上述值。术语 “％ (w/v)” 和 “％ (w/w)” 均优选如上所定义。
         至于本发明药物组合物的制备， 例如， 当在本发明药物组合物的制备过程中制备 ( 储备 ) 溶液时， 然而， 对于最终的本发明药物组合物， 本文所述的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生 物可以通常以上面指出的较高浓度溶于上述这种包含乳酸或醋酸或二者混合物的 ( 储备 ) 水溶液中。为此， ( 储备 ) 溶液可包含量为约 0.005％ (w/v) 或 0.01％ (w/v) 至约 30％ (w/ v)， 优选量为约 1％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 更优选量为约 5％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 甚至 更优选量为约 10％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 最优选量为约 15％ (w/v) 至约 20 或 25％ (w/ v) 的本文所述咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物。可选择地， 上述值可以被理解为％ (w/w)。这 些百分比 “％ (w/v)” 和 “％ (w/w)” 均优选如上所定义。
         根据另一个实施方式， 本发明的药物组合物也可包含添加剂或另外的组分。有利 的是， 这样的添加剂或另外的组分提高了本发明药物组合物中本文所述咪唑喹啉 ( 胺 ) 或 其衍生物的溶解性和 / 或膜渗透性。可选地或另外地， 这样的添加剂或另外的组分可为将 要治疗的具体疾病提供更加适合的制剂， 赋予本发明的药物组合物更好的耐受性， 等等。
         根据具体的实施方式， 本发明的药物组合物可包含环糊精， 其也被称为环状直链 淀粉 (cycloamylose)。如本发明的发明人所惊讶地发现， 即使仅通过环糊精不能使咪唑喹 啉 ( 胺 ) 或其衍生物充分地溶解， 也可使用环糊精来提高本发明药物组合物中本文所述咪 唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物的溶解性和有利地膜渗透性。在此背景下， 不仅最终本发明药物 组合物中本文所述咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物的溶解性利用环糊精得到提高， 而且由本文 所述咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物和上述有机酸例如乳酸、 醋酸或其混合物形成的中间 ( 储 备 ) 溶液中本文所述咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物的溶解性也得到提高。具体地， 环糊精与 乳酸和 / 或醋酸组合导致咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物——具体为咪喹莫特——的溶解性， 相对于治疗活性剂只与乳酸组合的溶解性， 小幅但却是重要地增加至少 10％， 更优选至少 15％或至少约 18％， 这相对于现有技术知识是不可预期的发现。因此， 可在制备药物组合 物的任何阶段使用环糊精来提高本文所述咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物的溶解性。在本发明 的背景下， 环糊精优选被理解为环状寡糖家族成员， 由 5 个或更多个在 1 位和 4 位之间连接 的 α-D- 吡喃葡萄糖苷单元组成， 被称为直链淀粉——淀粉片段。在本发明的背景下， 环糊精具体包含形成六元糖环分子的 α- 环糊精、 形成七元糖环分子的 β- 环糊精、 形成八元 糖环分子的 γ- 环糊精、 δ- 环糊精和 ε- 环糊精。特别优选地， 本发明的药物组合物包含 α- 环糊精、 β- 环糊精和 / 或 γ- 环糊精， 甚至更优选 β- 环糊精， 如羟丙基 -β- 环糊精 (HP-β-CD)。
         令人惊讶的是， 将 HP-β-CD 掺入本发明药物制剂改善了物理稳定性， 得到澄清均 质溶液。
         根据特别优选的实施方式， 上述本发明药物组合物可包含上述环糊精， 其量为约 0.1％ (w/v) 至约 30％ (w/v)， 通常其量为约 1％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 优选其量为约 2％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 更优选其量为约 5％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 还更优选其量为约 5％ (w/v) 至约 15％ (w/v)， 最优选其量为约 10％ (w/v) 至约 15％ (w/v) 或其量为约 0.1％ (w/ v) 至约 4％ (w/v)、 0.1％至 2％， 更优选其量为约 0.5 至 2％， 或者可选地， 其量为约 2％ (w/ v) 至约 6％ (w/v)， 其量为约 4％ (w/v) 至约 8％ (w/v)， 其量为约 6％ (w/v) 至约 10％ (w/ v)， 其量为约 8％ (w/v) 至约 12％ (w/v)， 其量为约 10％ (w/v) 至约 14％ (w/v)， 其量为约 12％ (w/v) 至约 16％ (w/v)， 其量为约 14％ (w/v) 至约 18％ (w/v)， 其量为约 16％ (w/v) 至 约 20％ (w/v)， 其量为约 18％ (w/v) 至约 22％ (w/v)， 其量为约 20％ (w/v) 至约 24％ (w/ v)， 其量为约 22％ (w/v) 至约 26％ (w/v)， 其量为约 24％ (w/v) 至约 28％ (w/v) 或其量为 约 26％ (w/v) 至约 30％ (w/v)， 其中当例如以液体或半液体制剂提供时， 以％ (w/v) 限定 的量可被理解为基于环糊精的重量， 相对于本发明药物组合物或中间储备溶液的总体积而 言。可选地， 可以％ (w/w) 限定上述量， 其中可在环糊精重量的基础上， 相对于本发明药物 组合物的总重量或在中间储备溶液的基础上确定以％ (w/w) 限定的量。
         根据另一个特别优选的实施方式， 上述本发明的药物组合物可包含上述环糊精， 其量为约 2％ (w/v) 至约 6％ (w/v)， 例如， 为约 2.5％ (w/v) 至约 6％ (w/v)、 约 3％ (w/v) 至 约 6％ (w/v)、 约 3.5％ (w/v) 至约 6％ (w/v)、 约 4％ (w/v) 至约 6％ (w/v)、 约 4.5％ (w/v) 至约 6％ (w/v)， 或为约 2.5％ (w/v) 至约 5.5％ (w/v)、 约 3％ (w/v) 至约 5.5％ (w/v)、 约 3.5％ (w/v) 至约 5.5％ (w/v)、 约 4％ (w/v) 至约 5.5％ (w/v)、 约 4.5％ (w/v) 至约 5.5％ (w/v)， 或为约 5％ (w/v)。
         根据另一个特别优选的实施方式， 具体对于某些给药形式和应用， 根据本发明的 药物组合物还包含至少一种热敏剂。 在本发明的背景下， 术语 “热敏剂” 通常指化合物， 优选 聚合物， 其能够在限定的转变点 ( 协同转变 ) 将其聚集态或其粘度从液态或半液态改变为 固态或半固态， 优选固态。更优选地， 术语 “热敏剂” 通常指化合物， 优选 ( 有机 ) 聚合物， 其 能够在特定的转变点 ( 也称为 “下部临界会溶温度” (LCST) 或 “凝胶转变温度” ) 将其聚集 态从液态或半液态改变为固态或半固态 ( 例如， 从液体至凝胶样状态或至固态 )， 其中特定 的转变点优选通过在如下范围内的特定转变温度限定 ： 约 15℃至约 35℃的范围， 更优选约 15℃至约 30℃的范围， 还更优选约 15℃或 20℃至约 30℃的范围， 最优选约 15℃或 20℃至 约 25℃的范围。根据本发明的 “下部临界会溶温度” 在环境压力下进行测定并且取决于热 敏剂的摩尔 - 质量分布。优选地， 上述这种热敏剂允许热敏剂和与其一起配制的任何化合 物或组合物——例如本发明药物组合物——在体温下的原位凝胶形成， 而该药物组合物通 常显示 ( 半 ) 液体特性。在此背景下， 热敏剂和与其一起配制的任何化合物或组合物的原 位凝胶形成通常直接发生在将本发明药物组合物给予患者要治疗的患病部位之时或之后，即， 不在给予本发明药物组合物之前。这种原位凝胶形成特别有利于意图在延长的时期内 释放本文所述本发明药物组合物的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物的特定应用。这样的应用通 常涉及将制剂置于例如组织或器官如膀胱的体腔中， 因此可能特别适于例如在膀胱疾病治 疗中膀胱给药。
         包含热敏剂的本发明药物组合物的一个具体优势是由于对上述温度范围的转变 点的选择而易于其给予。更具体地， 对上述温度范围的转变点的选择不仅仅允许本发明药 物组合物以液体或半液体聚集态制备或储存。其也允许 ( 优选液态的 ) 本发明药物组合物 通过例如注射给予， 因为本发明药物组合物在给予后由于周围组织或器官的温度升高—— 其优选高于转变点的温度——而直接固化或进行凝胶化。因此， 在组织或器官中引起凝胶 形成。从而应用诸如具有适当直径套管的注射针、 注射管、 内窥镜方法等的非创伤性方法 ( 无手术 ) 实施给药。而且， 这种凝胶形成导致本发明药物组合物的生物粘合特性增大， 造 成本发明药物组合物的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物长时间暴露于 TLR7 表达细胞和全身药 物渗透减少。如上所述， 咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物暴露于 TLR7 表达细胞引起发挥期望治 疗效果的免疫应答。
         此外， 包含热敏剂的本发明药物组合物有利地避免或至少显著降低了咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物的全身副作用， 原因是由于 ： 在患病部位局部给药、 本发明药物组合物的 体内粘度增大、 生物活性剂向周围组织的扩散减少， 以及此外一些情况下由于生物粘合特 性增加。
         最后， 包含热敏剂的本发明药物组合物有利地使其中包含的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其 衍生物所谓的 “缓释” ( 或有时称为 “长期释放” )。具体地， 本发明药物组合物的凝胶形成 导致咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物以零级动力学进行药物缓释， 这增加了治疗效果的持续时 间。本发明药物组合物中所含的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物的这种延长的治疗效果也避免 了重复给予本发明药物组合物——特别是在短时间间隔内， 这在使用不呈现药物缓释的药 物组合物时通常是无法避免的。 本发明药物组合物的长效 (depot) 效应通常持续至少 24h， 更优选 48h， 更优选至少 7 天， 通常随时间以 app. 恒定量释放活性剂 ( 例如， 在给药后例如 第 2 天和第 8 天在 24h 内的相当释放量 )。
         根据具体的优选实施方式， 上述本发明药物组合物包含本文所述的热敏剂， 其量 为约 0.1％ (w/v) 至约 40％ (w/v)， 优选在 0.1 与 5％ ( 更优选 0.1 与 2％ ) 之间， 或者可选 地， 通常其量为约 2％ (w/v) 至约 30％ (w/v)， 优选其量为约 5％ (w/v) 至约 30％ (w/v)， 更 优选其量为约 10％ (w/v) 至约 30％ (w/v)， 以及最优选其量为约 10％ (w/v) 至约 25％ (w/ v)， 例如， 其量为约 0.1％ (w/v) 至约 10％ (w/v)， 其量为约 5％ (w/v) 至约 15％ (w/v)， 其量 为约 10％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 其量为约 11％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 其量为约 12％ (w/ v) 至约 20％ (w/v)， 其量为约 13％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 其量为约 14％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 其量为约 15％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 其量为约 16％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 其量为 约 10％ (w/v) 至约 19％ (w/v)， 其量为约 10％ (w/v) 至约 18％ (w/v)， 其量为约 10％ (w/ v) 至约 17％ (w/v)， 其量为约 10％ (w/v) 至约 16％ (w/v)， 其量为约 11％ (w/v) 至约 19％ (w/v)， 其量为约 11％ (w/v) 至约 18％ (w/v)， 其量为约 11％ (w/v) 至约 17％ (w/v)， 其量为 约 11％ (w/v) 至约 16％ (w/v)， 其量为约 12％ (w/v) 至约 19％ (w/v)， 其量为约 12％ (w/ v) 至约 18％ (w/v)， 其量为约 12％ (w/v) 至约 17％ (w/v)， 其量为约 12％ (w/v) 至约 16％(w/v)， 其量为约 13％ (w/v) 至约 19％ (w/v)， 其量为约 13％ (w/v) 至约 18％ (w/v)， 其量为 约 13％ (w/v) 至约 17％ (w/v)， ， 其量为约 13％ (w/v) 至约 16％ (w/v)， 其量为约 14％ (w/ v) 至约 19％ (w/v)， 其量为约 14％ (w/v) 至约 18％ (w/v)， 其量为约 14％ (w/v) 至约 17％ (w/v)， 其量为约 14％ (w/v) 至约 16％ (w/v)， 其量为约 15％ (w/v) 至约 19％ (w/v)， 其量为 约 15％ (w/v) 至约 18％ (w/v)， 其量为约 15％ (w/v) 至约 17％ (w/v)， 其量为约 15％ (w/ v) 至约 16％ (w/v)， 其量为约 15％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 其量为约 20％ (w/v) 至约 30％ (w/v)， 其量为约 25％ (w/v) 至约 35％ (w/v) 或其量为约 30％ (w/v) 至约 40％ (w/v)， 其中 当例如以液体或半液体制剂提供时， 以％ (w/v) 限定的量可被理解为是在本文所述热敏剂 重量的基础上， 相对于本发明药物组合物或中间储备溶液的总体积给出的。 可选地， 可以％ (w/w) 限定上述量， 其中以％ (w/w) 限定的量可被理解为是基于本文所述热敏剂的重量， 相 对于本发明药物组合物的总重量。
         根据本发明另一个优选实施方式， 药物组合物包含咪唑喹啉 ( 胺 )、 至少一种选自 醋酸和 / 或乳酸的有机酸和至少一种热敏剂， 其中至少一种热敏剂优选选自壳聚糖或其衍 生物， 或选自聚 ( 环氧乙烷 )- 聚 ( 环氧丙烷 )- 聚 ( 环氧乙烷 ) 共聚物 ( 也称为 PEO-PPO-PEO 或泊洛沙姆 )。
         根据一个优选实施方式， 上述本发明药物组合物包含作为热敏剂的壳聚糖或其衍 生物。 在本发明的背景下， 这种壳聚糖优选被理解为是由随机分布的 β-(1-4) 连接的 D- 葡 萄糖胺 ( 脱乙酰化单元 ) 和 N- 乙酰基 -D- 葡萄糖胺 ( 乙酰化单元 ) 组成的线性多糖。壳 聚糖商业上通常通过几丁质脱乙酰化生产， 几丁质是甲壳类动物如螃蟹、 虾等的外骨骼的 结构成分。脱乙酰化的程度 (％ DA) 通常通过 NMR 光谱测定， 其中商业壳聚糖的％ DA 通常 在 60-100％范围内。 本发明背景下的壳聚糖还包括其衍生物， 如三甲基壳聚糖， 其中壳聚糖 的氨基已被三甲基化， 或壳聚糖的低聚衍生物 (3-6kDa)。
         根据一个还更优选的实施方式， 上述本发明药物组合物包含作为热敏剂的泊洛沙 姆。泊洛沙姆， 其以相对高的浓度 ( ＞ 17.5％ ) 溶解在水中， 能够产生在低温下 ( 室温以 下 ) 为液态并且在高温下形成冻状、 半固体或固体结构或者凝胶的系统。泊洛沙姆可以商 品名普流罗尼和 Lutrol(BASF AG， Ludwigshafen， Germany) 购得。泊洛沙姆作为增溶剂、 表 面活性剂、 增粘剂和胶凝剂存在于多种市售的药物产品中。 在此背景下， 本发明药物组合物 优选除了还呈现表面活性剂特性的这种热敏组分例如泊洛沙姆外， 不包含任何另外的呈现 表面活性剂特性的组分。
         根据本发明的包含热敏剂的药物组合物特是别有利的。例如， 根据本发明的包含 热敏剂——如例如泊洛沙姆——的药物组合物的膀胱内应用避免了全身吸收， 而且另外使 咪唑喹啉 ( 胺 ) 与膀胱上皮的局部接触增加。因此， 热敏剂的添加降低了从膀胱上皮全身 吸收咪唑喹啉 ( 胺 )， 并且维持免疫细胞局部浸润。
         本发明背景下的泊洛沙姆通常被称为为是聚 ( 环氧乙烷 )- 聚 ( 环氧丙烷 )- 聚 ( 环氧乙烷 ) 共聚物， 也被简称为 “PEO-PPO-PEO” 。 因此， 这种泊洛沙姆是由中心疏水链聚氧 丙烯 ( 聚 ( 环氧丙烷 )) 和侧翼的两条亲水链聚氧乙烯 ( 聚 ( 环氧乙烷 )) 组成的非离子型 三嵌段共聚物。这种泊洛沙姆的分子量通常没有具体限定， 并且针对每一特定目的可适当 地改变。因为聚合物嵌段的长度可被定制， 所以可以提供具有略微不同特性的多种泊洛沙 姆。对于通用术语 “泊洛沙姆” ， 这些共聚物通常以字母 “P” ( 对于泊洛沙姆 ) 命名， 随后是三位数字， 前两位数字 ×100 给出聚氧丙烯中心的近似分子量， 最后一位数字 ×10 给出聚 氧乙烯含量百分比 ( 例如， P407 ＝聚氧丙烯分子量为 4,000g/mol 和聚氧乙烯含量为 70％ 的泊洛沙姆 )。对于普流罗尼 /Lutrol 商品名， 这些共聚物的编码以字母开始以限定其室 温下的物理形式 (L ＝液体， P ＝糊状， F ＝薄片 ( 固体 ))， 随后两位或三位数字。数字命名 的第一位数字 ( 三位数字编号中的前两位数字 ) 乘以 300 表示疏水物的近似分子量 ； 以及 最后一位数字 ×10 给出聚氧乙烯含量百分比 ( 例如， L61 ＝聚氧丙烯分子量为 1,800g/mol 和聚氧乙烯含量为 10％的普流罗尼 )。在给出的实例中， 泊洛沙姆 181(P181) ＝普流罗尼 L61。
