翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物及其制备方法和应用.pdf

《翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物及其制备方法和应用.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物及其制备方法和应用.pdf（6页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、(10)申请公布号 CN 102908422 A (43)申请公布日 2013.02.06 CN 102908422 A *CN102908422A* (21)申请号 201210376958.1 (22)申请日 2012.09.29 A61K 36/73(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (71)申请人 暨南大学 地址 510632 广东省广州市黄埔大道西 601 号 (72)发明人 蔡宇 张荣华 (74)专利代理机构 广州市华学知识产权代理有 限公司 44245 代理人 裘晖 陈燕娴 (54) 发明名称 翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物及其制备方 法和应用 (57) 摘。

2、要 本发明提供一种翻白草逆转肿瘤多药耐药提 取物的制备方法， 包括下述步骤 ： 翻白草粉碎， 过 40 目筛， 用 2 5 倍 55% 90乙醇浸泡 1-3 天， 过滤， 收集滤液， 回收乙醇浓缩至粘稠状液体， 加 60 80乙醇使其溶解， 室温下放置 1-3 天， 用60%80乙醇洗滤， 收集滤液， 滤液浓缩至相 对密度为 1.02-1.04g/cm3的滤液浓缩液， 将滤液 浓缩液干燥后得到翻白草逆转肿瘤多药耐药提取 物， 提取物粉碎， 过筛， 得到翻白草逆转肿瘤多药 耐药提取物的细粉。本发明所制备得到的翻白草 提取物对逆转肿瘤多药耐药有很好的作用， 可将 其应用于制备常规的中药制剂剂型如片。

3、剂、 胶囊 剂、 颗粒剂。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 1/1 页 2 1. 一种翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物的制备方法， 其特征在于包括下述步骤 ： 翻白 草粉碎， 过 40 目筛， 用 2 5 倍 55% 90乙醇浸泡 1-3 天， 过滤， 收集滤液， 回收乙醇浓缩 至粘稠状液体， 加 60 80乙醇使其溶解， 室温下放置 1-3 天， 用 60% 80乙醇洗滤， 收集滤液， 滤液浓缩至相对密度为 1.02-1.04g/cm3得滤液浓缩液， 将滤液浓缩液干燥， 得。

4、到 翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物 ； 粉碎， 过筛， 得翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物的细粉。 2. 根据权利要求 1 中所述的一种翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物的制备方法， 其特征 在于包括下述步骤 ： 翻白草粉碎， 过 40 目筛， 用 3 倍 75乙醇浸泡 2 天， 过滤， 收集滤液， 回 收乙醇浓缩至粘稠状液体， 加 70乙醇使其溶解， 室温下放置 2 天， 用 70乙醇洗滤， 收集 滤液， 滤液浓缩至相对密度为 1.03g/cm3得滤液浓缩液， 将滤液浓缩液干燥， 得到翻白草逆 转肿瘤多药耐药提取物 ； 粉碎， 过 100 目筛， 得翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物的细粉。 3. 根据权利要。

5、求 1 所述的制备方法， 其特征在于 ： 所述的干燥为冷冻干燥、 真空干燥、 喷雾干燥中的一种 ； 所述的过筛是过 100-200 目的筛网。 4. 根据权利要求 3 所述的制备方法， 其特征在于 ： 所述喷雾干燥的条件为进风温度为 110 130 ； 出风温度为 70 90 ； 雾化器转速为 45 55 转 / 分钟 ； 进料速度为 3 6ml/ 分钟。 5. 根据权利要求 3 所述的制备方法， 其特征在于 ： 所述喷雾干燥的条件为进风温度为 120 ； 出风温度为 80 ； 雾化器转速为 50 转 / 分钟 ； 进料速度为 5ml/ 分钟。 6.一种由权利要求15任一项所述的制备方法制备而。

6、成的翻白草逆转肿瘤多药耐药 提取物。 7. 根据权利要求 6 任一项所述的翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物在制备常规的中药 制剂剂型中的应用， 其特征在于 ： 在干燥粉中加入制备不同中药制剂剂型时需要的各种常 规辅料， 采用常规的中药制剂制备方法将其制备成常见的中药制剂剂型。 8. 根据权利要求 7 所述的应用， 其特征在于 ： 所述中药制剂剂型为片剂、 胶囊剂、 颗粒 剂。 权 利 要 求 书 CN 102908422 A 2 1/4 页 3 翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物及其制备方法和应用 技术领域 0001 本发明属于中药领域， 特别涉及翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物及其制备方法和 应用。 背景。

