6，7二羟基5ΒD吡喃葡萄糖4ΒOD吡喃葡萄糖黄酮在制备抗炎药物中的用途.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 104083390 A (43)申请公布日 2014.10.08 CN 104083390 A (21)申请号 201410297230.9 (22)申请日 2014.06.28 A61K 31/7048(2006.01) A61P 29/00(2006.01) (71)申请人广西大学地址 530004 广西壮族自治区南宁市大学东路 100 号 (72)发明人王立升朱其琼戴航蒋敏捷 (54) 发明名称 6， 7- 二羟基 -5-D- 吡喃葡萄糖 -4-O-D- 吡喃葡萄糖黄酮在制备抗炎药物中的用途 (57) 摘要本发明涉及 6， 7- 二羟基 -5。

2、-D- 吡喃葡萄糖 -4-O-D- 吡喃葡萄糖黄酮在制备抗炎药物中的应用，该化合物可由菥蓂提取得到，具有显著的抗炎活性。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页说明书 6 页附图 10 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书1页说明书6页附图10页 (10)申请公布号 CN 104083390 A CN 104083390 A 1/1 页 2 1.6， 7- 二羟基 -5-D- 吡喃葡萄糖 -4-O-D- 吡喃葡萄糖黄酮在制备抗炎药物中的应用。 2. 根据权利要求 1 所述的应用，其特征在于所述炎症为无菌性炎症。权利要求书。

3、 CN 104083390 A 2 1/6 页 3 6， 7- 二羟基 -5-D- 吡喃葡萄糖 -4-O-D- 吡喃葡萄糖黄酮在制备抗炎药物中的用途技术领域 0001 本发明涉及一种黄酮的用途；具体涉及 6， 7- 二羟基 -5-D- 吡喃葡萄糖 -4-O-D- 吡喃葡萄糖黄酮在制备抗炎药物中的应用。背景技术 0002 炎症发生在局部，同时也可影响全身。局部临床特征是红、热、肿、痛和功能障碍。红、热是由于炎症局部血管扩张、血流加快所致。肿是由于局部炎症性充血、血液成分渗出引起。 0003 炎症过程中，一方面损伤因子直接或间接造成组织和细胞的破坏，另一方面通过。

4、炎症充血和渗出反应，以稀释、杀伤和包围损伤因子。同时通过实质和间质细胞的再生，使受损的组织得以修复和愈合。因此，可以说炎症是损伤和抗损伤的统一过程。目前传统的药物已很难满足社会需求，天然药物成为医药界关注的热点。 0004 6， 7-二羟基-5-D-吡喃葡萄糖-4-O-D-吡喃葡萄糖黄酮来自于菥蓂，在制备抗炎药物中有着良好的应用前景。发明内容 0005 本发明的目的是提供 6， 7- 二羟基 -5-D- 吡喃葡萄糖 -4-O-D- 吡喃葡萄糖黄酮在制备抗炎药物中的应用。 0006 本发明化合物 6， 7- 二羟基 -5-D- 吡喃葡萄糖 -4-O-D- 吡喃葡萄糖黄酮为。

5、天然产物，其结构式如下：可从菥蓂药材中提取获得，该化合物为黄棕色粉末，化学鉴定如下：说明书 CN 104083390 A 3 2/6 页 4 1HNMR （600MHz, MeOD-d4） :7.93 (2H, d, J=8.58 )， 7.24 (2H, d, J=8.58) ， 6.66 (1H, s)， 6.51 (1H, s)，显示为 4- 位取代黄酮苷元信号特征， 5.04 (1H, d, J=7.41) ， 4.90 (1H, d, J=9.90) 为构型的糖端基氢信号。:4.183.39 之间的多重峰为糖连接羟基的质子信号。 0007 ESI-MS m/z。

6、:595.1665M+H+，得出化合物分子量为594，分子式C27H30O15，不饱和度为 13 ： A 环、 B 环各分配 4 个， C 环 3 个，两个糖各分 1 个。 0008 在 1H-1H COSY 谱中，糖的端基质子 4.90 (1H, d, J=9.90) 与 4.17 (1H, m) 相关， 4.17 (1H, m) 与 3.42 (1H, m) 相关， 3.42 (1H, m) 与 3.48 (1H, m)、 3.73 (1H, m) 相关，结合 HSQC 可以确定葡萄糖 C-1C-6 的化学位移为： :74.8， 72.6， 80.1， 82.6， 71.。

