卡介菌多糖核酸制备过程中透析新工艺 【技术领域】
本发明涉及卡介菌多糖核酸原粉制备过程中透析新工艺，特别涉及到将卡介菌提取液中苯酚去除，采用中空纤维透析器透析除酚。
背景技术
卡介菌多糖核酸(BCG Polysaccharide and Nucleic)具有调节人体的免疫功能、主要用于预防和治疗慢性支气管炎、感冒、哮喘。
现有的卡介菌多糖核酸原粉制备全过程是培养基制备、接种、培养、收菌、破菌、提取、透析、精制和制备干粉。其中透析除酚这道工序，直接关系到原粉的质量以及对员工的劳动保护，是至关重要的。目前国内生产厂家一般采用这种经典的、原始的透析袋方法透析。
现有的卡介菌多糖核酸原粉制备过程中透析袋方法是：将破菌后的提取液灌入透析袋内，扎紧袋口，放入装有纯化水的容器内，进行静置透析，透析途中需定时换纯化水，直至透析外液即纯化水中用三氯化铁定性测定苯酚，测不出苯酚即透析完毕，透析时间大约需要72小时。然后再进入下一步工序，最后制得卡介菌多糖核酸原粉。更重要是由于透析袋法操作，手工灌袋近距离接触苯酚，人体皮肤易受伤害，而透析柱法不必人员直接操作，这样就避免了人体受伤害的可能。
【发明内容】
本发明提供了卡介菌多糖核酸原粉制备过程中透析新工艺，采用中空纤维透析柱进行透析，将提取液中苯酚去除，获得卡介菌菌体内的多糖和核酸。
卡介菌多糖核酸原料提取过程是：培养基制备—接种—培养—收菌—破菌—离心—透析—醇沉—精制干燥—制备原粉。
卡介菌多糖核酸原粉制备过程中透析新工艺为：
透析的具体操作步骤是：透析器有内液与外液两个通道，需要透析的液体是走内液通道，能去除杂质的纯化水是走外液通道，内通道的流向必须是由下而上，而外通道的流向是由上而下。首先取离心上清液，集中倒入一容器内，该容器内液体必须高于透析器的高度，这样可以利用位差将液体通过透析柱时能自下而上逆流而出，采用调节阀来控制流速，以每分钟20毫升恒定流量。同时开启透析柱外液通道，将纯化水接入，自上而下流出，每分钟流量控制在600～800毫升左右，内液与外液流速比为1∶30～40，外液流速的调节是根据内液流出不含苯酚为准。
测定方法：取2毫升透析内液，加一滴10％三氯化铁试液摇匀，透析液不得出现紫色反应，说明不含苯酚。然后收集不含有苯酚的流出液。一批料透析时间约为4小时，透析完毕，制备的透析液进入下一道工序，最后制得卡介菌多糖核酸原粉。
本发明由于改变了透析方式，即采用中空纤维透析柱透析，在不增加任何赋形剂，且透析的原理未改变的情况下，最后制备的原粉中酚残留和杂蛋白明显减少，从而使质量提高并完全符合检验标准，工作时间从72小时缩短至4小时，操作工从3人减至为1人，同时改善了员工的劳动保护，生产成本也下降。
然而我公司现有的制备工艺，将提取液直接通过中空纤维透析柱，自下而上逆流透析，1分钟后流出地透析内液即不含苯酚了，整批提取液通过透析柱透析时间只需4小时左右。根据用高效液相法定量测定残留苯酚，获得数据分析，透析袋比透析柱法液体中酚残留多4-5倍，由此可见用透析柱法得到的原粉质量更好，生产时间大幅度缩短，成本下降。
实施例1
将6公斤菌体加40升纯化水破菌，再加40升苯酚萃取，最后可获得提取液25升。然后把提取液倒入不锈钢容器内，再把不锈钢桶放到高位槽上，利用位差将提取液接入透析柱的内管下口，液体自下而上逆流而出，用三氯化铁测定透析内液的结果来控制流速，同时纯化水进入透析柱外管上口，自上而下流出，带走提取液中的苯酚。整个透析时间为4小时，透析完毕，制备的透析液进入下一道工序，最后制得卡介菌多糖核酸原粉。
比较实施例1
取6公斤菌体加40升纯化水破菌，再加40升苯酚萃取，最后可获得提取液25升。然后将提取液用手工方法灌入透析袋内并扎紧袋口，每支透析袋可装500毫升左右，大约可灌50支透析袋，最后把透析袋放入装有纯化水的透析池内，进行静置透析，透析中途定时换弃纯化水，直至透析袋外液即纯化水中用三氯化铁定性测定，测不出苯酚，大约需要换水10次左右，整个透析时间约72小时。然后再进入下一步工序，最后制得卡介菌多糖核酸原粉。由于人工近距离操作，难免含有苯酚的液体直接侵蚀人体皮肤，气体刺激人的呼吸系统，导致接触液体的皮肤腐蚀变白，并有头疼、口麻、恶心等症状。
新老工艺对比
名称 老工艺比较实施 例1 新工艺比较实施 例1 设备 透析袋 中空纤维透析柱 透析时间 72小时 4小时 人工 3个 1个 酚残留测定(三氯化 铁法) 阴性 阴性 劳动保护方面 接触人体皮肤伤害 不接触人体 生产成本 只能反复使用5次 再生反复使用
2008年5月对不同透析设备的验证数据
透析袋批号 苯酚(高效 液相) 杂蛋白 多糖 核酸 20080501-2 2.36μg 0.099mg 9.28mg 0.616 20080502-2 2.31μg 0.078mg 8.73mg 0.645 20080503-2 2.21μg 0.110mg 7.94mg 0.626 透析器批号 20080501-1 0.44μg 0.084mg 9.44mg 0.658 20080502-1 0.37μg 0.070mg 7.77mg 0.573 20080503-1 0.41μg 0.094mg 6.59mg 0.498
从表中可以看出采用中空纤维透析柱法与透析袋法相比较，无论从质量、人力、物力、生产时间、劳动保护等方面来说透析柱确确实实是优胜的。
本发明方法可提高卡介菌多糖核酸原粉的质量，缩短了整个生产周期，节约了生产力，降低了生产总成本。
虽然以上具体描述了本发明某些实施方案和实施例，但本领域所属技术人员应当理解，在不脱离本发明基本精神和范围的前提下可对本发明实施方案进行各种修改和替换，而这些修改和替换均应包括在本发明的等同范围内。