一种珊瑚菜素的制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103408560 A (43)申请公布日 2013.11.27 CN 103408560 A *CN103408560A* (21)申请号 201310349294.4 (22)申请日 2013.08.13 C07D 493/04(2006.01) (71)申请人南京标科生物科技有限公司地址 210046 江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边东 108 号 1 幢 701 室 (72)发明人张金芳万冬梅 (54) 发明名称一种珊瑚菜素的制备方法 (57) 摘要本发明公开了一种珊瑚菜素的制备方法。方法如下： 1）取北沙参种子粉碎 20-80 目，置于。

2、CO2 超临界萃取罐中萃取，通入液态 CO2，流量为 1-5ml/min/g 原料，压力 15-25Mpa，萃取时间 1-3h，解析得萃取物； 2）上述萃取物用热水溶解，加入大孔树脂中吸附，乙醇溶液梯度洗脱，洗脱液浓缩，浓缩液以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，用高速逆流色谱分离，根据图谱收集收集流分，合并流分减压干燥即得。采用该方法生产珊瑚菜素，提取效率高，工艺操作简单，污染小，适合高纯度珊瑚菜素的制备。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页说明书 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书1页。

3、说明书2页 (10)申请公布号 CN 103408560 A CN 103408560 A *CN103408560A* 1/1 页 2 1. 一种珊瑚菜素的制备方法，其特征在于包括以下步骤： 1）取北沙参种子粉碎 20-80 目，置于 CO2 超临界萃取罐中萃取，通入液态 CO2，流量为 1-5ml/min/g 原料，压力 15-25Mpa，萃取时间 1-3h，解析得萃取物； 2）上述萃取物用热水溶解，加入大孔树脂中吸附，乙醇溶液梯度洗脱，洗脱液浓缩，浓缩液以正己烷 - 乙酸乙酯 - 甲醇 - 水为溶剂系统，用高速逆流色谱分离，根据图谱收集收集流分，。

4、合并流分减压干燥即得。 2.根据权利要求1所述的珊瑚菜素的制备方法，其特征在于所述步骤2）中大孔树脂可选： AB-8、 D101、 HZ816 和 HPD100 中的一种，乙醇溶液梯度洗脱为。 3.根据权利要求1所述的珊瑚菜素的制备方法，其特征在于所述步骤2）中乙醇溶液梯度洗脱为： 5-9倍柱体积30-50%乙醇溶液洗脱杂质， 5-10倍柱体积70-90%乙醇溶液洗脱有效成分。 4. 根据权利要求 1 所述的珊瑚菜素的制备方法，其特征在于所述步骤 2）中的正己烷 - 乙酸乙酯 - 甲醇 - 水混合比例为： 1-3:2-5:2-5:2:7，取上相为固定相，下相为流。

5、动相。权利要求书 CN 103408560 A 2 1/2 页 3 一种珊瑚菜素的制备方法技术领域 0001 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种珊瑚菜素的制备方法。背景技术 0002 珊瑚菜素为香豆素类物质， CAS 号 2543-94-4，分子量为 C17H16O5，分子量为 300.308。分子结构式：北沙参为伞形科植物珊瑚菜（Glehnia lit toralis F.Schmidt ex Miq ），以根入药。北沙参味甘甜，是临床常用的滋阴药，养阴清肺，祛痰止咳。主治肺燥干咳、热病伤津、口渴等症。 0003 通过文献检索，珊瑚菜素制备方法多。

6、采用有机试剂提取及硅胶柱分离，此类方法提取效率低，纯化过程复杂，产品收率低。发明内容 0004 本发明要解决的技术问题是提供一种高效、操作简便的珊瑚菜素的制备方法。 0005 本发明是通过以下技术方案实现的：一种珊瑚菜素的制备方法，其特征在于包括以下步骤： 1）取北沙参种子粉碎 20-80 目，置于 CO2 超临界萃取罐中萃取，通入液态 CO2，流量为 1-5ml/min/g 原料，压力 15-25Mpa，萃取时间 1-3h，解析得萃取物； 2）上述萃取物用热水溶解，加入大孔树脂中吸附，乙醇溶液梯度洗脱，洗脱液浓缩，浓缩液以正己烷 - 乙酸乙酯。

7、- 甲醇 - 水为溶剂系统，用高速逆流色谱分离，根据图谱收集收集流分，合并流分减压干燥即得。 0006 步骤 2）中大孔树脂可选： AB-8、 D101、 HZ816 和 HPD100 中的一种，乙醇溶液梯度洗脱为。 0007 步骤 2）中乙醇溶液梯度洗脱为： 5-9 倍柱体积 30-50% 乙醇溶液洗脱杂质， 5-10 倍柱体积 70-90% 乙醇溶液洗脱有效成分。 0008 步骤 2）中的正己烷 - 乙酸乙酯 - 甲醇 - 水混合比例为： 1-3:2-5:2-5:2:7，取上相为固定相，下相为流动相。 0009 采用上述技术方案生产珊瑚菜素，提取效率高，。

