一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103989709 A (43)申请公布日 2014.08.20 CN 103989709 A (21)申请号 201410252263.1 (22)申请日 2014.06.09 201410107844.6 2014.03.21 CN A61K 35/28(2006.01) (71)申请人 江西赣南海欣药业股份有限公司 地址 341000 江西省赣州市章贡区健康路 61 号 (72)发明人 叶小珍 郭秋云 曹淑玲 兰飞 何利剑 胡翔 李静 (74)专利代理机构 山东济南齐鲁科技专利事务 所有限公司 37108 代理人 宋永丽 (54) 发明名称 一种含猪脾多肽及核糖。

2、口服液的制备方法 (57) 摘要 本发明提供了一种含猪脾多肽及核糖口服液 的制备方法， 步骤如下 ： 取健康猪脾去除脂肪 及筋膜， 清洗后绞碎混匀成浆 ； 将步骤冷冻 后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥， 得到 含水量为 1-6% 的猪脾颗粒 ； 将猪脾颗粒置入 工作温度为 3-6的超微粉碎机内粉碎， 得到猪 脾微粉 ； 将猪脾微粉与注射用水按 1 ： 4-8 的比 例混成浆液 ； 将步骤的浆液用离心沉降式冷 冻分离机分离， 取上清液备用 ； 将上清液用截 留分子量为 5000-6000 道尔顿的中空纤维超滤膜 过滤， 得到滤液 ； 对滤液除菌灌装封口， 制成产 品。本发明采用纯物理方法提取。

3、猪脾中的多肽及 核糖， 以解决现有技术的不足。 (66)本国优先权数据 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书6页 (10)申请公布号 CN 103989709 A CN 103989709 A 1/1 页 2 1. 一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法， 其特征在于 ： 步骤如下 ： 取健康猪脾去除脂肪及筋膜， 清洗后绞碎， 将绞碎后的猪脾与水按重量比 1 ： 3-4 的 比例混匀成浆， 在 -20冷冻成 8-12 毫米厚的冰体猪脾， 冷冻时间为 72-80 小时 ； 将步骤冷冻后的冰体猪。

4、脾置入真空冷冻干燥机内干燥， 真空冷冻干燥机内的真空 度为 110-4 毫巴110-2 毫巴， 温度为 -8 -2， 保持 13-16 小时， 然后在 40-90 分钟 内升温至 2-8， 保持 2-9 小时， 得到含水量为 1-6% 的猪脾颗粒 ； 将猪脾颗粒置入工作温度为 3-6的超微粉碎机内粉碎， 得到猪脾微粉 ； 将猪脾微粉与注射用水按 1 ： 4-8 的比例混成浆液， 注射用水的温度为 2-4 ； 将步骤的浆液用离心沉降式冷冻分离机在 2-4下分离， 分离机的转速为 8000 转 / 分钟， 分离 7-12 分钟， 取上清液备用 ； 将上清液用截留分子量为 5000-6000 道尔顿。

5、的中空纤维超滤膜过滤， 得到滤液 ； 对滤液除菌灌装封口， 制成产品。 2. 根据权利要求 1 所述的一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法， 其特征在于 ： 步 骤如下 ： 取健康猪脾去除脂肪及筋膜， 清洗后绞碎， 将绞碎后的猪脾与水按重量比 1 ： 3.5 的 比例混匀成浆， 在 -20冷冻成 10 毫米厚的冰体猪脾， 冷冻时间为 76 小时 ； 将步骤冷冻后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥， 真空冷冻干燥机内的真空 度为 110-3 毫巴， 温度为 -5， 保持 15 小时， 然后在 60 分钟内升温至 4， 保持 5 小时， 得到含水量为 3% 的猪脾颗粒 ； 将猪脾颗粒置入工作温度为。

