异噻唑酮类化合物 【发明领域】
本发明提供可用作抗病毒剂、抗炎剂和抗动脉粥样硬化剂的异噻唑酮衍生物。更具体地讲，本发明涉及二环及多环的异噻唑酮类化合物，这些化合物可用于治疗逆转录病毒、包括成髓细胞性白血病相关性病毒、鲁斯氏肉瘤病毒、人T细胞白血病病毒和HIV。这些化合物还可用于治疗炎症和动脉粥样硬化。
【发明背景】
某些具有多种药物用途、尤其是抗微生物活性的异噻唑酮类化合物是已知的。Okachi等在药物化学杂志，1985；28：1772-1779中记载了多种1，2-苯并异噻唑酮类化合物，这些化合物具有临界抗生素活性，最初是用作合成2，2′-二噻唑二(苯甲酰胺)衍生物的中间体。Carmellino等在欧洲药物化学杂志，1994；29：743-751中公开了多种用作抗菌剂和抗真菌剂的1，2-苯并异噻唑酮类化合物。Miller等在美国专利3517022中公开了2-氨基甲酰基-1，2-苯并异噻唑酮类化合物，据报道这些化合物对细菌、真菌和藻类有活性。Morley在美国专利3012039中记载了用作抗菌剂和抗真菌剂的2-烷基-1，2-苯并异噻唑酮类化合物。Sherba等在美国专利5219875中记载了含有2-未取代的1，2-苯并异噻唑啉-3-酮和碘代炔丙基丁基氨基甲酸酯的增效抗微生物组合物。Laber等在美国专利4049817中记载了含有各种2-取代和2-未取代苯并异噻唑酮类化合物的增效抗微生物组合物。
Grivos在美国专利3761489中记载了一系列取代的N-烷基苯并异噻唑酮类化合物，据报道这些化合物对细菌、真菌和酵母有活性。Grivos在美国专利3661974中记载了从2-烷氧羰基-苯基氨磺酰类化合物合成各种2-取代的1，2-苯并异噻唑啉-3-酮类化合物。据报道这些噻唑酮类化合物可用作抗菌剂和防腐剂。
在记载异噻唑酮类化合物的参考文献中，均未公开这些化合物可用于治疗和预防病毒感染、炎症或动脉粥样硬化。我们发现，异噻唑酮类化合物是很强的抗逆转录病毒剂，因此本发明的目的之一是提供预防和治疗病毒性疾病的方法，所述疾病包括由人T细胞白血病病毒、鲁斯氏肉瘤病毒、成髓细胞性白血病相关性病毒以及HIV所引起的疾病。本发明的另一目的是提供新地异噻唑酮类化合物，这些化合物特别适用于治疗HIV所引起的疾病。本发明的又一个目的是提供通过施用异噻唑酮类化合物来治疗炎症和动脉粥样硬化的方法。
发明概述
本发明提供预防和治疗逆转录病毒感染、炎症以及动脉粥样硬化的方法，该方法包括向治疗对象给予有效量的异噻唑酮类化合物。更具体地讲，本发明涉及预防和治疗逆转录病毒感染、炎症和动脉粥样硬化的方法，该方法包括施用式I的化合物、其可药用盐及溶剂化物其中：
A是含5或6个环原子的单环，或含9-12个环原子的二环，所述环原子选自碳以及选择性的最多3个选自O、S和N的杂原子；
R1和R2彼此独立地是氢、卤素、C1-C6烷基、 C3-C6环烷基、Het(CR6R7)m-、苯基-(CR6R7)m-、O-C1-C6烷基、羟基、硝基、氰基、NR3R4、NR3COR4、CO2R3、CONR3R4、S(O)mR3、SO3H、S(O)mNR3R4、COR3，或合在一起是氧代(O＝)或亚甲二氧基(-O-CH2-O-)；
m是0、1或2；
R3和R4彼此独立地是氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、Het(CR6R7)m-或苯基-(CR6R7)m-；
R6和R7彼此独立地是氢、C1-C6烷基、CO2R3、羟基、CONR3R4或氰基；
R5是氢、C1-C6烷基、COC1-C6烷基、C3-C6环烷基、苯基-(CR6R7)m-、Het(CR6R7)m-；并且
其中所述的烷基、环烷基、苯基和Het基团可以选择性地带有1-3个取代基，所述取代基选自卤素、羟基、硝基、NR3R4、NR3COR4、CO2R3、CONR3R4、S(O)mR3、S(O)mNR3R4和COR3，其中m、R3和R4如上所定义。
在优选的实施方案中，用于本发明之方法的异噻唑酮类化合物具有上述结构式I，其中A是含有6个环原子的单环，环原子中的一个或两个是选自O、S和N的杂原子；优选N。
在另一个优选实施方案中，A是含有6个环原子的单环芳环，环原子中的一个或两个是O、S或N；优选N。该组中特别优选的化合物具有如下结构式和
在另一个优选实施方案中，用于本发明之方法的异噻唑酮类化合物是式II的苯并异噻唑啉-3-酮类化合物其中
R1和R2彼此独立地是氢、卤素、C1-C6烷基或O-C1-C6烷基、R5是C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、或未取代或取代的苯基-(CR6R7)m-。
治疗病毒感染、炎症和动脉粥样硬化的特别优选的方法是应用式III的化合物其中R1是氢、卤素、烷基或烷氧，R5是被1或2个CO2R3基团取代的C1-C6烷基、或被S(O)mNR3R4取代的苯基，其中R3和R4如上所定义。
治疗病毒感染、炎症和动脉粥样硬化的另一个优选的方法是应用式IVa和式IVb的化合物其中R1、R2和R5如上所定义。
本发明还提供预防和治疗由逆转录病毒、尤其是HIV所引起的疾病的方法。
本发明的另一个实施方案是式V的新的异噻唑酮类化合物、其可药用盐及溶剂化物其中
A是含5或6个环原子的单环，或含9-12个环原子的二环，所述环原子选自碳以及选择性的最多3个选自O、S和N的杂原子；
R1和R2如上所定义；
R5如上所定义，条件是当A是全部由碳组成的单环时，R5不是氢、烷基、羟基取代的烷基、COC1-C6烷基、或未取代或当苯环上的取代基是烷基、卤素、烷氧基或NR3R4时的取代苯基-(CR6R7)m-。
本发明所提供的一组优选的化合物具有式VI的结构其中X是CH或N，R1、R2、R3和R4如上所定义。
另一组优选的化合物具有式VII的结构其中X是CH或N，R1是氢、卤素、C1-C6烷基或O-C1-C6烷基、
又一组优选的化合物具有式VIII的结构其中X、R1和R2如上所定义，R5是被1或2个CO2R3基团取代的C1-C6烷基，其中R3如上所定义，优选为氢或烷基。
特别优选的一组化合物是其中R5是羧基取代的烷基的化合物，例如式IX的化合物其中R1和R2如上所定义，X是CH或N，R5是被1或2个羧基取代的C1-C6烷基，并可以选择性地被羟基或氨基取代。特别优选其中R5是α-氨基酸残基的化合物，其中α-氨基酸的氨基是异噻唑酮环的一部分。代表性的氨基酸残基是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸、δ-羟基赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等的残基。
本发明所提供的再一组优选化合物是式X的嘧啶衍生物其中R1、R2和R5如上所定义。
发明详述
“C1-C6烷基”是指1-6个碳原子的直链或支链脂肪族基团。其例子包括甲基、乙基、异丁基、正烷基和异己基。
术语“O-C1-C6烷基”是指通过氧连接的上述烷基基团，其例子包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基、叔丁氧基等。代表性的“C3-C6环烷基”包括环丙基、环戊基、环己基等。
“Het”是含有4-10个原子的环或二环，其中的1-4个原子选自O、S或N。Het包括非芳香性的基团如吗啉代和吡咯啉代。优选的Het基团是含有1或2个杂原子的5或6元单环芳环。Het包括二环如苯并呋喃、异噻唑酮、吲哚等。代表性的Het所表示的基团包括和等。其它代表性的优选Het基团包括嘧啶、哒嗪、吡嗪、噁唑、吡唑、噻唑等。
如上所述，在R1、R2、R3、R4和R5的定义中所包括的烷基、环烷基、苯基和Het基团可以带有1-3个选自卤素、羟基、NR3COR4、CO2R3、NR3R4、CONR3R4、S(O)mR3、SO3H、S(O)mNR3R4和COR3的取代基、其中m、R3和R4如上所定义。代表性的取代烷基包括氯甲基、3-溴丙基、三氟甲基、4-羟基己基、1-羧基-2-甲基丁基、3-甲硫基丁基、4-甲磺酰基丁基、二甲氨基甲基、2，3-二溴丁基、2-氨基-3-氯-4-羧基丁基、3-乙酰氨基丙基、2-乙酰基乙基、2-甲氧羰基乙基、1，1-二乙酰基丙基等。
优选的取代烷基带有1、2或3个选自卤素、羟基和羧基的取代基。所述优选的基团包括1-溴-2-羟基丙基、1，1-二甲基-3-羟基丙基、1-羟基-2-氟甲基-3-羧基丁基、1-羧基-2-甲基丁基、1-羧基-3-甲基丁基、1，2，3-三羟基戊基等。
代表性的取代环烷基包括2-氟环丙基、2，2-二溴环丙基、2-羧基环丁基、2-氨基磺酰基环戊基、2-氨基-3-羧基环戊基和3-异丙基亚磺酰基环己基。
在以上结构式中，R1和R2可以是卤素，术语“卤素”包括氟、氯、溴和碘。R1、R2和R5可以包括苯基-(CR6R7)m-，其中的苯基可以是未取代的或被卤素、羟基、NR3R4、NR3COR4、CO2R3、CONR3R4、S(O)mR3、S(O)mNR3R4、SO3H和COR3所取代。代表性的NR3R4取代基包括氨基、甲氨基、二甲氨基、乙基异己氨基、环丙基氨基、3-吡啶基氨基、N-甲基-2-噻吩基氨基、苄氨基和3-氯苄氨基。
由NR3COR4所定义的代表性的取代基包括环丙基甲酰氨基、N-异丁基-N-环己基甲酰氨基、乙酰氨基等。由CO2R3所定义的代表性的基团包括R3表示氢时的游离羧酸，以及酯如C1-C6烷基酯、苄酯、环丁酯等。由CONR3R4所定义的酰胺取代基包括甲酰胺、N-甲基-甲酰胺和N，N-二乙基-甲酰胺。代表性的S(O)mR3取代基包括甲硫基、乙基亚磺酰基、环丙基磺酰基等。磺酰胺取代基S(O)mNR3R4包括N-甲基磺酰胺、N，N-二甲基磺酰胺等。因此，代表性的被上述取代基所取代的苯基-(CR6R7)m-基团包括：和
本发明的化合物可以是二环或三环的，例如当式I中的A是分别是单环或二环时的情况。该化合物可以带有1-3个选自O、S和N的杂原子作为A环系的一部分。本文代表性的二环和三环异噻唑酮类化合物包括：代表性的取代Het(CR6R7)m-包括：和
