从毛菊苣中提取CSUB15/SUBHSUB18/SUBOSUB5/SUB方法及其用途.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103804334 A (43)申请公布日 2014.05.21 CN 103804334 A (21)申请号 201410007335.6 (22)申请日 2014.01.08 C07D 307/93(2006.01) A61K 31/365(2006.01) A61P 1/16(2006.01) (71)申请人 石河子大学 地址 832000 新疆维吾尔自治区石河子市北 四路石河子大学 (72)发明人 秦冬梅 姚广民 胡利萍 张云生 王新兵 祝世发 (54) 发明名称 从毛菊苣中提取 C15H18O5方法及其用途 (57) 摘要 本发明涉及一种从毛菊苣中提取分离得。

2、到 C15H18O5英文名称为 11B， 13-Dihydrolacurin 的 方法及其该化合物的用途， 其特点在于 ： 将毛菊 苣根用乙醇浸泡， 采用渗漉法收集渗漉液， 用减 压蒸馏装置得稠浸膏， 将浸膏上硅胶柱、 ODS 柱 和 Sephadex LH-20 柱， 经洗脱， 洗脱液用减压蒸 馏装置蒸干得干粉， 既为单体 C15H18O5英文名称为 11B， 13-Dihydrolacurin 化合物 ； 该化合物有作 为抗肝纤维化作用机制既通过抑制肝星状细胞的 激活及增殖作用， 因此， C15H18O5英文名称为 11B， 13-Dihydrolacurin 能作为抗肝纤维化先导化合 物。

3、。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 8 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书8页 (10)申请公布号 CN 103804334 A CN 103804334 A 1/1 页 2 1.一种从毛菊苣中提取分离得到C15H18O5英文名称为116， 13-Dihydrolacurin的方法， 其特征在于 ： a、 将毛菊苣根进行晾干， 含水率在 1 10， 取晾干的毛菊苣根， 用 3 15 倍量的 60 95乙醇浸泡 12 36h ； b、 采用渗漉法， 毛菊苣根与 60 95乙醇比例 1 10 50， 流速 ： 1 5ml mi。

4、n， 收集渗漉液 ； c、 渗漉液用孔径 0.1 10mm 的网孔过滤 1 5 次， 滤液合并 ； d、 用减压蒸馏装置， 在压力 ： 1 0.110-3kPa， 温度 ： 30 80下， 蒸馏除去乙醇得 0.1 0.4g ml 的稠浸膏 ； e、 将稠浸膏与水按 1 2 10 混合得混合液， 用与混合液等体积乙酸乙酯萃取， 分出 乙酸乙酯层， 在压强 ： 0.10.2MPa， 温度 ： 4080下蒸馏浓缩， 得0.20.6gml的浸 膏 ； f、 将浸膏上 200 300 目的硅胶柱， 所述硅胶的类型为硅胶 H、 硅胶 G 和硅胶 HF 中的 任意一种， 氯仿 ： 甲醇 30 1 3 1 梯。

5、度洗脱得洗脱液， 洗脱液用减压蒸馏装置， 在压强 ： 1 0.110-3kPa， 温度 ： 30 80下蒸干， 得干粉， 用 50 100甲醇溶解上 ODS 填料， 30 100甲醇洗脱得洗脱液， 洗脱液用减压蒸馏装置， 在压强 ： 1 0.110-3kPa， 温度 ： 30 80下蒸干， 得干粉 ； g、 将上述所得干粉上 Sephadex LH-20 填料， 颗粒大小 ： 18 111m， 50 100甲 醇洗脱得洗脱液， 洗脱液用减压蒸馏装置， 在压力 ： 1 0.110-3kPa， 温度 ： 30 60下蒸 干得单体 C15H18O5英文名称为 11， 13-Dihydrolacuri。