7、技术 0002 肿瘤细胞对抗肿瘤药物的多药耐药 （multidrug resistance， MDR） 是导致肿瘤化 学药物治疗失败的常见因素。目前国内肿瘤患病率呈上升趋势， 并且 90% 的肿瘤患者死亡 在不同程度上受肿瘤耐药的影响， 这就急切寻求符合上述理想的新一代耐药逆转剂。 0003 现有的研究结果表明多种机制参与肿瘤细胞多药耐药形成， 主要包括 ： 细胞 膜 P- 糖 蛋 白 （Permeability-glycoprotein,P-gP） 、多 药 耐 药 相 关 蛋 白 （Multidrug Resistance Associated Protein,MRP） 过度表达形成药物外。

8、输泵， 使抗癌药物在肿瘤细胞 内蓄积下降 ； 谷胱甘肽 -S- 转移酶 （GST） 单独或与谷胱甘肽 （GSH） 一起参与多种细胞毒代 谢及解毒过程 ； 与细胞凋亡相关的因子及基因如bcl-2， P53等异常。 国内外针对上述环节进 行了广泛研究以寻求拮抗和 / 或逆转肿瘤耐药细胞， 体外被证实具有逆转耐药活性的化合 物或生物制剂很多， 但真正进入临床研究的只有异博定、 环孢菌素 A 等极少数， 而且疗效不 理想。目前还没有一种药物或方法在临床被广泛接受， 其原因在于 ： 现有逆转剂大多为 “老 药新用” ， 逆转耐药往往不是其主要功能， 临床使用禁忌症多， 毒副作用大 ； 生物制剂在体内 不。

9、稳定， 难以作用到靶点且毒副反应多 ； 临床耐药往往数种机制同时参与， 只对单一机制起 作用的逆转剂难以发挥显著的效应。其中对于中药或有效单体成分研究而言， 真正能结合 临床疗效和中医理论的研究少见。 0004 翻白草 （Descolor Cinquefoil Herb） ， 性甘、 苦、 平， 具有清热解毒功效 ； 该药材含 延胡索酸 （fumaric acid） ， 没食子酸 （gallic acid） ， 原儿茶酸 （protocatechuic acid） ， 槲皮素 （quercetin） ， 柚皮素 （naringenin） ， 山柰酚 （kaempferol） ， 间苯二酸 （m。

10、-phthalic acid） 等化学成分， 目前还没有其具有逆转肿瘤多药耐药作用的报道。 发明内容 0005 为了解决上述现有技术中存在的不足之处， 本发明的首要目的在于提供一种翻白 草逆转肿瘤多药耐药提取物。本发明的翻白草提取物起到逆转肿瘤多药耐药作用， 且该翻 白草提取物无毒副作用。 0006 本发明的另一目的在于提供一种上述翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物的制备方 法。 0007 本发明的再一目的在于提供一种翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物在制备常规的 中药制剂剂型中的应用。 0008 本发明的目的通过下述技术方案实现 ： 0009 一种翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物的制备方法包括下述步骤 ： 。

11、翻白草粉碎， 过 40 目筛， 用 2 5 倍 55% 90乙醇浸泡 1-3 天， 过滤， 收集滤液， 回收乙醇浓缩至粘稠状 说 明 书 CN 102908422 A 3 2/4 页 4 液体， 加6080乙醇使其溶解， 室温下放置1-3天， 用60%80乙醇洗滤， 收集滤液， 滤液浓缩至相对密度为 1.02-1.04g/cm3得滤液浓缩液， 将滤液浓缩液干燥， 得到翻白草逆 转肿瘤多药耐药提取物 ； 粉碎， 过筛， 得翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物的细粉。 0010 一种翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物的制备方法包括下述步骤 ： 翻白草粉碎， 过 40目筛， 用3倍75乙醇浸泡2天， 过滤， 收集。

12、滤液， 回收乙醇浓缩至粘稠状液体， 加70乙 醇使其溶解， 室温下放置 2 天， 用 70乙醇洗滤， 收集滤液， 滤液浓缩至相对密度为 1.03g/ cm3得滤液浓缩液， 将滤液浓缩液干燥， 得到翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物 ； 粉碎， 过 100 目筛， 得翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物的细粉。 0011 所述的干燥为冷冻干燥、 真空干燥、 喷雾干燥中的一种 ； 0012 所述的过筛是过 100-200 目的筛网。 0013 所述喷雾干燥的条件为进风温度为 110 130 ； 出风温度为 70 90 ； 雾化器 转速为 45 55 转 / 分钟 ； 进料速度为 3 6ml/ 分钟。 0014 。

