用于治疗过度增生性疾病、 自身免疫性疾病和心脏病的包 含 3- 奎宁环酮衍生物的水溶液 发明领域 本发明涉及一种奎宁环酮 (quinuclidinone) 衍生物的制剂和制备该制剂的方 法， 以及该制剂的应用。
发明背景 WO05/090341 中描述了用于治疗不同病症例如过度增生性疾病 (hyperproliferative disease)、 自 身 免 疫 性 疾 病 和 心 脏 病 的 3- 奎 宁 环 酮 衍 生 物。 类 似 地， WO04/084893、 WO02/024692 和 WO03/070250 中披露了特别用于治疗肿瘤疾病的 3- 奎宁环酮衍生物。
在 WO05/090341 中提到了其中所披露的奎宁环酮的组合物可以被制备用于任何 给药途径， 例如口服、 静脉内、 经皮或皮下、 经鼻、 肌肉内或腹膜内， 且载体或其它物质的确 切性质依赖于给药途径。亦提到， 对于胃肠外给药， 采用胃肠外可接受的水溶液， 该水溶液 不含致热源且具有需要的 pH、 等渗性和稳定性。
然而， 本发明人发现在液体水溶液中， 例如用于胃肠外给药的液体水溶液 ( 即通 常 pH 为 6.5-7.5) 或相应的用于制备可胃肠外给药溶液的贮备液中， 本发明化合物具有不 可接受的低稳定性， 在溶解后仅数小时内就产生降解产物。这种在液体溶液中缺乏化学稳 定性对于上面提到的现有技术文献中所描述的化合物来说是完全未预料到的。
发明概述 本发明的一个目的是提供一种如本文所定义的 3- 奎宁环酮衍生物的制剂， 该制剂具 有改进的保存期， 特别是与现有技术的制剂相比。
本发明的另一个目的是提供一种含有如本文所定义的 3- 奎宁环酮衍生物的、 保 存期得以改进的制剂， 该制剂可用于治疗， 例如用于治疗选自过度增生性疾病 ( 例如癌 症 )、 自身免疫性疾病和心脏病的病症， 所述制剂具有改进的保存期， 特别是与现有技术的 制剂相比。
又一个目的是提供一种含有如本文所定义的 3- 奎宁环酮衍生物的液体制剂， 其 中所述 3- 奎宁环酮衍生物具有降低的降解速率。
本发明的再一个目的是提供一种用于治疗过度增生性疾病、 自身免疫性疾病和心 脏病的药物制剂， 所述制剂含有如本文下文所定义的 3- 奎宁环酮衍生物并且具有改进的 保存期， 特别是与现有技术的制剂相比。
本发明的又一个目的是提供一种允许延长保存如本文所定义的 3- 奎宁环酮衍生 物的制剂。
本发明的另一个目的是提供一种用于制备本发明制剂的方法。
在一个具体的实施方式中， 本发明提供了一种制剂， 其为下式 (I) 的 3- 奎宁环酮 衍生物或其药学上可接受的盐和至少一种 pH 调节剂的水溶液 ：
I 其中， R1 选自 H、 -CH2-O-R3、 -CH2-S-R3 和 -CH2-NR3R4 ； R2 选自 -CH2-O-R3、 -CH2-S-R3 和 -CH2-NR3R4 ； R3 和 R4 相同或不同并且独立地选自 H， 取代或非取代的、 无支链或有支链的、 饱和或不 饱和的 3-12 个碳的环烷基或 1-10 个碳的烷基， 取代或非取代的苯甲基， 取代或非取代的单 环或双环芳基， 取代或非取代的含有一个或数个独立地选自 N、 O 和 S 的杂原子的单环、 双环 3 4 或三环的 2-10 个碳的杂芳基或非芳族的 2-10 个碳的杂环基， 或者在 -CH2-NR R 中的 R3 和 R4 键合在一起并与它们所键合的氮原子一起形成取代或非取代的非芳族的 2-10 个碳的单 