7、3， 62.5。另外一个糖的端基质子 5.04 (1H, d, J=7.41) 与 3.49 (1H, m) 相关， 3.49 (1H, d, J=7.41) 与 3.42 (1H, m)、 3.73 (2H, m) 相关，同样结合 HSQC 可以确定葡萄糖 C-1C-6 的化学位移为 :101.70， 75.3， 77.9， 71.8， 78.3， 62.9。 0009 在 HMBC 谱中， :7.93 (2H, d, J=8.58)，分别与 162.1， 165.5 远程相关，由 DEPT谱可知 162.1， 165.5均为连氧季碳，可以确定C-4为苷化位置，再由:7.24 (2。

8、H, d, J=8.58)，分别与:126.1， 162.1远程相关， :126.1为普通季碳，由此可知C-2， C-1， C-4，化学位移分别为： 165.5， 126.1， 162.1。 6.51 (1H, s) 分别与 165.5， 158.8， 109.3 远程相关，由此可以确定 C-9 化学位移为 158.8， H-3 化学位移为 6.51，可以确定H-8化学位移为 6.66。糖端基质子 4.90 (1H, d, J=9.90) 分别与 72.6， 109.3 远程相关， 109.3 为普通季碳 C-5 的化学位移，由此可以确定另外一个糖连接在 C-5 位。糖端基。

9、质子 5.04 (1H, d, J=7.41) 与 162.1 远程相关。 0010 信号归属为： 1HNMR （600 MHz, MeOD-d 4）： 7.93 (2H, d, J=8.58, H-2, 6)， 7.24 (2H, d, J=8.58, H-3, 5)， 6.66 (1H, s, H-8)， 6.51 (1H, s, H-3)， 5.04 (1H, d, J=7.41, 4-OGlc-H-1)， 4.90 (1H, d, J=9.90, 5-Glc-H-1)。 0011 13CNMR （150MHz, MeOD-d 4）： 165.5 (C-2)， 96.3 (C-3)。

10、， 184.0 (C-4)， 109.3 (C-5)， 158.7 (C-6)， 165.1 (C-7)， 104.9 (C-8)， 158.8 (C-9)， 105.3 (C-10)， 126.1 (C-1)， 129.1 (C-2, C-6)， 162.1 (C-4)， 118.1 (C-3, C-5)， 5-Glc:74.8 (C-1)， 72.6 (C-2)， 80.1 (C-3)， 82.6 (C-4)， 71.3 (C-5)， 62.5 (C-6)， 4-O-Glc:101.70 (C-1)， 75.3 (C-2)， 77.9 (C-3)， 71.8 (C-4)， 78.3 (C-。

11、5)， 62.9 (C-6)。 0012 化合物结构归属及其相关谱数据见下表：说明书 CN 104083390 A 4 3/6 页 5 为了说明本发明化合物的抗炎活性，特将同属于菥蓂药材的异牡荆苷、芹菜素、异荭草苷作为对照说明本发明化合物的优异抗炎效果。 0013 菥蓂提取物抗炎活性实验 1 实验材料 1.1 实验动物 SPF 级昆明种系小鼠，雄性，体重 18-22g，均为广西医科大学实验动物中心提供。试验动物生产许可证 SCXK( 桂 )2009-0002，试验动物使用许可证 SCXK( 桂 )2009-0005。 0014 实验药品与试剂醋酸地塞米松片，由天津。

12、药业集团新郑股份有限公司生产，批号： 130328 ；角叉菜胶，由 Sigma 公司生产，批号： 9000071 ；说明书 CN 104083390 A 5 4/6 页 6 受试药品: 本发明化合物6， 7-二羟基-5-D-吡喃葡萄糖-4-O-D-吡喃葡萄糖黄酮、异荭草苷、异牡荆苷、芹菜素，自制。 0015 统计学处理所有数据均以s 表示，两组间比较采用 t 检验 2 试验方法 2.1 二甲苯致小鼠耳肿胀实验所有受试药分成三批实验，每次取小鼠， 20-22g，雌雄各半， 10 只 / 组，给药组灌胃给予（i.g.）。组别分别为：空白对照组、地塞。