13、所述喷雾干燥的条件为进风温度为 120 ； 出风温度为 80 ； 雾化器转速为 50 转 / 分钟 ； 进料速度为 5ml/ 分钟。 0015 由上述所述的制备方法制备而成的翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物。 0016 上述所述的翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物在制备常规的中药制剂剂型中的应 用， 在干燥粉中加入制备不同中药制剂剂型时需要的各种常规辅料， 采用常规的中药制剂 制备方法将其制备成常见的中药制剂剂型。 0017 所述中药制剂剂型为片剂、 胶囊剂、 颗粒剂。 0018 本发明的原理在于 ： 翻白草性甘、 苦、 平， 具有清热解毒功效 ； 该药材含延胡索酸， 没食子酸， 原儿茶酸， 槲皮素， 。

14、柚皮素， 山柰酚， 间苯二酸等化学成分， 用本发明的制备方法 将翻白草提取物制备出来， 制备得到的翻白草提取物有逆转肿瘤多药耐药的作用。 0019 本发明与现有技术相比， 具有如下突出的优点 ： 本发明所制备的翻白草的提取物 无毒副作用、 有逆转肿瘤多药耐药的特性， 可以制备成颗粒、 片剂、 胶囊剂 ； 本发明生产方 法简便， 用药成本不高。实验结果表明 ： 本发明提取物含药血清与 ADR 联合用可使 ADR 对 K562/ADR 的 IC50明显下降， 不同给药浓度对 K562/ADR 逆转倍数为 1.85 8.63， 且呈浓度 正相关， 这表明本发明中药组合物对 K562/ADR 耐药株具。

15、有逆转作用。 具体实施方式 0020 下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述， 但发明的实施方式不限于此。 0021 实施例 1 0022 翻白草 1kg， 粉碎， 过 40 目筛， 用 2 倍 90乙醇浸泡 1 天， 过滤， 收集滤液， 回收乙 醇浓缩至粘稠状液体， 加 80% 乙醇使其溶解， 室温下放置 1 天， 用 80乙醇洗滤， 收集滤液， 滤液浓缩至相对密度为 1.04g/cm3得到滤液浓缩液， 将滤液浓缩液喷雾干燥， 进风温度控制 为 110， 出风温度为 70， 雾化器转速为 45 转 / 分钟， 进料速度为 3ml/ 分钟， 得翻白草 抗肿瘤多药耐药提取物， 将提取物粉碎， 。

16、过 150 目筛， 得翻白草抗肿瘤多药耐药提取物的细 粉 ； 细粉与常规辅料混匀后， 压片， 得到含有翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物的片剂。 0023 实施例 2 0024 翻白草1kg， 粉碎， 过40目筛， 用3倍75乙醇浸泡2天， 过滤， 收集滤液， 回收乙醇 说 明 书 CN 102908422 A 4 3/4 页 5 浓缩至粘稠状液体， 加 70% 乙醇使其溶解， 室温下放置 2 天， 用 70乙醇洗滤， 收集滤液， 滤 液浓缩至相对密度为 1.03g/cm3得到滤液浓缩液， 将滤液浓缩液喷雾干燥， 进风温度控制为 120， 出风温度为 80， 雾化器转速为 50 转 / 分钟， 进料。

17、速度为 5ml/ 分钟， 得翻白草抗肿 瘤多药耐药提取物， 将提取物粉碎， 过 100 目筛， 得翻白草抗肿瘤多药耐药提取物的细粉 ； 细粉与常规辅料混匀后， 制成颗粒， 装入胶囊， 得到含有翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物的 胶囊剂。 0025 实施例 3 0026 翻白草 1kg， 粉碎， 过 40 目筛， 用 5 倍 55% 乙醇浸泡 3 天， 过滤， 收集滤液， 回收乙 醇浓缩至粘稠状液体， 加 60% 乙醇使其溶解， 室温下放置 3 天， 用 60% 乙醇洗滤， 收集滤液， 滤液浓缩至相对密度为 1.02g/cm3， 得到滤液浓缩液， 将滤液浓缩液喷雾干燥， 进风温度控 制为 130， 。