根据本发明用于治疗和预防逆转录病毒感染、炎症和动脉粥样硬化的化合物可以通过多种常用的合成方法中的任何一种进行制备。例如，可以按照如下反应路线将邻-卤代硫基苯甲酰卤与胺反应，该方法是Fishe和Hurni的通用方法，Arzneithmittel Forsch.，1964；14：1301：其中R1、R2和R5如上所定义，“卤”包括氯、溴、碘等。一般地，胺和卤代硫基苯甲酰卤以接近等摩尔量使用；但随需要可以使用过量的胺。当在互溶剂如甲苯、二氯乙烷或二氯甲烷中于大约0-45℃的温度下进行反应时，该反应通常在1-8小时内基本完成。如需要，可使用酸清除剂如三乙胺。产物异噻唑酮很容易通过除去反应溶剂得到分离，随需要，还可以通过结晶或色谱法进行进一步的纯化。该方法适用于所有的A环系。
另一种合成方法包括将2-取代的异噻唑酮与化合物R5L反应，其中L是离去基团例如卤素。该反应的描述如下：具体反应条件，例如溶剂、温度、摩尔比、酸清除剂等的选择与上述方法相似并且是本领域技术人员熟知的。
制备异噻唑酮类化合物的优选方法包括将2，2′-二硫代二芳酰胺通过与氧化剂如氯或溴按照如下反应路线反应进行歧化：其中R1、R2和R5如上所定义。该歧化反应需要从2，2′-二硫代二芳酰胺开始，该化合物可以从2，2′-二硫代二芳基羧酸通过以下步骤方便地制得：将所述酸与氯化剂如草酰氯或亚硫酰氯反应生成相应的酰氯，然后将酰氨与胺R5NH2反应。如下反应路线给出了代表性的合成方法：
以上合成方法中所需的2，2′-二硫代二芳基羧酸是本领域已知的，或可以通过常规方法方便地制得。常用的代表性芳基羧酸包括以下通式所表示的羧酸：
通过与氯化剂如亚硫酰氯或草酰氯反应，很容易将2，2′-二硫代二芳基羧酸转变为相应的酰氯。该反应可以在不含溶剂的条件下或在惰性有机溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、乙醚、二甲基甲酰胺等中进行。当在大约0至大约100℃的温度下进行反应时，该反应通常在1-8小时内完成。产物酰氯很容易通过例如减压蒸发除去反应溶剂和过量的氯化剂得到分离。
然后通过与式R5NH2的伯胺反应将2，2′-二硫代二芳基酰氯转变为2，2′-二硫代二芳基酰胺。常用的代表性伯胺包括烷胺和取代的烷胺，例如甲胺、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、苏氨酸、赖氨酸、天冬酰胺等。也可以使用丙氨酸和取代的丙氨酸，例如4-羟基丙氨酸、3-氨基丙氨酸、3-甲硫基丙氨酸、4-二甲基氨磺酰基丙氨酸等。通常将所述胺和酰氯以近等摩尔量在互溶剂如丙酮、二氯甲烷、四氢呋喃、甲醇等中混合。随需要，可以使用酸清除剂如吡啶、三乙胺、N-甲基吗啉等。当在大约0至大约100℃的温度下进行反应时，该反应通常在1-18小时内完成。形成的2，2′-二硫代二芳基酰胺很容易通过减压蒸发除去反应溶剂和任何过量的反应剂得到分离，通常不需要进一步的纯化。
可以通过两种方法将2，2′-二硫代二芳基甲酰胺转变为本发明的异噻唑酮类化合物。该甲酰胺很容易与氧化剂如溴或氯反应而环化成相应的异噻唑酮类化合物。该氧化反应通常通过将过量的氯或溴与甲酰胺在适宜的溶剂如卤代烃、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺等溶剂中于大约0℃至大约5℃的低温下混合来进行。产物异噻唑酮在室温下通常为固体并通常从反应混合物中沉淀出来。可以通过过滤将其回收，并随需要通过常规的方法例如用碳酸氢钠水溶液等洗涤、用常规溶剂如丙酮、乙醇、乙酸乙酯等结晶进行进一步的纯化。
从2，2′-二硫代二芳基甲酰胺制备异噻唑酮类化合物的另一种方法包括首先将中间体二硫代二芳基甲酰胺转变为相应的芳基硫醇甲酰胺衍生物，然后将硫醇和甲酰胺环化形成最终产物。该反应路线如下所述：将中间体二硫代二芳基甲酰胺与还原剂二硫苏糖醇(DTT)在互溶剂如二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二氧六环等中进行反应。反应一般在大约10℃至大约30℃的温度下进行，通常在大约0.5至大约4小时内完成。产物芳基硫醇甲酰胺通常不经分离，不需蒸除任何反应溶剂。
芳基硫醇甲酰胺还可以从易得的2-羟基甲酸按照以下反应路线制备：在该方法中，将2-羟基甲酸与过量的常规氯化剂如亚硫酰氯或五氯化磷在惰性有机溶剂如二氨乙烷、氯仿、氯乙烷、甲苯等中、于大约25℃至大约60℃的温度下反应。产物2-氯代酰氯衍生物很容易通过例如减压蒸发除去反应溶剂和过量氯化剂得到分离。然后将该氯代酰氨与伯胺R5NH2在惰性有机溶剂如氯仿、二氯甲烷、氯乙烷等中反应。代表性的常用伯胺包括天然α-氨基酸如甘氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、天冬氨酸等。可以加入叔胺和芳胺如三乙胺、吡啶或N-甲基吗啉作为反应过程中形成的盐酸的酸清除剂。形成的氯代甲酰胺很容易通过除去反应溶剂得到分离，并可以通过常规方法如结晶、色谱法等进一步纯化。然后将氯代甲酰胺与硫氢化钠在极性溶剂如甲醇、乙醇、异丙醇等中反应生成相应的2-硫醇甲酰胺衍生物。
然后将芳基硫醇甲酰胺与一种试剂反应进行环化。代表性的常用试剂包括氨羰基硫化氯、碘、溴等。该环化反应的进行包括将等摩尔量的硫醇甲酰胺和环化剂在惰性有机溶剂如四氢呋喃等中混合，然后将该混合物在大约0℃至大约30℃的温度下搅拌大约0.5至大约18小时。产物异噻唑酮一般以沉淀的形式生成，可以通过过滤方便地分离，随需要还可以通过结晶、色谱法等进一步纯化。
许多式I所包括的化合物可以带有功能性取代基(例如R1和R2)，需要将这些取代基衍生以避免在合成过程中发生不利的副反应。所述功能性取代基包括，例如羟基、氨基，尤其是伯胺和仲胺基、羧基。例如，为了防止羟基发生不利的副反应，当在分子的其它位点进行化学反应时，通常需要将其转变为保护的羟基如醚或酯。随后除去羟基保护基得到游离的羟基。可以将氨基和羧基进行类似的保护以防止它们发生不利的副反应。通常将羧基转变为酯如叔丁酯、苄酯或对硝基苄酯等。一般对氨基进行酰化(例如用乙酰氯等)，或用三甲基硅烷基或叔丁基二甲基硅烷基进行硅烷化。代表性的保护基、连接和脱除它们的方法详细记载于Greene和Wuts，有机合成中的保护基，John Wiley和Sons，New York，(第2版；1991)，和McOmie，有机化学中的保护基，Plenum Press，New York，1973。
许多式I的异噻唑酮类化合物可以形成可药用盐，包括酸加成盐和碱盐，以及溶剂化物如水合物和醇化物。本发明完成了所有这些药物形式并均包括在本发明的范围内。当式I化合物中含有氨基取代基或在A环上存在氮原子时，可以很容易地形成酸加成盐。当存在羧酸取代基时，例如当R5是羧基取代的烷基如羧甲基等时，可以形成碱盐。
式I化合物的可药用酸加成盐包括与无机酸如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸等形成的盐，以及与有机酸如一元和二元脂肪酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、链烷双酸等形成的盐。所述的盐包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、辛酸盐、己丁酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐等。还包括氨基酸如精氨酸等的盐以及葡糖酸盐、半乳糖酸盐(参见，例如Berge S.M.等，“药物的盐”，药学杂志，1977；66：1-19)。
碱性化合物的酸加成盐通过将游离碱与足量的所需酸以常规方式接触成盐来制备。通过将盐形式与碱接触并将游离碱以常规方式分离可以使游离碱形式再生。游离碱形式与其盐形式的某些物理性质例如在极性溶剂中的溶解度不同，但对于本发明的目的，这些盐与其游离碱是等同的。
可药用碱加成盐与金属或胺形成，例如碱金属和碱土金属或有机胺。用作阳离子的金属的例子是钠、钾、镁、钙等。适宜的胺的例子是N，N′-二苄基乙二胺、氯代普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺和普鲁卡因(参见，例如Berge S.M.等，“药物的盐”，药学杂志，1977；66：1-19)。
酸性化合物的碱加成盐通过将游离酸与足量的所需碱以常规方式接触成盐来制备。通过将盐形式与酸接触并将游离酸以常规方式分离可以使游离酸形式再生。游离酸形式与其盐形式的某些物理性质例如在极性溶剂中的溶解度不同，但对于本发明的目的，这些盐与其游离酸是等同的。
许多式I的异噻唑酮类化合物含有一个或多个不对称碳原子，从而可以以光学活性的形式存在。例如，优选的一组化合物是其中R5是α-氨基酸如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、苏氨酸等的残基的化合物。这些基团带有一个或多个不对称中心。可以通过常规方法将外消旋体拆分成它们各自的对映体，所述方法包括分级结晶、高效液相色谱、不对称合成等。外消旋体以及单独的对映体均包括在本发明的范围内。
尽管本发明的形式构成了本文的优选实施方案，但许多其它形式也是可行的。本文并不打算提及所有可能的等同形式或由本发明衍生出的内容。应当理解，本文所用的术语仅仅是说明性的而并非限定性的，并且可以在不偏离本发明实质和范围前提下进行各种改变。
以下详细实施例说明本发明的具体实施方案。这些实施例是用来一般性地说明如何制备和应用本发明，并不是想以任何方式进行限定。