         作为热敏剂适用于本发明药物组合物的泊洛沙姆优选包括适于本发明目的的 任何聚 ( 环氧乙烷 )- 聚 ( 环氧丙烷 )- 聚 ( 环氧乙烷 ) 共聚物或这样的共聚物的混合 物， 即， 呈现上述热敏特性的任何 PEO-PPO-PEO 聚合物或这样的共聚物的混合物。这样 的 PEO-PPO-PEO 聚合物也包括商业可得的 PEO-PPO-PEO 聚合物及其混合物， 例如， 普流罗 尼 F 108 Cast Solid Surfacta ； 普流罗尼 F 108 锭剂 ； 普流罗尼 F 108 颗粒剂 ； 普流罗 尼 F 108NF 颗粒剂 ( 泊洛沙姆 338) ； 普流罗尼 F 127 ； 普流罗尼 F 127 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 127NF ； 普流罗尼 F 127NF 500BHT 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 127NF 颗粒剂 ( 泊洛沙姆 407) ； 普流 罗尼 F 38 ； 普流罗尼 F 38 锭剂 ； 普流罗尼 F 68 ； 普流罗尼 F 68 锭剂 ； 普流罗尼 F 68LF 锭 剂； 普流罗尼 F 68NF 颗粒剂 ( 泊洛沙姆 188) ； 普流罗尼 F 68 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 77 ； 普流 罗尼 F 77Micro 锭剂 ； 普流罗尼 F 87 ； 普流罗尼 F 87NF 颗粒剂 ( 泊洛沙姆 237) ； 普流罗尼 F 87 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 88 锭剂 ； 普流罗尼 F 88 颗粒剂 ； 普流罗尼 F 98 ； 普流罗尼 F 98 颗 粒剂 ； 普流罗尼 L 10 ； 普流罗尼 L 101 ； 普流罗尼 L 121 ； 普流罗尼 L 31 ； 普流罗尼 L 35 ； 普 流罗尼 L 43 ； 普流罗尼 L 44 ； 普流罗尼 L 44NF( 泊洛沙姆 124) ； 普流罗尼 L 61 ； 普流罗尼 L 62 ； 普流罗尼 L 62LF ； 普流罗尼 L 62D ； 普流罗尼 L 64 ； 普流罗尼 L 81 ； 普流罗尼 L 92 ； 普 流罗尼 L44NF INH 表面活性剂 ( 泊洛沙姆 124) ； 普流罗尼 N 3 ； 普流罗尼 P 103 ； 普流罗尼 P 104 ； 普流罗尼 P 105 ； 普流罗尼 P 123 表面活性剂 ； 普流罗尼 P 65 ； 普流罗尼 P 84 ； 普流 罗尼 P 85 ； 和泊洛沙姆 403。这样的 PEO-PPO-PEO 聚合物还包括由这些 PEO-PPO-PEO 聚合 物中任意两种或更多种 (3 种、 4 种、 5 种、 6 种等 ) 形成的混合物。
         更优选地， 作为热敏剂适用于本发明药物组合物的泊洛沙姆包括泊洛沙姆或其混 合物， 所述泊洛沙姆选自泊洛沙姆 124、 泊洛沙姆 188、 泊洛沙姆 237、 泊洛沙姆 338、 泊洛沙 姆 403 和泊洛沙姆 407。因此， 使用 BASF 的泊洛沙姆编码标记， 适合的泊洛沙姆选自普流 罗尼 /Lutrol F 44( 泊洛沙姆 124)、 普流罗尼 /Lutrol F 68( 泊洛沙姆 188)、 普流罗尼 / Lutrol F 87( 泊洛沙姆 237)、 普流罗尼 /Lutrol F 108( 泊洛沙姆 338)、 普流罗尼 /Lutrol F 123( 泊洛沙姆 403)、 普流罗尼 /Lutrol F 127( 泊洛沙姆 407)。
         甚至更优选地， 作为热敏剂适用于本发明药物组合物的泊洛沙姆包括泊洛沙姆或 其混合物， 所述泊洛沙姆选自泊洛沙姆 188、 泊洛沙姆 403 和泊洛沙姆 407。
         在作为热敏剂适用于本发明药物组合物的不同 PEO-PPO-PEO 聚合物中， 泊洛沙姆 407 是最优选的选择， 并且代表了在本发明背景中用于生产热响应凝胶的首选聚合物。 作为 热敏剂的泊洛沙姆 407 可单独使用或与上述其它泊洛沙姆——优选与泊洛沙姆 188——混 合使用以产生热敏剂混合物， 该热敏剂混合物在选定温度下 “胶凝化” ， 所述选定温度优选 略高于室温 ( ＞ 20℃ )， 但低于体温 ( ＜ 37℃ )。根据一个特别优选的实施方式， 本发明药物组合物包含作为热敏剂的泊洛沙姆 407， 其量一般为如上所述热敏剂的量， 更优选含量为约 0.1％、 1％、 2％、 3％、 4％、 5％、 6％、 7 ％、 8 ％、 9 ％或 10 ％ (w/v) 至约 30 ％ (w/v) ％， 还更优选量为约 5 ％ (w/v) 至约 25 ％ (w/ v)％， 以及最优选量为约 10％ (w/v) 至约 25％ (w/v)％， 例如， 量为约 0.1％、 1％、 2％、 3％、 4％、 5％、 6％、 7％、 8％、 9％或 10％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 10.5％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 11％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 11.5％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 12％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 12.5％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 13％ (w/v) 至 约 25％ (w/v)， 量为约 13.5％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 14％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 14.5％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 15％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 15.5％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 16％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 16.5％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 17％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 17.5％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 18％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 18.5％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 19％ (w/v) 至 约 25％ (w/v)， 量为约 19.5％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 20％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 20.5％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 21％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 21.5％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 22％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 22.5％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 23％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 23.5％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 24％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 或量为约 24.5％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 或更特别优选量为约 12％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 13％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 14％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 15％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 16％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为 约 17％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 18％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 19％ (w/v) 至 约 25％ (w/v)， 量为约 20％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 21％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量 为约 22％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 23％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 量为约 24％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 或更特别优选量为约 12％ (w/v) 至约 24％ (w/v)， 量为约 12％ (w/v) 至约 23％ (w/v)， 量为约 12％ (w/v) 至约 22％ (w/v)， 量为约 12％ (w/v) 至约 21％ (w/v)， 量为 约 12％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 量为约 12％ (w/v) 至约 19％ (w/v)， 量为约 12％ (w/v) 至 约 18％ (w/v)， 量为约 12％ (w/v) 至约 17％ (w/v)， 量为约 12％ (w/v) 至约 16％ (w/v)， 或 更特别地量为约 13％ (w/v) 至约 24％ (w/v)， 量为约 13％ (w/v) 至约 23％ (w/v)， 量为约 13％ (w/v) 至约 22％ (w/v)， 量为约 13％ (w/v) 至约 21％ (w/v)， 量为约 13％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 量为约 13％ (w/v) 至约 19％ (w/v)， 量为约 13％ (w/v) 至约 18％ (w/v)， 量为 约 13％ (w/v) 至约 17％ (w/v)， 量为约 13％ (w/v) 至约 16％ (w/v)， 或更特别优选量为约 14％ (w/v) 至约 24％ (w/v)， 量为约 14％ (w/v) 至约 23％ (w/v)， 量为约 14％ (w/v) 至约 22％ (w/v)， 量为约 14％ (w/v) 至约 21％ (w/v)， 量为约 14％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 量为 约 14％ (w/v) 至约 19％ (w/v)， 量为约 14％ (w/v) 至约 18％ (w/v)， 量为约 14％ (w/v) 至 约 17％ (w/v)， 量为约 14％ (w/v) 至约 16％ (w/v)， 或更特别优选量为约 15％ (w/v) 至约 24％ (w/v)， 量为约 15％ (w/v) 至约 23％ (w/v)， 量为约 15％ (w/v) 至约 22％ (w/v)， 量为 约 15％ (w/v) 至约 21％ (w/v)， 量为约 15％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 量为约 15％ (w/v) 至 约 19％ (w/v)， 量为约 15％ (w/v) 至约 18％ (w/v)， 量为约 15％ (w/v) 至约 17％ (w/v)， 量 为约 15％ (w/v) 至约 16％ (w/v)， 或更特别优选量为约 24％ (w/v) 至约 25％ (w/v)％， 其 中当例如以液体或半液体制剂提供时， 以％ (w/v) 限定的量可理解为是基于本文所述热敏剂的重量， 相对于本发明药物组合物或中间储备溶液的总体积。可选地， 上述量可以％ (w/ w) 限定， 其中以％ (w/w) 限定的量可被理解为是基于本文所述热敏剂的重量， 相对于本发 明药物组合物的总重量。
         根据更优选的实施方式， 本发明药物组合物可包含作为热敏剂的任意上述泊洛沙 姆， 优选选自泊洛沙姆 124、 泊洛沙姆 188、 泊洛沙姆 237、 泊洛沙姆 338 和泊洛沙姆 403 的任 意泊洛沙姆。 这样的泊洛沙姆作为热敏剂优选以上述热敏剂的一般量或更具体地上述泊洛 沙姆 407 的量存在于本发明的药物组合物中。
         根据特别优选的实施方式， 本发明的药物组合物也可包含作为热敏剂的任意上 述热敏剂的混合物。这样的热敏剂混合物优选包含这种混合物的热敏剂的总量， 其类似 于上述热敏剂的一般量或更具体地上述泊洛沙姆 407 的量。而且， 这种热敏剂混合物优 选包含不同的泊洛沙姆比， 其导致热敏剂混合物在期望温度——优选在上述温度范围—— 胶凝化。在此背景下， 混合物中不同泊洛沙姆的比率和 / 或量可影响 “下部临界会溶温 度” (LCST)， 从而影响凝胶转变温度。例如， 已发现降低混合物中泊洛沙姆 407 与泊洛沙姆 188 的百分比导致 LCST 升高。而且， 优选针对药物的溶解性选择混合物中不同泊洛沙姆 的量和 / 或比率。优选地， 上述热敏剂的任意两种， 特别是当以上述量提供时， 可以作为混 合物包含在本发明药物组合物中， 其比率为约 1 ∶ 20 至约 20 ∶ 1， 优选比率为约 1 ∶ 20、 2 ∶ 20、 3 ∶ 30、 4 ∶ 20、 5 ∶ 20、 6 ∶ 20、 7 ∶ 20、 8 ∶ 20、 9 ∶ 20、 10 ∶ 20、 11 ∶ 20、 12 ∶ 20、 13 ∶ 20、 14 ∶ 20、 15 ∶ 20、 16 ∶ 20、 17 ∶ 20、 18 ∶ 20、 19 ∶ 20、 20 ∶ 20( ＝ 1 ∶ 1)， 或比 率为约 20 ∶ 20、 19 ∶ 20、 18 ∶ 20、 17 ∶ 20、 16 ∶ 20、 15 ∶ 20、 14 ∶ 20、 13 ∶ 20、 12 ∶ 20、 11 ∶ 20、 10 ∶ 20、 9 ∶ 20、 8 ∶ 20、 7 ∶ 20、 6 ∶ 20、 5 ∶ 20、 4 ∶ 20、 3 ∶ 20、 2 ∶ 20 或 约 1 ∶ 20， 或比率为约 1 ∶ 20、 1 ∶ 19、 2 ∶ 18、 3 ∶ 17、 4 ∶ 16、 5 ∶ 15、 6 ∶ 14、 7 ∶ 13、 8 ∶ 12、 9 ∶ 11、 10 ∶ 10(1 ∶ 1)、 11 ∶ 9、 12 ∶ 8、 13 ∶ 7、 14 ∶ 6、 15 ∶ 5、 16 ∶ 4、 17 ∶ 3、 18 ∶ 2、 19 ∶ 1 或 20 ∶ 1， 或由上述任意两个比值组成的范围。甚至更优选地， 上述热敏剂的任意 两种， 特别是当以上述量提供时， 可以作为混合物包含在本发明药物组合物中， 其比率为约 1 ∶ 10 至约 10 ∶ 1， 例如， 比率为约 1 ∶ 10、 2 ∶ 10、 3 ∶ 10、 4 ∶ 10、 5 ∶ 10、 6 ∶ 10、 7 ∶ 10、 8 ∶ 10、 9 ∶ 10 或 10 ∶ 10( 即， 1 ∶ 1)， 或比率为约 10 ∶ 9、 10 ∶ 8、 10 ∶ 7、 10 ∶ 6、 10 ∶ 5、 10 ∶ 4、 10 ∶ 3、 10 ∶ 2 或 10 ∶ 1， 或由上述任意两个比值组成的范围。
         甚至更优选地， 本发明的药物组合物可以包含作为热敏剂的泊洛沙姆 407 与任意 上述泊洛沙姆 —— 甚至更优选选自泊洛沙姆 124、 泊洛沙姆 188、 泊洛沙姆 237、 泊洛沙姆 338 和泊洛沙姆 403——的混合物。同样， 这种热敏剂混合物优选包含混合物的热敏剂的总 量， 其类似于热敏剂的上述一般含量或更具体地泊洛沙姆 407 的上述含量。
         根据特别优选的实施方式， 本发明的药物组合物可包含作为热敏剂的泊洛沙姆 407 与泊洛沙姆 188 的混合物。本发明的药物组合物优选包含这种泊洛沙姆 407 与泊洛沙 姆 188 的混合物， 其总量如热敏剂的上述一般量或更具体地如泊洛沙姆 407 的上述量。优 选这种泊洛沙姆 407 与泊洛沙姆 188 的混合物也以在本发明的药物组合物中用作热敏剂的 泊洛沙姆混合物的上述一般比率存在于本发明的药物组合物中。甚至更优选地， 这样的比 率选自泊洛沙姆 407 ∶泊洛沙姆 188 的比率 ： 约 1 ∶ 20、 1 ∶ 19、 2 ∶ 18、 3 ∶ 17、 4 ∶ 16、 5 ∶ 15、 6 ∶ 14、 7 ∶ 13、 8 ∶ 12、 9 ∶ 11、 10 ∶ 10(1 ∶ 1)、 11 ∶ 9、 12 ∶ 8、 13 ∶ 7、 14 ∶ 6、 15 ∶ 5、 16 ∶ 4、 17 ∶ 3、 18 ∶ 2、 19 ∶ 1 或 20 ∶ 1， 或由上述任意两个值组成的范围。最优选地， 这样的比率选自泊洛沙姆 407 ∶泊洛沙姆 188 的比率 ： 约 7 ∶ 3、 7.5 ∶ 2.5、 8 ∶ 2、 8.5 ∶ 1.5、 9 ∶ 1 或 9.5 ∶ 0.5， 或由这些值中的任意两个组成的范围。因此， 本发明的药 物组合物中泊洛沙姆 188 和泊洛沙姆 407 的绝对含量可在本发明的药物组合物中两种泊洛 沙姆的总量和具体比率的基础上进行确定。
