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1、(10)申请公布号 CN 102805341 A (43)申请公布日 2012.12.05 CN 102805341 A *CN102805341A* (21)申请号 201210239470.4 (22)申请日 2012.07.11 A23L 1/29(2006.01) (71)申请人 北京阳光一佰生物技术开发有限公 司 地址 101118 北京市通州区宋庄镇小堡村阳 光路 1 号 (72)发明人 习文有 吴万有 (54) 发明名称 一种山芪参胶囊的五次发酵制备方法 (57) 摘要 本发明涉及一种山芪参胶囊的五次发酵制备 方法， 所述山芪参胶囊的活性成分包括重量份为 葛根 10.0-30.0。
2、、 黄芪 8.7-25.5、 山药 5.0-15.0、 桑叶2.5-7.5、 丹参2.5-7.5的中药原料经益生菌 接种， 置于高温有氧和低温无氧条件下， 五次发酵 制成的发酵液， 与 0.0035-0.0105 重量份的吡啶 甲酸铬混合而成。本发明采用采用人体肠道内的 多种益生菌， 五次发酵， 产品经长期临床和实践证 明， 发酵中药相比传统中药药效提高 4-28 倍。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 1/1 页 2 1. 一种山芪参胶囊的五次发酵制备方法， 其特征在于，。
3、 所述山芪参胶囊的活性成分包 括重量份为葛根 10.0-30.0、 黄芪 8.7-25.5、 山药 5.0-15.0、 桑叶 2.5-7.5、 丹参 2.5-7.5 的中药原料经益生菌接种， 置于高温有氧和低温无氧条件下， 五次发酵制成的发酵液， 与 0.0035-0.0105 重量份的吡啶甲酸铬混合而成， 接入的菌种重量占总重量的 10-15%， 第五 次发酵至每 ml 活菌数达到个 105-109， 所述五次发酵的条件为 ： 第一次发酵 ： 将各中药原料单独发酵， 将各益生菌种分别接种于培养基中， 培养基的重 量份组成包括 K2HPO4 0.5-1.5， MgSO4 0.5-1， NaCl。
4、 1.5-2.5、 NaHCO3 0.1-0.3g， 起始 pH 值 为 6.2-7.2， 培养温度 25-27， 摇床转速 120-180 转 / 分钟， 培养时间 170-230 小时， 获得 的发酵液经灭菌、 过滤和冷冻处理得第一次发酵液、 待用， ； 第二次发酵 ： 取各个药材原料的第一次发酵液， 将各益生菌种分别接种于培养基中， 继续单独发酵， 培养基同第一次发酵， 起始 pH 值为 6.2-7.2， 接种量 6-12， 培养温度 25-27， 摇床转速 140-200 转 / 分钟， 培养时间 160-200 小时， 获得的发酵液经灭菌、 过滤 和冷冻处理， 得第二次发酵液、 待用。
5、 ； 第三次发酵 ： 取各个药材原料的第二次发酵液， 混合， 将各益生菌种分别接种于培养基 中， 起始 pH 值为 6.2-7.2 ； 培养基同第一次发酵， 接种量 5-12， 培养温度 25-27， 搅拌转 速 120-160 转 / 分钟， 培养时间 120-200 小时， 获得的发酵液经灭菌、 过滤和冷冻处理， 得第 三次发酵液、 待用 ； 第四次发酵 ： 取第三次发酵液， 将各益生菌种分别接种于培养基中， 培养基同第一次发 酵， 起始 pH 值为 6.2-7.2， 接种量 5-12， 培养温度 25-27， 搅拌转速 100-190 转 / 分钟， 培养时间 100-180 小时， 获。
6、得的发酵液经灭菌、 过滤和冷冻处理， 得第四次发酵液、 待用 ； 第五次发酵 ： 取第四次发酵液， 培养基同第一次发酵， 起始 pH 值为 6.2-7.2， 将各益生 菌种分别接种于培养基中， 在 37左右发酵 12 小时， 获得的发酵液过滤， 浓缩， 干燥， 即得。 2. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述中药原料经二氧化碳超临界提取后 经益生菌接种， 其中萃取温度 40-60、 解析压力 6-8Mpa、 解析温度 30-45、 萃取压力 20-30Mpa、 萃取时间 1-3 小时。 3. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述益生菌为高温放线菌、 酵母菌、 嗜热链 。