6、 4的超微粉碎机内粉碎， 得到猪脾微粉 ； 将猪脾微粉与注射用水按 1 ： 6 的比例混成浆液， 注射用水的温度为 3 ； 将步骤的浆液用离心沉降式冷冻分离机在 3下分离， 分离机的转速为 8000 转 / 分钟， 分离 9 分钟， 取上清液备用 ； 将上清液用截留分子量为 5500 道尔顿的中空纤维超滤膜过滤， 得到滤液 ； 对滤液除菌灌装封口， 制成产品。 权 利 要 求 书 CN 103989709 A 2 1/6 页 3 一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及猪脾活性物质提取方法， 是一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方 法。 背景技术 0002 将猪脾中的。

7、多肽、 氨基酸及核苷酸等活性物质提取后制成的转移因子注射液或口 服液逐渐被广泛应用于临床。申请人是我国最早以猪脾为原料， 提取多肽及核糖后做成转 移因子口服液获得国药准字号的公司， 国药准字号为H20013138。 该口服液用于某些抗生素 难于控制的病毒性或霉菌性细胞内感染的辅助治疗， 也应用于恶性肿瘤的辅助治疗， 同时， 也可用于治疗血小板减少、 多次感染治疗、 慢性皮肤黏膜真菌病等免疫缺陷疾病。 申请人在 多年的生产中坚持采用纯物理方法提取猪脾中的多肽及核糖， 以保证临床应用的安全性。 但是， 生产中发现， 做为工业化、 规模化生产的工艺仍存在不足 ： 提取收率相对较低， 做为临 床应用的。

8、规格选择范围较窄， 较难满足临床的多种不同需要。近几年公开的猪脾转移因子 提取方法中的多肽及核糖均有所提高， 但是， 均采用反复冻融的方法提高收率， 然而， 国外 研究资料表明动物肉类及内脏在冷冻 - 解冻 - 再冷冻循环中易产生对人体有害的物质， 这 种有害物质随着冻融的次数增加而增加， 使临床应用的安全性较难保证。 发明内容 0003 本发明的目的是， 提供一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法， 用纯物理方法 提取猪脾中的多肽及核糖， 以解决现有技术的不足。 0004 本发明为实现上述目的通过以下技术方案实现 ： 一种含猪脾多肽及核糖口服液的 制备方法， 步骤如下 ： 取健康猪脾去除脂肪及。

9、筋膜， 清洗后绞碎， 将绞碎后的猪脾与水按重量比 1 ： 3-4 的 比例混匀成浆， 在 -20冷冻成 8-12 毫米厚的冰体猪脾， 冷冻时间为 72-80 小时 ； 将步骤冷冻后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥， 真空冷冻干燥机内的真空 度为 110-4 毫巴110-2 毫巴， 温度为 -8 -2， 保持 13-16 小时， 然后在 40-90 分钟 内升温至 2-8， 保持 2-9 小时， 得到含水量为 1-6% 的猪脾颗粒 ； 将猪脾颗粒置入工作温度为 3-6的超微粉碎机内粉碎， 得到猪脾微粉 ； 将猪脾微粉与注射用水按 1 ： 4-8 的比例混成浆液， 注射用水的温度为 2-4 ； 。

10、将步骤的浆液用离心沉降式冷冻分离机在 2-4下分离， 分离机的转速为 8000 转 / 分钟， 分离 7-12 分钟， 取上清液备用 ； 将上清液用截留分子量为 5000-6000 道尔顿的中空纤维超滤膜过滤， 得到滤液 ； 对滤液除菌灌装封口， 制成产品。 0005 所述的一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法， 步骤如下 ： 取健康猪脾去除脂肪及筋膜， 清洗后绞碎， 将绞碎后的猪脾与水按重量比 1 ： 3.5 的 比例混匀成浆， 在 -20冷冻成 10 毫米厚的冰体猪脾， 冷冻时间为 76 小时 ； 说 明 书 CN 103989709 A 3 2/6 页 4 将步骤冷冻后的冰体猪脾置入真空。