6、n ； 其结构式为 ： 。 2. 根据权利要求 1 所述从毛菊苣中提取分离得到 C15H18O5英文名称为 11， 13-Dihydrolacurin的化合物的用途为 ： 所述C15H18O5英文名称为11， 13-Dihydro1acurin 的化合物用作抗肝纤维化先导化合物。 权 利 要 求 书 CN 103804334 A 2 1/8 页 3 从毛菊苣中提取 C15H18O5方法及其用途 技术领域 0001 本发明涉及一种从毛菊苣中提取C15H18O5英文名称为11， 13-Dihydrolacurin的 方法及其该化合物的用途。 背景技术 0002 菊苣根是菊科植物毛菊苣(Cichor。

7、ium glandulosum Boiss)的根， 菊苣别名苦苣、 法国苦苣、 蓝苣等， 学名 Cichorium intybus L 是菊科菊苣属的 2 年生或多年生宿根植物， 其嫩叶、 叶球或根可食用或药用。原产于地中海、 中亚和北非， 在欧洲栽培甚多。在欧洲菊 苣常被用作蔬菜、 牧草饲料、 制糖原料及咖啡的替代品。主要分布于我国的新疆、 山东、 内 蒙古等地。菊苣是维吾尔族和蒙古族习用药材， 维语称卡申纳， 具有开通阻滞、 利尿、 消肿、 清热、 营养胃肝等之功效。国家药材标准 维吾尔药志 上有记载 ：“菊苣可入药， 味微苦、 咸， 性凉。维吾尔医临床广泛应用于肝炎、 胆囊炎等肝胆疾病的。

8、治疗” 。肝纤维化 (Hepatic fibrosis， HF) 是指各种病因引起的， 肝细胞发生坏死及炎症刺激时， 肝脏内细胞外基质 (extracelular matrix， ECM) 的合成大于降解， 致使 ECM 在肝脏内过度沉积所致的病理过 程。它是大多数慢性肝病所共有的病理特征， 也是慢性肝炎、 肝硬化等进一步发展、 恶化的 重要中间环节。 可以说， 肝纤维化作为各种慢性肝病向肝硬化发展的必经病理过程， 其形成 与发展己成为影响诸多肝病预后、 转归的关键。因此， 有效地阻断肝纤维化的发生发展， 对 防治肝硬化具有重要意义。 0003 维药毛菊苣治疗肝病为单味入药， 维吾尔医临床广泛。

9、应用于肝炎、 胆囊炎等肝胆 疾病的治疗。 近年来， 通过对毛菊苣所含化学成分及在体内外药理研究中的不断深入， 发现 它具有明显的保肝、 防治肝纤维化等作用， 但 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 抗纤维化 作用强于原药材毛菊苣， 作为治疗肝纤维化药物先导物， 这对阐明其治疗肝纤维化的物质 基础具有科学意义， 为今后创新药物的开发研究提供基础研究资料。研究工作将对今后进 一步发掘利用这一传统的新疆地道药材， 开发有效的抗肝纤维化药物起到推动作用。 而且， 利用新疆的菊苣资源开发具有知识产权的抗肝纤维化药物 ( 或先导化合物 )， 不仅对减轻 广大肝病患者的经济负担、。

10、 减少社会在预防和控制肝炎方面的开支、 稳定社会有益， 同时可 提高维药菊苣的附加值， 对拉动新疆种植业也有一定 的意义， 无论在经济效益和社会效益 方面潜力巨大。 0004 肝纤维化是由于过多的细胞外基质 (ECM) 在肝内沉积所致。转化生长因子 TGF-1能抑制肝细胞再生， 诱导肝细胞凋亡， 促进肝星状细胞(HSC)活化， 使ECM的合成增 加， 降解减少， 在肝纤维化的发生、 发展中具有重要作用。因此， 0005 肝星状细胞 (hepatic stellate cells， HSC) 又称肝贮脂细胞或 Ito 细胞， 是肝 纤维化病理形成的重要细胞学基础。肝纤维化时 ECM 的过度合成主。