环或双环的杂环基， 该杂环基任选含有一个或数个独立地选自 N、 O 和 S 的额外杂原子并且 任选含有一个或数个环酮基 ； 其中被取代基团的取代基独立地选自无支链或有支链的、 饱和或不饱和的 3-12 个碳 的环烷基或 1-10 个碳的烷基， 卤素， 卤素取代的 1-10 个碳的烷基、 单环或双环芳基， 含有一 个或数个独立地选自 N、 O 和 S 的杂原子的单环、 双环或三环的 2-10 个碳的杂芳基或非芳族 的 2-10 个碳的杂环基， 1-10 个碳的烷氧基， 氨基， 和 1-10 个碳的烷基氨基 ； 所述调节剂的量为例如提供约 3.0 至约 5.0 的水溶液 pH 的量。 在一个实施方式中， 所述制剂为药物制剂。 因此， 提供一种用于治疗的如本文所定 义的液体制剂。
在一个实施方式中， 所述制剂为贮备液， 该贮备液允许长期储存溶解其中的式 (I) 的 3- 奎宁环酮衍生物。
在一个实施方式中， 本发明制剂中所包含的式 (I) 的 3- 奎宁环酮衍生物可用于治 疗选自过度增生性疾病 ( 例如癌症 )、 自身免疫性疾病和心脏病的病症中， 特别地可用于治 疗癌症。
在又一个实施方式中， 提供了如本文所定义的 3- 奎宁环酮衍生物的液体制剂， 其 用于预防和 / 或治疗病理生理学病况 ( 例如过度增生性疾病 ( 例如癌症 )、 自身免疫性疾病 或心脏病 ) 的方法。
另一个实施方式涉及如本文所定义的 3- 奎宁环酮的液体制剂在制备用于预防和 / 或治疗病理生理学病况 ( 例如过度增生性疾病 ( 例如癌症 )、 自身免疫性疾病和心脏病 ) 的药物中的用途。
在又一个实施方式中， 提供了用于预防和 / 或治疗病理生理学病况的方法， 其包 括将有效量的本发明的组合物给予 ( 优选胃肠外给药 ) 有需要的哺乳动物。
在又一个实施方式中， 提供了用于预防和 / 或治疗病理生理学病况的方法， 其包 括将有效量的通过使用按照本发明的液体制剂制备的组合物给予 ( 优选胃肠外给药 ) 有需 要的哺乳动物。
此外， 提供了用于预防和 / 或治疗由异常细胞生长所介导的病理生理学病况的方 法， 其包括将有效量的本发明的组合物或通过使用按照本发明的液体制剂制备的组合物给 予 ( 胃肠外或口服给药 ) 哺乳动物。
在一个具体的实施方式中， 提供了用于预防和 / 或治疗由异常细胞生长所介导的 病理生理学病况的方法， 其包括将有效量的本发明的组合物给予 ( 胃肠外或口服给药 ) 需
要治疗性干预的哺乳动物， 以控制该病理生理学病况， 其中异常的细胞生长得以控制。
还提供了制备本发明液体制剂的方法， 包括向含水相中加入式 (I) 的化合物或者 其药学上可接受的盐、 任选至少一种其它治疗活性剂以及使得提供 3.0-5.0 的组合物 pH 的 量的 pH 调节剂。
本发明的其它实施方式如下文所述以及如权利要求所限定。
附图简述 图 1 显示了 SCID 小鼠中 p53 突变型异种移植物肿瘤的体积， SCID 小鼠用 2-( 羟甲 基 )-2-( 甲氧基甲基 ) 奎宁环 -3- 酮 (APR-246) 或 PBS( 溶媒， 对照 ) 以 100mg/kg 的剂量、 一天两次、 每周 3-4 天静脉内治疗。由图可见， 在治疗期最后， 对照动物的平均肿瘤体积为 用 APR-246 治疗的动物的三倍还多。用 Mann-Whitney 检验分析肿瘤体积的差异。发现统 计学显著的抗癌效果。
图 2 显示了中空纤维体内模型中 APR-246 对 AML MV-4-11 细胞的作用。数据以平 均值 ±SEM (n=7-8) 表示。