         根据具体的实施方式， 本发明的药物组合物可包含作为热敏剂的泊洛沙姆 407， 其 ( 总 ) 量为约 17.5 ％ (w/v)/(w/w) 至约 22.5 ％ (w/v)/(w/w)， 更优选总量为约 17.5 ％ (w/v)/(w/w)、 约 18.0％ (w/v)/(w/w)、 约 18.5％ (w/v)/(w/w)、 约 19.0％ (w/v)/(w/w)、 约 19.5％ (w/v)/(w/w)、 约 20.0％ (w/v)/(w/w)、 约 20.5％ (w/v)/(w/w)、 约 21.0％ (w/v)/(w/ w)、 约 21.5％ (w/v)/(w/w)、 约 22.0％ (w/v)/(w/w)， 或为约 22.5％ (w/v)/(w/w)， 或(总) 量为约 10 ％ (w/v)/(w/w) 至约 22.5 ％ (w/v)/(w/w)， 更优选总量为约 11 ％ (w/v)/(w/w) 至约 22.5 ％ (w/v)/(w/w)、 约 12.0 ％ (w/v)/(w/w) 至约 22.5 ％ (w/v)/(w/w)、 约 13 ％ (w/ v)/(w/w) 至约 22.5％ (w/v)/(w/w)、 约 14.0％ (w/v)/(w/w) 至约 22.5％ (w/v)/(w/w)、 约 15.0％ (w/v)/(w/w) 至约 22.5％ (w/v)/(w/w)、 约 15.5％ (w/v)/(w/w) 至约 22.5％ (w/v)/ (w/w)、 约 16.0 ％ (w/v)/(w/w) 至约 22.5 ％ (w/v)/(w/w)， 或为约 11 ％ (w/v)/(w/w) 至约 20.0％ (w/v)/(w/w)、 约 12.0％ (w/v)/(w/w) 至约 20.0％ (w/v)/(w/w)、 约 13％ (w/v)/(w/ w) 至约 20.0％ (w/v)/(w/w)、 约 14.0％ (w/v)/(w/w) 至约 20.0％ (w/v)/(w/w)、 约 15.0％ (w/v)/(w/w) 至约 20.0％ (w/v)/(w/w)、 约 15.5％ (w/v)/(w/w) 至约 20.0％ (w/v)/(w/w)、 约 16.0 ％ (w/v)/(w/w) 至约 20.0 ％ (w/v)/(w/w)， 或为约 11 ％ (w/v)/(w/w) 至约 19.0 ％ (w/v)/(w/w)、 约 12.0 ％ (w/v)/(w/w) 至约 19.0 ％ (w/v)/(w/w)、 约 13 ％ (w/v)/(w/w) 至 约 19.0 ％ (w/v)/(w/w)、 约 14.0 ％ (w/v)/(w/w) 至约 19.0 ％ (w/v)/(w/w)、 约 15.0 ％ (w/ v)/(w/w) 至 约 19.0 ％ (w/v)/(w/w)、 约 15.5 ％ (w/v)/(w/w) 至 约 19.0 ％ (w/v)/(w/w)、 约 16.0 ％ (w/v)/(w/w) 至约 19.0 ％ (w/v)/(w/w)， 或为约 11 ％ (w/v)/(w/w) 至约 18.0 ％ (w/v)/(w/w)、 约 12.0 ％ (w/v)/(w/w) 至约 18.0 ％ (w/v)/(w/w)、 约 13 ％ (w/v)/(w/w) 至 约 18.0 ％ (w/v)/(w/w)、 约 14.0 ％ (w/v)/(w/w) 至约 18.0 ％ (w/v)/(w/w)、 约 15.0 ％ (w/ v)/(w/w) 至 约 18.0 ％ (w/v)/(w/w)、 约 15.5 ％ (w/v)/(w/w) 至 约 18.0 ％ (w/v)/(w/w)、 约 16.0 ％ (w/v)/(w/w) 至约 18.0 ％ (w/v)/(w/w)， 或为约 11 ％ (w/v)/(w/w) 至约 17.0 ％ (w/v)/(w/w)、 约 12.0 ％ (w/v)/(w/w) 至约 17.0 ％ (w/v)/(w/w)、 约 13 ％ (w/v)/(w/w) 至 约 17.0 ％ (w/v)/(w/w)、 约 14.0 ％ (w/v)/(w/w) 至约 17.0 ％ (w/v)/(w/w)、 约 15.0 ％ (w/ v)/(w/w) 至约 17.0％ (w/v)/(w/w)、 约 15.5％ (w/v)/(w/w) 至约 17.0％ (w/v)/(w/w)、 约 16.0％ (w/v)/(w/w) 至约 17.0％ (w/v)/(w/w)， 或为约 11％ (w/v)/(w/w) 至约 16.5％ (w/ v)/(w/w)、 约 12.0 ％ (w/v)/(w/w) 至 约 16.5 ％ (w/v)/(w/w)、 约 13 ％ (w/v)/(w/w) 至 约 16.5％ (w/v)/(w/w)、 约 14.0％ (w/v)/(w/w) 至约 16.5％ (w/v)/(w/w)、 约 15.0％ (w/v)/ (w/w) 至约 16.5％ (w/v)/(w/w)、 约 15.5％ (w/v)/(w/w) 至约 16.5％ (w/v)/(w/w)。( 术语 (w/v)/(w/w) 意为 (w/v) 或 (w/w)) 或由上述这些值中的任意两个组成的范围。
         根据更具体的实施方式， 本发明的药物组合物可包含作为热敏剂的泊洛沙姆 407 与泊洛沙姆 188 的混合物， 其总量为约 22.5％ (w/v)/(w/w) 至约 27.5％ (w/v)/(w/w)， 更优 选总量为约 25％ (w/v)/(w/w)， 并且优选泊洛沙姆 407 ∶泊洛沙姆 188 的比率为约 15 ∶ 5、 16 ∶ 4、 17 ∶ 3、 18 ∶ 2、 19 ∶ 1 或 20 ∶ 1， 或由这些值中的任意两个组成的比率， 更优选 比率为约 9.5 ∶ 0.5、 约 9 ∶ 1、 约 8.5 ∶ 1.5， 或为约 8 ∶ 2， 或由这些值中的任意两个组成的比率。因此， 当本发明的药物组合物包含泊洛沙姆 407 与泊洛沙姆 188 的混合物时， 泊 洛沙姆 407 可以下列量存在于本发明的药物组合物中， 其量为约 15.5％ (w/v)/(w/w) 至约 26.5％ (w/v)/(w/w)， 优选量为约 17.5％ (w/v)/(w/w) 至约 22.5％ (w/v)/(w/w)， 而泊洛沙 姆 188 可以下列量存在于药物组合物， 其量为约 1.0％ (w/v)/(w/w) 至约 6.0％ (w/v)/(w/ w)， 优选量为约 2.5％ (w/v)/(w/w) 至约 4.5％ (w/v)/(w/w)。( 术语 (w/v)/(w/w) 意为 (w/ v) 或 (w/w))。
         本发明的药物组合物可以进一步包含添加剂或另外的组分， 诸如， 举例来说， 上述 环糊精。 在此背景下， 添加剂——具体为环糊精——的含量可影响上述所谓 “下部临界会溶 温度” (LCST) 或 “凝胶转变温度” 。作为具体实例， 增加环糊精的百分比造成上述泊洛沙姆 407 或泊洛沙姆 407 与泊洛沙姆 188 的混合物的 LCST 升高。这可适用于其他上述泊洛沙姆 和本文所述的其他热敏剂。
         同样， 本发明药物组合物的 LCST 受醋酸和乳酸不同地影响。两种酸一般使组合物 的 LCST 升高。然而， 在例如咪喹莫特完全不影响仅含醋酸的本发明药物组合物的凝胶转变 温度时， 含乳酸组合物的 LCST 被提高。因此， 本文所述热敏剂的最终百分比可取决于所用 的酸和是否存在环糊精。
         根据进一步的实施方式， 根据本发明的药物组合物可进一步包含药学上可接受 的载体和 / 或媒介物。在本发明的背景下， 药学上可接受的载体通常包括本发明药物组 合物的液体基底， 例如， 无热原水 ； 游离水溶液可以任意适当的比率与水混溶性的药学上 可接受的有机溶剂——例如， 醇 ( 例如， 乙醇或异丙醇 )——混合 ； 下列也可以使用 ： 等渗 盐水或缓冲 ( 水 ) 溶液——例如磷酸盐、 柠檬酸盐等缓冲溶液、 水缓冲溶液——其包含例 如， 钠盐 —— 优选至少 50mM 钠盐、 钙盐——优选至少 0.01mM 钙盐和 / 或钾盐—— 优选至 少 3mM 钾盐。根据优选的实施方式， 钠盐、 钙盐和 / 或钾盐可以其卤化物形式存在， 例如， 氯化物、 碘化物、 或溴化物 ； 可以其氢氧化物、 碳酸盐、 碳酸氢盐或硫酸盐等形式存在。不受 其限制， 钠盐的实例包括例如 NaCl、 NaI、 NaBr、 Na2CO3、 NaHCO3、 Na2SO4， 任选钾盐的实例包括 例如 KCl、 KI、 KBr、 K2CO3、 KHCO3、 K2SO4， 以及钙盐的实例包括例如 CaCl2、 CaI2、 CaBr2、 CaCO3、 CaSO4、 Ca(OH)2。而且， 上述阳离子的有机阴离子可包含于本发明的组合物中。根据更优选 的实施方式， 适于注射用的上述本发明组合物可包含选自如下的盐 ： 氯化钠 (NaCl)、 氯化 钙 (CaCl2) 和任选地氯化钾 (KCl)， 其中除氯化物外可存在另外的阴离子。CaCl2 也可被另 一种盐如 KCl 代替。本发明的组合物相对于具体参考介质可以是高渗的、 等渗的或低渗的， 即， 本发明的组合物相对于具体参考介质可具有较高的、 同等的或较低的盐含量， 其中优选 可应用上述盐的这些浓度， 其不会由于渗透或其他浓度效应导致细胞损伤。参考介质是例 如 “体内” 方法中存在的液体， 如血液、 淋巴液、 细胞液或其他体液， 或例如， 可用作 “体外” 方 法中的参考介质的液体， 如常用缓冲液或液体。本领域技术人员已知这种常用缓冲液或液 体。
         然而， 适合给予待治疗的患者的一种或多种相容性固体或液体填料或稀释剂或包 囊化合物 (encapsulating compounds) 也可用于本发明药物组合物。本文所用的术语 “相 容性” 意为本发明药物组合物的这些成分能与根据本发明所述的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生 物以如下方式混合 ： 在通常应用条件下不发生会使本发明药物组合物的药学效力大幅降低 的相互作用。 药学上可接受的载体、 填料和稀释剂必然具有足够高的纯度和足够低的毒性，以使其适合给予待治疗的人。可用作药学上可接受的载体、 填料或其成分的化合物的一些 实例是糖， 如例如， 乳糖、 葡萄糖和蔗糖 ； 淀粉， 如例如， 玉米淀粉或土豆淀粉 ； 纤维素及其 衍生物， 如例如， 羧甲基纤维素钠、 乙基纤维素、 醋酸纤维素 ； 粉状西黄蓍胶 ； 麦芽 ； 明胶 ； 动 物脂 ； 固体助流剂， 如例如， 硬脂酸、 硬脂酸镁 ； 硫酸钙 ； 植物油， 如例如， 花生油、 棉花籽油、 芝麻油、 橄榄油、 玉米油和可可油 ； 多元醇， 如例如， 聚丙二醇、 甘油、 山梨醇、 甘露醇和聚乙 二醇 ； 藻酸。
         本发明药物组合物中可包含的另外的添加剂是乳化剂， 如例如， Tween ； 湿润剂， 如例如， 十二烷基硫酸钠 ； 着色剂 ； 增味剂 (taste-imparting agents) ； 药物载体 ； 片剂成 形剂 ； 稳定剂 ； 抗氧化剂 ； 防腐剂。
         根据另一个实施方式， 本发明的药物组合物可包含佐剂。 在此背景下， 佐剂可被认 为是适于发动或增强天然免疫系统免疫应答——即非特异性免疫应答——的任何化合物。 换言之， 当被给予时， 本发明药物组合物通常由于任选包含在其中的佐剂而引起天然免疫 应答。这种佐剂可选自技术人员已知并适于本发明的任何佐剂， 即帮助诱发哺乳动物的天 然免疫应答。优选地， 佐剂可选自而不限于下列中的任一种， 包括壳聚糖、 TDM、 MDP、 胞壁酰 TM 二肽、 普流罗尼类、 明矾溶液、 氢氧化铝、 ADJUMER ( 聚磷腈 ) ； 磷酸铝凝胶 ； 来自藻类的葡聚 糖； algammulin ； 氢氧化铝凝胶 ( 明矾 ) ； 高蛋白吸附氢氧化铝凝胶 ； 低粘度氢氧化铝凝胶 ； AF 或 SPT( 角鲨烷 (5％ )、 Tween 80(0.2％ )、 普流罗尼 L121(1.25％ )、 磷酸盐缓冲盐水， pH 7.4 的乳状液 ) ； AVRIDINETM( 丙二胺 ) ； BAYR1005TM(N-(2- 脱氧基 -2-L- 亮氨酰氨基 -b-D- 吡 喃葡萄糖基 )-N- 十八烷基 - 十二烷酰 - 酰胺醋酸氢酯 ) ； CALCITRIOLTM(1-α， 25- 二羟 基 - 维生素 D3) ； 磷酸钙凝胶 ； CAPTM( 磷酸钙纳米颗粒 ) ； 霍乱全毒素、 霍乱毒素 -A1- 蛋 白 -A-D- 片段融合蛋白、 霍乱毒素亚单位 B ； CRL 1005( 嵌段共聚物 P1205) ； 含细胞因子的 脂质体 ； DDA( 二甲基双十八烷基溴化铵 ) ； DHEA( 脱氢表雄酮 ) ； DMPC( 二肉豆蔻酰基卵磷 脂)； DMPG( 二肉豆蔻酰磷脂酰甘油 ) ； DOC/ 明矾复合物 ( 脱氧胆酸钠盐 ) ； 弗氏 (Freund) 完全佐剂 ； 弗氏不完全佐剂 ； γ 菊粉 ； Gerbu 佐剂 ( 下列的混合物 ： i)N- 乙酰基葡萄糖胺 基 -(P1-4)-N- 乙酰基胞壁酰基 -L- 丙氨酰基 -D- 谷氨酰胺 (GMDP)， ii) 二甲基双十八烷基 氯化铵 (DDA)， iii) 锌 -L- 脯氨酸盐复合物 (ZnPro-8) ； GM-CSF) ； GMDP(N- 乙酰基葡萄糖胺 基 -(b1-4)-N- 乙酰基胞壁酰基 -L- 丙氨酰基 -D- 异谷氨酰胺 ) ； ImmTherTM(N- 乙酰基葡萄糖 胺基 -N- 乙酰基胞壁酰基 -L- 丙氨酸 -D- 异谷氨酸 -L- 丙氨酸 - 甘油二棕榈酸酯 ) ； DRVs( 由 脱水 - 再水化囊泡制备的免疫脂质体 ) ； 干扰素 -γ ； 白细胞介素 -1β ； 白细胞介素 -2 ； 白 TM TM TM ISCOPREP 7.0.3. ； 脂质体 ； LOXORIBINE (7- 烯 细胞介素 -7 ； 白细胞介素 -12 ； ISCOMS ； 丙基 -8- 氧鸟苷 ) ； LT 口服佐剂 ( 大肠杆菌 (E.coli) 不稳定肠毒素 - 原毒素 ) ； 任何组合 TM TM 物的微球和微粒 ； MF59 ； ( 角鲨烯 - 水乳状液 ) ； MONTANIDE ISA 51 ( 纯化的不完全弗氏 TM 佐剂 ) ； MONTANIDE ISA 720 ( 可代谢油佐剂 ) ； MPLTM(3-Q-desacyl-4′ - 单磷酰脂质 A) ； MTP-PE 和 MTP-PE 脂质体 ((N- 乙酰基 -L- 丙氨酰基 -D- 异谷氨酰基 -L- 丙氨酸 -2-(1， 2- 二 TM 棕榈酰基 -sn- 甘油 -3-( 羟基磷氧酰基 ))- 乙酰胺， 单钠盐 ) ； MURAMETIDE (Nac-Mur-L- 丙 TM 氨 酸 -D- 谷 氨 酰 胺 -OCH3) ； MURAPALMITINE 和 D-MURAPALMITINETM(Nac-Mur-L- 苏 氨 酸 -D- 异谷氨酰胺 -sn- 甘油二棕榈酰 ) ； NAGO( 神经氨酸酶 - 半乳糖氧化酶 ) ； 任何组合 TM 物的纳米球或纳米颗粒 ； NISV( 非离子型表面活性剂囊泡 ) ； PLEURAN (β- 葡聚糖 ) ； PLGA、 PGA 和 PLA( 乳酸与乙醇酸的均聚物和共聚物 ； 微球 / 纳米球 ) ； 普流罗尼 L121TM ； PMMA( 聚甲基丙烯酸甲酯 ) ； PODDSTM( 类蛋白微球 ) ； 聚乙烯氨基甲酸酯衍生物 ； 聚 -rA ： 聚 -rU( 聚 腺苷酸 - 聚尿苷酸复合物 ) ； 聚山梨酯 80( 吐温 80) ； 螺旋状蛋白 (protein cochleates) (Avanti Polar Lipids， Inc.， Alabaster， AL) ； STIMULONTM(QS-21) ； Quil-A(Quil-A 皂 素)； S-28463(4- 氨基 -otec- 二甲基 -2- 乙氧基甲基 -1H- 咪唑 [4， 5-c] 喹啉 -1- 乙醇 ) ； TM SAF-1 (“Syntex 佐 剂 制 剂” )； Sendai 脂 蛋 白 体 和 含 Sendai 的 脂 质 基 质 ； Span-85( 失 水山梨醇三油酸酯 ) ； Specol(Marcol 52、 司盘 (Span)85 和吐温 85 的乳状液 ) ； 角鲨烯或 Robane (2， 6， 10， 15， 19， 23- 六甲基二十四烷和 2， 6， 10， 15， 19， 23- 六甲基 -2， 6， 10， 14， 18， 22- 二十四烷基己烷 ) ； 硬脂酰酪氨酸 ( 十八烷基酪氨酸盐酸盐 ) ； Theramid (N- 乙酰 基葡萄糖胺基 -N- 乙酰基胞壁酰基 -L- 丙氨酸 -D- 异谷氨酸 -L- 丙氨酸 - 二棕榈酰氧基丙 酰胺 ) ； 苏氨酰 (Theronyl)-MDP(TermurtideTM 或 [thr 1]-MDP ； N- 乙酰基胞壁酰基 -L- 苏 氨酰 -D- 异谷氨酰胺 ) ； Ty 颗粒 (Ty-VLP 或病毒状颗粒 ) ； Walter-Reed 脂质体 ( 含吸附 在氢氧化铝上的脂质 A 的脂质体 ) 和脂肽， 包括 Pam3Cys， 具体为铝盐， 如 Adju-phos、 铝 胶 (Alhydrogel)、 氢氧化铝压缩凝胶 (Rehydragel) ； 乳状液， 包括 CFA、 SAF、 IFA、 MF59、 Provax、 TiterMax、 Montanide、 Vaxfectin ； 共 聚 物， 包 括 Optivax(CRL1005)、 L121 等 ； 脂质体， 包括 Stealth、 脂质卷 (cochleate)， 包括 BIORAL ； 源自植物的佐剂， 包括 QS21、 Quil A、 Iscomatrix、 ISCOM ； 适于共刺激的佐剂， 包括番茄碱 (Tomatine)、 生物聚合物， 包 括 PLG、 PMM、 菊粉 ； 源自微生物的佐剂， 包括罗莫肽 (Romurtide)、 DETOX、 MPL、 CWS、 甘露糖、 CpG 核酸序列、 CpG7909、 人 TLR 1-10 的配体、 鼠 TLR 1-13 的配体、 ISS-1018、 IC31、 聚肌胞 (Ampligen)、 Ribi529、 IMOxine、 IRIV、 VLP、 霍乱毒素、 热不稳定毒素、 Pam3Cys、 鞭毛蛋白、 GPI 锚形物 (anchor)、 LNFPIII/Lewis X、 抗微生物肽、 UC-1V150、 RSV 融合蛋白、 cdiGMP ； 以 及适于作为拮抗剂的佐剂， 包括 CGRP 神经肽。
         本发明的药物组合物可另外包含一种或多种助剂， 从而进一步增强其免疫调节作 用。因此优选实现根据本发明所述的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物和任选包含在上述本发明 药物组合物内的助剂的协同作用。取决于不同类型的助剂， 在此方面可考虑多种机制。例 如， 使树突细胞 (DCs) 成熟的化合物， 例如脂多糖、 TNF-α 或 CD40 配体， 组成第一类适当的 助剂。一般而言， 有可能将以 “危险信号” 的方式影响免疫系统的任何剂 (LPS、 GP96 等 ) 或 使由根据本发明的免疫刺激佐剂产生的免疫应答以靶向的方式得以增强和 / 或影响的细 胞因子如 GM-CSF 用作助剂。特别优选的助剂是进一步促进天然免疫应答的细胞因子， 如单 核因子、 淋巴因子、 白细胞介素或趋化因子， 如 IL-1、 IL-2、 IL-3、 IL-4、 IL-5、 IL-6、 IL-7、 IL-8、 IL-9、 IL-10、 IL-12、 IL-13、 IL-14、 IL-15、 IL-16、 IL-17、 IL-18、 IL-19、 IL-20、 IL-21、 IL-22、 IL-23、 IL-24、 IL-25、 IL-26、 IL-27、 IL-28、 IL-29、 IL-30、 IL-31、 IL-32、 IL-33、 INF-α、 IFN-β、 INF-γ、 GM-CSF、 G-CSF、 M-CSF、 LT-β 或 TNF-α、 生长因子， 如 hGH。
         本发明的药物组合物也可另外地或可选地包含任意另外的化合物， 所述化合物已 知由于其 ( 作为配体 ) 与人 Toll 样受体 TLR1、 TLR2、 TLR3、 TLR4、 TLR5、 TLR6、 TLR7、 TLR8、 TLR9、 TLR10 的结合亲和性或由于其 ( 作为配体 ) 与鼠 Toll 样受体 TLR1、 TLR2、 TLR3、 TLR4、 TLR5、 TLR6、 TLR7、 TLR8、 TLR9、 TLR10、 TLR11、 TLR12 或 TLR13 的结合亲和性而进行免疫刺 激。
         另一类在此背景下可被添加到本发明药物组合物的化合物可以是 CpG 核酸， 具 体是 CpG-RNA 或 CpG-DNA。CpG-RNA 或 CpG-DNA 可以是单链 CpG-DNA(ss CpG-DNA)、 双链CpG-DNA(dsDNA)、 单链 CpG-RNA(ss CpG-RNA) 或双链 CpG-RNA(ds CpG-RNA)。CpG 核酸优选 是 CpG-RNA 的形式， 更优选是单链 CpG-RNA(ss CpG-RNA) 的形式。 CpG 核酸优选包含至少一 个或多个 ( 促有丝分裂的 ) 胞嘧啶 / 鸟嘌呤二核苷酸序列 (CpG 基序 ( 一个或多个 ))。根 据第一优选的选择， 至少一个包含在这些序列中的 CpG 基序， 也就是说 CpG 基序的 C( 胞嘧 啶 ) 和 G( 鸟嘌呤 )， 是未甲基化的。任选包含在这些序列中的所有另外的胞嘧啶或鸟嘌呤 均可以是甲基化的或未甲基化的。 然而， 根据进一步优选的选择， CpG 基序的 C( 胞嘧啶 ) 和 G( 鸟嘌呤 ) 也可以甲基化的形式存在。