11、要是肝星状细胞的激活 和大量增殖的结果。因此， 如何能有效地抑制 HSC 的活化和增殖成为抗肝纤维化的关键。 HSC 活化最直接的表现为 -SMA 表达增多， 而其活化又受细胞因子和细胞内信号转导所调 控， 在众多的细胞因子中， TGF-1 是目前已知的最强大的促 HSC 激活的细胞因子， 在肝纤 说 明 书 CN 103804334 A 3 2/8 页 4 维化病理形成中起重要的促进作用， TGF-1 主要通过 TGF- Smad 信号转导通路发挥 生物学作用， Smad7 是 TGF- Smad 信号转导通路中的主要抑制性调控蛋白， 对 TGF-1 信号转导途径的反馈和交叉调控起关键作用，。

12、 能有效阻止 TGF-1 信号转导， 从而阻断 TGF-1介导的肝纤维化， 调控Smad7的表达为肝纤维化的防治提供了新的途径。 充分利用 毛菊苣化学成分及抗肝纤维化的作用， 从毛菊苣中提取分离得到 C15H18O5英文名称为 11， 13-Dihydrolacurin， 目前尚属空白。 发明内容 0006 本发明的目的是提供一种从毛菊苣中提取分离得到 C15H18O5英文名称为 11， 13-Dihydrolacurin 的方法及其该化合物的用途。 0007 本发明的目的是通过以下技术方案实现的 ： 0008 本发明从毛菊苣中提取分离得到C15H18O5英文名称为11， 13-Dihydro。

13、lacurin的 方法， 其特点在于 ： 0009 a、 将毛菊苣根进行晾干， 含水率在110， 取晾干的毛菊苣根， 用315倍量的 60 95乙醇浸泡 12 36h ； 0010 b、 采用渗漉法， 毛菊苣根与 60 95乙醇比例 1 10 50， 流速 ： 1 5ml min， 收集渗漉液 ； 0011 c、 渗漉液用孔径 0.1 10mm 的网孔过滤 1 5 次， 滤液合并 ； 0012 d、 用减压蒸馏装置， 在压力 ： 1 0.110-3kPa， 温度 ： 30 80下， 蒸馏除去乙醇 得 0.1 0.4g ml 的稠浸膏 ； 0013 e、 将稠浸膏与水按 1 2 10 混合得混合。

14、液， 用与混合液等体积乙酸乙酯萃取， 分出乙酸乙酯层， 在压强 ： 0.1 0.2MPa， 温度 ： 40 80下蒸馏浓缩， 得 0.2 0.6g ml 的浸膏 ； 0014 f、 将浸膏上200300目的硅胶柱， 所述硅胶的类型为硅胶H、 硅胶G和硅胶HF中 的任意一种， 氯仿 ： 甲醇 30 1 3 1 梯度洗脱得洗脱液， 洗脱液用减压蒸馏装置， 在压 强 ： 1 0.110-3kPa， 温度 ： 30 80下蒸， 得干粉， 用 50 100甲醇溶解上 ODS 填料， 型号 ： AA12S50， 描述 ： ODS-A120A50um， 30 100甲醇洗脱得洗脱液， 洗脱液用减压蒸馏装 置。

15、， 在压强 ： 1 0.110-3kPa， 温度 ： 30 80下蒸干， 得干粉 ； 0015 g、 将上述所得干粉上Sephadex LH-20填料， 颗粒大小 ： 18111m， 50100 甲醇洗脱得洗脱液， 洗脱液用减压蒸馏装置， 在压力 ： 1 0.110-3kPa， 温度 ： 30 60下 蒸干得单体 C15H18O5英文名称为 11， 13-Dihydrolacurin ； 0016 其结构式为 ： 0017 说 明 书 CN 103804334 A 4 3/8 页 5 0018 本发明的另一目的是 C15H18O5英文名称 11， 13-Dihydrolacurin 的用途 ：。