11、冷冻干燥机内干燥， 真空冷冻干燥机内的真空 度为 110-3 毫巴， 温度为 -5， 保持 15 小时， 然后在 60 分钟内升温至 4， 保持 5 小时， 得到含水量为 3% 的猪脾颗粒 ； 将猪脾颗粒置入工作温度为 4的超微粉碎机内粉碎， 得到猪脾微粉 ； 将猪脾微粉与注射用水按 1 ： 6 的比例混成浆液， 注射用水的温度为 3 ； 将步骤的浆液用离心沉降式冷冻分离机在 3下分离， 分离机的转速为 8000 转 / 分钟， 分离 9 分钟， 取上清液备用 ； 将上清液用截留分子量为 5500 道尔顿的中空纤维超滤膜过滤， 得到滤液 ； 对滤液除菌灌装封口， 制成产品。 0006 本发明用。

12、纯物理方法制备猪脾多肽及核糖口服液， 整体工艺在低温下完成， 低温 制备过程无任何添加剂， 在使猪脾细胞充分破壁的同时， 不破坏活性成份， 使收率提高， 多 肽含量及核糖含量达到较高值， 工业化生产中的各工序及参数易于控制， 生产周期短。 用本 发明方法制备的猪脾多肽核糖口服液中无有害物质， 无药物残留， 临床应用的安全性高。 整 体制备方法中无污染。 具体实施方式 0007 本发明的一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法， 步骤如下 ： 取健康猪脾去除脂肪及筋膜， 清洗后绞碎， 将绞碎后的猪脾与水按重量比 1 ： 3-4 的 比例混匀成浆， 在 -20冷冻成 8-12 毫米厚的冰体猪脾， 冷冻。

13、时间为 72-80 小时 ； 将步骤冷冻后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥， 真空冷冻干燥机内的真空 度为 110-4 毫巴110-2 毫巴， 温度为 -8 -2， 保持 13-16 小时， 然后在 40-90 分钟 内升温至 2-8， 保持 2-9 小时， 得到含水量为 1-6% 的猪脾颗粒 ； 将猪脾颗粒置入工作温度为 3-6的超微粉碎机内粉碎， 得到猪脾微粉 ； 将猪脾微粉与注射用水按 1 ： 4-8 的比例混成浆液， 注射用水的温度为 2-4 ； 将步骤的浆液用离心沉降式冷冻分离机在 2-4下分离， 分离机的转速为 8000 转 / 分钟， 分离 7-12 分钟， 取上清液备用 ； 。

14、将上清液用截留分子量为 5000-6000 道尔顿的中空纤维超滤膜过滤， 得到滤液 ； 对滤液除菌灌装封口， 制成产品。 0008 本发明制备方法中使猪脾在低温下干燥， 并将干燥的猪脾颗粒制备成微粉， 从而 增加细胞脆性并使细胞充分破壁， 使多肽等活性成份充分溶出， 以达到提高口服液多肽及 核糖含量的目的。 0009 本发明的一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法可以有以下多种选择。 0010 实施例 1、 一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法， 步骤如下 ： 取健康猪脾去除脂肪及筋膜， 清洗后绞碎， 将绞碎后的猪脾与水按重量比 1 ： 3.5 的 比例混匀成浆， 在 -20冷冻成 10 毫米厚。

15、的冰体猪脾， 冷冻时间为 76 小时 ； 将步骤冷冻后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥， 真空冷冻干燥机内的真空 度为 110-3 毫巴， 温度为 -5， 保持 15 小时， 然后在 60 分钟内升温至 4， 保持 5 小时， 得到含水量为 3% 的猪脾颗粒 ； 将猪脾颗粒置入工作温度为 4的超微粉碎机内粉碎， 得到猪脾微粉 ； 说 明 书 CN 103989709 A 4 3/6 页 5 将猪脾微粉与注射用水按 1 ： 6 的比例混成浆液， 注射用水的温度为 3 ； 将步骤的浆液用离心沉降式冷冻分离机在 3下分离， 分离机的转速为 8000 转 / 分钟， 分离 9 分钟， 取上清液备用 。