         本发明的药物组合物通常包含 “安全且有效量” 的上述本发明药物组合物组分， 特 别是根据本发明所述的咪唑喹啉 ( 胺 ) 及其衍生物。如本文所用， “安全且有效量” 意为这 些组分——特别是咪唑喹啉 ( 胺 ) 及其衍生物——的量足以显著引起本文所述疾病或病症 的积极改变。然而， 同时， “安全且有效量” 小到足以避免严重的副作用， 也就是说允许利益 与风险之间合理的关系。这些界限的确定通常在合理的医学判断的范围内。 “安全且有效 量” 的本发明药物组合物组分——特别是咪唑喹啉 ( 胺 ) 及其衍生物——在随行医师的知 识和经验内， 还将根据下列情况进一步改变 ： 要治疗的具体病症， 以及要治疗的患者的年龄 和身体状况、 体重、 一般健康状况、 性别、 饮食、 给药时间、 排泄速率、 药物组合、 其活性、 病症 的严重程度、 治疗持续时间、 伴随治疗的性质、 所用具体药学上可接受载体的性质及类似因 素。 本发明的药物组合物可用于人类医疗用途， 也可用于兽医医疗用途， 优选用于人类医疗 用途。
         不受其约束， 在一些实施方式中， 本发明的药物组合物将包含或释放足够的活性 咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物， 以向对象提供剂量为每千克约 10、 20、 50 或 100 纳克 (ng/kg) 至每千克约 50 毫克 (mg/kg)， 优选每千克约 10 微克 (μg/kg) 至约 5mg/kg 的化合物或其 盐。在其他实施方式中， 本发明的药物组合物将包含或释放足够的活性咪唑喹啉 ( 胺 ) 或 其 衍 生 物， 以 提 供 例 如 约 0.0001mg/m2、 0.001mg/m2、 0.01mg/m2 或 0.01mg/m2 至 约 5.0mg/ m2 的剂量， 其根据 Dubois 法计算， 其中利用对象体重计算对象的体表面积 (m2) ： m2 ＝ (wt kg0.425× 身高 cm0.725)×0.007184， 尽管在一些实施方式中， 所述方法可以通过以该范围外的 剂量给予化合物或盐或组合物来进行。在这些实施方式的其中一些中， 所述方法包括给予 2 足够的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物， 以向对象提供约 0.0001mg/m 、 0.001mg/m2、 0.01mg/m2 或 0.1mg/m2 至约 2.0mg/m2 的剂量， 例如， 从约 0.004mg/m2、 0.04mg/m2 或 0.4mg/m2 至约 1.2mg/ m2 的剂量。
         本 发 明 的 药 物 组 合 物 可 以 局 部 给 予。 局 部 给 药 途 径 (routes for local administration) 一般包括例如局部给药途径 (topical administration routes)， 也为膀 胱内、 真皮内、 经皮、 皮下或肌肉内注射或病灶内、 颅内、 肺内、 心脏内和舌下注射。更优选 地， 本发明的药物组合物可以通过膀胱内途径给予。可由动物模型常规实验确定要给予的 本发明药物组合物的适当量。 这种模型包括， 而不暗含任何限制， 兔、 羊、 小鼠、 大鼠、 狗和非 人灵长类模型。优选的注射用单位剂量形式包括无菌水溶液、 生理盐水或其混合物。
         以下实施方式是本发明特别优选的组合物， 其被限定于具体组分。
         优选地， 上述本发明的药物组合物包含至少一种本文所述的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其 衍生物和至少一种如上所述选自乳酸和 / 或醋酸的有机酸——优选其最终 pH 为 pH3 至 5， 优选 3.5 至 4.5 的浓度。因此， 本发明组合物的组分形成本发明的加合物结构。上述本发明的药物组合物优选包含至少一种本文所述的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物和至少一种如上 所述选自乳酸和 / 或醋酸的有机酸， 但包含不超过 4、 3、 2、 1 种本文所述的有机酸和 / 或无 机酸， 或最优选不包含另外的本文所述有机酸和 / 或无机酸， 或者可选地， 包含少于 2 种无 机酸并且不包含另外的有机酸， 或者可选地， 仅包含另外的有机酸而不包含无机酸。
         优选地， 上述本发明的药物组合物包含至少一种本文所述的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其 衍生物和至少一种如上所述选自乳酸和 / 或醋酸的有机酸， 以及少于 4 或 3 种热敏剂， 或更 优选地仅一种热敏剂。可选地， 本发明的组合物也可以不包含热敏剂。也提供本发明药物 组合物中有限数量的热敏剂与有限数量的上述酸的组合。因此， 上述本发明药物组合物可 以包含例如至少一种本文所述的咪唑喹啉 ( 胺 ) 或其衍生物和至少一种如上所述选自乳酸 和 / 或醋酸的有机酸， 以及少于 4、 3、 2 或 1 种本文所述另外的有机酸和 / 或无机酸， 以及少 于 4、 3 或 2 种热敏剂， 优选其全部属于普流罗尼类， 更优选上述为本文优选的那些普流罗尼 类化合物。
         优选地， 本发明的药物组合物可以除热敏剂 ( 如果有 ) 外不包含表面活性剂， 所述 热敏剂可以另外具有表面活性剂性质。相应地， 本发明的组合物也可不包含表面活性剂且 不包含热敏剂。
         优选地， 本发明的药物组合物可以包含少于 4、 3 或 2 种环糊精， 或者可选地， 根本 不包含环糊精。这些实施方式可与优选的上述实施方式结合。因此， 本发明的组合物可以 例如不包含热敏剂、 环糊精和表面活性剂。此外， 本发明的组合物可以除乳酸和 / 或醋酸外 不包含另外的增溶剂， 不论是表面活性剂、 环糊精或是另一种增溶化合物。
         优选地， 本发明的组合物包含至少一种咪唑喹啉 ( 胺 ) 化合物、 醋酸和 / 或乳酸和 1、 2 种热敏剂或不包含热敏剂和另外的增溶化合物以及另外的治疗活性成分和纤维素或纤 维素衍生物。在该实施方式中， 本发明的组合物可以仅另外包含一种或多种下列属于稳定 剂和防腐剂范畴的标准组分。
         根据一个具体实施方式， 本发明的药物组合物包含浓度为约 0.025 至约 0.2M 的醋 酸和 / 或乳酸、 量为约 0.1％ (w/v) 至约 1％ (w/v) 的咪唑喹啉 ( 胺 )、 量为约 2％ (w/v) 至 约 6％ (w/v) 的环糊精 ( 一种或多种 ) 以及量为约 10％ (w/v) 至约 25％ (w/v) 的泊洛沙 姆 407， 优选本发明的药物组合物包含 ： 醋酸和 / 或乳酸， 其浓度为约 0.075 至约 0.125M， 例如， 约 0.08M 至约 0.125M、 约 0.085M 至约 0.125M、 约 0.09M 至约 0.125M、 约 0.095M 至约 0.125M、 约 0.1M 至约 0.125M， 或约 0.075M 至约 0.120M、 约 0.075M 至约 0.115M、 约 0.075M 至约 0.110M、 约 0.075M 至约 0.105M、 约 0.075M 至约 0.105M， 或约 0.08M 至约 0.120M， 例如， 约 0.085M 至约 0.115M、 约 0.09M 至约 0.110M、 约 0.095M 至约 0.105M， 或约 0.1M ； 咪唑喹 啉 ( 胺 )， 其量为约 0.1％ (w/v) 至约 1％ (w/v)， 例如， 量为约 0.1、 0.2、 0.3、 0.4、 0.5、 0.6、 0.7、 0.8、 0.9 或 1.0(w/v) ； 环糊精 ( 一种或多种 )， 其量为约 2％ (w/v) 至约 6％ (w/v)， 例 如， 约 2.5％ (w/v) 至约 6％ (w/v)、 约 3％ (w/v) 至约 6％ (w/v)、 约 3.5％ (w/v) 至约 6％ (w/v)、 约 4 ％ (w/v) 至约 6 ％ (w/v)、 约 4.5 ％ (w/v) 至约 6 ％ (w/v)， 或约 2.5 ％ (w/v) 至 约 5.5 ％ (w/v)、 约 3 ％ (w/v) 至约 5.5 ％ (w/v)、 约 3.5 ％ (w/v) 至约 5.5 ％ (w/v)、 约 4％ (w/v) 至约 5.5％ (w/v)、 约 4.5％ (w/v) 至约 5.5％ (w/v)， 或约 5％ (w/v) ； 以及泊洛沙姆 407， 其含量为约 12％ (w/v) 至约 25％ (w/v)， 例如， 量为约 12％ (w/v) 至约 24％ (w/v)， 量 为约 12％ (w/v) 至约 23％ (w/v)， 量为约 12％ (w/v) 至约 22％ (w/v)， 含量为约 12％ (w/v) 至约 21％ (w/v)， 量为约 12％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 量为约 12％ (w/v) 至约 19％ (w/ v)， 量为约 12％ (w/v) 至约 18％ (w/v)， 量为约 12％ (w/v) 至约 17％ (w/v)， 量为约 12％ (w/v) 至约 16％ (w/v)， 或更具体地量为约 13％ (w/v) 至约 24％ (w/v)， 量为约 13％ (w/v) 至约 23％ (w/v)， 量为约 13％ (w/v) 至约 22％ (w/v)， 量为约 13％ (w/v) 至约 21％ (w/v)， 量为约 13％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 量为约 13％ (w/v) 至约 19％ (w/v)， 量为约 13％ (w/ v) 至约 18％ (w/v)， 量为约 13％ (w/v) 至约 17％ (w/v)， 量为约 13％ (w/v) 至约 16％ (w/ v)， 或更具体地量为约 14％ (w/v) 至约 24％ (w/v)， 量为约 14％ (w/v) 至约 23％ (w/v)， 量 为约 14％ (w/v) 至约 22％ (w/v)， 量为约 14％ (w/v) 至约 21％ (w/v)， 量为约 14％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 量为约 14％ (w/v) 至约 19％ (w/v)， 量为约 14％ (w/v) 至约 18％ (w/v)， 量为约 14％ (w/v) 至约 17％ (w/v)， 量为约 14％ (w/v) 至约 16％ (w/v)， 或更具体地量为 约 15％ (w/v) 至约 24％ (w/v)， 量为约 15％ (w/v) 至约 23％ (w/v)， 量为约 15％ (w/v) 至 约 22％ (w/v)， 量为约 15％ (w/v) 至约 21％ (w/v)， 量为约 15％ (w/v) 至约 20％ (w/v)， 量 为约 15％ (w/v) 至约 19％ (w/v)， 量为约 15％ (Mv) 至约 18％ (w/v)， 量为约 15％ (w/v) 至 约 17％ (w/v)， 量为约 15％ (w/v) 至约 16％ (w/v)， 或量为约 16％ (w/v)。
         根据本发明另一方面， 通过使用本文所述咪唑喹啉 ( 胺 ) 及其衍生物 ( 药物组合 物的制备， 例如本文所述的 ) 预防、 治疗和 / 或改善下列本文所述疾病和病症的任一种而 实现了本发明的目标 ： 例如皮肤疾病， 包括癌前病症 —— 如光化性角化症、 生殖器疣 ( 湿 疣 )、 VIN( 外阴上皮内瘤 )、 VAIN( 阴道上皮内瘤 ) 等、 传染性软疣、 皮肤癌——如基底细胞 癌、 鲍恩病、 鳞状细胞癌、 浅表恶性黑素瘤等、 膀胱疾病——如， 例如， 膀胱癌和膀胱炎等、 癌 症——包括腹膜癌、 卵巢癌等。
         经尿道膀胱肿瘤切除术和 BCG 辅助膀胱内免疫治疗是高级 NMIBC 的标准治疗。 然而， 许多患者显示出疾病复发， 并且对疾病进展的影响很有限 (Sylvester FJ， Van der Meijden AP， Lamm DL.intravesical bacillus Calmetie-Guerin reduces the risk of progression in patients with superficial bladder cancer ： a metaanalysis of the published results of randomized clinical trials.J Urol 2002 ； 168 ： 196470) 或甚 至不存在 ( PU， Sylvester RJ， Crawford ED， Friedrich M， Krege S， Rintala E， Solsona E， Di Stasi SM， Witjes JA.An individual patient data meta-analysis of the long-term outcome of randomized studies comparing intravesical Mitomycin C versus Bacillus Caimettte-Guerin for non-muscle-invasive bladder cancer. Eur Urol 2009 ； 56(2) ： 247256)。而且， BCG 治疗可导致严重的局部和全身副作用 (Witjes JA， Palou J， Soloway M， Lamm 0， Brausi M， Spermon JR， Persad R， Buckley R， Akaza H， Colombel M， A.Clinical Practice recommendations for the prevention and management of intravesical therapy-associated adverse events.Eur.Urol SuppI 2008 ； 7： 667-74)。因此， 迫切需要新型治疗选择方案来有可能以较低的毒性提高非肌肉侵 入性膀胱癌的整体治疗成功率。
         令人惊讶地， 可显示膀胱内给予的咪唑喹啉 ( 胺 ) 在猪体内耐受良好， 没有造成膀 胱壁毒性， 并且泊洛沙姆和 HPβCD 制剂在膀胱内停留较长， 全身吸收较少。膀胱内咪唑喹 啉 ( 胺 ) 的安全性与现有治疗如 BCG 的安全性相比是有利的。
         因此， 对于特别优选的实施方式， 通过使用本文所述咪唑喹啉 ( 胺 ) 及其衍生物( 药物组合物的制备， 例如本文所述的 )( 膀胱内 ) 治疗膀胱疾病如， 例如膀胱癌——如， 例 如非肌肉侵入性膀胱癌——和膀胱炎等而实现本发明的目标。对于此具体目的， 优选以上 述本发明药物组合物的制剂提供本文所述的咪唑喹啉 ( 胺 ) 及其衍生物。
         最后， 本发明还包括利用优选上所述本发明的药物组合物治疗本文所述疾病和病 症的方法， 所述疾病和病症包括皮肤病症， 其包括癌前病症——如光化性角化症、 生殖器疣 ( 湿疣 )、 VIN( 外阴上皮内瘤 )、 VAIN( 阴道上皮内瘤 ) 等、 传染性软疣、 皮肤癌——如基底 细胞癌、 鲍恩病、 鳞状细胞癌、 浅表恶性黑素瘤等 ； 膀胱疾病， 如， 例如膀胱癌——如例如非 肌肉侵入性膀胱癌——和膀胱炎等 ； 癌症， 包括腹膜癌、 卵巢癌等。 在此背景下， 上述这样的 治疗方法优选包括利用任意上述给药方式给予本发明的药物组合物， 所述给药方式优选包 括局部给药途径， 也为膀胱内、 真皮内、 经皮、 皮下或肌肉内注射或者病灶内、 颅内、 肺内、 心 脏内和舌下注射。
         特别优选的是， 本发明包括利用优选如上所述本发明药物组合物 ( 膀胱内 ) 治疗 膀胱疾病的方法， 所述膀胱疾病如， 例如膀胱癌——如例如非肌肉侵入性膀胱癌——和膀 胱炎等。在此背景下， 这样的 ( 膀胱内 ) 治疗膀胱疾病的方法通常包括膀胱内给予本发明 的药物组合物。 而且， 可以利用非创伤性方法， 如具有适当直径套管的注射针、 注射管、 内窥 镜方法等给予本发明的药物组合物。
         要理解的是， 本发明并不限于本文所述的具体方法学、 方案和试剂， 因为这些均可 以变化。 也要理解的是， 本文所用的术语仅用于描述具体实施方式的目的， 并不意图限制本 发明的范围， 本发明的范围仅通过所附权利要求进行限定。 除非另外限定， 本文所用的全部 技术术语和科学术语均具有与本领域普通技术人员通常理解的相同的含义。 附图说明
         下列附图意图进一步说明本发明。它们并不意图将本发明的内容限制到其中。
         图 1 显示含有不同百分比泊洛沙姆 407(20％和 25％ ) 的系统的粘度与温度的函 数关系。
         图 2 显示含有不同百分比 HP-β-CD(0％至 20％ ) 的系统的粘度与温度的函数关 系。
         图 3 显示含有不同比例泊洛沙姆 407 和泊洛沙姆 188(0％至 30％ ) 的系统的粘度 与温度的函数关系。
         图 4 显示在咪喹莫特 (TMX， 0.4％ ) 存在或不存在下在醋酸溶液 (AA) 中用 20％泊 洛沙姆 407 或 25％泊洛沙姆混合物制备的系统的粘度与温度的函数关系。
         图 5 显示在水或醋酸溶液 (AA) 中， 或者在醋酸溶液中存在咪喹莫特 (TMX) 的情况 下， 用 20％泊洛沙姆 407 制备的系统的粘度与温度的函数关系。
         图 6 显示在水或醋酸溶液中， 在醋酸溶液中存在咪喹莫特 (TMX) 的情况下下， 用 25％泊洛沙姆混合物 ( 泊洛沙姆 407 和泊洛沙姆 188) 制备的系统的粘度与温度的函数关 系。
         图 7 显示在咪喹莫特 (TMX， 0.9％ ) 存在和不存在下， 在乳酸溶液 (LA) 中用 20％ 泊洛沙姆 407(PG) 或 25％泊洛沙姆混合物 ( 泊洛沙姆 407 和泊洛沙姆 188， PPG) 制备的系 统的粘度与温度的函数关系。图 8 显示在水或乳酸溶液中， 或在乳酸溶液中存在咪喹莫特 (TMX， 0.9) 的情况下 用 20％泊洛沙姆 407 制备的系统的粘度与温度的函数关系。
         图 9 显示在水或乳酸水溶液中或在乳酸溶液中存在咪喹莫特 (TMX， 0.9) 的情况 下， 用 25％泊洛沙姆混合物 ( 泊洛沙姆 407 和泊洛沙姆 188) 制备的系统的粘度与温度的函 数关系。
         图 10 显示无咪喹莫特的 PG-LA1( 乳酸溶液中的泊洛沙姆 407)( 上图 ) 和有咪喹 莫特的 PG-LA1(TMX PG-LA1)( 下图 ) 随时间的侵蚀曲线 ( 溶解 )。
         图 11 显示由于用 0.1M 乳酸和泊洛沙姆 407(PG) 或泊洛沙姆 407/ 泊洛沙姆 188 混合物 (PPG) 制备的凝胶制剂咪喹莫特 (TMX) 经过纤维素膜的扩散曲线 (g) ； 为了比较目 的， 在相同的图中给出了在无凝胶制剂的情况下 0.1M 乳酸溶液中咪喹莫特 (TMX) 的扩散。
         图 12 显示与制剂 ( 参见实施例 5)——也就是溶解在 0.1M 乳酸溶液中的 0.9％咪 喹莫特 -15％ HP-β-CD， 或在含 15％ HP-β-CD(0.1M 乳酸 ) 的 19％泊洛沙姆 407 凝胶中的 0.9％咪喹莫特， 或在脂质体分散液 (0.1M 乳酸溶液中的 1％大豆卵磷脂 ) 中的 0.9％咪喹 莫特——接触 4 小时后在 BE( 膀胱上皮 ) 中回收的咪喹莫特 (TMX-101) 的量。显示了本发 明的制剂在长期释放方面比本文以对比为目的给出的脂质体制剂呈现相当好的效果。
         图 13 显示不同乳酸浓度存在下咪喹莫特 (TMX-101) 的溶解性。溶解性作为乳酸 浓度的函数而增加。