除非另有说明，所有试剂均来自商业途径。许多用作原料的芳基硫醇甲酰胺类化合物是已知的或可以通过下述方法制得，例如，Bell，美国化学会志，1942：2905，Carmellino等，欧洲药物化学杂志，1994；29：743-751，Bennett等，Organic Prep.and Proced.Iht.，1974；6(6)：287-293，以及Vitali等，IlFarmaco Ed.Sc.，1968；23：468-476。将这些文献引入本文作为合成芳基硫醇甲酰胺类化合物的参考。
制备例12，2′-二硫代二苯甲酰氯
将2，2′-二硫代二苯甲酸(25g，81.6mmol)在350ml亚硫酰氯中的混合物加热回流18小时。将得到的溶液冷却并真空除去过量的亚硫酰氯。将固体粗品在己烷中形成浆料，过滤回收得到21.2g标题化合物，mp150-151℃。该化合物不经纯化直接使用。
制备例22，2′-二硫代二[5-氟苯甲酰氯]
将2，2′-二硫代二[5-氟苯甲酸](5.0g，14.6mmol)和亚硫酰氨(40ml)的混合物按照上述方法反应得到4.9g 2，2′-二硫代二[5-氟苯甲酰氯]。该化合物不经纯化直接使用。
制备例32，2′-二硫代二[5-甲氧基苯甲酰氯]
将2，2′-二硫代二[5-甲氧基苯甲酸](0.8g，2.0mmol)和亚硫酰氯(10ml)的混合物按照上述方法反应得到0.8g 2，2′-二硫代二[5-甲氧基苯甲酰氯]。该化合物不经纯化直接使用。
制备例42，2′-二硫代二[5-甲基苯甲酰氯]
将2，2′-二硫代二[5-甲基苯甲酸](0.6g，1.8mmol)和亚硫酰氯(10ml)的混合物按照上述方法反应得到0.3g 2，2′-二硫代二[5-甲基苯甲酰氯]。该化合物不经纯化直接使用。
制备例52，2′-二硫代二[4-氟苯甲酰氯]
将2，2′-二硫代二[4-氟苯甲酸](5.0g，14.6mmol)和亚硫酰氯的混合物按照上述方法反应得到4.1g 2，2′-二硫代二[4-氟苯甲酰氯]。该化合物不经纯化直接使用。
制备例62，2′-二硫代二[4-甲氧基苯甲酰氯]
将2，2′-二硫代二[4-甲氧基苯甲酸](2.2g，6.6mmol)和亚硫酰氯(20ml)的混合物按照上述方法反应得到2.1g 2，2′-二硫代二[4-甲氧基苯甲酰氯]。无需进一步纯化。
制备例72，2′-二硫代二[4-甲基苯甲酰氯]
将2，2′-二硫代二[4-甲基苯甲酸](3.8g，11.9mmol)和亚硫酰氯(50ml)的混合物按照上述方法反应得到3.6g 2，2′-二硫代二[4-甲基苯甲酰氯]。该化合物不经纯化直接使用。
制备例82，2′-二硫代二[吡啶-3-甲酰氯]
将2，2′-二硫代二[吡啶-3-甲酸](1.5g，4.8mmol)和亚硫酰氯(20mL)的混合物按照前述方法反应得到1.3 g 2，2′-二硫代二[吡啶-3-甲酰氯]。该产物不经纯化即可使用。
制备例92，2′-二硫代二[4′-氨磺酰基-N-苯甲酰苯胺](一般方法)
将制备例1的2，2′-二硫代二苯甲酰氧(5.0g，14.0mmol)的50mL二氯甲烷溶液滴加到冷却到0℃的4-(氨基磺酰基)-苯胺(6.2g，36.0mmol)的125mL吡啶溶液中。混合物搅拌18小时，滤出所得固休，用1NHCl、水洗涤，真空干燥得到7.6g粗产物。将该粗品(6.5g)悬浮在50mL二甲基甲酰胺/60mL乙醇中，过滤，然后加入10mL 4％NaHCO3水溶液从滤液中析出沉淀。过滤收集产物，用乙醇和水洗涤得到4.3g标题化合物，mp311-312℃。
制备例102，2′-二硫代二[4′-氨磺酰基-(4-甲氧基-N-苯甲酰苯胺)]
按照制备例9中的一般方法，用2，2′-二硫代二[4-甲氧基苯甲酰氯](1.1g，2.7mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液和4-(氨基磺酰基)-苯胺(1.1g，6.8mmol)的吡啶(15mL)溶液制备该化合物。粗产物用二甲基甲酰胺、乙醇和水重结晶得到0.8g标题化合物。
制备例112，2′-二硫代二[4′-氨磺酰基-(4-甲基-苯甲酰苯胺)]
按照制备例9中的一般方法，用2，2′-二硫代二[4-甲基苯甲酰氯](2.0g，5.5mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液和4-(氨基磺酰基)-苯胺(3.4g，19.9mmol)的吡啶(40mL)溶液制备该化合物。粗产物用二甲基甲酰胺、乙醇和水重结晶得到2.1g标题化合物。
制备例122，2′-二硫代二[4′-氨磺酰基-(4-氟苯甲酰苯胺)]
按照制备例9中的一般方法，用2，2′-二硫代二[4-氟苯甲酰氨](2.0g，5.2mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液和4-(氨基磺酰基)-苯胺(2.2g，13.9mmol)的吡啶(30mL)溶液制备该化合物。粗产物用二甲基甲酰胺乙醇和水重结晶得到2.6g标题化合物。
制备例132，2′-二硫代二[4′-氨磺酰基-N-(5-甲基-苯甲酰苯胺)]
按照制备例9中的一般方法，用2，2′-二硫代二[4-甲基苯甲酰氯](2.0g，5.3mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液和4-(氨基磺酰基)-苯胺(2.3g，13.3mmol)的吡啶(30mL)溶液制备该化合物。粗产物用二甲基甲酰胺、乙醇和水重结晶得到1.8g标题化合物。
制备例14[S-(R★，R★)]-2-[2-[2-(1-叔丁氧羰基-3-甲基-丁基氨基甲酰基)-5-甲氧基-苯基双磺酰基]-4-甲氧基-苯甲酰氨基]-4-甲基-戊酸叔丁基酯(一般方法)
将制备例9的2，2′-二硫代二[4-甲氧基苯甲酰氯](1.1g，2.7mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液滴加到冷却至0℃-5℃的L-亮氨酸叔丁酯一盐酸盐(1.5g，6.8mmol)和N-甲基吗啉(1.6mL，14.0mmol)的25mL二氯甲烷溶液中。将得到的溶液搅拌18小时，然后加热到室温(25℃)。将该混合物用0.5NHCl、水、8％NaHCO3水溶液和盐水提取。有机层用硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩。粗产物用乙酸乙酯重结晶得到1.2g标题化合物。
制备例15[S-(R，R★)]-2-[2-[2-(1-叔丁氧羰基-3-甲基-丁基氨基甲酰基)-4-氟-苯基双磺酰基]-5-氟苯甲酰氨基]-4-甲基-戊酸叔丁酯
按照制备例14的一般方法，用2，2′-二硫代二[5-氟苯甲酰氯](2.0g，5.2mmol)的20mL二氯甲烷溶液，L-亮氨酸叔丁酯一盐酸盐(2.5g，11.4mmol)和N-甲基吗啉(1.4mL，12.5mmol)的30 mL二氯甲烷溶液制备该化合物。粗产物用乙酸乙酯中重结晶得到1.8g标题化合物。
制备例16[S-(R★，R★)]-2-[2-[2-(1-叔丁氧羰基-3-甲基-丁基氨基甲酰基)-5-甲基-苯基双磺酰基]-5-氟苯甲酰氨基]-4-甲基-戊酸叔丁酯
按照制备例14的一般方法，用2，2′-二硫代二[4-甲基苯甲酰氯](1.8g，7.8mmol)的20mL二氯甲烷)溶液，L-亮氨酸叔丁酯一盐酸盐(4.0g，17.9mmol)和N-甲基吗啉(4.6mL，41mmol)的30mL二氯甲烷溶液制备该化合物。粗产物用乙酸乙酯重结晶得到1.9g标题化合物。
制备例17[S-(R★，R★)]-2-[[2-[3-(1-叔丁氧羰基-3-甲基-丁基氨基甲酰基)-吡啶-2-基双磺酰基]-吡啶-3-羰基]-氨基]-4-甲基-戊酸叔丁酯
按照制备例14的一般方法，用2，2′-二硫代二[3-吡啶-3-甲酰氯](0.8g，2.1mmol)的10mL二氯甲烷溶液和L-亮氨酸叔丁酯一盐酸盐(1.5g，5.7mmol)的20mL吡啶溶液制备该化合物。粗产物用乙酸乙酯重结晶得到1.9g标题化合物。
制备例18[S-(R★，R★)]-2-[2-[2-(1-羧基-2-甲基丁基氨基甲酰基)苯基双磺酰基]-苯甲酰氨基]-3-甲基戊酸叔丁酯
10.0g(53.2mmol)L-异亮氨酸叔丁基酯的100mL二氯甲烷溶液与5.6g(55.0mmol)的N-甲基吗啉混合。将所得溶液冷却到0℃，迅速滴加8.3g(24.2mmol)2，2′-二硫代二苯甲酰氯(来自制备例1)的100mL二氯甲烷溶液进行反应，保持温度在0℃以下。将混合物在0℃搅拌1小时，然后在室温搅拌18小时。滤出形成的固体，用水洗涤，然后真空干燥，得到6.5g标题化合物。用水、0.5M盐酸、水洗涤滤液，干燥(MgSO4)，过滤，然后真空蒸发得到另外6.9g纯度相当的标题化合物。
制备例19[S-(R★，R★)]-2-[2-[2-(1-羧基-2-甲基-丁基氨基甲酰基)-苯基双磺酰基苯甲酰氨基]-3-甲基戊酸
将13.2g(20.5mmol)的叔丁基酯(制备例18)的50mL三氟乙酸溶液在室温搅拌18小时。真空除去溶剂，残余物溶解在50mL二氯甲烷中。真空除去二氯甲烷，残余物用150mL乙醚/戊烷(2∶1v/v)研制，然后滤出所得固体。依次用50mL乙醚/戊烷(2∶1)、戊烷洗涤后，真空干燥固体，得到9.9g标题化合物，mp211-213℃。
制备例20[S-(R★，R★)]-2-[2-[2-(1-羧基-3-甲基-丁基氨基甲酰基)-5-甲氧基-苯基双磺酰基]-4-甲氧基苯甲酰氨基]-4-甲基-戊酸(一般方法)
将[S-(R★，R★)]-2-[2-[2-(1-叔丁氧羰基-3-甲基-丁基氨基甲酰基)-5-甲氧基苯基双磺酰基]-4-甲氧基苯甲酰氨基]-4-甲基-戊酸叔丁酯(1.2g，1.7mmol)和茴香醚(1mL)的二氯甲烷溶液冷却到约0℃，滴加10mL三氟乙酸进行处理。4小时后，加入5mL甲苯，真空除去溶剂。粗产物用甲醇/水重结晶得到0.7g标题化合物。
制备例21[S-(R★，R★)]-2-[2-[2-(1-羧基-3-甲基-丁基氨基甲酰基)-4-氟苯基双磺酰基]-5甲氧基苯甲酰氨基]-4-甲基-戊酸