8、工艺简单易操作，而且对环境友好，易于实现工业化生产。说明书 CN 103408560 A 3 2/2 页 4 具体实施方式 0010 下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。 0011 实施例 1 ：取北沙参种子2kg烘干，粉碎过60目筛，置于CO2超临界萃取罐中萃取，通入液态CO2，流量为2ml/min/g原料，压力25Mpa，萃取时间2h，解析得萃取物用热水分散，加入装有D101 大孔树脂柱中吸附，饱和吸附后，先用 5 倍柱体积 30% 乙醇溶液洗脱杂质，再用 8 倍柱体积 70% 乙醇溶液洗脱有效成分，洗脱液减压浓缩，得浓缩液。取正己烷 - 乙酸乙。

9、酯 - 甲醇 - 水按 3:5:5:7 混合，取上相为固定相，注入高速逆流色谱管，开转主机，转速 800rpm，取下相做流动相，流速 2ml/min，建立动态平衡后，进样，根据图谱收集收集流分，合并流分减压干燥，得白色珊瑚菜素，经检测，含量 98.5%。 0012 实施例 2 ：取北沙参种子 2kg 烘干，粉碎过 40 目筛，置于 CO2 超临界萃取罐中萃取，通入液态 CO2，流量为3ml/min/g原料，压力20Mpa，萃取时间1h，解析得萃取物用热水分散，加入装有 AB-8 大孔树脂柱中吸附，饱和吸附后，先用 5 倍柱体积 50% 乙醇溶。

10、液洗脱杂质，再用 10 倍柱体积 90% 乙醇溶液洗脱有效成分，洗脱液减压浓缩，得浓缩液。取正己烷 - 乙酸乙酯 - 甲醇 - 水按 1:2:2:2 混合，取上相为固定相，注入高速逆流色谱管，开转主机，转速 900rpm，取下相做流动相，流速 3ml/min，建立动态平衡后，进样，根据图谱收集收集流分，合并流分减压干燥，得白色珊瑚菜素，经检测，含量 97.1%。 0013 实施例 3 ：取北沙参种子 2kg 烘干，粉碎过 20 目筛，置于 CO2 超临界萃取罐中萃取，通入液态 CO2，流量为1ml/min/g原料，压力15Mpa，萃取时间3h，解析得萃取物用热水分散，加入装有 HPD100 大孔树脂柱中吸附，饱和吸附后，先用 5 倍柱体积 40% 乙醇溶液洗脱杂质，再用 7 倍柱体积 80% 乙醇溶液洗脱有效成分，洗脱液减压浓缩，得浓缩液。取正己烷 - 乙酸乙酯 - 甲醇 - 水按 2:3:3:5 混合，取上相为固定相，注入高速逆流色谱管，开转主机，转速 850rpm，取下相做流动相，流速 2ml/min，建立动态平衡后，进样，根据图谱收集收集流分，合并流分减压干燥，得白色珊瑚菜素，经检测，含量 98.3%。说明书 CN 103408560 A 4 。

摘要
申请专利号：	CN201310349294.4	申请日：	2013.08.13
公开号：	CN103408560A	公开日：	2013.11.27
当前法律状态：	撤回	有效性：	无权
法律详情：	发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):C07D 493/04申请公布日:20131127\|\|\|公开
IPC分类号：	C07D493/04	主分类号：	C07D493/04
申请人：	南京标科生物科技有限公司
发明人：	张金芳; 万冬梅
地址：	210046 江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边东108号1幢701室
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内容摘要

本发明公开了一种珊瑚菜素的制备方法。方法如下：1）取北沙参种子粉碎20-80目，置于CO2超临界萃取罐中萃取，通入液态CO2，流量为1-5ml/min/g原料，压力15-25Mpa，萃取时间1-3h，解析得萃取物；2）上述萃取物用热水溶解，加入大孔树脂中吸附，乙醇溶液梯度洗脱，洗脱液浓缩，浓缩液以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，用高速逆流色谱分离，根据图谱收集收集流分，合并流分减压干燥即得。采用该方法生产珊瑚菜素，提取效率高，工艺操作简单，污染小，适合高纯度珊瑚菜素的制备。

权利要求书

权利要求书
1.  一种珊瑚菜素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）取北沙参种子粉碎20-80目，置于CO2超临界萃取罐中萃取，通入液态CO2，流量为1-5ml/min/g原料，压力15-25Mpa，萃取时间1-3h，解析得萃取物；
    2）上述萃取物用热水溶解，加入大孔树脂中吸附，乙醇溶液梯度洗脱，洗脱液浓缩，浓缩液以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，用高速逆流色谱分离，根据图谱收集收集流分，合并流分减压干燥即得。