13、米松对照组、各受试药物组。空白对照组给予等体积的含DMSO 5%和含吐温80 0.1%的水溶液，给药后1h，于小鼠右耳正反面均匀涂抹二甲苯 50l/ 只， 1h 后脱颈椎处死，用 9mm 打孔器在左右相同的部位打下耳片，精确称重，计算肿胀度（mg）及肿胀抑制率（%）。 0016 肿胀度 (mg)= 右耳耳片重 (mg)- 左耳耳片重 (mg)。 0017 抑制率 =( 空白组平均肿胀度 - 给药组平均肿胀度 )/ 空白组平均肿胀度 100%。 0018 角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响动物分组及给药方法同前（2.1），末次给药后 1h，在每鼠右侧足趾皮下注射 1% 。

14、角叉菜胶 0.05ml， 5h 后沿踝关节剪下左右两足，称重，计算肿胀度及肿胀抑制率。 0019 肿胀度（mg） = 右足重量（mg） - 左足重量 (mg) 抑制率 =（空白组平均肿胀度 - 给药组平均肿胀度） / 空白组平均肿胀度 100% 3 结果与分析 3.1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响与空白组相比，地塞米松组，受试药物组耳肿胀度均有下降。见下表。 0020 受试药物对小鼠耳肿胀度的影响（s） n=10 注：与空白组比较， *P 0.05 3.2 对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响与空白组相比，地塞米松组，受试药物组足趾肿胀度均有下降，结果见下表。 0021 受。

15、试药物对小鼠足趾肿胀度的影响（s） n=10 说明书 CN 104083390 A 6 5/6 页 7 注：与空白组比较， *P 0.05 4 结论二甲苯致小鼠耳片肿胀及角叉菜胶诱发小鼠足爪肿胀是常用的急性炎症模型，主要表现为局部的充血、水肿及渗出等病理反应过程，是应用最多的研究药物抗炎作用的方法之一。本试验应用这两种模型，对受试药抗炎活性进行了筛选。结果显示，本发明化合物 6， 7- 二羟基 -5-D- 吡喃葡萄糖 -4-O-D- 吡喃葡萄糖黄酮具有显著的抗炎活性。 0022 附图说明图 1 菥蓂提取物色谱图图 2 化合物的 1H-1H COSY 和 HMBC 。

16、图 3 化合物的 1HNMR 谱图（600 MHz, MeOD-d 4）图 4 化合物的 13CNMR 谱图（150 MHz, MeOD-d 4）图 5 化合物的 DEPT90 谱图（150 MHz, MeOD-d4）图 6 化合物的 DEPT135 谱图（150 MHz, MeOD-d4）图 7 化合物的 HHCOSY 谱图图 8 化合物的 HSQC 谱图图 9 化合物的 HMBC 谱图图 10 化合物的 ESI-MS 谱图具体实施方式实施例 1. 6， 7- 二羟基 -5-D- 吡喃葡萄糖 -4-O-D- 吡喃葡萄糖黄酮的制备称取菥蓂药材干燥粗粉 1000g，。

17、分别加入 10000mL 蒸馏水和 8000mL 蒸馏水在 120下回流提取 4h，将提取液趁热抽滤得滤液，合并两次滤液，用旋转蒸发仪旋蒸浓缩得到浸膏，在浸膏中加入 65% 的乙醇使之完全溶解，抽滤得滤液，将滤液进行浓缩、干燥，得到菥蓂水提醇沉浸膏；用蒸馏水将水提醇沉浸膏完全溶解，加入等量的石油醚循环萃取至无色，除去石油醚说明书 CN 104083390 A 7 6/6 页 8 层，得到水层溶液；将水层溶液分别用乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，分别萃取至无色。取正丁醇部位进行浓缩，得到正丁醇萃取部位浸膏，浸膏经水浴锅挥发和真空箱干燥后，得到正丁醇。

18、萃取部位；取正丁醇萃取部位，用蒸馏水溶解后倒入 D101 大孔树脂柱上端， 17 小时静态吸附后，用去离子水洗脱，直至洗脱液为无色，再用 30% 乙醇水溶液洗脱至洗脱液为无色，收集洗脱液进行浓缩至浸膏，真空干燥；再将该浸膏以半制备液相进行分离，液相条件如下：色谱柱：苏州环球 C18 半制备柱（10mm ID 250mm， 10m）流动相： 0.4冰醋酸水溶液 - 乙腈（A ： B）检测波长： 273nm 流速： 3.0 mLmin-1 进样量： 2.0 mL 柱温：室温洗脱梯度： t/min A/% B/% 0955 108515 307。

