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1、(10)申请公布号 CN 102302556 A (43)申请公布日 2012.01.04 CN 102302556 A *CN102302556A* (21)申请号 201110264253.6 (22)申请日 2011.09.08 A61K 36/60(2006.01) A01N 65/08(2009.01) A01P 3/00(2006.01) A61P 9/00(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (71)申请人 南京泽朗医药科技有限公司 地址 210046 江苏省南京市栖霞区尧化街道 甘家边 108 号 05 幢 6 楼 。
2、(72)发明人 刘东锋 吴艳波 (54) 发明名称 一种从马桑中提取总黄酮的方法 (57) 摘要 本发明涉及一种从马桑中提取总黄酮的方 法， 尤其是涉及一种从马桑中提取纯化总黄酮的 制备工艺。工艺步骤包括 ： 取金钱草药材， 置于动 态连续逆流提取装置中提取， 提取液浓缩至原提 取液体积的 1/22/3， 静置去除沉淀， 再经超滤膜 去除水溶性大分子， 上大孔树脂吸附， 醇溶液洗脱 收集马桑总黄酮。 本方法具有操作简单， 设备要求 低， 制得产品纯度较高等优点。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 CN 102。
3、302557 A1/1 页 2 1.1. 一种从马桑中提取总黄酮的方法， 其特征在于， 该方法包含以下步骤 ： 1） 将马桑药材粉碎， 加入至提取釜中， 置于动态连续逆流提取装置中采用 5070% 低碳 醇提取， 提取液置于真空浓缩釜， 浓缩至原提取液体积的 1/22/3， 静置， 分离出上清液 ； 2） 将上述上清液加水稀释， 过超滤膜进行超滤， 去除水溶性大分子得超滤处理液 ； 3） 取大孔树脂湿法装柱， 将上述超滤处理液缓慢通入树脂柱， 先用水洗脱， 再用乙醇液 洗脱， 合并洗脱液， 浓缩得马桑总黄酮。 2.2.如权利要求1所述的一种从马桑中提取总黄酮的方法， 其特征在于所述步骤2） 中。
4、 的超滤膜孔径为 510nm。 3.3.如权利要求1所述的一种从马桑中提取总黄酮的方法， 其特征在于所述步骤3） 中 超滤处理液的吸附流速控制为 38ml/min。 4.4.如权利要求1所述的一种从马桑中提取总黄酮的方法， 其特征在于所述步骤3） 中 的乙醇液洗脱为 65-80% 乙醇溶液。 权 利 要 求 书 CN 102302556 A CN 102302557 A1/3 页 3 一种从马桑中提取总黄酮的方法 技术领域 0001 本发明属于天然产物分离领域， 具体是涉及一种从马桑中提取总黄酮的方法， 特 别是采用膜分离结合大孔树脂纯化马桑总黄酮的方法。 背景技术 0002 马桑 (Cori。
5、aria sinica Maxim) 为马桑科多年生落叶小乔木或灌木， 广泛分布于 地中海以东至日本、 新西兰、 中南美洲。在中国， 很多省份和地区皆有马桑的分布， 例如河 南、 四川、 贵州、 云南、 湖南、 陕西、 甘肃等。 马桑是杀虫植物之一， 对小麦蚜虫、 菜青虫及小菜 蛾、 黑肩毛胸榆叶甲、 榆叶甲、 榆三节叶蜂、 白杨叶甲等多种害虫具有拒毒、 抑制生长、 缩短 成虫寿命、 导致其产卵量下降等效应， 对马铃薯晚疫病菌、 棉花轮纹病菌及楔顶病菌等有抑 制作用。 0003 黄酮类化合物具有多方面的生物活性和药理作用， 如抗肿瘤、 抗心血管疾病、 抗炎 镇痛、 免疫等作用， 可用作药物、 。
6、抗氧化剂、 防腐剂等， 其应用开发具有广阔的前景。艾国明 等研究表明以苹果轮纹病菌为靶标， 发现马桑叶提取液对该病菌有较好的抑制作用， 在前 期分离、 结构鉴定以及室内生测的基础上， 初步确定杀菌活性物质为黄酮类化合物。 0004 目前， 对马桑的提取研究多集中在马桑内酯的提取研究， 对马桑黄酮的涉及较少。 硕士论文 “马桑化学成分研究及马桑中黄酮的生物活性研究” ， 该文献采用酸碱处理及有机 溶剂萃取等方法提取马桑黄酮， 该法产生的酸碱废液难于处理， 且工艺难以放大。 发明内容 0005 本发明的目的是提供一种从马桑中提取总黄酮的方法， 该方法操作简便， 对环境 无污染， 能耗相对小， 且制。
7、得的总黄酮的纯度较高。 0006 一种从马桑中提取总黄酮的方法， 其特征在于， 该方法包含以下步骤 ： 1） 将马桑药材粉碎， 加入至提取釜中， 置于动态连续逆流提取装置中采用 5070% 低碳 醇提取， 提取液置于真空浓缩釜， 浓缩至原提取液体积的 1/22/3， 静置， 分离出上清液 ； 2） 将上述上清液加水稀释， 过超滤膜进行超滤， 去除水溶性大分子得超滤处理液 ； 3） 取大孔树脂湿法装柱， 将上述超滤处理液缓慢通入树脂柱， 先用水洗脱杂质， 再用乙 醇液洗脱， 合并洗脱液， 浓缩得马桑总黄酮。 0007 所述步骤 1） 中的低碳醇可以为甲醇、 乙醇、 异丙醇中的一种， 用量是药材的。