         图 14 在上面部分中， 显示了经切除、 洗涤和转移到 37℃ NaCl 溶液中的猪膀胱。 将 根据本发明的制剂施用于该膀胱并且在 10 分钟后将膀胱切开。观察所施用的制剂的凝胶 状态。 在下面部分中， 显示了添加本发明制剂后的膀胱， 所述本发明制剂包含在 20％泊洛沙 姆 4077 的乳酸溶液 (0.1M) 中的咪喹莫特， 所述膀胱先前通过考马斯蓝染色， 并且仍观察凝 胶。没有观察到凝胶粘着。
         图 15 显示与不同的咪喹莫特制剂接触 4 小时后在膀胱上皮 (BE) 中回收的咪喹莫 特 (TMX) 的量 ( 数据被标准化成吸收面积， 并且是 3 次实验的平均值 )。
         图 16 显示根据实施例 10.3.1 的人膀胱癌粘膜 ( 下层 )TLR-7 的免疫组织化学染 色 ( 原始放大 40×)。
         图 17 显示根据实施例 10.3.1 的猪膀胱粘膜 ( 下层 )TLR-7 的免疫组织学染色 ( 原 始放大 40×)。
         图 18 显示给予用不同咪喹莫特制剂处理的猪组的咪喹莫特 (R-837) 的药代动力 学血浆参数。动物接受溶于 0.1M 乳酸的 0.5％咪喹莫特溶液 ( 第 1 组 ) ； 溶于 0.1M 乳酸、 作为乳化剂的 16 ％泊洛沙姆 407 和作为稳定剂的 15 ％ HPβCD( 羟丙基 -β- 环糊精 ) 的 0.5％咪喹莫特溶液 ( 第 2 组 ) ； 溶于 0.1M 乳酸、 16％泊洛沙姆 407 和 5％ HPβCD 的 0.5％ 咪喹莫特溶液 ( 第 3 组 )。
         图 19 显示猪膀胱正常粘膜 ( 下层 ) 表观 ( 原始放大 20×)。
         图 20 显示实施例 10.3.2 的研究药物 ( 第 3 组 ) 灌注后一天中度主要淋巴细胞粘 膜下层炎症反应 ( 原始放大 20×)。
         图 21 显示实施例 10.3.2 的猪膀胱粘膜下层 ( 第 1 组 ) 具有纤维蛋白样管壁坏死 的白细胞破裂性脉管炎 ( 原始放大 20×)。
         图 22 显示根据实施例 11.3.1 膀胱内给予 0.1％乳酸中的咪喹莫特的细胞因子和趋化因子诱导。 小鼠 (n ＝ 8) 膀胱内接受不同剂量的咪喹莫特的乳酸制剂。 给药后两小时， 收集血清和膀胱灌洗液。测定血清中 TNFα(A) 和 KC(B) 的水平和膀胱灌洗液中 TNFα(C) 和 KC(D) 的水平。所示数据代表两个独立的实验 ( 平均值 ±SEM.)。* 表示通过单因素方 差分析和 Dunnett 事后检验， 与用媒介 (Veh) 处理的小鼠相比， p ＜ 0.05。
         图 23 显示根据实施例 11.3.2 膀胱内给药后小鼠的咪喹莫特 (R-837) 药代动力 学。(A-D) 小鼠 (n ＝ 8) 被给予 5000 纳摩尔乳酸或泊洛沙姆制剂中的咪喹莫特。测定血清 TNFα(A)、 膀胱灌洗液中 TNFα(B)、 血清 KC(C) 和膀胱灌洗液中 KC(D) 的水平。* 表示通过 不成对 Student t 检验评估的 p ＜ 0.01。(E) 小鼠 (n ＝ 6 至 8) 被给予 1500 纳摩尔乳酸或 泊洛沙姆制剂中的咪喹莫特。在给药后 2、 4、 6、 24 小时收集血清。(F) 小鼠 (n ＝ 6) 被给予 100μL 不同剂量的乳酸或泊洛沙姆制剂中的咪喹莫特。给药后 2 至 4 小时收集血清。通过 Chiman SRL 测定咪喹莫特的水平。所示数据是两次独立实验的合并值 ( 平均值 ±SEM.)。 * 表示通过单因素方差分析和 Dunnett 事后检验， 与在 0 小时时间点处理的小鼠或单独用媒 ** 介物 (Veh) 处理的小鼠相比， p ＜ 0.05。 表示通过单因素方差分析和 Bonferroni 事后检 验评估的统计学显著性 (p ＜ 0.01)。
         图 24 显示根据实施例 11.3.3 掺入 HPβCD 部分恢复全身 TNFα 和 KC 水平。小鼠 (n ＝ 8) 被给予 1500 纳摩尔乳酸、 泊洛沙姆或泊洛沙姆 -HPβCD 制剂中的咪喹莫特。显示 了 TNFα(A) 和 KC(B) 的水平。所示数据是两次独立实验的合并值 ( 平均值 ±SEM)。* 表 示通过单因素方差分析和 Dunnett 事后检验， p ＜ 0.05。(C)C57BL/6 小鼠被注射 5000 钠 摩尔乳酸、 泊洛沙姆或泊洛沙姆 -HPβCD 制剂中的咪喹莫特。通过 Luminex 微珠分析评价 灌洗液中 KC 的水平。所示数据是三次独立实验的合并值 ( 平均值 ±SEM.)。
         图 25 显 示 根 据 实 施 例 11.3.4， 用 泊 洛 沙 姆 -HPβCD 制 剂 中 0.1 ％ 咪 喹 莫 特 (R-837) 处理的鼠膀胱的代表性组织学。A ： 单次媒介物处理 ( 野生型 C57BL/6) ； B： 三次 媒介物处理 ( 野生型 C57BL/6) ； C： 单次咪喹莫特处理 ( 野生型 C57BL/6) ； D： 三次咪喹莫 特处理 ( 野生型 C57BL/6) ； E： 三次盐水处理 ( 野生型 C57BL/6) ； F： 三次咪喹莫特处理 (TLR7ko) ； 在第 0 天 ( 单次处理 ) 用泊洛沙姆 -HPβCD 制剂中的 0.1％咪喹莫特膀胱内处理 C57BL/6(A-E) 或 TLR7 缺陷小鼠 (ko)(F)， 在第 0、 4 和 8 天 ( 三次处理 ) 以 50μL 膀胱内处 理 C57BL/6(A-E) 或 TLR7 缺陷小鼠 (ko)(F)。在第 1 天收集单次处理的膀胱 (A 和 C)， 或在 第 9 天收集三次处理的膀胱 (B、 D、 E 和 F)， 并用 H&E 染色。用媒介物单独处理的小鼠 (Veh， n ＝ 4) 和首次接受试验的小鼠 (B 和 E) 用作对照。比例尺 ： 100μm。原始放大为 200×。
         图 26 显示根据实施例 11.3.5， 用泊洛沙姆 -HPβCD 制剂中的 0.1％咪喹莫特处理 的具有 MB49 的小鼠减少的膀胱重量。具有 MB49 膀胱肿瘤的小鼠 (n ＝ 11) 在第 3、 6和9 天膀胱内接受 50μL 0.1％在泊洛沙姆 -HPβCD 制剂中的咪喹莫特。在第 11 天将小鼠处 死， 测量膀胱重量。将无肿瘤植入的首次接受试验的小鼠 ( 首次接受试验 )， 未经处理的植 入 MB49 的小鼠 ( 未处理 ) 或媒介物处理的小鼠 (Veh) 用作对照。所示数据是三次独立实 验的合并值 ( 平均值 ±SEM.)。通过单因素方差分析和克鲁斯卡尔 - 沃利斯检验评估统计 学显著性。 实施例
         以下实施例意图进一步说明本发明。 它们并不意图将本发明的内容限制到其中。 .1. 实施例 ： 咪喹莫特的溶解性
         1.1. 初步试验
         1.1.1. 咪喹莫特在盐酸中的溶解性
         称量 48mg 咪喹莫特， 并添加到不同浓度的盐酸溶液中 ： 具体而言， 用 8ml 0.1N 盐酸处理 48.2mg 咪喹莫特， 用 9ml 0.2N 盐酸处理 48.6mg 咪喹莫特， 用 8ml 2N 盐酸处理 48.4mg 咪喹莫特。涡旋 5 分钟后， 对样品进行视觉检查。
         药物微溶于 0.1N、 0.2N 和 2N 盐酸。以 2N HCl 制备的系统在 74℃下是透明溶液。 其中所溶药物的理论浓度为 0.042M， 相应于 1.0％。
         1.1.2. 咪喹莫特在冰醋酸中的溶解性
         将经称量的药物 (48.2mg) 在搅拌下溶于 2ml 冰醋酸中。完全溶解后， 将经称量等 份的咪喹莫特 (150mg) 添加到该溶液中， 以便视觉评价所溶药物的最大浓度。该初步实验 证明， 在室温下使 10g 咪喹莫特溶解在 100ml 100％醋酸中 (10％ (w/v)) 是可能的。
         1.1.3. 咪喹莫特在缓冲液中的溶解性
         确定不同 pH 值下咪喹莫特的溶解性。应用两种不同的程序。将药物分散在缓冲 液中 ( 无醋酸作共溶剂 )。用 10ml 柠檬酸盐缓冲液分散 72mg 咪喹莫特， 在 10ml 磷酸盐缓 冲液中分散 155mg 咪喹莫特， 在 10ml 醋酸盐缓冲液中分散 192mg 咪喹莫特。 涡旋 5 分钟后， 对各样品进行视觉检查。
         将咪喹莫特完全溶于冰醋酸中， 并且将 1ml 该溶液 (2.41％咪喹莫特 ) 用 9ml 水、 0.9％ w/wNaCl 溶液、 pH 7.0 的磷酸盐缓冲液 (0.1M)、 pH 6.0 的柠檬酸盐缓冲液 (0.1M) 或 pH 5.0 的醋酸盐缓冲液 (0.1M) 进行稀释。对该系统进行视觉检查。
         这些初步试验的结果表明， 咪喹莫特微溶于缓冲液。 当药物溶于冰醋酸中， 然后用 缓冲液稀释时， 得到澄清透明的溶液 ： 这些系统的 pH 总是低于 3.6。
         1.2. 咪喹莫特的分析
         1.2.1. 通过分光光度计分析咪喹莫特在醋酸中的校准曲线
         将经称量的药物 (0.0124g) 溶于 100ml 溶剂 ( 醋酸 / 水 1 ∶ 9) 中。溶液浓度为 0.0005M。 用相同的溶剂适当地稀释不同量的该溶液， 以制备浓度范围从 2x10-6-5x10-5M( 具 体为 2×10-6M、 5×10-6M、 10×10-6M、 20×10-6M、 50×10-6M) 的五种标准溶液。以分光光度法 分析这些溶液。在三个波长 (250nm、 305nm、 319nm) 处测定吸光度。
         下表 1 中显示了用于方法校准的标准溶液的浓度和在 319、 305 和 250nm 处相应的 吸光度值。
         表1： 标准咪喹莫特溶液的浓度和吸光度值
         1.2.2. 通过 HPLC 分析咪喹莫特在醋酸中的校准曲线
         将 经 称 量 的 咪 喹 莫 特 (0.0316g) 溶 于 250ml 溶 剂 ( 乙 腈 (ACN)/ 水， pH 3.5) 中。溶液浓度为 0.0005M。用相同的溶剂适当地稀释不同量的该溶液， 以制备浓度范围为 -6 -5 -6 -6 -6 -6 2×10 -3×10 M( 具体为 2×10 M、 3×10 M、 10×10 M、 20×10 M、 30×10-6M) 的标准溶液。 通过 HPLC 分析咪喹莫特的这些溶液。
         在下列条件下分析样品 ：
         ●柱 ： Symmetry Shield RP18(150×4.6mm， 3.5μm)
         ●预柱 ： Symmetry C18(3.9×20mm， 5μm)
         ●流动相 ： 溶液 A ： 乙腈
         溶液 B ： 含 50mM 醋酸铵的溶液 (11g 水中 3.85g)
         ●流速 (ml/min) ： 1.0
         ●梯度 ： 见表 2
         ●柱箱温度 (℃ ) ： 40
         ●波长 (nm) ： 250
         ●注入体积 (μl) ： 20
         表2： HPLC 的校准梯度 在这些分析条件下， 咪喹莫特的保留时间为 18 分钟。 下表 3 显示了用于方法校准的标准溶液的浓度和相应的峰面积。浓度 (10-6mol/l) 面积 (U.A.) 2.0 3.0 55868.98 74818.3352102307569 A CN 102307576 10.0 20.0 30.0
         说明书262028.00 526459.49 824246.6441/66 页表3： 咪喹莫特标准溶液的浓度和峰面积
         1.3. 溶解性研究
         1.3.1. 咪喹莫特在冰醋酸和缓冲液中的溶解性
         如所报道的那样， 室温下咪喹莫特在冰醋酸中的溶解度为 100mg/ml(10％ w/v)。
         称量 1200mg 药物， 添加 10ml 冰醋酸并轻轻摇动该分散液 24 小时， 通过实验确定 溶解性。经过滤 (0.22μm 微孔膜过滤器 ) 后通过 HPLC 分析该样品的咪喹莫特含量， 并且 测定其 pH。
         将咪喹莫特 (738mg) 最初溶于冰醋酸 (10ml) 中。用 pH 7.0 的磷酸盐缓冲液 (0.1M)、 pH 6.0 的柠檬酸盐缓冲液 (0.1M) 或 pH 5.0 的醋酸盐缓冲液 (0.1M) 适当地稀释 一定体积的该溶液， 以制备含 2.0％药物的系统。经 0.22μm 微孔膜过滤器过滤后， 通过分 光光度法和色谱法分析样品的咪喹莫特含量。测定 pH。
         表 4 显示了通过 HPLC 和 / 或分光光度法测定的药物在冰醋酸中或在用磷酸盐、 柠 檬酸盐或醋酸盐缓冲液 (0.1M) 稀释的醋酸中的溶解值和相应的 pH 值。
         表4： 系统的组成、 溶液 pH 和咪喹莫特溶解性
         1.3.2. 咪喹莫特在短链酸中的溶解性
         一些无机酸和有机酸被认为是潜在的药物增溶剂。将 100mg 咪喹莫特溶于 10ml 0.1M 磷酸、 0.1M 琥珀酸、 0.1M 柠檬酸、 0.01M、 0.05M、 0.1M 醋酸和 0.01M、 0.05M、 0.088M 和 0.1M 乳酸中。经过滤后， 通过分光光度法分析这些系统的咪喹莫特， 并测量其 pH。
         1.3.3. 咪喹莫特在环糊精存在下的溶解性
         将经准确称量的咪喹莫特 (200mg) 和羟丙基 -β- 环糊精 (HP-β-CD)(4000mg) 溶 于 10ml ：
         ●水
         ● pH 5.0 的水 ( 用 HCl 校正 )
         ● pH 3.0 的水 ( 用 HCl 校正 )
         ●乳酸溶液 (0.1M)
         摇动 24 小时并过滤 (0.22μm 微孔膜过滤器 ) 后， 通过分光光度法测定溶解的咪 喹莫特。同样测量溶液 pH。
         1.3.4. 咪喹莫特在表面活性剂存在下的溶解性
         称量咪喹莫特 (200mg)， 并与不同量的表面活性剂 ( 吐温 20、 吐温 80、 聚氧乙烯蓖 麻油 (Cremophor)EL 或普流罗尼 F-68) 混合， 以便制备含 0.5％、 2.5％和 5％表面活性剂的 制剂。将各混合物添加到 10ml 乳酸 (0.1M) 中， 轻轻摇动 24 小时， 过滤并通过分光光度法 分析， 并且进行 pH 测定。
         通过分光光度法测定用不同的酸和表面活性剂制备的组合物溶液中存在的咪喹 莫特， 并与 pH 值一起显示在表 5 中。
         表5： 制剂的组成、 pH 值和咪喹莫特的量
         1.3.5. 咪喹莫特在甘油或丙二醇中的溶解性
         称量咪喹莫特 (100mg)， 并加入甘油或丙二醇至体积为 10ml。在摇动 (120℃下 24 小时 ) 和冷却后， 添加 10ml 水 ： 将分散液过滤， 并测定液体相中咪喹莫特的量。
         用甘油作为溶剂制备的系统显示 pH 值为 5.42， 咪喹莫特浓度为 0.02％。当使用 丙二醇时， pH 为 3.03， 溶液中咪喹莫特的浓度为 0.02％。
         1.4. 结果讨论
         咪喹莫特明显溶于纯醋酸和乳酸 ( ＞ 7.5％ w/v)。这两种酸可用作共溶剂， 以制 备包含相对高的量的活性物质的制剂。
         在被认为是咪喹莫特增溶剂的酸中， 醋酸和乳酸证实了其与药物相互作用并使其 溶解的能力。溶液中药物的量与酸浓度直接相关 ( 这也由实施例 6.1 证实 )。作为增溶剂， 乳酸比醋酸更加有效。
         与乳酸结合的表面活性剂并不改善咪喹莫特的溶解性。所得到的结果证明， 对于 这些系统， 药物溶解性主要取决于乳酸， 并且表明， 药物没有陷于表面活性剂形式的微团。
         关于包含剂， 当使用了单一的高浓度 HP-β-CD 时， 可以证实该络合剂基本上不改 变药物溶解性 ： 在不同实验中观察到的浓度增加是因为 pH 值下降。
         当 HP-β-CD 与乳酸结合使用时， 可观察到少量但明显的溶解性增加 ( 约 18％ )。
         2. 实施例 ： 咪喹莫特的热可逆凝胶制剂
         2.1. 半固体系统制剂
         2.1.1. 具有泊洛沙姆 407 的制剂
         使用泊洛沙姆 407 制备半固体系统， 其包含下列液体相 ：
         ●水
         ● 10％醋酸溶液
         ● 0.1M 醋酸溶液
         ● 0.1M 乳酸溶液
         所有系统均由 25％聚合物 ( 热敏剂的总量 / 浓度 ) 组成。
         2.1.2. 具有泊洛沙姆 407 和羟丙基甲基纤维素的制剂
         评价纤维素衍生物——羟丙基甲基纤维素 (HPMC-Methocel KL5M， Colorcon， MW 15000) 对泊洛沙姆热凝胶化性质的影响 ： 纯 HPMC 在 40℃与 50℃之间显示凝胶相变， 并且 其下部临界会溶温度 (LCST) 可通过化学修饰而降低 ( 通过降低取代程度， 凝胶转变温度可 降至约 40℃ )。使用不同量的该聚合物 ： 含 HPMC 制剂的组成如下 ：
         表6： 含 HPMC 的组合物
         因此， 添加纤维素衍生物没有显著改变制剂的流变特性。
         2.1.3. 具有泊洛沙姆 407 和环糊精的制剂
         文献报道了将环糊精用作热敏半固体系统的组分 (CDG.Palmieri 等人， 15th Int. Symp.on Microencapsulation， Parma， Italy 18-21 September 2005)。将 0 至 20％范围 的高百分比的羟丙基 -β- 环糊精 (HP-β-CD) 用于由泊洛沙姆 407 和水组成的系统中， 并 测定这些制剂的 LCST。
         2.1.4. 具有泊洛沙姆和泊洛沙姆 188 的制剂
         也评价作为胶凝化系统的泊洛沙姆混合物。 MW 低于泊洛沙姆 407 的泊洛沙姆 188、 PEO-PPO-PEO 共聚物可用来调节凝胶的 LCST。泊洛沙姆 407 被泊洛沙姆 188 部分取代， 从 而得到包含相当于 25％的量的聚合物的水凝胶。
         表7： 泊洛沙姆的不同混合物
         2.1.5. 具有泊洛沙姆和乳酸或醋酸的制剂
         由乳酸或醋酸取代液体相 ( 水 ) ： 评价其对热敏系统流变行为的影响以及药物对 热敏系统流变行为的影响。在用有机酸 ( 乳酸或醋酸 ) 制备的不同的凝胶制剂中， 考虑显 示凝胶转变温度在约 20℃的凝胶制剂。因此， 选择包含如下的胶凝系统 ：
         ● 20％ w/w 泊洛沙姆 407 ● 25％ w/w 泊洛沙姆 407/ 泊洛沙姆 188(9 ∶ 1 重量比 ) 2.1.6. 具有咪喹莫特的制剂 所研究的凝胶的组合物如下 ： 咪喹莫特 PPG-LA 01 咪喹莫特 0.90g 泊洛沙姆 407 22.50g 泊洛沙姆 188 2.50g 乳酸溶液 (0.135M) 74.02g 咪喹莫特 PG-LA 01 咪喹莫特 0.90g 泊洛沙姆 407 20.00g 乳酸溶液 (0.125M) 79.02g 咪喹莫特 PPG-AA 01 咪喹莫特 0.40g 泊洛沙姆 407 22.50g 泊洛沙姆 188 2.50g 醋酸溶液 (0.135M) 74.02g 咪喹莫特 PG-AA 01 咪喹莫特 0.40g 泊洛沙姆 407 20.00g 醋酸溶液 (0.125M) 79.02g 2.2. 组分对下部临界会溶温度 (LCST) 的影响LCST 值不能通过 DSC 测定 ： 当由纯泊洛沙姆 407 组成的系统使用泊洛沙姆混合 物—— HP-β-CD/ 泊洛沙姆 407 或 HPMC/ 泊洛沙姆 407 作为胶凝剂呈现可与凝胶转变相关 的吸热峰时， DSC 转变信号消失。因此， 通过粘度测量来测定凝胶转变温度。利用装有小样 品适配器和锭子 S-25 的 Rheometer BROOKFIELD DV-II+， 在 1-40℃温度范围内评价系统的 粘度。