16、 0019 本 发 明 的 用 途 是 ： C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 该 化 合 物 能 作 为 抗 肝纤维化先导化合物 ； 从分子生物及细胞因子水平， 对于三种药物 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin)、 奥菊素与8-去乙酰母菊素-8-O-硫酸盐对大鼠肝星状细胞(HSC-T6) 活化及增殖的影响及其的机制 ； 0020 A、 三种药物可显著抑制 HSC-T6 增殖， 而 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 抑制 作用最强， 且抑制程度与药物剂量呈一定依赖关系 ； 0021 B、 三种药物可显著抑制HS。

17、C-T6活化， 对-SMA的蛋白表达有明显抑制作用， 尤其 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 对 -SMA 抑制作用最显著 ； 0022 C、 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 可显著提高 Smad7 蛋白表达 ； 0023 D、 三种药物可抑制 HSC-T6TGF-1表达 ； 0024 药 理 作 用， 三 种 药 物 对 肝 星 状 细 胞 激 活 及 增 殖 具 有 显 著 的 抑 制 作 用， C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 对 HSC-T6 细 胞 的 激 活 及 增 殖 抑 制 作 用 尤 。

18、为 显 著， 而肝纤维化主要是肝星状细胞的激活和大量增殖的结果， 因此 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin)相比较于另外两种药物具有较好的抗肝纤维化作用， C15H18O5英文名称 11， 13-Dihydrolacurin为新化合物， C15H18O5英文名称11， 13-Dihydrolacurin即 ： 为新 化学结构， 该药抗纤维化作用机制既通过抑制肝星状细胞的激活及增殖作用， 因此， C15H18O5 英文名称为 11， 13-Dihydrolacurin， 该化合物能作为抗肝纤维化先导化合物。 0025 本 发 明 解 决 了 从 毛 菊 苣 中 提 取 。

19、分 离 得 到 C15H18O5英 文 名 称 为 11， 13-Dihydrolacurin 的方法， 并且制备方法简单， 成本低。C15H18O5英文名称为 11， 13-Dihydrolacurin 抗肝纤维化作用比毛菊苣中其它同类化合物作用显著 ； 从细胞及分子 水平方面， 比较 11， 13-Dihydrolacurin 与毛菊苣中另外两种化合物奥菊素 (Austricin) 与 8- 去乙酰母菊素 -8-O- 硫酸盐 (8-deacetylmatricarin-8-O-sulfate) 的抗纤维化作 用。通过肝星状细胞 (HSC-T6) 形态学观察发现， 三种药物均能抑制细胞体伸展。

20、， 胞体近梭 形， 类似于静止期形态。通过镜检观察， C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 抑制作用更显 著， 并且未见核固缩或凋亡现象。MTT 细胞增殖检测不同浓度的三种药物对 HSC-T6 增殖 的抑制作用实验证明， 奥菊素与 8- 去乙酰母菊素 -8-O- 硫酸盐对 HSC-T6 的抑制率分别为 为 46.97与 46.69， 两药物抑制率基本相同， 而 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 对 说 明 书 CN 103804334 A 5 4/8 页 6 HSC-T6的抑制率高达57.5， 抑制作用显著。 荧光定量PCR测定TGF-1。

21、水平显示， HSC的活 化是各种肝纤维化发生发展的共同环节， TGF-1则是促进HSC活化和分泌ECM的最强有力 因子。 本研究采用C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin)、 奥菊素与8-去乙酰母菊素-8-O-硫 酸盐三种不同药物不同浓度组含药完全培养基干预体外培养的活化大鼠 HSC-T624h 后， 采用荧光定量 PCR 测定各组 TGF-1mRNA 表达水平， 结果显示空白对照组、 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin)50umolL-1组 25umolL-1组、 10umolL-1组其 TGF-1mRNA 表达的 2-ct值用均数标准差表达分。