19、525 605050 在该条件下得到色谱图（见图 1），本发明化合物 6， 7- 二羟基 -5-D- 吡喃葡萄糖 -4-O-D- 吡喃葡萄糖黄酮出峰时间为 22.44min，分离该组份干燥即得。说明书 CN 104083390 A 8 1/10 页 9 图 1 说明书附图 CN 104083390 A 9 2/10 页 10 图 2 说明书附图 CN 104083390 A 10 3/10 页 11 图 3 说明书附图 CN 104083390 A 11 4/10 页 12 图 4 说明书附图 CN 104083390 A 12 5/10 页 13 图 5 说明书附图 CN 104083390 A 13 6/10 页 14 图 6 说明书附图 CN 104083390 A 14 7/10 页 15 图 7 说明书附图 CN 104083390 A 15 8/10 页 16 图 8 说明书附图 CN 104083390 A 16 9/10 页 17 图 9 说明书附图 CN 104083390 A 17 10/10 页 18 图 10 说明书附图 CN 104083390 A 18 。

摘要
申请专利号：	CN201410297230.9	申请日：	2014.06.28
公开号：	CN104083390A	公开日：	2014.10.08
当前法律状态：	撤回	有效性：	无权
法律详情：	发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):A61K 31/7048申请公布日:20141008\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):A61K 31/7048申请日:20140628\|\|\|公开
IPC分类号：	A61K31/7048; A61P29/00	主分类号：	A61K31/7048
申请人：	广西大学
发明人：	王立升; 朱其琼; 戴航; 蒋敏捷
地址：	530004 广西壮族自治区南宁市大学东路100号
优先权：
专利代理机构：		代理人：
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内容摘要

本发明涉及6，7-二羟基-5-β-D-吡喃葡萄糖-4`-β-O-D-吡喃葡萄糖黄酮在制备抗炎药物中的应用，该化合物可由菥蓂提取得到，具有显著的抗炎活性。

权利要求书

权利要求书
1. 6，7-二羟基-5-β-D-吡喃葡萄糖-4`-β-O-D-吡喃葡萄糖黄酮在制备抗炎药物中的应用。

2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述炎症为无菌性炎症。

说明书

说明书6,7-二羟基-5-β-D-吡喃葡萄糖-4`-β-O-D-吡喃葡萄糖黄酮在制备抗炎药物中的用途
技术领域
本发明涉及一种黄酮的用途；具体涉及6，7-二羟基-5-β-D-吡喃葡萄糖-4`-β-O-D-吡喃葡萄糖黄酮在制备抗炎药物中的应用。
背景技术
炎症发生在局部，同时也可影响全身。局部临床特征是红、热、肿、痛和功能障碍。红、热是由于炎症局部血管扩张、血流加快所致。肿是由于局部炎症性充血、血液成分渗出引起。
炎症过程中，一方面损伤因子直接或间接造成组织和细胞的破坏，另一方面通过炎症充血和渗出反应，以稀释、杀伤和包围损伤因子。同时通过实质和间质细胞的再生，使受损的组织得以修复和愈合。因此，可以说炎症是损伤和抗损伤的统一过程。目前传统的药物已很难满足社会需求，天然药物成为医药界关注的热点。
6，7-二羟基-5-β-D-吡喃葡萄糖-4`-β-O-D-吡喃葡萄糖黄酮来自于菥蓂，在制备抗炎药物中有着良好的应用前景。
发明内容
本发明的目的是提供6，7-二羟基-5-β-D-吡喃葡萄糖-4`-β-O-D-吡喃葡萄糖黄酮在制备抗炎药物中的应用。
    本发明化合物6，7-二羟基-5-β-D-吡喃葡萄糖-4`-β-O-D-吡喃葡萄糖黄酮为天然产物，其结构式如下：