用[S-(R★，R★)]-2-[2-[2-(1-叔丁氧羧基-3-甲基-丁基氨基甲酰基)-4-氟苯基双磺酰基]-5-氟苯甲酰氨基]-4-甲基-戊酸叔丁酯(1.8g，2.6mmol)的20mL二氯甲烷溶液、茴香醚(2mL)和20mL三氟乙酸完成制备例20的一般方法。粗产物用甲醇/水重结晶得到0.9g标题化合物。
制备例22[S-(R★，R★)]-2-[2-[-(1-羧基-3-甲基-丁基氨基甲酰基)-5-甲基苯基双磺酰基]-4甲基苯甲酰氯基]-4-甲基-戊酸
用[S-(R★，R★)]-2-[2-[2-(1-叔丁氧羧基-3-甲基-丁基氨基甲酰基)-5-甲基-苯基双磺酰基]-4-甲基-苯甲酰氨基]-4-甲基-戊酸叔丁酯(1.9g，2.8mmol)的20mL二氯甲烷溶液、茴香醚(2.0mL)和10mL三氟乙酸完成制备例20的一般方法。粗产物用甲醇/水重结晶得到1.1g标题化合物。
制备例23[S-(R★，R★)]-2-[[2-[3-(1-羧基-3-甲基-丁基氨基甲酰基)-吡啶-2-基-双磺酰基]-吡啶-3-羰基]-氨基]-4-甲基-戊酸
用[S-(R★，R★)]-2-[[2-[3-(1-叔丁氧羧基-3-甲基-丁基氨基甲酰基)-吡啶-2-基双磺酰基]-吡啶-3-羰基]-氨基]-4-甲基-戊酸叔丁酯(1.9g，2.9mmol)的20mL二氯甲烷溶液、茴香醚(1.5mL)和10mL三氟乙酸完成制备例20的一般方法。粗产物用甲醇/水重结晶得到1.2g标题化合物。
制备例242-氯5-硝基苯甲酰胺
将2-氯-5-硝基苯甲酸(15.0g，74.0mmol)和200mL二氯甲烷的混合物与草酰氨(16.2mL，186.0mmol)和催化量的二甲基甲酰胺反应。将混合物在25℃搅拌3小时。真空除去溶剂，残余物再溶于200mL二氯甲烷中。将溶液冷却0℃，将氨通入冷溶液中5分钟，使产物析出沉淀。过滤收集产物，得到6.8g，mp174-175℃。
制备例252，2′-二硫代二(5-硝基苯甲酰胺)
回流下，向制备例24的2-氯5-硝基苯甲酰胺(6.8g，33.0mmol)的90mL乙醇溶液中分批添加硫化钠水合物，Na2S(9H2O)(2.6g，20.5mmol)和硫(0.7g，20.5mmol)。将混合物加热回流1小时，然后冷却到室温，使形成固体。过滤收集固体得到2.6g标题化合物，mp266-269℃。
制备例26 2，2′-二硫代二(5-氨基苯甲酰胺)
回流下，将2，2′-二硫代二(5-硝基苯甲酰胺)(2.6g，7.0mmol)分批添加到还原铁(8.7g)在含0.1mL乙酸的65mL水的浆料中。将所得溶液回流加热2.0小时，然后冷却到室温。加入14mL 1N NaOH调至强碱性(pH11)。过滤碱性混合物，将乙酸加到所述溶液中，将pH调到7.0。将氧通到溶液中，加入乙酸保持pH＝6-7。当pH逐渐稳定时开始有固体形成。过滤回收产物(1.1g)，mp188-190℃。
制备例27 2.2′-二硫代二(5-乙酰氨基)苯甲酰胺
在蒸汽浴中，将2，2′-二硫代二(5-氨基苯甲酰胺)(1.1g，3.4mmol)溶解于6mL冰乙酸中，然后与乙酸酐(0.7mL，7.2mmol)反应。在冷却过程中，从溶液中沉淀出产物。再加入4mL的冰乙酸和0.1mL乙酸酐，将混合物加热回流30分钟，然后冷却到室温。过滤回收粗产物，用二甲基甲酰胺/二甲亚砜/水重结晶，得到0.8g标题产物，mp301-303℃。
制备例282，2′-二硫代二[N-[4-[(乙酰氨基)磺酰基]苯基]苯甲酰胺
按照制备例9的一般方法，用2，2′-二硫代二苯甲酰氯(3.0g，8.0mmol)的30mL二氨甲烷溶液和4-[(乙酰氨基)磺酰基]苯胺(5.6g，26.0mmol)的100mL吡啶溶液制备化合物。用氯仿/甲烷(1∶1v/v)为流动相，在硅胶柱上纯化粗产物。收集纯馏份，真空浓缩，固体用乙醇/水(1∶1v/v)结晶，得到0.5g的标题化合物，mp180-182℃。
制备例292-巯基-N-(4-氨磺酰基苯基)苯甲酰胺
将2，2′-二硫代二[4′-氨磺酰基苯甲酰苯胺](0.1g，0.2mmol)溶解在4mL二甲基甲酰胺和1.6mL 2.7％的NaH2PO4水溶液中。加入二硫苏糖醇(0.1g，0.7mmol)，将混合物在25℃搅拌0.5小时。加入甲酸(10mL 10％水溶液)以沉淀产物，然后过滤收集，用水和乙醚洗涤，得到72mg标题化合物，mp230-231℃。
制备例302-[2-[2-(羧甲基氨甲酰基)-苯基双磺酰基]-苯甲酰氨基]乙酸
向18g(0.24mol)甘氨酸的75mL无水乙醇中加入100mL通过溶解4.6g(0.2mol)钠而制备的乙醇钠溶液。将混合物冷却到-60℃，然后分批添加17.2g(0.05mol)2，2′-二硫代二苯甲酰氯。将混合物加热到室温，搅拌过夜。过滤除去固体，用2NHCl酸化滤液。收集固体，溶解在碳酸氢钠溶液中，然后过滤溶液。用HCl酸化滤液，然后收集固体，在110℃干燥24小时，得到6.8g标题化合物，mp213-215℃。
制备例312-[2-[2-(1-羧基-2-甲基丙基氨甲酰基)-苯基双磺酰基]-苯甲酰氨基]-3-甲基丁酸
用制备例30中的方法，将17.8g(0.15mol)D，L缬氨酸与17.2g(0.05mol)2，2′-二硫代二苯甲酰氯反应，用乙酸重结晶后得到11.4g标题化合物，mp226.5-227.5℃。
制备例324-[2-[2-(3-羧丙基氨基甲酰基)苯基双磺酰基]-苯甲酰氨基]丁酸
按照制备例30的方法，将16g(0.15mol)4-氨基-丁酸与10.8g(0.03mol)二硫代二苯甲酰氯反应，得到7.14g标题化合物。
制备例338-氯-[1，3]二氧戊环并[4，5-g]喹啉-7-羧酸(2-吡啶-2-基-乙基)-酰胺
向23.3g(0.10mol)8-羟基-[1，3]二氧戊环并[4，5-g]喹啉-7-羧酸(药物化学杂志，1968；11：160)的500mL二氯乙烷溶液中加入35mL(0.47mol)亚硫酰氯和1 mL DMF。将混合物加热回流过夜，浓缩到100mL，收集固体，得到18.7g 8-氯-[1，3]二氧戊环并[4，5-g]喹啉-7-甲酰氯。不用纯化就可使用该化合物。向13.5g(～0.05mol)该物质的1000mL二氯乙烷溶液中加入10mL(0.07mol)的三乙胺，然后将混合物冷却到15℃。向该混合物中加入6.25g(0.51mol)2-(2-氨基乙基)吡啶，将混合物在室温搅拌24小时。加入500mL H2O终止反应。用水洗涤有机层，干燥(MgSO4)，然后浓缩，得到16g标题化合物，mp145-146℃。
制备例348-巯基-[1，3]二氧戊环并[4，5-g]喹啉-7-羧酸(2-吡啶-2-基-乙基)-酰胺
向10.4g(0.025mol)8-氯-[1，3]二氧戊环并[4，5-g]喹啉-7-羧酸(2-吡啶-2-基-乙基)-酰胺的100mL乙醇溶液中加入7.2g(0.1mol)硫氢化钠，将混合物加热回流3小时。冷却混合物，过滤固体，用乙醇洗涤，然后用水洗涤。浓缩滤液，将固体悬浮在水中，通过过滤收集，然后用乙醇重结晶，得到6.8g标题化合物，mp258-260℃。
制备例354-氯-2-苯基-嘧啶-5-羧酸(2-二乙氨基-乙基)-酰胺
用制备例33的方法，将15.5g(0.072mol)4-羟基-2-苯基-嘧啶-5-羧酸(药物化学杂志，1963；7∶68)与8.5g(0.073mol)2-二乙氨基乙胺反应，用甲苯重结晶后得到18g标题化合物，mp40-45℃。
制备例364-巯基-2-苯基-嘧啶-5-羧酸(2-二乙氨基-乙基)-酰胺
用制备例34的方法，将6.4g(0.02mol)4-氨-2-苯基-嘧啶-5-羧酸(2-二乙氨基-乙基)酰胺与4.8g(0.066mol)硫氢化钠反应，得到4.2g标题化合物，mp178-180℃。
制备例375-氯-3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-羧酸(2-吡啶-2-基-乙基)-酰胺
用制备例33的方法，将28.4g(0.13mol)5-羟基-3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-羧酸与15.9g(0.13mol)2-(2-氨基乙基)吡啶反应，得到标题化合物，不用纯化就可使用该化合物。
制备例385-巯基-3-甲基-1-苯基-1-吡唑-4-羧酸(2-吡啶-2-基-乙基)-酰胺
用制备例34的方法，将29.3g(0.087mol)5-基-3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-羧酸(2-吡啶-2-基-乙基)-酰胺与纤溶剂中的19.3g(0.27mol)硫氢化钠反应，得到24.0g标题化合物，不用纯化就可在实施例22中使用该化合物。
制备例394-氯-2-二甲氨基-嘧啶-5-羧酸苄基酰胺
用制备例33的方法，将61.6g(0.337mol)2-二甲氨基-4-羟基-嘧啶-5-羧酸与37g(0.34mol)2-氨基甲基吡啶反应，得到14.3g的标题化合物，不用纯化就可使用该化合物。
制备例402-二甲氨基-4-巯基-嘧啶-5-羧酸苄基酰胺
用制备例34的方法，将14.3g(0.045mol)4-氯-2-二甲氨基-嘧啶-5-羧酸苄基酰胺和12g(0.21mol)硫氢化钠反应，得到5.7g的标题化合物，mp175-178℃。
制备例414-氯-2-苯基-嘧啶-5-羧酸苄基酰胺
用制备例33的方法，将31.0g(0.143mol)4-羟基-2-苯基-嘧啶-5-羧酸与60mL(0.82mol)亚硫酰氯反应，得到37.8g粗氯代酰氯。将5.0g(19.8mmol)酰氯与2.12g(19.8mmol)苄胺反应，得到6.27g标题化合物，不用纯化就可使用该化合物。
制备例424-巯基-2-苯基-嘧啶-5-羧酸苄基酰胺
用制备例34的方法，将5.8g(17.9mmol)4-基-2-苯基-嘧啶-5-羧酸苄基酰胺与5.1g(72mmol)硫氢化钠反应，得到3.75g标题化合物，mp189-193℃。