7、球菌、 嗜酸乳杆菌、 明串珠菌、 保加利亚乳杆菌、 地衣芽孢杆菌、 农杆菌、 青春双歧杆菌的一 种或组合。 4. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述益生菌的重量份配比为酵母菌 1-3、 嗜 热链球菌 1-3、 嗜酸乳杆菌 1-3、 明串珠菌 1-3、 保加利亚乳杆菌 1-3。 5. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述中药原料与培养基按 1 3-6 混合。 6.如权利要求1所述的方法， 其特征在于， 包括如下重量份中药原料与0.0056-0.0084 重量份的吡啶甲酸铬 ： 葛根 16.0-24.0 黄芪 14.0-21.0 山药 8.0-12.0 桑叶 4.0-6.。
8、0 丹参 4.0-6.0。 7.如权利要求6所述的方法， 其特征在于， 由如下重量份中药原料与280mg的吡啶甲酸 铬制成 1000 粒胶囊 ： 葛根 800g 黄芪 700g 山药 400g 桑叶 200g 丹参 200g。 权 利 要 求 书 CN 102805341 A 2 1/5 页 3 一种山芪参胶囊的五次发酵制备方法 技术领域 0001 本发明属于保健食品领域， 特别涉及一种山芪参胶囊的五次发酵制备方法。 背景技术 0002 山芪参胶囊为效果显著、 安全低毒、 配方精简的辅助降血糖药物， 为中国国家药监 局批准上市的保健食品， 该产品已经申请专利 CN2011104129944, 。
9、是由精选的葛根、 黄芪、 山药、 桑叶、 丹参等 5 味中药材经过科学配比制备而成， 经功能试验和人体试食试验均表明 本发明产品具有显著的辅助降糖效果， 经多年的临床应用表明， 有效率达到 99% 以上 ； 经安 全性试验表明， 本发明产品安全低毒， 符合国家规定的人体安全性标准。然而， 由于中药在 人体内需要消化分解过程， 加之中药中有较多的无治疗活性的大分子物质， 对于产品的疗 效会有较大影响， 因而， 只有对山芪参胶囊的制备工艺的不断改进， 才能进一步提高该药物 的疗效。 发明内容 0003 本发明提供了一种具有更高治愈率的山芪参胶囊的五次发酵制备方法， 具体的技 术方案为 ： 0004。
10、 本发明的山芪参胶囊的五次发酵制备方法， 保留原有山芪参胶囊所需的中药 原料组合及配比， 即葛根 10.0-30.0、 黄芪 8.7-25.5、 山药 5.0-15.0、 桑叶 2.5-7.5、 丹 参 2.5-7.5， 经益生菌接种， 置于高温有氧和低温无氧条件下， 五次发酵制成的发酵液， 与 0.0035-0.0105 重量份的吡啶甲酸铬混合而成， 接入的菌种重量占总重量的 10-15%， 第五 次发酵至每 ml 活菌数达到个 105-109， 所述五次发酵的条件为 ： 0005 第一次发酵 ： 将各中药原料单独发酵， 将各益生菌种分别接种于培养基中， 培养基 的重量份组成包括 K2HPO。
11、4 0.5-1.5， MgSO4 0.5-1， NaCl 1.5-2.5、 NaHCO3 0.1-0.3g， 起始 pH 值为 6.2-7.2， 培养温度 25-27， 摇床转速 120-180 转 / 分钟， 培养时间 170-230 小时， 获 得的发酵液经灭菌、 过滤和冷冻处理得第一次发酵液、 待用， ； 0006 第二次发酵 ： 取各个药材原料的第一次发酵液， 将各益生菌种分别接种于培养基 中， 继续单独发酵， 培养基同第一次发酵， 起始 pH 值为 6.2-7.2， 接种量 6-12， 培养温度 25-27， 摇床转速 140-200 转 / 分钟， 培养时间 160-200 小时，。
12、 获得的发酵液经灭菌、 过滤 和冷冻处理， 得第二次发酵液、 待用 ； 0007 第三次发酵 ： 取各个药材原料的第二次发酵液， 混合， 将各益生菌种分别接种于培 养基中， 起始 pH 值为 6.2-7.2 ； 培养基同第一次发酵， 接种量 5-12， 培养温度 25-27， 搅 拌转速 120-160 转 / 分钟， 培养时间 120-200 小时， 获得的发酵液经灭菌、 过滤和冷冻处理， 得第三次发酵液、 待用 ； 0008 第四次发酵 ： 取第三次发酵液， 将各益生菌种分别接种于培养基中， 培养基同第一 次发酵， 起始 pH 值为 6.2-7.2， 接种量 5-12， 培养温度 25-2。