16、； 将上清液用截留分子量为 5500 道尔顿的中空纤维超滤膜过滤， 得到滤液 ； 对滤液除菌灌装封口， 制成口服液产品。 0011 本发明上述方法中的各工序及参数的特定组合， 使口服液中猪脾多肽含量达到 2.78-2.87mg/ml， 核糖含量达到 79-81ug/ml， 用本发明的方法可做成多肽及核糖含量较高 的多种规格， 适用于临床的不同需要， 使临床应用选择范围宽。 用本发明方法制备的口服液 质量高， 其中不含任何化学物质及防腐剂， 无毒、 无菌， 临床应用安全性高。 0012 实施例 2、 一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法， 步骤如下 ： 取健康猪脾去除脂肪及筋膜， 清洗后绞碎， 。

17、将绞碎后的猪脾与水按重量比 1 ： 3 的比 例混匀成浆， 在 -20冷冻成 8 毫米厚的冰体猪脾， 冷冻时间为 72 小时 ； 将步骤冷冻后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥， 真空冷冻干燥机内的真空 度为 110-4 毫巴， 温度为 -8， 保持 13 小时， 然后在 40 分钟内升温至 2， 保持 2 小时， 得 到含水量为 1% 的猪脾颗粒 ； 将猪脾颗粒置入工作温度为 3的超微粉碎机内粉碎， 得到猪脾微粉 ； 将猪脾微粉与注射用水按 1 ： 4 的比例混成浆液， 注射用水的温度为 2 ； 将步骤的浆液用离心沉降式冷冻分离机在 2下分离， 分离机的转速为 8000 转 / 分钟， 分离。

18、 7 分钟， 取上清液备用 ； 将上清液用截留分子量为 5000 道尔顿的中空纤维超滤膜过滤， 得到滤液 ； 对滤液除菌灌装封口， 制成口服液产品。 0013 实施例 3、 一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法， 步骤如下 ： 取健康猪脾去除脂肪及筋膜， 清洗后绞碎， 将绞碎后的猪脾与水按重量比 1 ： 4 的比 例混匀成浆， 在 -20冷冻成 12 毫米厚的冰体猪脾， 冷冻时间为 80 小时 ； 将步骤冷冻后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥， 真空冷冻干燥机内的真空 度为 110-2 毫巴， 温度为 -2， 保持 16 小时， 然后在 90 分钟内升温至 8， 保持 9 小时， 得到含水量。

19、为 6% 的猪脾颗粒 ； 将猪脾颗粒置入工作温度为 6的超微粉碎机内粉碎， 得到猪脾微粉 ； 将猪脾微粉与注射用水按 1 ： 8 的比例混成浆液， 注射用水的温度为 4 ； 将步骤的浆液用离心沉降式冷冻分离机在 4下分离， 分离机的转速为 8000 转 / 分钟， 分离 12 分钟， 取上清液备用 ； 将上清液用截留分子量为 6000 道尔顿的中空纤维超滤膜过滤， 得到滤液 ； 对滤液除菌灌装封口， 制成口服液产品。 0014 实施例 4、 一种含猪脾多肽及核糖口服液的制备方法， 步骤如下 ： 取健康猪脾去除脂肪及筋膜， 清洗后绞碎， 将绞碎后的猪脾与水按重量比 1 ： 38 的比 例混匀成浆。

20、， 在 -20冷冻成 11 毫米厚的冰体猪脾， 冷冻时间为 78 小时 ； 将步骤冷冻后的冰体猪脾置入真空冷冻干燥机内干燥， 真空冷冻干燥机内的真空 度为110-3.5毫巴， 温度为-3， 保持14小时， 然后在80分钟内升温至7， 保持8小时， 得到含水量为 5% 的猪脾颗粒 ； 说 明 书 CN 103989709 A 5 4/6 页 6 将猪脾颗粒置入工作温度为 5的超微粉碎机内粉碎， 得到猪脾微粉 ； 将猪脾微粉与注射用水按 1 ： 7 的比例混成浆液， 注射用水的温度为 3.5 ； 将步骤的浆液用离心沉降式冷冻分离机在 3.5下分离， 分离机的转速为 8000 转 / 分钟， 分离 。