22、别为(1.0000.039)、 (0.6560.025)、 (0.5130.016)、 (0.5340.021)， 表明 TGF-1mRNA 表达受到明显抑制 (P0.01) 且具有剂量依赖性。反 映出 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 药物可以抑制 TGF-1基因表达的作用， 提示 C15H15O5(11， 13-Dihydrolacurin) 药物作用机制之一是从 mRNA 抑制肝星状细胞 TGF-1 的表达， 从而抑制 HSC 的激活、 增殖以及 ECM 的合成， 发挥抗肝纤维化作用。另外两种药 物奥菊素与 8- 去乙酰母菊素 -8-O- 硫酸盐也具有明显的。

23、抑制 TGF-1基因表达的作用， 其机理与 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 药物 大致相同， 但没有剂量依赖性。通过 Western Blot 检测肝星状细胞 (HSC-T6) 平滑肌肌动蛋白 (-SMA) 与 Smad7 蛋白的表达 的变化实验证明， 三种药物对 -SMA 的蛋白表达均有不同程度的抑制作用， 且其抑制作 用与药物浓度大致呈线性关系， 但 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 高、 中、 低药物组与 阳性药物组间存在显著性差异其 P0.01， 抑制作用明显高于阳性药姜黄素与其他两种药 物组。C15H18O5(11， 13。

24、-Dihydrolacurin) 能显著上调 Smad7 蛋白， 增强作用明显高于阳 性药姜黄素与其他两种药物组 ； 三种药物对肝星状细胞激活及增殖具有显著的抑制作用， C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 对 HSC-T6 细胞的激活及增殖作用尤为显著， 而肝纤维 化主要是肝星状细胞的激活和大量增殖的结果， 因此 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 相比较于另外两种药物具有较好的抗肝纤维化作用 ； C15H18O5（11， 13-Dihydrolacurin) 抗纤维化作用靶点为通过上调 Smad7 蛋白， 有效阻断 TGF- Smad 。

25、信号转导通路， 抑制 TGF-1基因表达与 -SMA 蛋白的表达， 从而抑制肝星状细胞 (HSC-T6) 的激活及增殖作 用， 发挥抗肝纤维化作用 ； C15H18O5(1l， 13-Dihydrolacurin) 抗纤维化作用强于原药材毛 菊苣， C15H18O5英文名称为 11， 13-Dihydrolacurin 该化合物能作为抗肝纤维化先导化合 物。 具体实施方式 0026 实施例 1 ： 从毛菊苣中提取分离得到 C15H18O5英文名称 11B， 13-Dihydrolacurin 的 方法， 按以下步骤进行 ： 0027 a、 将毛菊苣根进行晾干， 含水率在 l， 取晾干的毛菊苣根。

26、， 用 3 倍量的 60乙 醇浸泡 36h ； 0028 b、 采用渗漉法， 毛菊苣根与 60乙醇按 1 10 的比例， 流速 ： 1ml min， 收集渗 漉液 ； 0029 c、 渗漉液用孔径 0.1mm 的网孔过滤 1 次， 滤液合并 ； 0030 d、 用减压蒸馏装置， 在压力 ： 110-3kPa， 温度 ： 30下， 蒸馏除去乙醇得0.1gml 的稠浸膏 ； 0031 e、 将稠浸膏与水按12混合得混合液， 用与混合液等体积乙酸乙酯萃取， 分出乙 说 明 书 CN 103804334 A 6 5/8 页 7 酸乙酯层， 在压强 ： 0.1MPa， 温度 ： 40下蒸馏浓缩， 得 0。

27、.2g ml 的浸膏 ； 0032 f、 将浸膏上 200 目的硅胶柱， 所述硅胶的类型为硅胶 H， 氯仿 ： 甲醇 30 1 梯度洗 脱得洗脱液， 洗脱液用减压蒸馏装置， 在压强 ： 110-3kPa， 温度 ： 30下蒸， 得干粉， 用 50 甲醇溶解上 ODS 填料， 型号 ： AA12S50， 描述 ： ODS-A120A50um， 30甲醇洗脱得洗脱液， 洗脱 液用减压蒸馏装置， 在压强 ： 110-3kPa， 温度 ： 30下蒸干， 得干粉 ； 0033 g、 将上述所得干粉上 Sephadex LH-20 填料， 颗粒大小 ： 18m， 50甲醇洗脱得洗 脱液， 洗脱液用减压蒸馏。

