一种肝素钠的纯化方法技术领域
本发明涉及一种生物药用原料的制备方法，属于生物工程领域，具体是一种肝素
钠纯化方法。
背景技术
粗品肝素中含有其它黏多糖，也含有一些残余的蛋白质和核酸类物质，从而使粗
品肝素的效价过低。目前，在肝素提取纯化方面，主要采用有机溶剂（如乙醇、丙酮等）分步
沉淀法、氧化纯化法、酶解辅助纯化法、离子交换法、亲和层析法等。这些方法各有特点，但
也都有些不足之处，有的表现为产品在线时间长，有的表现为分离不完全，特别是粗品肝素
中的硫酸皮肤素、硫酸软骨素等有关物质去除效果很难达到药典要求。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种肝素钠纯化方法，以共价结合的琼脂糖凝胶-抗凝血
酶III为层析介质，运用亲和层析的原理纯化肝素钠粗品，去除硫酸皮肤素及硫酸软骨素，
得到效价大于180Uusp/mg的高纯肝素钠，其中硫酸皮肤素及硫酸软骨素等相关物质含量远
小于药典规定的含量要求。
本发明的技术解决方案是：以共价结合的琼脂糖凝胶-抗凝血酶III为层析介质，
用平衡液溶解粗品肝素，缓慢通过亲和层析介质，循环吸附3次；吸附完成后，用2-3个柱体
积的洗涤液洗涤；再用2个柱体积的洗脱液将肝素洗下；最后加入提取液乙醇，搅拌，沉淀，
脱水，过滤，烘干，得效价大于180Uusp/mg的高纯肝素钠。
1)平衡液中含0.15MNaCl、20mM Tris-HCl，pH7.5。
2)洗涤液中含1.2-1.5MNaCl、20mM Tris-HCl，pH7.5。
3)洗脱液中含2MNaCl、20mM Tris-HCl，pH7.5。
4)提取液乙醇的质量浓度是94%，其体积是洗脱液体积的1.0-1.5倍，沉淀8-10小
时。
本发明的优点在于：1、粗品肝素经一步纯化就将硫酸皮肤素及硫酸软骨素等相关
物质的含量降低到药典的要求，极大地提高了生产效率；2、琼脂糖凝胶-抗凝血酶III层析
介质经再生后，可重复使用。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步说明本发明作进一步说明。
实施例1
1)取粗品肝素钠（来源于猪）2克，用100ml（0.15MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）平衡液
溶解，缓慢通过琼脂糖凝胶-抗凝血酶III亲和层析介质（2ml/min），循环吸附3次；
2)吸附完成后，用2-3个柱体积的洗涤液（1.2MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）洗涤；再用
2个柱体积的洗脱液（2MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）将肝素洗下；
3)按洗脱液的体积加入洗脱液体积1.5倍的质量浓度94%的乙醇，搅拌，沉淀10小时，脱
水，过滤，烘干，得效价大于180Uusp/mg的高纯肝素钠。硫酸皮肤素及硫酸软骨素等相关物
质的液相色谱峰面积仅为对照品的1/5，符合药典要求。
实施例2
1)取粗品肝素钠（来源于猪）1.8克，用100ml（0.15MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）平衡
液溶解，缓慢通过琼脂糖凝胶-抗凝血酶III亲和层析介质（2ml/min），循环吸附3次；
2)吸附完成后，用2-3个柱体积的洗涤液（1.35MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）洗涤；再
用2个柱体积的洗脱液（2MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）将肝素洗下；
3)按洗脱液的体积加入洗脱液体积1.25倍的质量浓度94%的乙醇，搅拌，沉淀9小时，脱
水，过滤，烘干，得效价大于185Uusp/mg的高纯肝素钠。硫酸皮肤素及硫酸软骨素等相关物
质的液相色谱峰面积仅为对照品的1/6，符合药典要求。
实施例3
1)取粗品肝素钠（来源于牛）1.5克，用100ml（0.15MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）平衡
液溶解，缓慢通过琼脂糖凝胶-抗凝血酶III亲和层析介质（2ml/min），循环吸附3次；
2)吸附完成后，用2-3个柱体积的洗涤液（1.5MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）洗涤；再用
2个柱体积的洗脱液（2MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）将肝素洗下；
3)按洗脱液的体积加入洗脱液体积1.0倍的质量浓度94%的乙醇，搅拌，沉淀8小时，脱
水，过滤，烘干，得效价大于180Uusp/mg的高纯肝素钠。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任
何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等
效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所
作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。