实施例14-(3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑-2-基)-苯磺酰胺
向冷却到0℃的60mL甲醇和60mL四氢呋喃溶液中滴加3.9g(30.0mmol)氯羰基亚磺酰氯。将混合物在0℃搅拌20分钟，然后加入9.0g(29.2mmol)2-硫代-N-(4-氨磺酰基苯基)苯甲酰胺稀释。将反应混合物在0℃搅拌0.5小时，加热到室温，然后搅拌18小时。用200mL乙醚稀释悬浮液，搅拌1小时，滤出固体。用新鲜乙醚洗涤后，真空干燥固体，得到7.8g的标题化合物。通过浓缩母液并用乙醚研制残余物还可得到2.2g。两部分的mp均为283-285℃。
实施例2[S-(R★，R★)]-3-甲基-2-(3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑-2-基)-戊酸
向搅拌中的5.3g(10.0mmol)[S-(R★，R★)]-2-[2-[2-(1-羧基-2-甲基-丁基氨基甲酰基)-苯基双磺酰基苯甲酰氨基]-3-甲基戊酸(制备例19)的200mL二氯甲烷悬浮液中滴加2.4g(15.0mmol)液溴。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后真空浓缩至干。用二氯甲烷研制残余物。真空蒸除二氯甲烷以除去过量的溴。将残余物在二氯甲烷/5％碳酸氢钠水溶液(各200mL)之间进行分配。分出水层，用新鲜二氯甲烷洗涤，用6.0M盐酸酸化到pH1.5。用二氯甲烷提取(2×75mL)酸性水溶液。合并有机层，用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩至干，得到4.8g标题化合物，mp50-52℃。
实施例3N-乙酰基-4-(3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑-2-基)-苯磺酰胺(一般方法)
将2，2′-二硫代二[N-[4-[[乙酰氨基]磺酰基]苯基]苯甲酰胺(1.0g，1.5mmol)的1mL二甲基甲酰胺溶液用20mL二氯甲烷稀释，在此过程中形成细沉淀。将溴(0.3g，1.8mmol)的5mL二氨甲烷溶液滴加到混合物中。逐渐形成均匀的溶液，然后再形成固体。过滤收集固体，用乙酸/水(1∶1v/v)重结晶，得到0.6g标题化合物，mp254-255℃。
实施例4N-(3-氧代-2，3-二氢-苯并[d]异噻唑-5-基)-乙酰胺
按照实施例3的一般方法，将2，2′-二硫代二[5-乙酰氨基]苯甲酰胺(2.0g，4.8mmol)在4mL二甲亚砜和20mL二氯甲烷中的浆液与溴(0.8g，5.0mmol)的10mL二氯甲烷溶液反应。过滤收集固体，用5mL热乙酸重结晶，得到0.8g标题化合物。
实施例54-(5-甲氧基-3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑-2-基)-苯磺酰胺
按照实施例3的一般方法，将2，2′-二硫代二[4-氨磺酰基-(5-甲氧基-N-苯甲酰苯胺)](0.8g，1.2mmol)在2mL二甲基甲酰胺和20mL二氯甲烷中的浆液与溴(0.2g，1.3mmol)的10mL二氯甲烷溶液反应。用甲醇/水重结晶粗产物，得到0.2g标题化合物。
实施例64-(6-甲基-3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑-2-基)-苯磺酰胺
按照实施例3的一般方法，将2，2′-二硫代二[4′-氨磺酰基-(4-甲基-N-苯甲酰苯胺)](2.1g，3.2mmol)(制备例11)在4mL二甲基甲酰胺/40mL二氯甲烷中的浆液与溴(0.6g，3.6mmol)的15mL二氯甲烷溶液反应。用甲醇/水重结晶粗产物，得到0.9g标题化合物。
实施例74-(6-氟-3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑-2-基)-苯磺酰胺
按照实施例3的一般方法，将2，2′-二硫代二[4′-氨磺酰基-(4-氟苯甲酰苯胺)](1.8g，2.7mmol)(制备例12)在4mL二甲基甲酰胺和30mL二氯甲烷中的浆液与溴(0.5g，3.2mmol)的20mL二氯甲烷溶液反应。用甲醇/水重结晶粗产物，得到1.1g标题化合物，mp265-266℃。
实施例84-(5-甲基-3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑-2-基)-苯磺酰胺
按照实施例3的一般方法，将2，2′-二硫代二[4′-氨磺酰基-N-(5-甲基-苯甲酰苯胺)](1.1g，1.7mmol)(制备例13)在2mL二甲基甲酰胺和20mL二氯甲烷中的浆液与溴(0.3g，1.9mmol)的10mL二氯甲烷溶液反应。用甲醇/水重结晶粗产物，得到0.4g标题化合物。
实施例9(S)-4-甲基-2-(6-甲氧基-3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑-2-基)-戊酸
按照实施例3的一般方法，将[S-(R★，R★)]-2-[2-[2-(1-羧基-3-甲基-丁基氨基甲酰基)-5-甲氧基-苯基双磺酰基]-4-甲氧基苯甲酰氨基]-4-甲基-戊酸(1.4g，2.3mmol)(制备例20)在4mL乙腈和10mL二氯甲烷中的浆液与溴(0.4g，2.6mmol)的10mL二氯甲烷溶液反应。用甲醇/水重结晶粗产物，得到0.8g标题化合物。
实施例10(S)-4-甲基-2-(5-氟-3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑-2-基)-戊酸
按照实施例3的一般方法，将[S-(R★，R★)]-2-[2-[2-(1-羧基-3-甲基-丁基氨基甲酰基)-4-氟苯基双磺酰基]-5甲氧基苯甲酰氨基]-4-甲基-戊酸(2.1g，3.6mmol)(制备例21)在8mL乙腈和25mL二氯甲烷中的浆液与溴(0.7g，4.4mmol)的15mL二氯甲烷溶液反应。用甲醇/水重结晶粗产物，得到1.4g标题化合物，mp161-162℃。
实施例11(S)-4-甲基-2-(6-甲基-3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑-2-基)-戊酸
按照实施例3的一般方法，将[S-(R★，R★)]-2-[2-[-(1-羧基-3-甲基-丁基氨基甲酰基)-5-甲基苯基双磺酰基]-4甲基苯甲酰氨基]-4-甲基-戊酸(1.8g，3.2mmol)(制备例22)在5mL乙腈和20mL二氯甲烷中的浆液与溴(0.6g，3.7mmol)的10mL二氯甲烷溶液反应。用甲醇/水重结晶粗产物，得到1.3g标题化合物。
实施例12(S)-4-甲基-2-(3-氧代-3H-异噻唑并[5，4-b]吡啶-2-基)-戊酸
按照实施例3的一般方法，将([S-(R★，R★)]-2-[[2-[3-(1-羧基-3-甲基-丁基氨基甲酰基)-吡啶-2-基-双磺酰基-吡啶-3-羰基｝-氨基]-4-甲基-戊酸(2.1g，4.1mmol)(制备例23)在3mL乙腈和10mL二氯甲烷中的浆液与溴(0.3g，1.8mmol)的8mL二氯甲烷溶液反应。用甲醇/水重结晶粗产物，得到0.3g标题化合物。
实施例13 2-(3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑-2-基)-乙酸
在1小时内，向6.0g(13.3mmol)2-[2-[2-(羧甲基氨基甲酰基)-苯基双磺酰基]-苯甲酰氨基]乙酸(制备例30)悬浮在50mLCCl4中并滴加0.83mL(16.1mmol)溴的15mLCCl4溶液。过滤收集固体，将其中的6.0g在25mL乙酸中加热回流1小时。冷却混合物，过滤收集固体。用90％甲基纤溶剂重结晶，然后在50℃干燥24小时，得到3.0g标题化合物，mp236-238℃。
实施例143-甲基-2-(3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑-2-基)-丁酸
按照实施例13的方法，将6.0g(13.6mmol)2-[2-[2-(1-羧基-3-甲基丁基氨甲酰基)-苯基双磺酰基]-苯甲酰氨基]-3-甲基丁酸与溴反应，得到2.25g标题化合物，mp166-168℃。
实施例152-苯基-3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑
用实施例13的方法，将20g(43.7mmol)2，2′-二硫代二-N-苯甲酰胺(按药物化学杂志，1985；28：1772所述制备的)与溴反应，得到10.55g粗异噻唑。用无水乙醇、然后用异丙醇重结晶，得到5.4g3-苯基-3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑，mp143-145℃。
实施例162-(4-乙酰苯基)-3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑
在1小时内，向7.0g(12.9mmol)2，2′-二硫代二[4′48-乙酰-(N-苯甲酰苯胺)]的50mL CCl4溶液中滴加0.7mL(13.5mmol)溴的5mL CCl4溶液过滤收集固体沉淀。将1.3g固体在碳酸氯钠溶液中溶解30分钟。过滤收集固体，70℃干燥24小时，得到0.87g标题化合物，mp183-185℃。
实施例174-(3-氧代-2-h-苯并[d]异噻唑-2-基)-丁酸
用实施例13的方法，将2.4g(5.0mmol)4-[2-[2-(3-羧丙基氨甲酰基)苯基双磺酰基]-苯甲酰氨基]丁酸(制备例32)与溴反应，得到0.85g粗异噻唑酮，将其用异丙醇重结晶，得到0.76g标题化合物，97-99℃。