28、装置， 在压力 ： 110-3kPa， 温度 ： 30下蒸干得单体 C15H18O5英文名 称为 11， 13-Dihydrolacurin ； 0034 其结构式为 ： 0035 0036 本发明的 C15H18O5， 英文名称 11， 13-Dihydrolacurin， 由于该药抗纤维化作用机 制既通过抑制肝星状细胞的激活及增殖作用， 具有作为抗肝纤维化先导化合物的用途。 0037 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin)该化合物能作为抗肝纤维化先导化合物 ； 从细 胞及细胞因子水平， 对于三种药物 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin)、 。

29、奥菊素与 8- 去乙酰 母菊素 -8-O- 硫酸盐对肝星状细胞活化及增殖的影响及其的机制 ； 0038 A、 三种药物可显著抑制HSC增殖， 而C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin)抑制作用 最强， 且抑制程度与药物剂量呈一定依赖关系 ； 0039 B、 三种药物可显著抑制HSC-T6活化， 对-SMA的蛋白表达有明显抑制作用， 尤其 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 对 -SMA 抑制作用最显著 ； 0040 C、 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 可显著提高 Smad7 蛋白表达 ； 0041 D、 三种药。

30、物可抑制 HSC-T6TGF-1表达 ； 0042 药 理 作 用， 三 种 药 物 对 肝 星 状 细 胞 激 活 及 增 殖 具 有 显 著 的 抑 制 作 用， C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 对 HSC-T6 细胞的激活及增殖作用尤为显著， 而肝纤维 化主要是肝星状细胞的激活和大量增殖的结果， 因此 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 相 比 较 于 另 外 两 种 药 物 具 有 较 好 的 抗 肝 纤 维 化 作 用， C15H18O5英 文 名 称 11， 13-Dihydrolacurin 为新化合物， C15H18O。

31、5英文名称 11， 13-Dihydrolacurin 即 ： 为新化学 结构， 该药抗纤维化 作用机制既通过上调 Smad7 蛋白， 有效阻断 TGF- Smad 信号转导 通路， 抑制 TGF-1基因表达与 -SMA 蛋白的表达， 从而抑制肝星状细胞 (HSC-T6) 的激活 说 明 书 CN 103804334 A 7 6/8 页 8 及增殖作用， 发挥抗肝纤维化作用， 因此， C15H18O5英文名称为 11， 13-Dihydrolacurin， 该 化合物能作为抗肝纤维化先导化合物。 0043 实施例 2 ： 从毛菊苣中提取分离得到 C15H18O5英文名称 11B， 13-Dih。

32、ydrolacurin 的 方法， 按以下步骤进行 ： 0044 a、 将毛菊苣根进行晾干， 含水率在 10， 取晾干的毛菊苣根， 用 15 倍量的 95乙 醇浸泡 12h ； 0045 b、 采用渗漉法， 毛菊苣根与 95乙醇按 1 50 的比例， 流速 ： 5ml min， 收集渗 漉液 ； 0046 c、 渗漉液用孔径 10mm 的网孔过滤 5 次， 滤液合并 ； 0047 d、 用减压蒸馏装置， 在压力 ： 0.110-3kPa， 温度 ： 80下， 蒸馏除去乙醇得 0.4g ml 的稠浸膏 ； 0048 e、 将稠浸膏与水按 1 10 混合得混合液， 用与混合液等体积乙酸乙酯萃取， 。