8、 818 倍量。 0008 所述步骤 2） 中的超滤膜孔径为 510nm， 透过压力为 0.30.8MPa。 0009 所述步骤 3） 中超滤处理液的吸附流速控制为 38ml/min。 0010 所述步骤 3） 中的水洗液用量为 24BV， 乙醇液洗脱为 5-8BV65-80% 乙醇溶液。 0011 本发明的优势在于 ： 1） 采用动态连续逆流提取， 通过循环的提取液不断将有效成分提取出来， 缩短了提取 周期， 减少了溶剂的用量 ； 说 明 书 CN 102302556 A CN 102302557 A2/3 页 4 2） 采用浓缩脱醇后沉淀去除水不溶性杂质， 再经过超滤膜脱除水溶性大分子杂质。
9、， 经 过这些除杂处理， 减轻了杂质对树脂的干扰， 加大了树脂的处理量， 适应规模化处理的需 要 ； 3） 采用低醇上柱， 减少了大孔树脂对杂质的吸附量， 加大了大孔树脂的处理量。 0012 下面将结合具体实施方式进一步说明本发明， 但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。 具体实施方式 0013 实施例 1 ： 1） 将马桑药材粉碎， 取 3kg 药材， 分为三等份， 分别置于 3 个提取罐中， 以 3 个提取罐为 一组， 采用动态连续逆流法提取， 分别向各个提取罐中加入 8L50% 甲醇回流提取， 提取液置 于真空浓缩釜， 浓缩至原体积的 1/2， 静置， 分离出上清液 ； 2） 。
10、将上述上清液加水稀释， 过超滤膜进行超滤， 超滤膜孔径为 5nm， 透过压力为 0.8MPa 去除水溶性大分子得超滤处理液 ； 3） 取 AB-8 型大孔树脂湿法装柱， 水洗平衡后， 将上述超滤处理液缓慢通入树脂柱， 控 制吸附流速为 3ml/min， 先用 2BV 水洗脱， 再分别用 3BV65% 乙醇溶液、 5BV80% 乙醇溶液洗 脱， 合并洗脱液， 浓缩得马桑总黄酮 18.7g。 0014 实施例 2 ： 1） 将马桑药材粉碎， 取 6kg 药材， 分为六等份， 分别置于 6 个提取罐中， 以 6 个提取罐为 一组， 采用动态连续逆流法提取， 分别向各个提取罐中加入 18L70% 乙醇。
11、回流提取， 提取液 置于真空浓缩釜， 浓缩至原体积的 2/3， 静置， 分离出上清液 ； 2）将上述上清液加水稀释， 过超滤膜进行超滤， 超滤膜孔径为 10nm， 透过压力为 0.3MPa 去除水溶性大分子得超滤处理液 ； 3） 取 D001 型大孔树脂湿法装柱， 水洗平衡后， 将上述超滤处理液缓慢通入树脂柱， 控 制吸附流速为 8ml/min， 先用 4BV 水洗脱， 再分别用 2BV65% 乙醇溶液、 3BV75% 乙醇溶液洗 脱， 合并洗脱液， 浓缩得马桑总黄酮 54.7g。 0015 实施例 3 ： 1） 将马桑药材粉碎， 取 10kg 药材， 分为五等份， 分别置于 5 个提取罐中，。
12、 以 5 个提取罐 为一组， 采用动态连续逆流法提取， 分别向各个提取罐中加入 10L60% 异丙醇回流提取， 提 取液置于真空浓缩釜， 浓缩至原体积的 2/3， 静置， 分离出上清液 ； 2） 将上述上清液加水稀释， 过超滤膜进行超滤， 超滤膜孔径为 5nm， 透过压力为 0.5MPa 去除水溶性大分子得超滤处理液 ； 3） 取 AB-8 型大孔树脂湿法装柱， 水洗平衡后， 将上述超滤处理液缓慢通入树脂柱， 控 制吸附流速为 6ml/min， 先用 2BV 水洗脱， 再分别用 3BV60% 乙醇溶液、 4BV80% 乙醇溶液洗 脱， 合并洗脱液， 浓缩得马桑总黄酮 132.2g。 0016 。
13、实施例 4 ： 1） 将马桑药材粉碎， 取 10kg 药材， 分为五等份， 分别置于 5 个提取罐中， 以 5 个提取罐 为一组， 采用动态连续逆流法提取， 分别向各个提取罐中加入 12L65% 乙醇回流提取， 提取 液置于真空浓缩釜， 浓缩至原体积的 3/5， 静置， 分离出上清液 ； 说 明 书 CN 102302556 A CN 102302557 A3/3 页 5 2）将上述上清液加水稀释， 过超滤膜进行超滤， 超滤膜孔径为 10nm， 透过压力为 0.4MPa 去除水溶性大分子得超滤处理液 ； 3） 取 D001 型大孔树脂湿法装柱， 水洗平衡后， 将上述超滤处理液缓慢通入树脂柱， 控 制吸附流速为 8ml/min， 先用 4BV 水洗脱， 再分别用 3BV55% 乙醇溶液、 5BV75% 乙醇溶液洗 脱， 合并洗脱液， 浓缩得马桑总黄酮 118.1g。 说 明 书 CN 102302556 A 。