本发明涉及生物化学、酶学、突变或遗传过程,是在变异或遗传工程中涉及基因工程的DNA或其分离、制备或纯化,其宿主的应用;进一步说,是涉及由二个或二个以上细胞融合、DNA片段、编码性微生物蛋白质,如内毒素的基因,具体地说,是涉及编码病毒蛋白质的基因,如肝炎病毒。 据统计,全世界约有2亿以上人携带HBV(乙肝病毒),而我国受HBV感染的人至少有1亿以上。大量证据表明:HBV持续感染和肝癌发生有相关关系,据报道,HBV感染人群中发生肝癌的相对危险性为非感染人群的200倍以上,肝癌患者中血清HBV标志流行率也较高,用放免法检测HBeAg,在对照人群中低于6%,而肝癌患者的血清中HBeAg阳性率达45%至80%,如果包括将抗HBe也作为HBV感染的标志,则对照人群与肝癌人群在HBV标志方面的这种差异更大,因此,HBV的准确迅速检测就显得十分重要,但是传统检测法存在敏感性比较差、费时、假阴性多等问题,而PCR高度敏感,因而可检出潜在的低水平HBV感染。
已有的PCR直接检测HBV DNA,通常比较复杂、使用不便、且需花费较多时间。关键在于PCR检测前的血清样本处理存在一些缺陷。
本发明的目的是提供一种简单、快速、不加任何试剂的乙肝病毒基因扩增检测(HBV DNA PCR)前的样本处理方法。
本发明的技术解决方案是:一种乙肝病毒基因扩增检测前的样本处理方法:首先将血清样本在90℃-99℃下加热5-25分钟,再经离心后,吸取上清液作为血清中靶DNA。
本发明中的加热温度以94℃-95℃为佳,当然,也可采用其他合适的温度值。
本发明中的加热时间以10-15分钟为佳。
当然,也可采用其他合适的时间值。
本发明中离心时的离心速度1万转,离心时间2-5分钟,当然,也可采用其他合适的离心速度和离心时间。
本发明的优点是:快速、稳定可靠,重复性好。而且在处理血清时(PCR之前)无需加入任何试剂,除了简化操作、节约试剂、节省时间外,还使PCR操作人员不必接触有损健康的苯酚/氯仿等有机溶剂,可在没有防护设施的普通实验室内开展PCR操作,可避免经典法经常遇到地操作误差。更有利于普及推广应用。
下表即为本发明方法与其他方法的比较:
以下结合实施例对本发明作进一步说明:
例1:取50μl血清样品于94℃下加热15分钟,再12000rpm离心2分钟,吸取5μl上清液作为血清中靶DNA。
例2:取50μl血清样品于97℃下加热5分钟,再9800rpm离心3分钟,吸取5μl上清液作为血清中靶DNA。
例3:取50μl血清样品于95℃下加热10分钟,再10000rpm离心5分钟,吸取5μl上清液作为血清中靶DNA。
本发明中所取血清样品的量、加热温度、加热时间、离心速度、离心时间、及吸取上清液的量均可作合适的变化。以符合要求为准。