13、7， 搅拌转速 100-190 转 / 分钟， 培养时间 100-180 小时， 获得的发酵液经灭菌、 过滤和冷冻处理， 得第四次发酵液、 待 说 明 书 CN 102805341 A 3 2/5 页 4 用 ； 0009 第五次发酵 ： 取第四次发酵液， 培养基同第一次发酵， 起始 pH 值为 6.2-7.2， 将各 益生菌种分别接种于培养基中， 在 37左右发酵 12 小时， 获得的发酵液过滤， 浓缩， 干燥， 即得。 0010 为了获得更好的发酵效果， 本发明的中药原料在发酵前， 可先经二氧化碳超临界 提取后经益生菌接种， 其中萃取温度 45-60、 解析压力 6-8Mpa、 解析温度 。
14、30-40、 萃取压 力 20-35Mpa、 萃取时间 2-3 小时。 0011 本发明的益生菌选自但不限于高温放线菌、 酵母菌、 嗜热链球菌、 嗜酸乳杆菌、 明 串珠菌、 保加利亚乳杆菌、 地衣芽孢杆菌、 农杆菌、 青春双歧杆菌的一种或组合， 均为已被市 售或其他方式公开菌种。 0012 本发明中益生菌的较佳的重量份配比为酵母菌 1-3、 嗜热链球菌 1-3、 嗜酸乳杆菌 1-3、 明串珠菌 1-3、 保加利亚乳杆菌 1-3。 0013 本发明的各次发酵中， 中药原料与培养基按 1 3-6 混合获得最佳效果。 0014 本发明的更优选的中药原料重量份配比为葛根 16.0-24.0、 黄芪 1。
15、4.0-21.0、 山药 8.0-12.0、 桑叶 4.0-6.0、 丹参 4.0-6.0， 与 0.0056-0.0084 重量份的吡啶甲酸铬配伍使用。 0015 最佳的是按如下重量份中药原料与 280mg 的吡啶甲酸铬制成 1000 粒胶囊， 葛根 800g、 黄芪 700g、 山药 400g、 桑叶 200g、 丹参 200g。 0016 本发明的有益效果为 ： 采用五次发酵， 模拟中药在人体内的消化分解过程， 采用现 代生物工程技术， 在人体外建立一个 “工业化肠胃系统” ， 采用人体肠道内的多种益生菌， 对 中药进行预消化、 分解和转化， 把大分子的中间物质， 分解转化成为能够被直接。
16、吸收的有效 小分子物质。人体试食证明， 本发明方法制得的产品相比传统山芪参胶囊药效提高 4-28 倍。下面通过试验例对本发明做进一步说明 ： 0017 试验例人体试食试验 0018 1 材料和方法 0019 1.1 样品 ： 五次发酵法山芪参胶囊 （试食组服用） 和传统山芪参胶囊 （对照组服用） 均由北京阳光一佰生物技术开发有限公司提供。食用方法为每日 2 次， 每次 2 粒。 0020 对照组数据引用专利 CN2011104129944 试食试验的 “试食组” 数据。 0021 1.2 受试者选择 0022 1.2.1 纳入标准 ： 征集经饮食控制或口服降糖药后病情稳定、 不需要更换药物 品。
17、种及剂量、 只服用维持量降糖药的成年 II 型糖尿病例， 年龄在 18-65 岁， 空腹血糖 7.8mmol/L， 或餐后 2 小时血糖 11.1mmol/L。 0023 1.2.2 排除标准 0024 1.2.2.1I 型糖尿病人。 0025 1.2.2.2 年龄在 18-65 岁以外者， 妊娠或哺乳妇女， 对受试样品过敏者。 0026 1.2.2.3 有严重心、 肝、 肾等并发症， 或合并有其他严重原发疾病， 精神病患者， 服 用糖皮质激素或其它影响血糖药物者。 0027 1.2.2.4 不合作者， 无法判断疗效或资料不全者。 0028 1.2.2.5 近 3 个月内有糖尿病酮症、 酸中毒。
18、以及感染者。 0029 1.2.2.6 短期内服用与受试功能有关的物品， 影响到对结果的判定者。 说 明 书 CN 102805341 A 4 3/5 页 5 0030 1.3 试验设计与分组 ： 随机分为受试组和对照组。各组采用自身对照设计， 两组间 对照设计。 0031 1.4 试食方法 ： 54 例受试者， 在原服用的降糖药物品种及剂量均不变的基础上， 加 服五次发酵山芪参胶囊， 服用方法均为每日二次， 每次 2 粒。试食者原饮食习惯不变。 0032 1.5 仪器与试剂 ： CYSMEX-SY18001 型血球计数仪， Ci8200 雅培生化 - 免疫工作站， 长春迪瑞 -H500 全自。