21、11 分钟， 取上清液备用 ； 将上清液用截留分子量为 5800 道尔顿的中空纤维超滤膜过滤， 得到滤液 ； 对滤液除菌灌装封口， 制成口服液产品。 0015 用本发明方法制备的猪脾多肽及核糖口服液产品的指标如下 ： 1、 成品指标如下 ： 2、 稳定性检测 上表显示本发明的制备方法稳定性良好。 0016 3、 安全检验 ： 毒性检验 ： 健康小鼠10只， 体重50-80g5只， 体重200-250g5只， 正常饮料喂养， 每日 3次将本发明口服液拌入饲料， 每日拌入量为每克体重0.2 ml， 连续观察14日， 10只鼠均未 出现毒性反应。 0017 健康兔 10 只， 体重 200-400g。

22、， 正常饲料喂养， 每日 2 次将本发明口服液拌入饲料， 每日拌入量为每克体重 0.15ml， 连续观察 7 日， 10 只兔均未发现局部及全身的不良反应。 0018 过敏检验 ： 健康豚鼠 6 只， 体重 200-250g， 隔日每只每次腹腔注射 0.5ml， 共 3 次， 进行致敏。每日观察每只动物的行为和体征。然后将其均分为 2 组， 每组 3 只， 分别在 说 明 书 CN 103989709 A 6 5/6 页 7 首次注射后第 14 日和第 21 日， 由静脉注射 1ml 进行激发 , 激发后 30 分钟内动物均无过 敏反应症状。 0019 4、 动物机体疫苗免疫效果试验 ： 用本。

23、发明实施例 1 的制备方法制备含猪脾多肽及核糖口服液， 对猪瘟疫苗进行免疫效 果试验， 试验分为 ： 疫苗组、 空白对照组各一组， 本发明口服液三种规格的高、 中、 低剂量组， 每组均采用健康猪 10 头。 0020 4.1 材料和方法 4.1.1 材料 本发明口服液三个规格 ： 10 ml ： 20mg( 多肽 ) ： 600ug（核糖） 10 ml ： 25mg( 多肽 ) ： 750ug（核糖） 10 ml ： 27mg( 多肽 ) ： 810ug（核糖） 。 0021 动物 ： 30 日龄猪仔。 0022 猪瘟兔化弱毒疫苗 ： 4.1.2 方法 疫苗组， 分为 2 组， 每组 5 头，。

24、 一组为空白对照组， 一组为疫苗对照组。 0023 本发明口服液三个规格、 高、 中、 低组， 9 组， 每组 10 头。 0024 试验方法 ： 空白对照组， 正常饲料喂养。疫苗对照组， 疫苗注射， 同时正常饲料喂 养。 口服液高剂量组， 疫苗注射， 正常饲料喂养， 三种规格口服液每种规格每日二次喂入， 每 日喂入量为每公斤体重 0.6mg， 中剂量组疫苗注射， 三种规格口服液， 每种规格每日均喂二 次， 每日喂入量为每公斤体重 0.3ml ； 低剂量组， 疫苗注射， 三种规格口服液， 每种规格每日 均喂入二次， 每日喂入量为每公斤体重量 0.1ml。 0025 4.1.3 疫苗抗体水平检测。

25、 疫苗免疫前、 疫苗免疫后的30天、 60天、 90天， 分别采血分离血清， 采用猪瘟抗体ELISA 检测试剂盒测定， 结果如下 ： 说 明 书 CN 103989709 A 7 6/6 页 8 注 ： *P 0.05， * P 0.01。 0026 上述试验结果表明， 本发明方法制备的口服液能提高猪瘟疫苗抗体滴度。 0027 用本发明方法制备的口服液指标检测， 按照现行 中国药典 、中国兽药典 及行 业通用方法检测。 用本发明方法制备的口服液未添加任何化学物质及防腐剂， 品质纯正， 在 20以下保存、 保存期可达 36 个月。本发明方法易于工业化生产， 易于机械化操作， 整个制 备过程为纯物理过程。本发明所述的方法未详述内容为公知技术。 说 明 书 CN 103989709 A 8 。