实施例182-(4-甲基-吡啶-2-基-3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑
用Fischer和Hurni的方法(ArzneimittelForsch.，1964；14：1301)，在10℃将5.4g(0.05mol)2-氨基-4-甲基吡啶的50mL吡啶溶液与10.3g(0.05mol)2-氯亚磺酰苯甲酰氯反应。将混合物加热到50℃，在此温度保持2小时。将混合物冷却到25℃，过滤。用苯将所述固体重结晶，得到4.5g标题化合物，mp195-196.5℃。
实施例194-(3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑-2-基)-苯乙酸
向7.55g(0.05mol)4-氨基苯乙酸和15.15g(0.15mol)三乙胺的25mL乙基纤溶剂的混合物中加入10.3g(0.05mol)2-氯亚磺酰苯甲酰氯(Arzneimittel Forsch.，1964；14：1301)。将混合物在室温搅拌3小时，真空浓缩，然后将水加到残余物中。用HCl酸化所述混合物，过滤，得到9.9g标题化合物，mp173-175℃。
实施例202-[2-(2-吡啶基)乙基]-[1，3]二氧戊环并[4，5-g]异噻唑并[4，5-c]喹啉-3(2H)-酮
向4.1g(0.012mol)8-巯基-[1，3]二氧戊环并[4，5-g]喹啉-7-羧酸(2-吡啶-2-基-乙基)酰胺(制备例34)和5mL(0.035mol)三乙胺的750mL甲醇溶液中加入2.95g(0.012mol)碘的100mL甲醇溶液。将混合物加热回流2小时，冷却，然后浓缩成油。将残余物在水中形成浆液，收集固体并用乙醇重结晶，得到3.5g标题化合物，mp200-201℃。
实施例21 2-[2-(二乙氨基)乙基]-6-苯基-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-3(2H)-酮
用实施例20的方法，将3.3g(0.01mol)4-巯基-2-苯基-嘧啶-5-羧酸(2-二乙氨基-乙基)-酰胺(制备例36)和2.54g(0.01mol)碘反应，用异丙醇重结晶后得到2.25g标题化合物，mp106-107℃。
实施例223-甲基-1-苯基-5-[2-(2-吡啶基)乙基]-1H-吡唑并[5，4-d]异噻唑-4(5H)-酮
用实施例20的方法，将24g(0.069mol)5-巯基-3-甲基-1-苯基-1-吡唑-4-羧酸(2-吡啶-2-基-乙基)-酰胺(制备例38)与17.6g(0.069mol)碘反应，用异丙醇重结晶两次后得到4.8g标题化合物，mp137-138℃。
实施例236-(二甲氨基)-2-(2-吡啶基甲基)异噻唑并[5，4-d]嘧啶-3(2H)-酮
用实施例20的方法，将5.7g(0.02mol)2-二甲氨基-4-巯基-嘧啶-5-羧酸苄基酰胺(制备例40)与5.0g(0.02mol)碘反应，用乙醇重结晶后得到2.27g标题化合物，mp145-146℃。
实施例242-苄基-6-苯基异噻唑并[5，4-d]嘧啶-3-酮
用实施例20的方法，将2.0g(6.22mmol)4-巯基-2-苯基-嘧啶-5-羧酸苄基酰胺(制备例42)与1.74g(6.8mmol)碘反应，用异丙醇重结晶后得到1.74g标题化合物，mp166-167℃。
实施例254-(3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑-2-基)-苯乙酸
用实施例13的方法，将1.5g(2.6mmol)4-[2-[2-(4-羧甲基苯基氨基甲酰基)-苯基双磺酰基]-苯甲酰氨基]苯乙酸与溴反应，得到0.62g标题化合物，mp173-175℃。
实施例26(S)-2，6-二-(3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑-2-基)-己酸甲酯
用实施例18的方法，将0.77g(3.3mmol)赖氨酸甲酯二盐酸盐和2.1mL(15mmol)三乙胺的60mL二氯甲烷溶液与1g(3.0mmol)2-氯亚磺酰苯甲酰氯反应。将混合物在室温搅拌18小时，然后依次用1N HCl、饱和的NaHCO3水溶液和盐水洗涤该溶液。干燥溶液，并浓缩得到1g的油。用色谱(SiO2，CHCl3-CHCl3/MeOH；98：2)纯化化合物，得到0.16g玻璃状标题化合物。NMR(DMSO)：δ8.03(m，2H)，7.61(m，2H)，7.50(m，2H)，7.41(m，2H)，5.42(m，1H)，3.88(t，2H)，3.75(s，3H)，2.24(m，1H， 2.11(m，1H，1.87(m，2H)，1.44(m，2H)
实施例27 2-(2-吗啉-4-基-乙基)-6-苯基-异噻唑并[5.4-d]嘧啶-3-酮
用实施例20的方法，将2.0g(5.81mmol)4-巯基-2-苯基-嘧啶-5-羧酸(2-吗啉-4-基-乙基)-酰胺与1.47g(5.81mmol)碘反应，用异丙醇重结晶后得到1.21g标题化合物，mp163-165℃。
实施例282-苯乙基-6-苯基-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-3-酮
用实施例20的方法，将2.0g(5.96mmol)4-巯基-2-苯基-嘧啶-5-羧酸苯乙基-酰胺与1.66g(6.56mmol)碘反应，用异丙醇重结晶后得到1.42g标题化合物，mp144-147℃。
实施例296-苯基-2-吡啶-2-基甲基-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-3-酮
用实施例20的方法，将2.0g(6.20mmo)4-巯基-2-苯基-嘧啶-5-羧酸(吡啶-2-基甲基)-酰胺与1.73g(6.82mmol)碘反应，用异丙醇重结晶后得到1.62g标题化合物，mp154-156℃。
实施例306-苯基-2-(2-吡啶-2-基-乙基)-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-3-酮
用实施例20的方法，将14.0g(41.6mmol)4-巯基-2-苯基-嘧啶-5-羧酸(2-吡啶-2-基-乙基)-酰胺与10.6g(41.7mmol)碘反应，用乙醇重结晶后得到12.7g标题化合物，mp132-133℃。
实施例31 6-哌啶-1-基-2-(2-吡啶-2-基-乙基)-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-3-酮
用实施例20的方法，将33.0g(96.2mmol)4-巯基-2-哌啶-1-基-嘧啶-5-羧酸(2-吡啶-2-基-乙基)-酰胺与24.4g(96.1mmol)碘反应，用含水乙醇重结晶后得到21.4g标题化合物，mp109-110℃。
实施例32 6-哌啶-1-基-异噻唑[5，4-d]嘧啶-3-酮
用实施例20的方法，将20.8g(87.4mmol)4-巯基-2-哌啶-1-基-嘧啶-5-羧酸酰胺与22.2g(87.4mmol)碘反应，用二甲基甲酰胺重结晶后得到14.37g标题化合物，mp268-269℃。
实施例336-吗啉-4-基-2-(2-哌啶-1-基-乙基)-异噻唑并[5.4-d]嘧啶-3-酮
用实施例20的方法，将5.2g(14.8mmol)4-巯基-2-吗啉-4-基-嘧啶-5-羧酸(2-哌啶-1-基-乙基)-酰胺与3.81g(15.0mmol)碘反应，用含水异丙醇重结晶后得到2.6g标题化合物，mp98-100℃。
实施例346-二甲氨基-2-(2-吡啶-2-基-乙基)-异噻唑并[5，4-c]嘧啶-3-酮
用实施例20的方法，将7.5g(24.8mmol)2-二甲氨基-4-巯基-嘧啶-5-羧酸(2-吡啶-2-基-乙基)-酰胺与6.4g(25.2mmol)碘反应，用异丙醇重结晶后得到4.21g标题化合物，mp134-136℃。
实施例35 6-二甲氨基-2-(2-哌啶-1-基-乙基)-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-3-酮
用实施例20的方法，将6.2g(20.1mmol)2-二甲氨基-4-巯基-嘧啶-5-羧酸(2-哌啶-2-基-乙基)-酰胺与5.08g(20.0mmol)碘反应，用乙酸乙酯重结晶后得到5.31g标题化合物，mp128-129℃。
可用上述方法制备的其它异噻唑酮类化合物包括：续续本发明的其它具体异噻唑酮类化合物包括：实施例 R1 R2 R536 H H CHiPrCOOH37 H H 正己基38 H H CH2COOEt39 H H -苯基40 H H 4-乙酰苯基41 H H 乙酰基42 H H 苯甲酰基43 H H C(S)NH苯基44 H H 4-氯苯甲酰基45 H H 4-硝基苯甲酰基46 H H CO(CH2)4CH347 H H COCH2苯基48 H H 49 H H 4-甲氧基苯甲酰基50 H H 1-羟基羰基-2-甲基丁基51 H H 2-乙氧基羰基苯甲酰基52 H H 2-氯苯甲酰基53 H H 4-甲基-2-吡啶基54 H H 5-硝基噻唑酮-2-55 H H 2-(4-硝基苯基)-2-羟基-1-甲基乙基56 H H 3-羟基羰基丙基57 H H 2-羟基羰基苄基58 H H 2-吡咯烷-1-基乙基59 5-CH3O 6-CH3O 2-(2-吡啶基)乙基60 H H 2-(2-哌啶基)乙基61 H H 3-(1-哌啶基)丙基62 H H 4-羟基羰基甲基苯基苄基63 H H 4-甲氧基苄基64 H H 4-甲氧基苯基65 H H 2，4-二氯苯基66 H H 2，4-二氯苄基67 H H 3，4-二氯苯基68 H H 3，4-二氯苄基69 H H 4-氯苯基70 H H 4-氯苄基71 H H 4-(N-乙酰基氨基)苯基72 H H 4-(N-乙酰基氨基)苄基73 H H 4-乙氧基羰基苯基74 H H 4-乙氧基羰基苄基75 H H 4-叔丁基苯基76 H H 4-叔丁基苄基77 H H 4-三氟甲基苯基78 H H 4-三氟甲基苄基79 H H 4-二苯基80 H H 4-苯基苄基81 H H 4-硝基苄基82 H H 环丙基83 H H 环丙基甲基84 H H 2-苯基乙基85 H H 环己基86 H H 环己基甲基87 H H 4-氨基磺酰基苯基实施例 R1 R2 R5 mp ℃88 H H 丙基89 H H 2-(2-吡啶基)乙基90 H H 2-(N，N-二乙氨基)