33、分出 乙酸乙酯层， 在压强 ： 0.2MPa， 温度 ： 80下蒸馏浓缩， 得 0.6g ml 的浸膏 ； 0049 f、 将浸膏上300目的硅胶柱， 所述硅胶的类型为硅胶G和硅胶， 氯仿 ： 甲醇31梯 度洗脱得洗脱液， 洗脱液用减压蒸馏装置， 在压强 ： 0.110-3kPa， 温度 ： 80下蒸， 得干粉， 用100甲醇溶解上ODS填料， 型号 ： AA12S50， 描述 ： ODS-A120A50um， 100甲醇洗脱得洗脱 液， 洗脱液用减压蒸馏装置， 在压强 ： 0.110-3kPa， 温度 ： 80下蒸干， 得干粉 ； 0050 g、 将上述所得干粉上 Sephadex LH-2。

34、0 填料， 颗粒大小 ： 111m， 100甲醇洗脱得 洗脱液， 洗脱液用减压蒸馏装置， 在压力 ： 0.110-3kPa， 温度 ： 60下蒸干得单体 C15H18O5英 文名称为 11， 13-Dihydrolacurin ； 0051 其结构式为 ： 0052 0053 本发明的 C15H18O5， 英文名称 11， 13-Dihydrolacurin， 由于该药抗纤维化作用机 制既通过抑制肝星状细胞的激活及增殖作用， 具有作为抗肝纤维化先导化合物的用途。 0054 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin)该化合物能作为抗肝纤维化先导化合物 ； 从细 胞及细胞因子水。

35、平， 对于三种药物 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin)、 奥菊素与 8- 去乙酰 母菊素 -8-O- 硫酸盐对肝星状细胞活化及增殖的影响及其的机制 ； 0055 A、 三种药物可显著抑制HSC增殖， 而C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin)抑制作用 说 明 书 CN 103804334 A 8 7/8 页 9 最强， 且抑制程度与药物剂量呈一定依赖关系 ； 0056 B、 三种药物可显著抑制HSC-T6活化， 对-SMA的蛋白表达有明显抑制作用， 尤其 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 对 -SMA 抑制作用最显。

36、著 ； 0057 C、 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 可显著提高 Smad7 蛋白表达 ； 0058 D、 三种药物可抑制 HSC-T6TGF-1表达 ； 0059 药 理 作 用， 三 种 药 物 对 肝 星 状 细 胞 激 活 及 增 殖 具 有 显 著 的 抑 制 作 用， C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 对 HSC-T6 细胞的激活及增殖作用尤为显著， 而肝纤维 化主要是肝星状细胞的激活和大量增殖的结果， 因此 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 相 比 较 于 另 外 两 种 药 物 具 有。

37、 较 好 的 抗 肝 纤 维 化 作 用， C15H18O5英 文 名 称 11， 13-Dihydrolacurin 为新化合物， C15H18O5英文名称 11， 13-Dihydrolacurin 即 ： 为新化学 结构， 该药抗纤维化作用机制既通过上调 Smad7 蛋白， 有效阻断 TGF- Smad 信号转导通 路， 抑制 TGF-1基因表达与 -SMA 蛋白的表达， 从而抑制肝星状细胞 (HSC-T6) 的激活及 增殖作用， 发挥抗肝纤维化作用， 因此， C15H18O5英文名称为 1l， 13-Dihydrolacurin， 该化 合物能作为抗肝纤维化先导化合物。 0060 实施。

38、例 3 ： 从毛菊苣中提取分离得到 C15H18O5英文名称 11B， 13-Dihydrolacurin 的 方 法， 按以下步骤进行 ： 0061 a、 将毛菊苣根进行晾干， 含水率在 5， 取晾干的毛菊苣根， 用 7 倍量的 75乙醇 浸泡 20h ； 0062 b、 采用渗漉法， 毛菊苣根与 80乙醇比例 1 25， 流速 ： 3ml min， 收集渗漉液 ； 0063 c、 渗漉液用孔径 4mm 的网孔过滤 3 次， 滤液合并 ； 0064 d、 用减压蒸馏装置， 在压力 ： 0.510-3kPa， 温度 ： 55下， 蒸馏除去乙醇得 0.3g ml 的稠浸膏 ； 0065 e、 将。