2.  根据权利要求1所述的珊瑚菜素的制备方法，其特征在于所述步骤2）中大孔树脂可选：AB-8、D101、HZ816和HPD100中的一种，乙醇溶液梯度洗脱为。

3.  根据权利要求1所述的珊瑚菜素的制备方法，其特征在于所述步骤2）中乙醇溶液梯度洗脱为：5-9倍柱体积30-50%乙醇溶液洗脱杂质，5-10倍柱体积70-90%乙醇溶液洗脱有效成分。

4.  根据权利要求1所述的珊瑚菜素的制备方法，其特征在于所述步骤2）中的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合比例为：1-3:2-5:2-5:2:7，取上相为固定相，下相为流动相。

说明书

说明书一种珊瑚菜素的制备方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种珊瑚菜素的制备方法。
背景技术
珊瑚菜素为香豆素类物质，CAS号2543-94-4，分子量为C17H16O5，分子量为300.308。分子结构式：

北沙参为伞形科植物珊瑚菜（Glehnia lit－toralis F.Schmidt ex Miq．），以根入药。北沙参味甘甜，是临床常用的滋阴药，养阴清肺，祛痰止咳。主治肺燥干咳、热病伤津、口渴等症。
通过文献检索，珊瑚菜素制备方法多采用有机试剂提取及硅胶柱分离，此类方法提取效率低，纯化过程复杂，产品收率低。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种高效、操作简便的珊瑚菜素的制备方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
    一种珊瑚菜素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）取北沙参种子粉碎20-80目，置于CO2超临界萃取罐中萃取，通入液态CO2，流量为1-5ml/min/g原料，压力15-25Mpa，萃取时间1-3h，解析得萃取物；
    2）上述萃取物用热水溶解，加入大孔树脂中吸附，乙醇溶液梯度洗脱，洗脱液浓缩，浓缩液以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，用高速逆流色谱分离，根据图谱收集收集流分，合并流分减压干燥即得。
    步骤2）中大孔树脂可选：AB-8、D101、HZ816和HPD100中的一种，乙醇溶液梯度洗脱为。
     步骤2）中乙醇溶液梯度洗脱为：5-9倍柱体积30-50%乙醇溶液洗脱杂质，5-10倍柱体积70-90%乙醇溶液洗脱有效成分。
步骤2）中的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水混合比例为：1-3:2-5:2-5:2:7，取上相为固定相，下相为流动相。
采用上述技术方案生产珊瑚菜素，提取效率高，工艺简单易操作，而且对环境友好，易于实现工业化生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1：
取北沙参种子2kg烘干，粉碎过60目筛，置于CO2超临界萃取罐中萃取，通入液态CO2，流量为2ml/min/g原料，压力25Mpa，萃取时间2h，解析得萃取物用热水分散，加入装有D101大孔树脂柱中吸附，饱和吸附后，先用5倍柱体积30%乙醇溶液洗脱杂质，再用8倍柱体积70%乙醇溶液洗脱有效成分，洗脱液减压浓缩，得浓缩液。取正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水按3:5:5:7混合，取上相为固定相，注入高速逆流色谱管，开转主机，转速800rpm，取下相做流动相，流速2ml/min，建立动态平衡后，进样，根据图谱收集收集流分，合并流分减压干燥，得白色珊瑚菜素，经检测，含量98.5%。
实施例2：
取北沙参种子2kg烘干，粉碎过40目筛，置于CO2超临界萃取罐中萃取，通入液态CO2，流量为3ml/min/g原料，压力20Mpa，萃取时间1h，解析得萃取物用热水分散，加入装有AB-8大孔树脂柱中吸附，饱和吸附后，先用5倍柱体积50%乙醇溶液洗脱杂质，再用10倍柱体积90%乙醇溶液洗脱有效成分，洗脱液减压浓缩，得浓缩液。取正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水按1:2:2:2混合，取上相为固定相，注入高速逆流色谱管，开转主机，转速900rpm，取下相做流动相，流速3ml/min，建立动态平衡后，进样，根据图谱收集收集流分，合并流分减压干燥，得白色珊瑚菜素，经检测，含量97.1%。
实施例3：
取北沙参种子2kg烘干，粉碎过20目筛，置于CO2超临界萃取罐中萃取，通入液态CO2，流量为1ml/min/g原料，压力15Mpa，萃取时间3h，解析得萃取物用热水分散，加入装有HPD100大孔树脂柱中吸附，饱和吸附后，先用5倍柱体积40%乙醇溶液洗脱杂质，再用7倍柱体积80%乙醇溶液洗脱有效成分，洗脱液减压浓缩，得浓缩液。取正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水按2:3:3:5混合，取上相为固定相，注入高速逆流色谱管，开转主机，转速850rpm，取下相做流动相，流速2ml/min，建立动态平衡后，进样，根据图谱收集收集流分，合并流分减压干燥，得白色珊瑚菜素，经检测，含量98.3%。