可从菥蓂药材中提取获得，该化合物为黄棕色粉末，化学鉴定如下：
1HNMR （600MHz, MeOD-d4）δ:7.93 (2H, d, J=8.58 )，7.24 (2H, d, J=8.58) ，6.66 (1H, s)，6.51 (1H, s)，显示为4`-位取代黄酮苷元信号特征，5.04 (1H, d, J=7.41) ，4.90 (1H, d, J=9.90)为β构型的糖端基氢信号。δ:4.18~3.39之间的多重峰为糖连接羟基的质子信号。
ESI-MS m/z:595.1665[M+H]+，得出化合物分子量为594，分子式C27H30O15，不饱和度为13：A环、B环各分配4个，C环3个，两个糖各分1个。
在1H-1H COSY谱中，糖的端基质子4.90 (1H, d, J=9.90) 与4.17 (1H, m) 相关，4.17 (1H, m) 与3.42 (1H, m) 相关，3.42 (1H, m) 与3.48 (1H, m)、3.73 (1H, m)相关，结合HSQC可以确定葡萄糖C-1``~C-6``的化学位移为：δ:74.8，72.6，80.1，82.6，71.3，62.5。另外一个糖的端基质子5.04 (1H, d, J=7.41) 与3.49 (1H, m)相关，3.49 (1H, d, J=7.41) 与3.42 (1H, m)、3.73 (2H, m) 相关，同样结合HSQC可以确定葡萄糖C-1```~C-6```的化学位移为δ:101.70，75.3，77.9，71.8，78.3，62.9。
在HMBC谱中，δ:7.93 (2H, d, J=8.58)，分别与δ 162.1，165.5远程相关，由DEPT谱可知δ 162.1，165.5均为连氧季碳，可以确定C-4`为苷化位置，再由δ:7.24 (2H, d, J=8.58)，分别与δ:126.1，162.1远程相关，δ:126.1为普通季碳，由此可知C-2，C-1`，C-4`，化学位移分别为：165.5，126.1，162.1。δ 6.51 (1H, s) 分别与δ 165.5，158.8，109.3远程相关，由此可以确定C-9化学位移为δ 158.8，H-3化学位移为δ 6.51，可以确定H-8化学位移为δ 6.66。糖端基质子δ 4.90 (1H, d, J=9.90) 分别与δ 72.6，109.3远程相关，δ 109.3为普通季碳C-5的化学位移，由此可以确定另外一个糖连接在C-5位。糖端基质子5.04 (1H, d, J=7.41) 与162.1远程相关。
信号归属为：
1HNMR （600 MHz, MeOD-d4）δ：7.93 (2H, d, J=8.58, H-2`, 6`)，7.24 (2H, d, J=8.58, H-3`, 5`)，6.66 (1H, s, H-8)，6.51 (1H, s, H-3)，5.04 (1H, d, J=7.41, 4`-OGlc-H-1```)，4.90 (1H, d, J=9.90, 5-Glc-H-1``)。
13CNMR （150MHz, MeOD-d4）δ：165.5 (C-2)，96.3 (C-3)，184.0 (C-4)，109.3 (C-5)，158.7 (C-6)，165.1 (C-7)，104.9 (C-8)，158.8 (C-9)，105.3 (C-10)，126.1 (C-1`)，129.1 (C-2`, C-6`)，162.1 (C-4`)，118.1 (C-3`, C-5`)，5-Glc:74.8 (C-1``)，72.6 (C-2``)，80.1 (C-3``)，82.6 (C-4``)，71.3 (C-5``)，62.5 (C-6``)，4`-O-Glc:101.70 (C-1```)，75.3 (C-2```)，77.9 (C-3```)，71.8 (C-4```)，78.3 (C-5```)，62.9 (C-6```)。

化合物结构归属及其相关谱数据见下表：

为了说明本发明化合物的抗炎活性，特将同属于菥蓂药材的异牡荆苷、芹菜素、异荭草苷作为对照说明本发明化合物的优异抗炎效果。
菥蓂提取物抗炎活性实验
1 实验材料
1.1 实验动物
SPF级昆明种系小鼠，雄性，体重18-22g，均为广西医科大学实验动物中心提供。试验动物生产许可证SCXK(桂)2009-0002，试验动物使用许可证SCXK(桂)2009-0005。
实验药品与试剂
醋酸地塞米松片，由天津药业集团新郑股份有限公司生产，批号：130328；角叉菜胶，由Sigma公司生产，批号：9000071；
    受试药品: 本发明化合物6，7-二羟基-5-β-D-吡喃葡萄糖-4`-β-O-D-吡喃葡萄糖黄酮、异荭草苷、异牡荆苷、芹菜素，自制。
统计学处理
所有数据均以±s表示，两组间比较采用t检验
2 试验方法
2.1二甲苯致小鼠耳肿胀实验
所有受试药分成三批实验，每次取小鼠，20-22g，雌雄各半，10只/组，给药组灌胃给予（i.g.）。组别分别为：空白对照组、地塞米松对照组、各受试药物组。空白对照组给予等体积的含DMSO 5%和含吐温80 0.1%的水溶液，给药后1h，于小鼠右耳正反面均匀涂抹二甲苯50μl/只，1h后脱颈椎处死，用9mm打孔器在左右相同的部位打下耳片，精确称重，计算肿胀度（mg）及肿胀抑制率（%）。
肿胀度(mg)=右耳耳片重(mg)-左耳耳片重(mg)。
抑制率=(空白组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/空白组平均肿胀度×100%。
角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响
动物分组及给药方法同前（2.1），末次给药后1h，在每鼠右侧足趾皮下注射1%角叉菜胶0.05ml，5h后沿踝关节剪下左右两足，称重，计算肿胀度及肿胀抑制率。
肿胀度（mg）=右足重量（mg）-左足重量(mg)
抑制率=（空白组平均肿胀度-给药组平均肿胀度）/空白组平均肿胀度×100%
3 结果与分析
3.1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
与空白组相比，地塞米松组，受试药物组耳肿胀度均有下降。见下表。
  受试药物对小鼠耳肿胀度的影响   （±s） n=10