39、稠浸膏与水按15混合得混合液， 用与混合液等体积乙酸乙酯萃取， 分出乙 酸乙酯层， 在压强 ： 0.15MPa， 温度 ： 60下蒸馏浓缩， 得 0.4g ml 的浸膏 ； 0066 f、 将浸膏上 250 目的硅胶柱， 所述硅胶的类型为硅胶 HF， 氯仿 ： 甲醇 10 1 梯度 洗脱得洗脱液， 洗脱液用减压蒸馏装置， 在压强 ： 0.510-3kPa， 温度 ： 60下蒸， 得干粉， 用 75甲醇溶解上 ODS 填料， 型号 ： AA12S50， 描述 ： ODS-A120A50um， 60甲醇洗脱得洗脱液， 洗脱液用减压蒸馏装置， 在压强 ： 0.510-3kPa， 温度 ： 60下蒸干。

40、， 得干粉 ； 0067 g、 将上述所得干粉上 Sephadex LH-20 填料， 颗粒大小 ： 60m， 80甲醇洗脱得洗 脱液， 洗脱液用减压蒸馏装置， 在压力 ： 0.510-3kPa， 温度 ： 55下蒸干得单体 C15H18O5英文 名称为 11， 13-Dihydrolacurin ； 0068 其结构式为 ： 0069 说 明 书 CN 103804334 A 9 8/8 页 10 0070 本发明的 C15H18O5， 英文名称 11， 13-Dihydrolacurin， 由于该药抗纤维化作用机 制既通过抑制肝星状细胞的激活及增殖作用， 具有作为抗肝纤维化先导化合物的用途。

41、。 0071 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 该化合物能作为抗肝纤维化先导化合物 ； 从 分子 生物及细胞因子水平， 对于三种药物 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin)、 奥菊素与 8- 去乙酰母菊素 -8-O- 硫酸盐对肝星状细胞活化及增殖的影响及其作用机制 ； 0072 A、 三种药物可显著抑制HSC增殖， 而C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin)抑制作用 最强， 且抑制程度与药物剂量呈一定依赖关系 ； 0073 B、 三种药物可显著抑制HSC-T6活化， 对-SMA的蛋白表达有明显抑制作用， 尤其 C15H。

42、18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 对 -SMA 抑制作用最显著 ； 0074 C、 C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 可显著提高 Smad7 蛋白表达 ； 0075 D、 三种药物可抑制 HSC-T6TGF-1表达 ； 0076 药 理 作 用， 三 种 药 物 对 肝 星 状 细 胞 激 活 及 增 殖 具 有 显 著 的 抑 制 作 用， C15H18O5(11， 13-Dihydrolacurin) 对 HSC-T6 细胞的激活及增殖作用尤为显著， 而肝纤维 化主要是肝星状细胞的激活和大量增殖的结果， 因此 C15H18O5(11， 1。

43、3-Dihydrolacurin) 相 比 较 于 另 外 两 种 药 物 具 有 较 好 的 抗 肝 纤 维 化 作 用， C15H18O5英 文 名 称 11， 13-Dihydrolacurin 为新化合物， C15H18O5英文名称 11， 13-Dihydrolacurin 即 ： 为新化学 结构， 该药抗纤维化作用机制既通过上调 Smad7 蛋白， 有效阻断 TGF- Smad 信号转导通 路， 抑制 TGF-1基因表达与 -SMA 蛋白的表达， 从而抑制肝星状细胞 (HSC-T6) 的激活及 增殖作用， 发挥抗肝纤维化作用， 因此， C15H18O5英文名称为 11， 13-Dihydrolacurin， 该化 合物能作为抗肝纤维化先导化合物。 说 明 书 CN 103804334 A 10 。