         2.2.1. 含有不同含量的泊洛沙姆 407 的系统的粘度
         聚合物百分比减少， LCST 升高 ( 见图 1) ： 在较低浓度泊洛沙姆下， 微团需要过量能 量以建立给制剂提供半固体稠度的相互作用。 含 20％或 25％泊洛沙姆 407 并以水作溶剂的 凝胶的 LCST 分别为 19.93 和 13.9℃。 这些结果与文献中报道的一致 (A.Cabana 等人， Study of the Gelation Process of Polyethylene Oxide-Polypropylene Oxide-Polyethylene Oxide Copolymer(Poloxamer 407)Aqueous Solutions， J.COLLOID INTERFACE SCI.190， 307-312(1997))。
         2.2.2. 含泊洛沙姆和 HPMC 系统的粘度
         发现 HPMC 在所考虑的浓度范围 ( ≤ 2％ ) 内不改变含纯泊洛沙姆 407 的制剂的凝 胶转变温度。
         2.2.3. 含泊洛沙姆和环糊精的系统的粘度
         环糊精 (HP-β-CD) 百分比增加导致 LCST 略微升高但却有显著的意义 ： 所得到的 结果表明， CD 浓度与粘度之间的非线性关系。由于 CD 使药物溶解性提高 ( 提高约 17％ )， 可以考虑在最终凝胶制剂中应用该组分 ( 没有对包含药物的系统进行测定 )( 见图 2)。
         2.2.4. 含泊洛沙姆 407 和 188 混合物的系统的粘度
         观察了泊洛沙姆 188 对 LCST 的相关影响 ： 该组分比例增加使凝胶转变温度升高 ( 注意到 P188 浓度与系统粘度之间的线性关系 )( 见图 3)。
         2.2.5. 含醋酸、 乳酸和咪喹莫特的系统的粘度
         可理解的是， 与胶凝系统无关， 醋酸使系统的 LCST 升高 ： 该酸性组分使咪喹莫特 PG-AA 01 和咪喹莫特 PPG-AA 01 的 LCST 均升高至 22.85℃。咪喹莫特没有显著改变凝胶 转变温度 ( 咪喹莫特 PG-AA 01 和咪喹莫特 PPG-AA 01 分别为 22.95 和 23.00℃ )( 图 4、 5、 6)。
         同样， 乳酸使凝胶制剂的 LCST 升高 ： 如用醋酸先前所观察的那样， 由泊洛沙姆 407 组成的系统的凝胶转变温度为 23.8℃。 用泊洛沙姆 407/ 泊洛沙姆 188 混合物， 在乳酸存在 下， 该值甚至更高 ( ＝ 25.9℃ )( 图 7、 8、 9)。
         不像用醋酸那样， 咪喹莫特显著影响用乳酸制备的系统的 LCST ： 对于咪喹莫特 PG-LA 01 制剂 ( 纯泊洛沙姆 407)， 药物导致凝胶转变温度进一步略微升高 ( 图 8) ； 当 应用胶凝组分的混合物时， 该温度降至 24.1 ℃ ( 在药物不存在的情况下， 凝胶的 LCST ＝ 25.9℃ )( 图 9)。
         3. 实施例 ： 含咪喹莫特的制剂的溶解 / 侵蚀试验和释放实验
         3.1. 组合物和实验条件
         3.1.1. 组合物
         对下列制剂进行探索性溶解 / 侵蚀试验 ：
         咪喹莫特 PG-LA 01咪喹莫特 0.90g
         泊洛沙姆 407 20.00g
         乳酸溶液 (0.125M) 79.02g
         PG-LA01
         泊洛沙姆 407 20.00g
         乳酸溶液 (0.125M) 79.02g
         3.1.2. 实验条件
         本 试 验 在 L.Zhang-J.ControI.Release， 85(2002)73-81 的 “Development and in-vitro evaluation of sustained release Poloxamer 407(P407)gel formulations of ceftiofur” 中进行了说明。本试验在以弹性体封闭的 10ml 管形瓶中进行。将称量约 3g 的 制剂作为溶胶 ( 温度＝ 4℃ ) 移至管形瓶， 并将管形瓶在 37℃下保存直至胶凝化。然后称 量管形瓶， 使 2ml 醋酸盐缓冲液 (pH 6.0 ； 0.1M) 在凝胶上成层。在预定的时间间隔 (1、 2、 3、 4 小时后 )， 将液体相完全去除， 并称量管形瓶。使新鲜的醋酸盐缓冲液在剩余的凝胶上 成层。各时间间隔后管形瓶的重量差异相应于缓冲液所溶解的凝胶量。报道了所溶解的凝 胶的百分比是时间的函数。
         为进行比较， 考虑 Zhang(J.Control.Release， 85(2002)73-81) 所研究的凝胶 ： 其 为含头孢噻呋的 25％泊洛沙姆 407 凝胶系统。
         3.2. 结果与讨论
         所得到的结果显示在图 10 中 ( 值为三次重复的平均值 )。可以注意到， 所考虑的 系统的侵蚀性质非常相似 (p ＞ 0.973)， 这表明药物不影响聚合物的侵蚀。两系统的溶解 / 侵蚀均是零级动力学过程， 几乎长达 4 小时 ( 约 40％侵蚀 ) ： Zhang 观察到相同的动力学， 但 -1 -1 该过程的速度高于 ( 约 0.26％ min ) 我们所得到的 ( 约 0.19％ min )。Zhang 观察到溶解 介质的 pH 对凝胶溶解的影响甚小， 并将不同 pH 的磷酸盐缓冲溶液用作聚合物的溶剂。本 发现可涉及低 pH 的制剂或乳酸与泊洛沙姆的相互作用。
         另外， 在咪喹莫特 PG-LA 01 制剂的溶解 / 侵蚀实验过程中， 没有观察到药物的分 离 / 沉淀。
         4. 实施例 ： 咪喹莫特扩散 / 释放实验
         4.1. 组合物和实验条件
         4.1.1. 组合物
         咪喹莫特 PPG-LA 01
         咪喹莫特 0.90g
         泊洛沙姆 407 22.50g
         泊洛沙姆 188 2.50g
         乳酸溶液 (0.135M) 74.02g
         咪喹莫特 PG-LA 01
         咪喹莫特 0.90g
         泊洛沙姆 407 20.00g
         乳酸溶液 (0.125M) 79.02g
         PG-LA01泊洛沙姆 407 20.00g
         乳酸溶液 (0.125M) 79.02g
         4.1.2. 实验条件
         用 Franz 细胞以 1.76cm2 的有效扩散面积和 14ml 的接受室体积进行咪喹莫特扩 散 / 释放实验 ： 供给室包含约 2g 凝胶制剂， 而接受室填充有 0.1M 乳酸溶液 (pH ＝ 3.5)。 在两室之间插入醋酸纤维素膜 (MWCO ＝ 23000)。利用再循环浴在 37℃下进行实验， 并且以 300rpm 持续搅拌接受室中的液体。
         在预定的时间间隔， 完全去除接受相， 并用新鲜的酸溶液替代。 将接受溶液针对咪 喹莫特进行 UV 分析。
         4.2. 结果与讨论
         咪喹莫特通过人造屏障的通量高 (1.95x10-6g·cm2·s-1) 且恒定 ( 第一小时几乎 恒定 )， 这表明药物通过膜的转移不影响咪喹莫特通过泊洛沙姆的动力学。
         凝胶制剂中咪喹莫特性质非常不同于溶液中咪喹莫特性质， 但它们之间非常相 似。咪喹莫特以相对高的速率扩散通过凝胶基质 ： 在 6 小时后， 咪喹莫特 PG-LA01 制剂的约 44.4％和咪喹莫特 PPG-LA01 的约 48.3％在 Franz 细胞的接受相中。两凝胶制剂的药物扩 散性质均为线性， 这表明伪零级动力学 ： 对于咪喹莫特 PG-LA 01， 咪喹莫特通过凝胶基质 -7 2 -1 的通量为 2.00×10 g·cm ·s ， 对于咪喹莫特 PPG-LA01 系统， 咪喹莫特通过凝胶基质的通 -7 2 -1 量为 2.19×10 g·cm ·s ( 图 11)。
         这些发现得出的结论是， 药物通过两个所检测系统的扩散速率没有显著差异， 并 证明胶凝化材料的组成对咪喹莫特在凝胶中的扩散没有相关影响 ： 活性剂的小分子尺寸 ( 低分子量 ) 有利于其通过凝胶胶束结构的移动。
         如实验进行的那样， 聚合物逐渐溶解在通过膜的液体中。液体逆流至药物的的通 量可改变活性分子从供给室向接受室的扩散。 然而， 该影响甚小 ： 咪喹莫特通过膜的通量比 其通过泊洛沙姆系统的通量高 10 倍。
         5. 实施例 ： 咪喹莫特渗透试验
         5.1. 组合物和实验条件
         5.1.1. 组合物
         进行试验的组合物为 ：
         ●在 0.1M 乳酸溶液中的 0.9％咪喹莫特 -15％ HP-β-CD
         ●在含 15％ HP-β-CD 的 19％泊洛沙姆 407 凝胶 (0.1M 乳酸 ) 中的 0.9％咪喹莫 特
         ●在脂质体分散液 ( 在 0.1M 乳酸溶液中的 1％大豆卵磷脂 ) 中的 0.9％咪喹莫特
         5.1.2. 实验条件
         使用 6-9 月龄的雌性猪的膀胱 ： 切除后立即将尿道割除， 并将膀胱上皮 (BE) 切 2 片， 得到约 3cm 面积的片。将各部分上皮置于 Franz 细胞室之间， 内表面朝上。作为接受 相 ( 底室 )， 使用 0.1M 磷酸盐缓冲溶液 (pH 7.4) ： 实验过程中使其保持在 37℃下搅拌 ( 约 300rpm)。报道的制剂之一表示供给相 ( 顶室 ) ： 在装置温度达到 37 ℃的温度后， 将制剂 (2g) 引入供给室。在实验终止时 ( 开始后 4 小时 )， 用蒸馏水将从扩散细胞移除的 BE 充分 洗涤， 以去除多余的制剂， 并用棉纸小心擦拭。然后用冷冻切片机将 BE 冷冻切片。将五个连续的 BE 切片 ( 各 100μm 厚 ) 导入管中， 添加 5ml 乳酸 (92％ )， 并保持摇动过夜。液体 相过滤 (0.22μm)， 并通过 HPLC 针对咪喹莫特进行分析。
         5.2. 结果
         图 12 显示所得到的结果， 该结果报告了在与制剂接触 4 小时后 BE 中回收的咪喹 莫特的量 ( 数据已被标准化成吸收面积 )。数据是 3 个实验 ( 溶液和脂质体 ) 或 6 个实验 ( 凝胶制剂 ) 的平均值。
         凝胶制剂影响咪喹莫特在膀胱上皮中的吸收 ： 由凝胶释放并在 BE 中回收的活性 剂的量低于由溶液释放的活性剂的量。值得注意的是， 配制在脂质体中并存在于 BE 中的咪 喹莫特的量高于来自溶液的咪喹莫特的量 ： 该结果表明了脂质囊对药物吸收的促进作用。
         6. 实施例 ： 含咪喹莫特的不同组合物的溶解性、 密度和粘度
         6.1. 溶解性
         6.1.1. 组合物
         咪喹莫特的溶解性已在不同溶剂系统中进行了测定 ：
         ●乳酸溶液 -0.025M、 0.05M、 0.1M 和 0.2M
         ●含 5 或 15％ HP-β-CD 的 0.1M 乳酸溶液
         ●含 5％、 16％和 20％泊洛沙姆 407 的 0.1M 乳酸溶液
         ●含 5％或 15％ HP.-β-CD 和 16％泊洛沙姆 407 的 0.1M 乳酸溶液
         ● 0.1M 乙醇酸、 酒石酸和谷氨酸的溶液
         ● DMSO
         ● N- 甲基 - 吡咯烷酮
         ● PEG 400
         6.1.2. 实验条件
         将超过药物溶解性 (2g) 的量加入到不同的溶剂系统 (50ml) 中， 并在 25℃下搅拌 24 小时 (400rpm)。将分散液以 10,000rpm 离心 10 分钟， 收集液体相并保存在室温下直至 分析。在适当地稀释后， 通过分光光度法 (λ ＝ 319nm) 测定这些溶液中咪喹莫特的浓度。
         6.1.3. 结果与讨论
         表 8 报告了所得到的结果。所述值为 3 次测定的平均值。咪喹莫特在马来酸溶液 中的溶解性在几天以后将测定。
         表8： 咪喹莫特在不同溶剂系统中的溶解性研究
         所得到的结果表明 ：
         ●乳酸和咪喹莫特之间存在线性关系 ( 图 13， 上图 ) ： 羧酸浓度增大， 则药物溶解 性增大。
         ●环糊精使咪喹莫特的溶解性增大 ： 同样在这种情况下， 溶解的药物的增加与所 用的环糊精的量线性相关 ( 图 13， 下图 )
         ●泊洛沙姆 407 对药物溶解性有不利影响 ： 随着聚合物得百分比增加， 咪喹莫特 在溶液中的浓度降低。
         ●当泊洛沙姆 407 和环糊精均存在于制剂中时， 这些组分的相反作用得以平衡， 并且咪喹莫特的溶解性相对于 0.1M 乳酸溶液基本上不变。
         ●在羧酸如乙醇酸、 酒石酸和谷氨酸存在的情况下， 药物溶解性低于乳酸存在的 情况 ( 谷氨酸在相应于其溶解性的浓度下使用， 即， 10.6g/l)。可考虑该 ( 二羧 ) 酸相对于 其他酸性化合物 ( 羟基 - 羧酸 ) 的结构差异来说明在酒石酸存在下观察到的咪喹莫特溶解 性： 溶解值低表明， 醇性官能 (alcoholic function) 与药物 / 羟基 - 羧酸加合物的形成有 关。对于谷氨酸， 羟基的作用通过氨基酸的伯氨基来发挥。
         ●咪喹莫特在亲水非水溶剂中的溶解性非常低。
         6.2. 密度 6.2.1. 组合物 对 5ml 下列组合物进行密度评价 ： ●含 16％泊洛沙姆 407 的 0.1M 乳酸溶液 ●含 5％或 15％ HP-β-CD 和 16％泊洛沙姆 407 的 0.1M 乳酸溶液 ●含 5％或 15％ HP-β-CD、 16％泊洛沙姆 407 和 0.5％咪喹莫特的 0.1M 乳酸溶液 ●含 5％ HP-β-CD 和 0.5％咪喹莫特的 0.1M 乳酸溶液 6.2.2. 实验条件 进行 5 次测量， 并计算平均值和标准差。 6.2.3. 结果密度 ±S.D.(g/ml) 1.0155±0.0032 1.0299±0.0039 1.0639±0.0040 1.0359±0.0033 1.0670±0.0023 1.0158±0.00365％ CD-16％ PF127LA 01-0.5％咪喹莫特 15％ CD-16％ PF127LA 01-0.5％咪喹莫特 5％ CD LA 01-0.5％咪喹莫特
         表9： 密度的测定 6.3. 粘度 6.3.1. 组合物 对下列组合物测定粘度 ： ●含 16％泊洛沙姆 407 的凝胶 ●含 16％泊洛沙姆 407 和 15％ HP-β-CD 的凝胶 ●含 16％泊洛沙姆 407 和 5％ HP-β-CD 的凝胶 ●含 15％ HP.-β-CD 的 0.5％咪喹莫特乳酸 (0.1M) 溶液 ●含 5％ HP.-β-CD 的 0.5％咪喹莫特乳酸 (0.1M) 溶液 ●含 16％泊洛沙姆 407 和 15％ HP.-β-CD 的 0.5％咪喹莫特凝胶制剂 ●含 16％泊洛沙姆 407 和 5％ HP.-β-CD 的 0.5％咪喹莫特凝胶制剂 6.3.2. 结果 表 10 报告了其他系统的粘度。所述值为 3 次测量的平均值 ±S.D.。
         锭子 SC18
         锭子 SC29
         表 10 ： 在 10、 25 和 37℃下的凝胶粘度 (20RPM)
         对于所研究的制剂， 在不同温度下观察到显著不同的特性 ： 在 10 和 25℃下， 向聚 合物溶液添加环糊精和 / 或咪喹莫特导致粘度升高， 而在 37℃下， 环糊精使粘度降低， 药物 使粘度升高。
         7. 实施例 ： 咪喹莫特在盐溶液和人造尿液中的溶解性
         7.1. 组合物
         在几种盐溶液中评价凝胶制剂中包含的咪喹莫特的溶解性。 本研究针对由如下组 成的咪喹莫特制剂进行 ：
         0.9％咪喹莫特凝胶
         21
         0.5％咪喹莫特凝胶
         0.1％咪喹莫特凝胶
         使用如下溶液作为药物的溶剂 ：
         用 1HCl 将 pH 校正为 6.50±0.05。 人造尿液 (AUS) 具有如下组成 ：用 1M HCl 将 pH 校正为 6.50±0.05。
         7.2. 实验条件
         将预定体积的制剂和溶剂转移到 10ml 烧瓶中， 从而得到溶剂 / 制剂体积比为 0.5、 1、 5 和 10 的混合物。将这些系统在搅拌下保持不同的时间段 ( 对于溶剂 / 制剂体积比为 0.5、 1、 5 和 10 的系统分别为 25、 50、 240 和 240 分钟 )。选定的时间相应于可推测的尿形成 时间 ( 产尿速率＝ 1ml/min)( 对于溶剂 / 制剂体积比为 10 的系统， 所用的时间段 240 分钟 比预期的短， 因为计算的时间 (500 分钟 ) 超过了制剂与膀胱接触的有效时间 )。 然后， 测定 各系统的 pH。将系统以 5000rpm 离心 15 分钟， 并将回收的液体部分进行分光光度分析 (A ＝ 319nm)， 得到咪喹莫特的含量。
         7.3. 结果与讨论
         下表 11 和 12 以 pH 单位和咪喹莫特沉淀百分比报告了结果 (3 次重复的平均值 )。
         表 11 ： pH 测定
         表 12 ： 咪喹莫特沉淀
         不同溶液 ( 除 AUS 外 ) 的 pH 被校正至约 6.5。 必须注意的是 ： ·小体积的溶液 ( 与盐种类无关 ) 不能控制混合物的 pH。 ·以与制剂高体积比的 A.U.S. 和碳酸氢盐溶液显示与其初始值没有显著差异的pH。 ·制剂中存在的药物量基本上不改变 A.U.S 和碳酸氢盐溶液的缓冲能力 ： 观察到 pH 随着制剂中咪喹莫特的百分比降低而略微下降 ( 游离乳酸增加 )。
         用水稀释没有促使药物显著沉淀， 这与凝胶 / 溶液比无关 ： 例外是水 /0.9％咪喹 莫特凝胶 ( 体积比 0.5 ∶ 1) 系统， 已观察到其溶解的药物浓度持续降低 ( 超过 30％ )。
         用磷酸盐缓冲溶液的情况下， 药物沉淀宏观上不明显 ： 在最大稀释比下， 含最高量 咪喹莫特 (0.9％ ) 的制剂溶液中药物最多减少 4.29％。
         在阴离子中， 碳酸氢根阴离子促使药物沉淀最多 ： 在体积比 10 ∶ 1 下， 观察到全部 制剂的咪喹莫特几乎完全沉淀。
         硫酸盐溶液使药物与 0.9％和 0.5％的凝胶分离， 但不与 0.1％的药物系统分离 ： 对于含药物最高的凝胶， 咪喹莫特沉淀百分比与稀释比之间存在抛物线关系。
         用人造尿液得到的结果可主要归因于碳酸氢根和硫酸根离子的存在， 同时不可排 除 AUS 的其他相同组分的相加 / 协同效应。
         8. 实施例 ： 含不同泊洛沙姆百分比的咪喹莫特制剂的比较
         8.1. 组合物
         实验工作的目的是比较包含不同量泊洛沙姆 407 和药物的咪喹莫特制剂的一些 化学物理特性。
         所研究的系统具有如下组成 ：
         制剂 0.5％ -16
         制剂 0.1％ -16
         制剂 0.5％ -10
         制剂 0.1％ -10
         8.2. 结果 在 25℃和 37℃测定这些制剂的粘度和 pH， 并且结果报告在下表 13 中 ：