18、出风温度为 90， 雾化器转速为 55 转 / 分钟， 进料速度为 6ml/ 分钟， 得翻白草 抗肿瘤多药耐药提取物， 将提取物粉碎， 过 200 目筛， 得翻白草抗肿瘤多药耐药提取物的细 粉 ； 细粉与常规辅料混匀后， 制备成颗粒剂， 得到含有翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物的颗 粒剂。 0027 实施例 4 0028 翻白草1kg， 粉碎， 过40目筛， 用5倍55%乙醇浸泡3天， 过滤， 收集滤液， 回收乙醇 浓缩至粘稠状液体， 加 60% 乙醇使其溶解， 室温下放置 3 天， 用 60% 乙醇洗滤， 收集滤液， 滤 液浓缩至相对密度为 1.02g/cm3， 得到滤液浓缩液， 采用冷冻干燥法。

19、， 将滤液浓缩液放入功 率 3KW 冷冻干燥机， 冷冻 24 小时后得翻白草抗肿瘤多药耐药提取物， 将提取物粉碎， 过 150 目筛， 得翻白草抗肿瘤多药耐药提取物的细粉 ； 细粉与常规辅料混匀后， 制备成颗粒剂， 得 到含有翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物的颗粒剂。 0029 实施例 5 0030 翻白草1kg， 粉碎， 过40目筛， 用5倍55%乙醇浸泡3天， 过滤， 收集滤液， 回收乙醇 浓缩至粘稠状液体， 加 60% 乙醇使其溶解， 室温下放置 3 天， 用 60% 乙醇洗滤， 收集滤液， 滤 液浓缩至相对密度为 1.02g/cm3， 得到滤液浓缩液， 采用真空干燥法， 将滤液浓缩液放入功。

20、 率 3KW 真空干燥机， 控制压力 100Pa 以下， 干燥 24 小时后得翻白草抗肿瘤多药耐药提取物， 将提取物粉碎， 过 200 目筛， 得翻白草抗肿瘤多药耐药提取物的细粉 ； 细粉与常规辅料混匀 后， 制备成颗粒剂， 得到含有翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物的颗粒剂。 0031 实施例 6 0032 1细胞和细胞培养 0033 白血病细胞 K562/S 为敏感株， K562/ADR 为白血病细胞阿霉素耐药株， K562/ADR 是由 K562/S 细胞接触递增浓度的 ADR 诱导而成， 具有典型多药耐药性。细胞株均培养于含 10% 小牛血清的 RPMI-1640 培养液中。细胞购买于中山大。

21、学实验动物中心。 0034 2MTT 比色法测定翻白草提取物对肿瘤细胞的增殖抑制作用 0035 取对数生长期细胞， K562/ADR 细胞以 1105/ml、 K562/S 以 0.5105/ml 分别接 种于 96 孔培养板， 100l/ 孔。在 37 5%CO2条件下培养过夜后， 加不同浓度翻白草逆转 肿瘤多药耐药提取物和 ADR 共 100l， 调零组和对照组加相应体积的培养液， 每组设 4 个 平行孔。培养 72h 后， 每孔加 5mg/ml MTT20l（调零组除外） ， 再培养 4h， 倾去培养液， 加 DMSO100l/ 孔， 待完全溶解后， 用酶联免疫仪在波长 570nm 处调。

22、零组调零后读取吸光度 说 明 书 CN 102908422 A 5 4/4 页 6 （A） 值。取 4 孔 A 值的均数按公式计算细胞抑制率 ； 细胞抑制率 （IR） =1-（试验孔 A 均值 / 对照孔 A 均值） 100%。计算 IR 并求出半数抑制浓度 （IC50） ， 以上实验重复 3 次。 0036 逆转倍数 =IC50 对照组/IC50 受试组 0037 IC50 对照组为对照组的 K562/S 或 K562/ADR IC50值 ； 0038 IC50 受试组为不同剂量给药组的 IC50值。 0039 表 1 翻白草逆转肿瘤多药耐药提取物对 K562/S 和 K562/ADR 细胞生长的逆转作用 0040 0041 0042 本发明提取物含药血清与 ADR 联合用可使 ADR 对 K562/ADR 的 IC50明显下降， 不同 给药浓度对K562/ADR逆转倍数为1.858.63， 且呈浓度正相关， 这表明本发明中药组合物 对 K562/ADR 耐药株具有逆转作用。 0043 上述实施例为本发明较佳的实施方式， 但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制， 其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、 修饰、 替代、 组合、 简化， 均应为等效的置换方式， 都包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 CN 102908422 A 6 。