     注：与空白组比较，*P <0.05
3.2 对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响
与空白组相比，地塞米松组，受试药物组足趾肿胀度均有下降，结果见下表。

受试药物对小鼠足趾肿胀度的影响   （±s） n=10

     注：与空白组比较，*P <0.05
4 结论
二甲苯致小鼠耳片肿胀及角叉菜胶诱发小鼠足爪肿胀是常用的急性炎症模型，主要表现为局部的充血、水肿及渗出等病理反应过程，是应用最多的研究药物抗炎作用的方法之一。本试验应用这两种模型，对受试药抗炎活性进行了筛选。结果显示，本发明化合物6，7-二羟基-5-β-D-吡喃葡萄糖-4`-β-O-D-吡喃葡萄糖黄酮具有显著的抗炎活性。

附图说明
图1 菥蓂提取物色谱图
图2 化合物的1H-1H COSY和HMBC
图3 化合物的1HNMR谱图（600 MHz, MeOD-d4）
图4化合物的13CNMR谱图（150 MHz, MeOD-d4）
图5化合物的DEPT90谱图（150 MHz, MeOD-d4）
图6化合物的DEPT135谱图（150 MHz, MeOD-d4）
图7 化合物的HHCOSY谱图
图8化合物的HSQC谱图
图9化合物的HMBC谱图
图 10化合物的ESI-MS谱图
具体实施方式
实施例1.
6，7-二羟基-5-β-D-吡喃葡萄糖-4`-β-O-D-吡喃葡萄糖黄酮的制备
称取菥蓂药材干燥粗粉1000g，分别加入10000mL蒸馏水和8000mL蒸馏水在120℃下回流提取4h，将提取液趁热抽滤得滤液，合并两次滤液，用旋转蒸发仪旋蒸浓缩得到浸膏，在浸膏中加入65%的乙醇使之完全溶解，抽滤得滤液，将滤液进行浓缩、干燥，得到菥蓂水提醇沉浸膏；
     用蒸馏水将水提醇沉浸膏完全溶解，加入等量的石油醚循环萃取至无色，除去石油醚层，得到水层溶液；
将水层溶液分别用乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，分别萃取至无色。取正丁醇部位进行浓缩，得到正丁醇萃取部位浸膏，浸膏经水浴锅挥发和真空箱干燥后，得到正丁醇萃取部位；
取正丁醇萃取部位，用蒸馏水溶解后倒入D101大孔树脂柱上端，17小时静态吸附后，用去离子水洗脱，直至洗脱液为无色，再用30%乙醇水溶液洗脱至洗脱液为无色，收集洗脱液进行浓缩至浸膏，真空干燥；
再将该浸膏以半制备液相进行分离，液相条件如下：
色谱柱：苏州环球C18半制备柱（10mm ID ×250mm，10μm）
流动相：0.4％冰醋酸水溶液-乙腈（A：B）
检测波长：273nm
流速：3.0 mL·min-1
进样量：2.0 mL
柱温：室温
洗脱梯度：t/minA/%B/%0955108515307525605050
在该条件下得到色谱图（见图1），本发明化合物6，7-二羟基-5-β-D-吡喃葡萄糖-4`-β-O-D-吡喃葡萄糖黄酮出峰时间为22.44min，分离该组份干燥即得。