         (*) 锭子 nr.25 (**) 锭子 nr.18 9. 实施例 ： 咪喹莫特制剂对猪膀胱上皮毒性的体外评价9.1. 材料和方法 9.1.1. 研究设计 应用如下处理对两头猪的膀胱上皮进行研究 ： ● 0.1％咪喹莫特制剂 (16％泊洛沙姆、 5％羟丙基 β 环糊精在 0.1M 乳酸中的混合物 ) ●媒介物 (16％泊洛沙姆、 5％羟丙基 β 环糊精在 0.1M 乳酸中的混合物 )
         ● 0.9％ NaCl 溶液
         将部分猪膀胱置于 Franz 细胞的供给 ( 处理 ) 室与接受室之间。在全部实验中应 用接受介质 PBS(pH 7.4)。实验开始后一小时， 去除接受介质， 并分析咪喹莫特含量。回收 膀胱 ； 将处理的部分进行分离， 并分成两部分 ： 一部分固定在福尔马林中、 包埋、 切片并染 色 (H&E) 以进行组织学检查 ； 另一部分进行药物提取和分析。
         9.1.2. 同级评审
         对五个膀胱切片进行组织病理学检查， 即， 2 个来自猪 1 的载玻片 ( 标记为咪喹莫 特 1 和媒介物 1)、 2 个来自猪 2 的载玻片 ( 标记为咪喹莫特 2 和媒介物 2) 和 1 个 NaCl 溶 液载玻片 ( 标记为对照 )。
         主要检测载玻片的尿道上皮完整性和包括炎症在内的任何粘膜下变化。
         9.2. 结果和结论
         在所检测的全部载玻片中， 尿道上皮和粘膜下组织呈现正常。在处理之间没有显 著差异 ( 未显示数据 )。
         9.3. 毒性评价的咪喹莫特渗透实验
         9.3.1. 目的
         为评价活性分子向猪膀胱上皮的渗透， 进行了一系列体外渗透实验。
         所研究的咪喹莫特制剂为 ：
         - 在 0.1M 乳酸溶液中的 0.5％咪喹莫特
         - 在 0.1M 乳酸溶液中的 0.5％咪喹莫特 -5％ HP-β-CD
         - 在 16％泊洛沙姆 407 凝胶中的 0.5％咪喹莫特
         - 在 16％泊洛沙姆 407 凝胶中的 0.5％咪喹莫特 -5％ HP-β-CD
         系统的组成如下 ：
         在 0.1M 乳酸溶液中的 0.5％咪喹莫特
         咪喹莫特 5.020mg
         乳酸 (90.3％ ) 10.020mg
         注射用水 q.b. 1000.00mg
         在 0.1M 乳酸溶液中的 0.5％咪喹莫特 -5％ HP-β-CD
         HP-β-CD 50.080mg
         咪喹莫特 5.020mg
         乳酸 (90.3％ ) 10.080mg
         注射用水 q.b. 1000.000mg
         在 16％泊洛沙姆 407 凝胶中的 0.5％咪喹莫特
         泊洛沙姆 407 160.020mg
         咪喹莫特 5.000mg 乳酸 (90.3％ ) 10.100mg 注射用水 q.b. 1000.000mg 在 16％泊洛沙姆 407 凝胶中的 0.5％咪喹莫特 -5％ HP-β-CD9.3.2. 方法
         将来自 6-9 个月龄雌性猪的膀胱进行切片， 并置于 Franz 细胞室之间， 内表面向 上。在全部实验中， 将 0.1M 磷酸盐缓冲溶液 (pH 7.4) 用作接受相 ： 在实验过程中将其于 37℃下保持搅拌 ( 约 300rpm)。含咪喹莫特的制剂 (2g) 为供给相。
         在实验终止时 ( 开始后 4 小时 )， 用蒸馏水充分洗涤将从扩散细胞移除的膀胱上 皮 (BE) 以去除多余的制剂， 并用棉纸仔细擦拭。然后用冷冻切片机将 BE 冷冻切片。将五 个连续的 BE 切片 ( 各 100μm 厚 ) 导入管中， 添加 5ml 乳酸 (92％ )， 并保持摇动过夜。过 滤液体相 (0.22μm)， 并通过 HPLC 分析咪喹莫特。
         9.3.3. 结果
         图 15 显示所得到的结果， 其报告了在与制剂接触 4 小时后在 BE 中回收的咪喹莫 特的量 ( 数据被标准化成吸收面积。数据是 3 个实验的平均值 )。
         10. 实施例 ： 膀胱内咪喹莫特的药代动力学和毒性 ： 在猪中的临床前研究
         10.1. 引言
         为检测膀胱癌是否可能是咪唑喹啉 ( 胺 ) 治疗的适合靶标， 对人膀胱癌和正常膀 胱组织中的 TLR-7 表达进行了研究。研究了猪组织样品， 用于模型验证。其后， 为检测咪唑 喹啉 ( 胺 ) 在膀胱内应用时的潜力和风险， 进行了动物研究， 其中对三种不同的咪喹莫特膀 胱内制剂和媒介物对照进行了检测。 对动物的健康、 药代动力学特性、 细胞因子产生和膀胱 壁组织学进行了研究。
         10.2. 动物、 材料和方法
         10.2.1.TLR-7 表达的检测
         由 Mosaic Laboratories， LLC(Lake Forest， CA， USA) 将 15 个福尔马林固定、 石 蜡包埋的人膀胱癌样本和 6 个正常膀胱样本针对 TLR-7 进行染色。此外， 将 28 个不同的正 常人组织样本 ( 除膀胱外 ) 针对 TLR-7 表达进行染色。此外， 检测猪膀胱、 扁桃体、 心脏、 肝 脏、 脾脏和肾脏组织样本。
         相对于对照载玻片的强度判断各样本的染色强度， 所述对照载玻片包含用不相关 物种抗体和同种型匹配抗体染色的邻近切片。用阴性试剂对照标记的切片染色被认为是 “本底” 。 对切片进行如下打分 ： 0 相对于本底未染色， 1+ 弱染色， 2+ 中度染色， 3+ 强染色。 对 于各样本记录总阳性染色 ( 所有染色为 1+、 2+ 和 3+ 的总和 )。利用如下等式， 基于各强度 染色的细胞百分比的产物总和计算 H 分数 ： (3×％染色为 3+ 的细胞 )+(2×％染色为 2+ 的
         细胞 )+(1×％染色为 1+ 的细胞 )。H 分数值的范围从 0-300。
         10.2.2. 猪模型
         根据实验动物管理使用委员会 (IACUC， Radboud University Nijmegen Medicai Centre， The Netherlands) 批准的方案并依照国家法规和欧洲法规进行动物程序。本研究 使用雌性猪 (Dutch Landrace)。猪的泌尿生殖道与人泌尿生殖系统极其相似， 并且阴茎的 形状和包皮憩室妨碍雄性猪的经尿道导管插入术。 将母猪安置在特制的猪不锈钢层架式笼 中， 并以普通猪食饲养。将猪分为 4 组， 每组 6 只动物。在全身麻醉下进行实验程序。术前 用药包含一次性肌肉注射 (i.m.)10mg/kg 氯胺酮和 0.5 至 1.0mg/kg 咪达唑仑的混合物。 每 45 分钟通过一半剂量的相同混合物进行镇静维持。在治疗开始前将膀胱无抽吸创伤地 放空 ( 经由 12 根 French Foley 导管 )， 膀胱内灌注 50mL 研究药物。动物接受溶于 0.1M 乳 酸的 0.5％咪喹莫特溶液 ( 第 1 组 ) ； 溶于 0.1M 乳酸的 0.5％咪喹莫特、 作为乳化剂的 16％ 泊洛沙姆 407 和作为稳定剂的 15％ HPβCD( 羟丙基 -β- 环糊精 ) 的溶液 ( 第 2 组 ) ； 溶于 0.1M 乳酸的 0.5％咪喹莫特、 16％泊洛沙姆 407 和 5％ HPβCD 的溶液 ( 第 3 组 ) 或媒介物 对照 (0.1M 乳酸 )( 第 4 组 )。夹住导管， 使灌注流体在膀胱中保留 60 分钟， 然后将膀胱放 空。放空后不冲洗膀胱。
         获得血液样本， 用于药代动力学分析 (PK)、 细胞因子 (IL-6) 测量、 肌酐测量和全 血细胞计数。 取决于穿刺角度和针穿透深度， 穿刺头静脉或内颈静脉、 外颈静脉或颈静脉丛 (communal jugular vein)。
         分别在滴注前和滴注开始后 60 分钟、 24 小时和 1 周 ( 恰好在膀胱切除术之前 ) 将 用于血液计数和肌酐测量的样品收集于具有凝胶分离器 (gel divider) 的 3-mLEDTA 钾管 和 3mL 肝素锂管中。将样品保存在冰上， 并转移到实验室进行分析。
         在研究药物滴注前和药物滴注开始后 15、 30、 60、 120、 240 和 480 分钟以及恰好在 膀胱切除术之前， 将用于药代动力学分析和细胞因子测量的血液样本收集于具有凝胶分离 器的 4mL 肝素锂管中。将样品在冰上转移至实验室， 在 30 分钟内进行血浆处理。将血液在 4℃下以 3,200rpm 离心 15 分钟， 收集血浆用于 PK 和细胞因子分析， 在 -80℃下保存， 并在干 冰上运送以用于分析。
         收集治疗后排出的膀胱内含物和恰好在尸体解剖前排出的尿， 用于咪喹莫特浓度 分析。将尿立即冷冻， 并在 -80℃下保存在塑料管中， 在干冰上运送以用于咪喹莫特测定。 对排出的治疗前和治疗后的尿液以及对恰好在尸体解剖前收集的尿液进行试纸尿液分析。 通过液相色谱 - 质谱法 / 质谱法 (LC-MSMS)， 由 CHIMAN s.r.1.(Rottofreno， Italy) 测定 血浆和尿中咪喹莫特浓度。利用 “Quantikine Porcine IL-6” (P6000 ； R&D 系统 ) 试剂盒， 由 Areta International s.r.1.(Gerenzano， Italy) 分析用于 IL-6 测量的血浆样品。
         在治疗前和开始治疗后 1、 8 和 24 小时以及一周通过直肠测量体温。由经验丰富 的研究人员通过选定的毒性的可能迹象和症状的方案列表在实验前、 恰好在灌注后和恰好 在膀胱切除术前监测动物的健康。
         治疗后 24 小时， 将每组三只动物处死并进行膀胱切除， 治疗后 7 天， 对其余动物进 行相同的程序。收集来自膀胱的材料， 并进行如下组织学处理 ： 从穹顶、 三角区、 右侧壁、 左 2 侧壁取 1cm 的膀胱活组织， 并移至在 PBS 中的 10％福尔马林。将材料包埋在石蜡中， 切片 并用 H&E 进行染色。评价载玻片的炎症迹象和粘膜下层和粘膜中的过敏反应。将微观异常分为无反 应、 轻微反应、 中度反应或严重反应。
         10.3. 结果
         10.3.1.TLR-7 表达
         15 个人膀胱癌样本的 TLR-7 表达证明， 全部样品中阳性染色的范围为 70 ％至 100％， 平均 90％ (SD ＝ 9％ )。最高强度的染色是核膜 / 核周染色， 较弱的是细胞质染色 ( 图 16)。H 分数的范围为 90 至 155， 平均 127(SD ＝ 23)。6 个正常膀胱上皮细胞样本中也 观察到阳性染色， 其范围为 80％至 100％， 平均 95％ (SD ＝ 8％ )。H 分数的范围为 100 至 230， 平均 179(80 ＝ 55)。在几乎全部所检测的非膀胱组织中观察到 TLR-7 表达 ( 未显示数 据 )， 最明显的是淋巴组织。在心脏和平滑肌中没有观察到染色。猪组织的 TLR-7 表达 ( 图 17) 类似于相应的人组织。
         10.3.2. 猪实验
         将平均重量 57.1kg(40.0-85.0kg 范围 ) 的 24 头猪分为四组， 每组六头， 用不同的 咪喹莫特制剂以单次 50 分钟膀胱内滴注进行处理。 在滴注后一周随访期中 ( 每组 3 头猪 )， 没有观察到动物健康恶化。在四头猪中观察到少量可能源于研究药物的毒性迹象 ( 即， 第 1、 2 和 4 组三头猪食物摄入少， 第 1 组一头猪便溏 )。没有其他损害动物健康状况的迹象。
         对于全部处理组， 处理后体温不受研究药物滴注的影响， 并与处理前体温相当。 虽 然在滴注后一周观察到第 1 和 2 组的肌酐水平略微上升， 这可能表示轻微的肾损伤， 但没有 注意到与处理方式的明显相关性。
         除第 1 组的一头猪显示异常的血液学值 ( 在 50 分钟灌注期结束时血红蛋白浓度 2.5mmol/l、 血细胞比容 12％、 血小板计数 18×109/L、 白细胞计数 8.8×109/L) 外， 血液学值 在正常范围内。然而， 在 T ＝ 24h 时， 该动物几乎全部血液学值均在正常范围内， 除了血小 9 板计数 (53×10 /L) 于滴注后一周在正常范围内外。
         处理后尿液分析 ( 滴注开始后 50 分钟 ) 显示除媒介对照组外全部处理组的咪喹 莫特含量都高 ( 表 14)。在第 1 组动物尿液中收集的咪喹莫特量比第 2 和 3 组动物的高几 乎 2 倍， 第 2 组与第 3 组之间无明显差异。24 小时后， 咪喹莫特水平非常低 ( ＜ 5μg/mL)。
         表 14 每个处理组的咪喹莫特给药量和测定的处理结束时的量
         药代动力学分析揭示， 仅极少量全身吸收 ( 表 15 和图 18)。第 1 组动物的最高血 浆水平比第 2 和 3 组动物的最高血浆水平高 3 倍， 这导致 2 倍的 AUC。8 小时后， 在任何猪 血浆中均几乎不再可以检测到咪喹莫特 ( ＜ 2.10ng/mL)。
         表 15 每个处理组的咪喹莫特药代动力学血浆参数 ( 平均值 ±sd)
         组 1 Cmax(ng/mL) 45.17±29,96 AUC(ng*h/mL) 96,75±50,42 72 T1/2(h) 1,18±0,12102307569 A CN 102307576 2 3
         16,23±10,22 17,00±6,57说明书1,58±1,05 1,90±1,0661/66 页45,67±26,53 56,65±24,94Cmax ＝最大浓度 ； AUC ＝曲线下面积 ； T1/2 ＝半衰期
         包括媒介物对照组在内各组 IL-6 细胞因子水平相似， 在研究药物灌注后 8 小时达 到最高 IL-6 水平 ( 未显示数据 )。
         切除的膀胱肉眼检查不显示异常， 除咪喹莫特滴注后 24 小时处死的猪一些区域 具有出血现象外 ( 第 1-3 组 )， 7 天后处死的猪较少表现或不表现异常。
         切除的膀胱的微观检查显示 4 个取样区之间无差异 ( 左侧壁、 右侧壁、 穹顶、 三角 区 )。膀胱内滴注后 24 小时， 在三个处理组的多数动物中观察到中度主要淋巴细胞粘膜下 层炎症反应 ( 图 20)， 在 7 天后处死的猪中下降至轻微炎症。滴注后 24 小时， 在三头猪中 观察到血管炎， 平均分布在三个处理组中 ( 图 21)。在第 1 组的一头猪中观察到中度肌炎。 在几乎全部 24 小时后处死的动物中观察到轻微反应性非典型膀胱上皮， 其及时消失， 并且 在一周后处死的动物中不再可见。侵蚀、 粘膜下水肿和出血轻微， 没有观察到过敏反应。
         10.4. 讨论
         如 说 明 书 中 已 阐 述 的， 咪 喹 莫 特， 咪 唑 喹 啉 ( 胺 ) 家 族 的 主 要 成 员， 已显示 出对抗多种肿瘤类型的效力 ( MP， M.Imiquimod ： mode of action.Br J DermatoI2007 ； 157 ： 8-13)。 该化合物结合 TLR-7， 引起前炎性细胞因子生成和分泌， 不断诱 导深远的肿瘤特异性细胞介导的免疫应答， 这与已提出的 BCG 工作机制非常相似。此外， 咪喹莫特能够对肿瘤细胞发挥直接的细胞凋亡作用， 能够刺激 TLR 非依赖性基因表达， 并 且能够干扰腺苷受体信号传导通路 ( MP， M.Imiquimod ： mode of action.Br J DermatoI2007 ； 157 ： 8-13)。
         咪喹莫特作为治疗多种良性和恶性皮肤科损伤的局部制剂十分有效， 并且耐受良 好。局部皮肤反应是最常见的副作用 (Geisse J， Caro I， Lindholm J， Golitz L， Stampone P， Owens M.Imiquimod 5 ％ cream for the treatment of superficial basal cell carcinoma ： Results from two phase III， randomized， vehicle-controlled studies. J Am Acad Dermatol 2004 ； 50 ： 722-33)。咪喹莫特作为系统治疗方式也被研究 ： 在癌症 患者的 I 期试验中研究了每周给予高剂量的口服咪喹莫特 (Witt PL， Ritch PS， Reding D， McAuliffe TL， Westrick L， Grossberg SE， Borden EC.Phase I trial of an oral immunomodulator and interferon inducer in cancer patients.Cancer Res 1993 ； 53 ： 5176-5180)。剂量限制性副作用是流行性感冒样症状和轻微的淋巴细胞减少。 膀胱癌可以是咪喹莫特治疗针对的靶标 ： 膀胱内给予咪喹莫特类似于局部治疗皮 肤损伤， 与恶性细胞直接接触， 咪喹莫特不依赖免疫应答而诱导的直接细胞毒性或细胞凋 亡。此外， 膀胱内滴注避免了首过代谢的损失， 并且使药物的治疗作用定位在期望部位， 而 具有最小化的全身副作用。
         Smith 等提供了咪唑喹啉 ( 胺 ) 确实可以是膀胱癌的适当治疗方式的实验证 据。这些研究者证实了， TLR-7 在鼠和人的膀胱癌细胞系中表达， 并且咪唑喹啉对这些细 胞系具有直接的生物作用 ： 细胞存活力降低， 并且诱导细胞凋亡和细胞因子产生。此外， 免疫感受态原位小鼠模型的初步结果表明了体内抗肿瘤作用 (Smith EB， Schwartz M，
         Kawamoto H 等 人， Antitumour effects of Imidazoquinolines in urothelial cell carcinoma of the bladder.J Urol 2007 ； 177 ： 2347 ； Liu H， Schwartz MJ， Hwang DH， Scherr OS.Tumour growth inhibition by an imidazoquinoline is associated with c-Myc down-regulation in urothelial cell carcinoma.BJU Int 2008 ； 101 ： 894-901)。
         为研究咪喹莫特的靶标 TLR-7 是否在人膀胱癌中表达， 评价了 15 个样本中的 TLR-7 表达。在全部样本中证实了阳性染色， 平均值为 90％， 但强度有一些不均匀性， 导致 H 分数范围为 90 至 165。这些结果证明， 膀胱癌可以是咪喹莫特治疗针对的靶标。
         为评价咪喹莫特滴注的药代动力学和可能的毒性， 对猪进行了实验。猪和人膀胱 组织样本中的 TLR-7 表达相似， 证实了猪模型的有效性。对咪喹莫特三种不同的膀胱内溶 液和媒介物对照 ( 乳酸溶液 ) 进行了研究。所检测制剂均不影响猪的一般健康状况， 一般 健康状况通过例如粘膜表观、 行为、 食物 / 水摄入等进行判断。血浆分析显示， 与所使用的 制剂无关， 膀胱滴注后仅极少量咪喹莫特全身吸收。 因此， 在滴注后尿液中收集到高含量的 咪喹莫特。但是， 用简单乳酸溶液中的咪喹莫特处理的动物 ( 第 1 组 ) 的处理后尿液咪喹 莫特水平比用具有泊洛沙姆和 HPβCD 的咪喹莫特制剂处理的动物 ( 第 2 和 3 组 ) 高几乎 2 倍。此外， 第 1 组中咪喹莫特的平均最高血浆水平比第 2 和 3 组动物中的高 3 倍。该差异 可能是具有泊洛沙姆和 HPβCD 的药物制剂对膀胱壁的生物粘附性增大和延长的结果。然 而， 该作用是短暂的， 因为与咪喹莫特制剂无关， 8 小时后猪血浆中几乎不再可检测到咪喹 莫特， 并且 24 小时后在任意动物的尿液中不再可检测到咪喹莫特。可能是药物制剂 2 和 3 导致咪喹莫特较长的、 持续的膜水平。