乙基91 7-氯 8-氯 二甲氨基乙基 241-
24292 6-甲氧基 9-氯 2-二甲氨基乙基 172-
17393 H 7-甲氧基 2-二甲氨基乙基 175-
17694 H 8-甲氧基 2-二甲氨基乙基 155-
15695 7，8-亚甲二氧 3-二甲氨基丙基 160-
基 16196 7，8-亚甲二氧 2-吡咯烷代乙基 185-
基 18697 7，8-亚甲二氧 2-吗啉代乙基 200-
基 20298 H 8-氯 2-二甲氨基乙基 214-
21599 7，8-亚甲二氧 2-乙酰氨基乙基 ＞260
基100 7-氯 8-甲氧基 2-二甲氨基乙基 226-
227实施例 R1 R2 R5101 H 6-哌啶基 2-(N，N-二乙氨基)乙基102 H 6-哌啶基 2-(2-吡啶基)乙基盐酸
盐103 H 6-二甲氨基 2-哌啶基甲基104 H 6-吡咯烷代 2-(2-哌啶基)乙基实施例 R1 R2 R5105 H 6-苯磺酰基 2-二甲氨基乙基106 H 6-氯 甲基107 H 6-三氟甲基 环丙基108 H 6-(3，4-二甲氧基苯基) 2-二甲氨基乙基实施例 R1 R2 R5 mp℃109 H H 2-二甲氨基乙基 86-87
本发明的化合物会使锌从HIV-1的核壳体蛋白(NCp7)挤出。NC蛋白在所有逆转录病毒中是高度保守的(South T.，Blake P.，等，生物化学，1990；29：7786)，而且对于病毒感染是必需的(Aldovini A.和Young R.，病毒学杂志，1990；64：1920和Gorelick R.，Nigida S.，等，病毒学杂志，1990；64：3207)。锌通常由1或2个锌指固定在NC蛋白上。在HIV-1病毒的情况下，存在2个锌指(Summers M.，South T.，等，生物化学，1990；29：329)，而且具体与控制病毒RNA包装的病毒RNA上的PSI位点有关。干扰所述包装会形成非感染性病毒粒子(Dannull J.，Surovoy A.，等，EMBO，1994；13：1525)。以前已证实在多种细胞系中，引起锌挤出的化合物有强抗HIV活性，并可对抗所有逆转录病毒(Rice W.，SchaefferC.，等，自然，1993；361：473)。
已经开发了基于荧光的检测方法以监测锌从纯化的HIV-1 NCp7中的挤出。荧光团N-(6-甲氧基-8-喹啉基)-对甲苯磺酰胺(TSQ)在与溶液中的锌离子结合后荧光信号增强。将含2个Zn-指和2个Zn离子的NCp7蛋白与可引起锌离子挤出的药物一起保温。然后由TSQ螯合释放出的锌并监测相对于对照增强的荧光。按如下步骤完成检测：26℃下，将10μM化合物加到2.8μM NCp7和47μM TSQ在20μLpH7.4缓冲液的溶液中90分钟。定时检测荧光(激发355nm发射400nm)。对照是在检测条件下不合药物的NCp7，以及含药物的apo NCp7(不含锌)。锌挤出的百分数等于测得的实际荧光值除以所有理论上的锌挤出的荧光值(5.6μM)×100。
还要完成电子喷雾电离质谱分析。使用40μM NCp7在pH6的乙酸铵缓冲液中的溶液，加入320μM4-(3-氧代-3H-苯并[d]异噻唑-2-基)-苯磺酰胺(实施例1)的乙睛溶液。3分钟后，在6360出现对应于apo NCp7(丢失了2个锌)的质量峰(100％)。另外，还在6740出现了一个对应于NCp7+308+锌的峰。该峰表示挤出了一个锌并与分子量为308的化合物共价连接的NCp7，308的分子量正好对应于实施例1化合物的分子量，这表明挤出了锌并在锌指的半胱氨酸和异噻唑酮之间形成了共价键。
用于确定式I的异噻唑酮类化合物细胞抗病毒活性的检测系统是本领域熟知的，而且通常也用于此目的。例如，用于评估化合物抗HIV病毒的检测是由美国国家癌症研究所所采用的由Weislow O.S.，等(国家癌症研究所期刊，1989；81：577-586)(该文献引入本文作为参考)所记载的方法。
设计该方法是为了检测作用于病毒繁殖周期的任何阶段的试剂。该检测基本基于由HIV杀死T4淋巴细胞。将少量HIV加到细胞中，至少要完成两个完整的病毒繁殖周期才能得到所需的细胞杀死作用。与病毒粒子、细胞或病毒基因产物相互作用以干扰病毒活性的试剂将会防止细胞发生细胞溶解。该系统可以在多方面自动调节以容纳大量的候选试剂，并通常设计成可以检测抗HIV活性。但是，在培养条件下退化或迅速代谢的化合物在该筛选中没有活性。
用于评估本发明化合物的另一试验系统称为HIV H9试验。HIV V9细胞试验测量抑制HIV-1病毒复制所需的抑制剂浓度。在该系统中，病毒生长是通过多轮的生活周期而发生的。对复制动力学的任何抑制作用均会导致病毒生产发生几何级数的降低。因此，该试验是测量化合物抑制HIV-1病毒繁殖的敏感方法。
以MOI为0.01分批用HIV病毒感染H9 T细胞系。吸收2小时后，洗涤细胞，重悬在RPMI-1640/10％胎牛血清中，以5×10-3个细胞/孔接种于96孔平板。制备未感染的H9细胞的复制平板以进行细胞毒性试验。用DMSO对药物进行系列稀释，以8倍浓度转移到培养基中，然后一式三份加到培养物中。DMSO的终浓度为0.002(0.2％)。
用RT试验测量病毒生产，用XTT试验在感染后7天测量细胞毒性。按照Borroto-Esoda和Boone(病毒学杂志，1991；65：1952-1959)的改进方法完成RT试验，并用Molecular Dynamics Phosphoimager和Imagequant软件定量测量。按照Roehm等(免疫学方法杂志，1991；142：257-265)的改进方法完成XTT试验，并用Molecular DevicesThermomax平板阅读仪和Softmax软件定量测量。
将数据输入微软的Excell表格上进行分析。从未处理的对照计算出等于抑制了病毒生产50％和90％的RT试验值。产生这些值(IC50和IC90)所需的抑制剂浓度从这些RT活性侧的数值点插入。从未处理的对照计算出等于50％细胞毒性的XTT试验值。从这些XTT值侧的数据点插入产生该值所需的抑制剂浓度。
将用于确定抗病毒活性的另一试验系统称为CEM细胞试验。
在病毒与细胞比率为约0.05时，将T4淋巴细胞(CEM细胞系)与HIV接触，并与未感染的对照细胞一起铺在96孔微滴定板上。
将候选试剂溶解在二甲亚砜(除非另有说明)中，然后用细胞培养基以1∶200稀释。在加入到等体积的含感染或未感染细胞的培养基中之前，再进行稀释(半-log10)。
将培养物在5％二氧化碳中，37℃培养6或7天。将四唑盐，XTT加到所有孔中，保温培养物以使活细胞显出甲色(国家癌症研究所期刊，1989；81：577-586)。对每个孔进行分光光度分析以定量确定甲的生产，然后用显微镜观察以检测活细胞，从而确定保护活性。
在同一平板上，将药物试验的病毒感染细胞与药物处理的非感染细胞和其它适宜的对照(未处理的感染和未处理非感染细胞，没有细胞的含药物孔等)进行比较。在与同时完成的其它试验进行比较时，分析数据，并确定活性。
表1列出了在上述锌挤出试验中，多种本发明化合物的试验结果。评估化合物使锌从核壳体蛋白NCp7挤出的活性(以相对于对照的％表示)。
表1从HIV-1核壳体蛋白(NCp7)挤出的锌 实施例的化合物 相对于对照的锌挤出％ EDTAa 制备例29 1 2 13 14 15 17 18 25 10 5.8 100 30 75 71 97 78 100 89
a在24小时内，EDTA从锌指中除去了约10％的锌(Rice W.和Schaeffer C.等，自然，1993；361：473)
下列表2列出了用H9和CEM细胞试验评估时，数种本发明化合物的数据。用这两种试验系统评估时，数据表明，本发明的化合物可有效地抗HIV病毒。
表2抗HIV活性 实施例的化合物 CEM细胞试验 EC50(uM)a TC50(uM)6 1 2 14 17 25 5.1 14 21 5.8 5.8 21 ＞100 ＞100 ＞100 69
a使细胞不会受病毒细胞致病性影响的有效浓度
b相对于对照，抑制50％细胞生长的毒性浓度
本发明的化合物有抗广谱逆转录病毒的效用，因此有广泛的应用。适用于用本发明治疗的可能的病毒实例包括C型和D型逆转录病毒、HTLV-1、HTLV-2、FLV、SIV、MLV、BIV、马感染性病毒、贫血病毒、鸟肉瘤病毒等。
式I的异噻唑酮类化合物还可有效地治疗炎症和动脉粥样硬化。动脉粥样硬化的特征是来自泡沬细胞的胆甾醇酯沉积。泡沫细胞衍生于循环中的单核细胞，这些单核细胞固高胆固醇血症而侵入动脉壁，然后成熟变成组织巨嗜细胞。酶15-脂氧化酶(15-LO)也涉及炎症性疾病以及泡沫细胞的产生和募集反应(参见Harats等，心血管医学趋势，1995；5(1)：29-36)。该酶能够氧化酯化的多元脂肪酸，如在磷脂中所发现的那些。用降低由15-LO产生的氢过氧化物的抗氧化剂治疗试验动物表明，可延缓动脉粥样硬化损伤的进展。因此，施用抑制15-LO的化合物是一种有效治疗和预防动脉粥样硬化的方法。当用常规用于测量15-L0活性的常规试验评估时，式I的异噻唑酮类化合物是有效的15-LO抑制剂。具体地说，用Auerbach等(分析生物化学1992；201：375-380)所述的方法，评估有代表性的化合物。用两种体外试验酶促生产已知为13(S)-HPODE的过氧化物氧化产物，所述两种试验均使用兔网状细胞15-LO，并以亚油酸为底物。用N-苯甲酰无色美蓝作为比色剂以检测并定量测量过氧化物的形成。此外，在4℃保温10分钟后，用HPLC定量测量氧化作用。