19、动尿液分析仪。 0033 结果 ： 0034 表 1 试食前后空腹血糖比较 （mmol/L,XS） 0035 0036 0037 表 5 餐后 2 小时血糖比较 （mmol/L,XS） 0038 0039 # 表示自身前后比较 P0.05 * 表示两组间比较 P0.05 0040 表 6 空腹尿糖结果 （XS） 0041 0042 表 7 糖尿病症状治愈率比较 0043 说 明 书 CN 102805341 A 5 4/5 页 6 0044 结果与判定 0045 实验周期 1 个月， 结果表明， 五次发酵法山芪参胶囊能使 II 型糖尿病人的空腹血 糖平均下降 1.70+1.97mmol/L （。
20、下降 17.0%） ， 餐后血糖下降 3.903.62mol/L （下降 22.8%） ， 有效率提高达 8.6-18.6%。 具体实施方式 0046 最佳实施例制备 1000 粒胶囊 0047 中药原料 ： 葛根 800g、 黄芪 700g、 山药 400g、 桑叶 200g 丹参 200g ； 0048 吡啶甲酸铬 280mg ； 0049 培养基 ： K2HPO4 MgSO4 NaCl NaHCO3=1 0.5 2 0.2 ； 0050 中药原料 ： 培养基 =1 4 ； 0051 益生菌的重量份配比 ： 酵母菌嗜热链球菌嗜酸乳杆菌明串珠菌保加利亚 乳杆菌 =1 1 1 2 1 2 00。
21、52 具体方法为 ： 0053 A 超临界萃取 0054 取所有中药原料经二氧化碳超临界提取， 其中萃取温度 40-60、 解析压力 6-8Mpa、 解析温度 30-45、 萃取压力 20-30Mpa、 萃取时间 1-3 小时。 0055 B 五次发酵 0056 第一次发酵 ： 将各中药原料单独发酵， 将各益生菌种分别接种于培养基中， 起始 pH 值为 7， 培养温度 25， 摇床转速 140 转 / 分钟， 培养时间 200 小时， 获得的发酵液经灭 菌、 过滤和冷冻处理得第一次发酵液、 待用， ； 0057 第二次发酵 ： 取各个药材原料的第一次发酵液， 将各益生菌种分别接种于培养基 中，。
22、 继续单独发酵， 起始 pH 值为 7， 接种量 10， 培养温度 25， 摇床转速 200 转 / 分钟， 培 养时间 160 小时， 获得的发酵液经灭菌、 过滤和冷冻处理， 得第二次发酵液、 待用 ； 0058 第三次发酵 ： 取各个药材原料的第二次发酵液， 混合， 将各益生菌种分别接种于培 养基中， 起始 pH 值为 7 ； 接种量 10， 培养温度 25， 搅拌转速 140 转 / 分钟， 培养时间 120 小时， 获得的发酵液经灭菌、 过滤和冷冻处理， 得第三次发酵液、 待用 ； 0059 第四次发酵 ： 取第三次发酵液， 将各益生菌种分别接种于培养基中， 起始 pH 值为 7， 接。
23、种量 10， 培养温度 25， 搅拌转速 140 转 / 分钟， 培养时间 180 小时， 获得的发酵液 经灭菌、 过滤和冷冻处理， 得第四次发酵液、 待用 ； 说 明 书 CN 102805341 A 6 5/5 页 7 0060 第五次发酵 ： 取第四次发酵液， 培养基同第一次发酵， 起始 pH 值为 6.2-7.2， 将各 益生菌种分别接种于培养基中， 在 37左右发酵 12 小时， 获得的发酵液过滤， 浓缩， 干燥， 即得。 0061 C 成囊 0062 将五次发酵后的活性物质与吡啶甲酸铬充分混合后， 加入适量辅料， 按照常规胶 囊制备技术， 制得 1000 粒。 0063 以上所述实施例仅仅是本发明的优选实施方式进行描述， 并非对本发明的范围进 行限定， 在不脱离本发明设计精神的前提下， 本领域普通技术人员对本发明的技术方案作 出的各种变形和改进， 均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。 说 明 书 CN 102805341 A 7 。