         包括媒介物对照组在内各组的血浆 IL-6 水平均相似， 并且在膀胱滴注后 8 小时达 到最大值， 这最有可能是由于全身麻醉和膀胱导管插入术后的应激反应， 而不是咪喹莫特 的免疫刺激。此外， 血浆咪喹莫特水平太低， 而不能实现全身细胞因子应答。
         膀胱壁的组织病理学检查显示了咪喹莫特处理组的预期炎症反应。 除了该预期炎 症反应外， 没有观察到明显的异常。仅血管炎可代表一些毒性反应， 虽然短暂 ： 在第 7 天处 死的动物中没有观察到血管炎。以每组这些少的数量进行有意义的组间比较是不可能的， 然而在所检测的咪喹莫特溶液之间没有观察到主要差异。
         总之， 猪膀胱内给予的咪喹莫特耐受良好， 不引起膀胱壁毒性， 并且具有泊洛沙姆 和 HPβCD 的制剂在膀胱内停留时间较长， 全身吸收较少。膀胱内咪喹莫特的安全性比现有 治疗如 BCG 有利。考虑到非常相似的药代动力学特征， 在 NMIBC 患者中以 0.1M 乳酸中的 0.5％咪喹莫特、 16％泊洛沙姆 407 和 5％ HPβCD 开始 I 期剂量扩大标记物损伤研究。
         11. 实施例 ： 用于膀胱癌治疗的 Toll 样受体 7 激动剂膀胱内制剂的优化
         11.1. 引言
         本研究的目的是优化咪喹莫特制剂以改善治疗应用。 对多种咪喹莫特制剂引起的 全身和局部炎症进行比较。 在鼠原位膀胱癌模型中评价咪喹莫特在热敏性泊洛沙姆聚合物 中的抗癌效力。
         11.2. 材料和方法
         11.2.1. 小鼠
         6 至 8 周龄的雌性 C57BL/6 小鼠购自 Charles River Laboratory(Wilmington， MA)。TLR7 缺陷小鼠由 S.Akira(Osaka University， Osaka， Japan) 赠送， 并且在 C57BL/6背景小鼠上回交 10 代。全部小鼠安置在 University of California， San Diego Animal Facility 的标准条件下。所有程序和方案均得到了 UCSD 机构审查委员会的预先批准。
         11.2.2. 试剂
         咪喹莫特 (TMX， TMX-101， R-837) 和 Lutrol F127 由 Telormedix SA(Bioggio， Switzerland) 提供。乳酸购自 Fisher Scientific(Pittsburgh， PA)。2-( 羟丙基 )-β- 环 糊精 (HPβCD) 购自 SigmaAldrich(St.Louis， MO)。 咪喹莫特以最终浓度 1％ (w/v， 41.7mM) 溶于 0.1 ％乳酸 ( 乳酸制剂 )。将 Lutrol F127( 泊洛沙姆 407) 加入 0.1M 乳酸中， 制成 20％ ( 泊洛沙姆制剂 )。将 5％ HPβCD 掺入到 0.1M 乳酸中的 16％ Lutrol F127 中 ( 泊 洛沙姆 -HPβCD 制剂 )。将全部溶液在给药前通过 0.22 微米过滤器进行过滤。
         11.2.3. 体内药理学研究
         将小鼠麻醉， 并使用 20G Teflon 静脉导管 (Terumo Co.Somerset， NJ) 进行导管插 入。分别膀胱内给予 50 或 100μL 媒介物中的 150 纳摩尔、 500 纳摩尔或 1500 纳摩尔咪喹 莫特。使用 120μL 体积灌注 5000 纳摩尔。咪喹莫特溶液在膀胱内保持 20min。根据产品 说明书， 通过 Luminex 微珠分析 (Invitrogen， Carlsbad， CA) 测定细上胞因子水平。TNFα 和 KC 的最小检测水平分别为 5pg/mL 和 25pg/mL。通过 Chiman SRL(Rottofreno， Italy) 分 析血清中的咪喹莫特水平。
         11.2.4. 组织学检查
         一次给予小鼠 100μL， 或以四天的间隔三次给予小鼠 50μL 0.1％咪喹莫特的泊 洛沙姆 -HPβCD 制剂。最后一次给药后 24 小时， 收集膀胱。将固定的膀胱经石蜡包埋， 并 由 UCSD Cancer Center Histology Core 用苏木精和伊红 (H&E) 进行染色。
         11.2.5. 肿瘤的植入、 治疗和评估
         用聚 L- 赖氨酸 (0.1mg/mL) 治疗 20 分钟后， 如先前所述将 1×106MB49 细胞植 入 (Hegele A， Dalpke A， Barth P 等人， Antineoplastic effect of immunostimulatory DNA(CpG-ODN)in a murine C57-BL6/MB-49 transitional cell carcinoma model. Anticancer research.2004 ； 24 ： 2225-30)。在第 3、 6 和 9 天进行治疗。未经治疗或经媒介 物治疗的 MB49 植入小鼠充当对照。在第 11 天将小鼠处死， 并测量膀胱的重量。
         11.2.6. 统计学分析
         如图例中所示， 利用软件包 (Prism 4.0， GraphPad， San Diego CA) 进行统计学分 析。p ＜ 0.05 的值被认为在统计学上显著。
         11.3. 结果
         11.3.1. 膀胱内给予咪喹莫特引起的全身炎症
         已知咪喹莫特不溶于水， 并且略溶于常见的药物溶剂。如上所述， 醋酸和 / 或乳酸 溶液使咪喹莫特的溶解性增大。因此， 使用 0.1M 乳酸制备 1％咪喹莫特溶液 ( ～ 41.7mM)。 小鼠膀胱内接受 150 纳摩尔、 500 钠摩尔、 1500 纳摩尔和 5000 纳摩尔。血清 TNFα 和 KC 以 剂量依赖性方式被诱导 ( 在图 22A 和 B 中， 0.1M 乳酸， )。这些因子在膀胱中的水平比其在 血清中的水平低 10 至 100 倍 ( 在 1500 纳摩尔和 5000 纳摩尔时 p ＜ 0.001， 图 22C 和 D)。
         11.3.2. 添加泊洛沙姆聚合物防止咪喹莫特的吸收和细胞因子的全身诱导
         促 炎 性 细 胞 因 子 的 全 身 诱 导 引 起 厌 食 和 疲 劳， 因此称为宿主 “疾 病 综 合 征” (Hayashi T， Cottam HB， Chan M 等 人， Mast cell-dependent anorexia andhypothermia induced by mucosal activation of Toll-like receptor 7.Am J Physiol RegulIntegr Comp Physiol.2008 ； 295 ： R123-32)。 为避免全身吸收和增加咪喹莫特与膀胱 上皮的局部接触， 将热敏性泊洛沙姆聚合物 Lutrol F127 加入制剂中。与具有乳酸的制 剂相比， 在该制剂中接受 5000 纳摩尔咪喹莫特的小鼠血清和膀胱中的 TNFα( 图 23A 和 B) 和 KC( 图 23C 和 D) 的水平显著降低。
         为评价泊洛沙姆聚合物对咪喹莫特通过膀胱上皮全身吸收的影响， 在 2、 4、 6、 24 和 48 小时收集接受 1500 纳摩尔咪喹莫特的小鼠血清。无论是接受单独在乳酸中或是在泊 洛沙姆制剂中的咪喹莫特的小鼠， 在给药后 2 小时均观察到咪喹莫特的最大血清浓度 ( 图 23E)(p ＜ 0.01)。血清咪喹莫特的水平以剂量依赖性方式增加 ( 图 23F)。在制剂中添加泊 洛沙姆聚合物降低了在 2 小时时间点 (p ＜ 0.01， 图 23E) 和在 5000 纳摩尔 (p ＜ 0.01， 图 23F) 时咪喹莫特的血清水平。这些数据表明， 在制剂中包含泊洛沙姆明显降低咪喹莫特的 全身吸收。
         11.3.3.HPβCD 的掺入使全身和局部炎症恢复
         为提高物理稳定性和实现澄清均质的溶液以及实现从泊洛沙姆聚合物的完全释 放， 将咪喹莫特与 HPβCD 一并掺入在乳酸中的泊洛沙姆 ( 泊洛沙姆 -HPβCD 制剂 )。评价 了 TNFα 和 KC 的全身水平， 并与其他制剂进行比较 ( 图 24)。与乳酸制剂相比， 添加泊洛沙 姆聚合物使血清 KC 水平降至几乎基线水平 (p ＜ 0.001， 图 24A 和 24B)。向泊洛沙姆制剂 添加 HPβCD 使血清 KC 水平明显恢复 ( 图 24B)， 但 TNFα 则没有 ( 图 24A)。在 KC 局部水 平中可见相似的趋势 ( 图 24C)。
         11.3.4. 膀胱内给予咪喹莫特的泊洛沙姆 -HPβCD 制剂的膀胱局部炎症的评价
         为评价膀胱的局部炎症， 小鼠膀胱内接受在泊洛沙姆 -HPβCD 制剂中的 0.1％咪 喹莫特， 所述泊洛沙姆 -HPβCD 制剂作为媒介物。通过组织学检查评价炎性细胞在膀胱中 的流入量 ( 图 25)。因为在临床应用中患者接受重复的膀胱内治疗， 所以我们检测了第 0、 4 和 8 天重复给予咪喹莫特的泊洛沙姆 -HPβCD 制剂的效果。第一次滴注咪喹莫特后， 与单 独滴注媒介物相比 ( 图 25A)， 细胞浸润开始 ( 图 25C)。第三次治疗后， 观察到在用咪喹莫 特治疗的膀胱固有层中单核细胞大量浸润 ( 图 25D)， 而在媒介物或盐水治疗的膀胱中极少 细胞浸润 ( 图 25B 和 E)。与盐水治疗的小鼠类似， 在用咪喹莫特的泊洛沙姆 -HPβCD 制剂 治疗的 TLR7 缺陷型小鼠膀胱中观察到细胞浸润减少， 这表明咪喹莫特在膀胱中引发的炎 症是 TLR7 依赖性的 ( 图 25F)。
         11.3.5. 在鼠原位膀胱癌模型中治疗效力的评价
         利用 MB49——得自鼠泌尿道移行细胞癌的细胞系——产生正位膀胱肿瘤模型。 将 患有 MB49 膀胱肿瘤的小鼠用 50μL 泊洛沙姆 ( 第 3、 6 和 9 天 )， 所述泊洛沙姆 姆
         制剂中的 0.1％咪喹莫特治疗三次制剂作为媒介物。与非治疗组或媒介物治疗组相比， 治疗组显示平均肿瘤负荷显著降低 (p ＜ 0.01， 图 26)。因此， 用咪喹莫特的泊洛沙 制剂治疗使膀胱重量保持接近未患肿瘤 ( 首次接受试验 ) 的小鼠。 11.4. 讨论
         在本研究中， 利用热敏性泊洛沙姆聚合物确保局部接触延长并使咪喹莫特全身吸 收最小化。聚合物制剂减少咪喹莫特从膀胱上皮的全身吸收， 并且维持免疫细胞的局部浸 润。将 HPβCD 掺入制剂中使物理稳定性提高， 实现了澄清均质的溶液。该制剂提高了局部趋化因子的诱导， 并证实了在膀胱癌原位小鼠模型中的抗肿瘤作用。
         膀胱内 BCG 给予是一种完善的浅表膀胱癌免疫治疗 (Alexandroff AB， Jackson AM， O ′ Donnell MA， James K.BCG immunotherapy of bladder cancer ： 20 years on.Lancet.1999 ； 353 ： 1689-94)。虽然活 BCG 杆菌对于引起免疫应答具有显著优势， 但使 用活 BCG 需要医务人员和患者谨慎的生物危害预防措施 (Games J.Nursing implications in the management of superficial bladder cancer.Seminars in urologic oncology.1996 ； 14 ： 36-40)。BCG 仅保持部分有效， 并且可发生严重的副作用， 包括高热、 肺炎、 肝炎和脓毒症。持续努力以开发更安全和更有效的膀胱癌治疗。其中， 已报道了尝 试使用单独 TLR 激动剂治疗膀胱癌 (Smith EB， Schwartz M， Kawamoto H 等人， Antitumor effects of imidazoquinolines in urothelial cell carcinoma of the bladder.The Journal of urology.2007 ； 177 ： 347-51 ； Mangsbo SM， Ninalga C， Essand M， Loskog A， Totterman TH.CpG therapy is superior to BCG in an orthotopic bladder cancer model and generates CD4+T-ell immunity.J Immunother.2008 ； 31 ： 34-42)。 重 复 应 用 TLR9 激动剂使存活率提高， 并使肿瘤负荷降低 (Mangsbo SM， Ninalga C， Essand M， Loskog A， Totterman TH.CpG therapy is superior to BCG in an orthotopic bladder cancer model and generates CD4+T-cell immunity.J Immunother.2008 ； 31 ： 34-42)。 TLR7 激动剂咪喹莫特直接影响人和鼠膀胱癌细胞， 以诱导趋化因子分泌和诱导细胞凋亡， 以及降低肿瘤生长 (Smith EB， Schwartz M， Kawamoto H 等人， Antitumor effects of imidazoquinolines in urothelial cell carcinoma of the bladder.The Journal of urology.2007 ； 177 ： 2347-51)。
         在本研究中， 证实了咪喹莫特的泊洛沙姆 -HPβCD 制剂可引起大量局部天然免 疫反应。因为酸制剂使咪喹莫特的溶解性增大， 所以最初测试了咪喹莫特溶于 0.1M 制药 工业中常用的乳酸。咪喹莫特的乳酸制剂被全身吸收， 并造成全身炎症的明显引发。活 BCG 杆菌粘附于膀胱壁表面 (Atkins H， Davies BR， Kirby JA， Kelly JD.Polarisation of a T-helper cell immune response by activation of dendritic cells with CpG-containing oligonucleotides ： a potential therapeutic regime for bladder cancer immunotherapy.British journal of cancer.2003 ； 89 ： 2312-9 ； Akazawa T， Masuda H， Saeki Y 等人， Adjuvant-mediated tumor regression and tumor-specific cytotoxic response are impaired in MyD88-deficient mice.Cancer research.2004 ； 64 ： 757-64)， 并且长期给膀胱上皮和局部免疫细胞提供持续的免疫刺激。热敏性泊洛沙姆 聚合物减缓了药物释放， 并维持细胞表面的药物浓度， 以及防止药物全身吸收 (Anderson BC， Pandit NK， Mallapragada SK.Understanding drug release from poly(ethylene oxide)-b-poly(propylene oxide)-b-poly(ethylene oxide)gels.J Control Release.2001 ； 70 ： 157-67)。为重述活 BCG 杆菌感染的有益促炎性特性和为减少全身吸收 以及为增加药物的表面接触， 将热敏性泊洛沙姆聚合物加入到乳酸制剂中。泊洛沙姆制剂 显著减少了咪喹莫特通过膀胱表面全身吸收， 并且将全身细胞因子诱导降至基线水平。
         本研究特别引人关注的组成部分是， 与单独泊洛沙姆制剂相比， 包含 HPβCD 的制 剂恢复咪喹莫特对 KC 的诱导。使用 HPβCD 络合是增加药物在水基质中溶解性和稳定性的 常用方法 (Brewster ME， Loftsson T.Cyclodextrins as pharmaceutical solubilizers.Advanced drug delivery reviews.2007 ； 59 ： 645-66.[25]Bilensoy E， Rouf MA， Vural I， Sen M， Hincal AA.Mucoadhesive， thermosensitive， prolonged-release vaginal gel for clotrimazole ： beta-cyclodextrin complex.AAPS PharmSciTech.2006 ； 7： E38)。此外， 在 聚合物中包含 HPβCD 被用于阴道输送系统 (Chang JY， Oh YK， Kong HS et al.Prolonged antifungal effects of clotrimazolecontaining mucoadhesive thermosensitive gels on vaginitis.J Control Release.2002 ； 82 ： 39-50)。 由于观察到 20％热敏性泊洛沙姆在 膀胱中短时间内固化， 导致尿道阻塞， 因此将泊洛沙姆的浓度降至 16％。具体地， 在聚合物 制剂中掺入 HPβCD 使水溶性提高， 并且咪喹莫特在膀胱癌原位小鼠模型中具有有效的抗 肿瘤作用。该发现有力地支持了泊洛沙姆 -HPβCD 制剂在后续临床研究中的应用。
         有效的抗肿瘤免疫治疗需要适当补充免疫细胞 (Simons MP， O ′ Donnell MA， Griffith TS.Role of neutrophils in BCG immunotherapy for bladder cancer. Urologic oncology.2008 ； 26 ： 341-5 ； Saban MR， Simpson C， Davis C 等人， Discriminators of mouse bladder response to intravesical Bacillus Calmette-Guerin(BCG).BMC immunology.2007 ； 8： 6)。组织学检查显示， 咪喹莫特引起大量免疫细胞浸润到固有层 中。TLR7 缺陷型小鼠中咪喹莫特引起的膀胱中细胞浸润减少， 这表明炎症是 TLR7 依赖 性的， 而不是由媒介或机械性损伤引起。在重复单独给予媒介物 ( 泊洛沙姆 -HPβCD 制 剂 ) 后膀胱上皮的完整性保持良好。据报道， 1V270—— TLR7 激动剂的磷脂偶联物， 发挥 优良且快速的 Th1 适应性免疫应答 12。因为活 BCG 滴注的免疫治疗引起肿瘤特异性的 Th1 型适应性免疫激活 (Luo Y， Chen X， O’ Donell MA.Role of Th1 and Th2 cytokines in BCG-induced IFN-gamma production ： cytokine promotion and simulation of BCG effect.Cytokine.2003 ； 21 ： 17-26)， 所以磷脂偶联物具有提高未偶联的 TLR7 激动剂对膀 胱癌治疗效力的潜能。
         总之， 这些结果表明， 具有低溶解性的药物的泊洛沙姆和 HPβCD 制剂可发挥有 利的特性， 如缓慢释放性和较长的表面接触， 同时避免可能的全身副作用。优化的泊洛沙 姆 -HPβCD 制剂可增加咪喹莫特的最大耐受剂量和提高患者依从性。

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