在表3和4中列出了代表性异噻唑酮类化合物的15-LO抑制活性。表3给出了用Auerbach等的方法，用HPLC测量时，抑制50％15-LO活性所需的化合物的浓度。表4给出了用比色法评估时，15-LO活性的抑制百分比。
表315-L0抑制作用的HPLC试验实施例的化合物 IC50(μM) 23 24 27 28 29 30 31 32 33 34 35 0.4 0.3 0.27 0.76 0.39 0.29 1.3 3.2 0.12 1.7 0.16表4 15-LO抑制作用的比色试验实施例的化合物 ％ 抑制 1 3 21 50 59 91 93 94 95 96 97 108 109 35@10μM 75@10μM 95@10μM- ＞10μM ＞10μM ＞10μM ＞10μM ＞10μM ＞10μM ＞10μM ＞10μM 65@10μM 22@10μM
利用其抑制15-LO的能力，可将式I化合物用于治疗动脉粥样硬化。
在本发明的另一个实施方案中，可将所述化合物配制成适于应用到例如木头、金属、陶瓷等表面的组合物，以及适于向动物、包括人进行给药，适于治疗和预防病毒所引起的疾病，以及炎症和动脉粥样硬化的组合物。可将该化合物配制成适于以任何途径给药的形式，例如口服、胃肠外、局部和直肠给药。例如，为了进行口服给药，可将本发明的化合物与惰性稀释剂或可消化的可食用载体混合，或将其包封在硬或软壳的明胶胶囊内，或将其压成片剂，或将其直接掺入食物中。为了进行口服治疗性给药，可将活性化合物与赋性剂混合并以可消化片、颊含片、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、糯米纸囊等形式使用。这些组合物和制剂应含有至少1％重的活性化合物。当然，组合物和制剂的百分含量可以改变，通常为单位剂量的约5％至约80％重。在所述有治疗用途的组合物中，活性化合物的量是可以达到治疗有效剂量的量。可以按照本发明制备优选的组合物或制剂，以使每一口服剂量单位形式含有约5-1000mg的活性化合物，较理想为约25至约750mg。
片剂、锭剂、丸剂、胶囊等还可以含有常规的药物赋性剂，如粘合剂、甜味剂等。代表性的粘合制包括黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉和明胶，以及赋性剂如磷酸二钙。代表性的崩解剂包括玉米淀粉、土豆淀粉、藻酸等。常用的润滑剂是硬脂酸镁。代表性的甜味剂是蔗糖、乳糖或糖精，也可以使用矫味剂如薄荷、冬青油或樱桃香精。当剂量单位形式是胶囊时，除上述类型的物质外，还可以含有液体载体。还可以含有各种其它物质作为包衣或用来改善剂量单位的外观。例如，可以将片剂、丸剂或胶囊用紫胶和糖中的一种或两种进行包衣。糖浆或酏剂可以含有活性化合物，蔗糖作为甜味剂、对羟基苯甲酸甲酯和丙酯作为防腐剂、染料、矫味剂如樱桃或橙香精。当然，制备任何剂量单位形式的原料都应是药物纯的并且在用量下是基本无毒的。
还可以将本发明的异噻唑酮类化合物配制成用于局部给药的形式，例如贴剂、油膏剂、霜剂、软膏等。还可以使用常用的促进经皮途径的试剂。还可以将化合物与蜡等配制成用于常规直肠给药的形式。
还可以将活性化合物进行胃肠外或腹膜内给药。还可以在甘油、液态聚乙二醇、它们的混合物以及油中制成分散剂。在常规的贮藏和使用条件下，这些制剂还可以含有防腐剂以防止微生物的生长。
适于注射用的药物形式包括无菌含水溶液(水溶性的化合物)或分散剂，以及用于即时制备无菌注射液或分散剂的无菌粉末。在各种情况下，所述剂型必需是无菌的并且必需是易于注射的液体。它们必需在生产和贮藏的条件下稳定并且必需防止微生物如细菌和真菌的污染。其载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液态聚乙二醇等)、它们的适宜混合物以及植物油的溶剂或分散介质。可以通过例如使用包衣如卵磷脂；在分散剂的情况下通过维持所需的粒度以及使用表面活性剂来维持适宜的流动性。可以用各种抗菌和抗真菌剂如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、乙基汞硫代水杨酸钠等来防止微生物的作用。在许多情况下，优选含有等渗剂，例如糖或氯化钠。可以通过在组合物中使用延长吸收的试剂如一硬脂酸铝和明胶来延长可注射组合物的吸收。
通过将所需量的活性化合物与随需要加入的各种其它上述成分一起掺入适宜的溶剂中，并随后过滤灭菌来制备无菌注射液。通常，通过将各种无菌的活性成分掺入含有基本分散介质和随需要加入的上述其它成分的无菌溶媒中来制备分散剂。在制备无菌注射液用的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，该方法可以从前述含有活性成分以及任何所需添加成分的无菌滤液中制得其粉末。
文中使用的“可药用载体”包括各种溶剂、分散介质、包衣剂、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延缓剂等。用于药物活性物质的这些溶媒和试剂是本领域熟知的。除非常规的溶媒或试剂与活性成分不相容，否则就可将其用于药物组合物中。也可以将其它活性成分掺入所述组合物中。
特别优选将胃肠外组合物配制成剂量单位的形式，以便易于给药并使剂量均匀。本文所用的剂量单位形式是指适于作为单一剂量向待治疗的哺乳动物给药的个别单位；每个单位含有经过计算的预定的活性物质，以便与所需可药用载体结合产生理想的治疗效果。通过并直接根据下列因素来说明本发明的新剂量单位形式：(a)活性物质的独特特征和所要达到的特定治疗效果，和(b)本领域配制所述活性物质以用于活体治疗时的本身限制条件，所述活体患有如本文所述的影响身体健康的疾病。
为了方便和有效的施用，将有效量的活性成分与适宜的可药用载体一起配制成前文所述的剂量单位形式。术语“有效量”指对于治疗患有病毒感染、炎症或动脉粥样硬化的哺乳动物产生阳性治疗效果的异噻唑酮的量。例如，单位剂量形式可含有约5至约1000mg的活性化合物，优选约25至约750mg。代表性的剂量是约50至约500mg。在组合物含有附加活性成分的情况下，根据所述成分的常规剂量和给药方法来确定剂量。通常每日需给药1-4次单位剂量，或根据疾病的治疗情况来确定。
在另一实施方案中，将异噻唑酮类化合物与具有抗病毒活性的其它试剂联合使用。例如，常用的试剂包括等。无环鸟苷、AZT(叠氮胸苷，齐多呋定)、三氮唑核苷、阿糖腺苷、ganciclovir、二脱氧肌苷等。将异噻唑酮类化合物与所述的其它抗病毒试剂联用时，通常将其以各自常规的剂量方案进行给药。所采用的具体联用方式、各自的给药量以及给药频率可由主治医师或医生根据所用的具体试剂、待治疗的具体情况和疾病的严重程度来确定。
用下列实施例进一步说明本发明的制剂。
实施例110
用以下成分制备软明胶胶囊：
含量
(mg/粒胶囊)
实施例1的化合物 250.0
丁基化的羟基苯甲醚B.P. 0.05
分馏过的椰油B.P. 70.0
320.05
将上述成分混合并填充到软明胶胶囊内，所述胶囊的壳体成分为明胶和甘油。该胶囊的给药频率为每日1-4次。
实施例111 用以下成分制备片剂： 实施例5的化合物 500mg 结晶纤维素 200mg 羧甲基淀粉钠 20mg 硬脂酸镁 4mg 丁基化的羟基苯甲醚B.P. 0.002mg 将上述成分混合均匀并压成用于口服给药的片剂。治疗病毒感染时每日给药1-4片。
实施例112 气雾剂的制备如下： 实施例4的化合物 100mg 丙二醇 20mg 二氯四氟乙烷 600mg (抛射剂14) 二氯二氟甲烷 500mg
(抛射剂12) 将上述成分在-20℃混合并置于带有计量装置的密封灌内。
实施例113 溶液剂的制备如下： 实施例6的化合物 5mg 水 1L 1N HCl 20mL 将上述成分混合形成溶液，该溶液可用于冲洗浴室以防止和消除细菌生长。
本发明的又一实施方案是治疗、预防和抑制病毒感染的方法。该方法包括向需要治疗的个体或表面施用抗病毒有效量的本发明化合物。例如，可将式I化合物应用于浴室和公共场所以预防、控制和抑制病毒感染。可将该化合物施用于动物、尤其是人，以治疗和预防病毒感染。如上所述，活性化合物的有效量通常为每剂量单位约5至约1000mg，优选为约25至约750mg。
当以约1.0至约100mg/kg体重/天的剂量范围进行给药时，治疗组合物的活性成分以及本发明的化合物表现出极佳的抗逆转录病毒活性。为达到最佳效果的优选剂量方案应为约2.0至约50mg/kg体重/天，应用该剂量单位可以使对体重为约70kg的个体在24小时内的给药总量为0.2至约3.0g活生化合物。可对该剂量方案进行调整以达到最佳治疗效果，并优选以每次约250至约750mg的剂量每日给药1-4次。例如，每日可以分成数次给药或将根据治疗中出现的紧急情况将剂量成比例的减少。实践证实，可将所述活性化合物以方便的方式进行给药，例如通过口服、静脉内(水溶性药物)、肌肉内或皮下途径给药。
可将所述活性化合物配制成水溶液和悬浮液的形式，用于洗涤例如木头、钢、陶瓷等的表面，以消除和控制病毒的生长。
本发明的另一个实施方案是对患有动脉粥样硬化并需要治疗的哺乳动物治疗动脉粥样硬化的方法。所述化合物可有效地抑制15-脂氧化酶的活性，从而可以向哺乳动物、包括人进行给药，以有效地消除和治疗动脉粥样硬化。可以将该化合物以治疗动脉粥样硬化有效量进行给药，一般为约1.0至约100mg/kg治疗对象的体重。
该化合物还可用于治疗炎症，例如损伤引起的肿胀、骨和关节周围的肿胀等。可以将该化合物以治疗炎症有效量向患有炎症的动物给药。一般的剂量为约1.0至约100mg/kg体重。