发明详述 除非另有限定， 本文所用的全部技术及科学术语均具有与本发明所属领域的技术人员 所通常理解的含义相同的含义。
因此， 除非另有说明， “贮备液” 通常是指对于实际应用将被稀释至某个较低浓度 的浓缩液。本领域的普通技术人员已知的是， 贮备液用于例如节省制备时间、 保存物质、 减 少储存空间以及改进制备工作溶液的准确性。
“保存期” 意指产品在没有变得不适于使用或消费的情况下可以储存的时间长度。
按照本发明， 令人惊讶地发现在 pH 至多约 5.0 的水溶液中， 上文所提及的 3- 奎宁 环酮的化学稳定性显著地提高。 事实上， 发现在一些情形中， 降解速率降低至不到相应的较 3 高 pH 的溶液的 1/10 。
因此， 本发明提供了一种含有如本文所定义的 3- 奎宁环酮衍生物水溶液的组合 物， 其中该水溶液的 pH 为从约 pH 3.0 到约 pH 5.0， 优选到约 4.7， 或到约 4.5， 或到约 4.2， 例如到约 4.0。举例来说， 该 pH 可在下限为 pH 3.0 或 pH 3.5 和上限为 pH 5 或 pH 4.5 之 间的范围内， 优选地可在 pH 3.8 和 pH 4.2 之间的范围内， 例如接近 4.0。 举例来说， 本发明 水溶液的 pH 可具有选自 pH 约 3.0 或约 3.2 例如约 3.4、 例如约 3.6 或约 3.8 的下限， 以及 约 5.0 或约 4.7 或约 4.5 或约 4.2 例如约 4.0 的上限。
在本发明的 pH 下， 与现有技术的水溶液中的化合物的稳定性相比， 溶解于本发明 水溶液的式 (I) 的 3- 奎宁环酮衍生物的针对降解的化学稳定性显著地得到提高。事实上， 本发明的 3- 奎宁环酮衍生物的水溶液可在 2-8℃下具有 24 个月或甚至更长的保存期。
本发明制剂中存在的 3- 奎宁环酮衍生物为下式 (I) 化合物或其药学上可接受的 盐：I 其中，R1 选自 H、 -CH2-O-R3、 -CH2-S-R3 和 -CH2-NR3R4 ； R2 选自 -CH2-O-R3、 -CH2-S-R3 和 -CH2-NR3R4 ； R3 和 R4 相同或不同并且独立地选自 H， 取代或非取代的、 无支链或有支链的、 饱和或不 饱和的 3-12 个碳的环烷基或 1-10 个碳的烷基， 取代或非取代的苯甲基， 取代或非取代的单 环或双环芳基， 取代或非取代的含有一个或数个独立地选自 N、 O 和 S 的杂原子的单环、 双环 3 4 或三环的 2-10 个碳的杂芳基或非芳族的 2-10 个碳的杂环基， 或者在 -CH2-NR R 中的 R3 和 R4 键合在一起并与它们所键合的氮原子一起形成取代或非取代的非芳族的 2-10 个碳的单 环或双环的杂环基， 该杂环基任选含有一个或数个独立地选自 N、 O 和 S 的额外杂原子并且 任选含有一个或数个环酮基 ； 其中被取代基团的取代基独立地选自无支链或有支链的、 饱和或不饱和的 3-12 个碳 的环烷基或 1-10 个碳的烷基， 卤素， 卤素取代的 1-10 个碳的烷基、 单环或双环芳基， 含有一 个或数个独立地选自 N、 O 和 S 的杂原子的单环、 双环或三环的 2-10 个碳的杂芳基或非芳族 的 2-10 个碳的杂环基， 1-10 个碳的烷氧基， 氨基， 和 1-10 个碳的烷基氨基。
式 (I) 的化合物的药学上可接受的盐， 例如可以是无机矿物酸或有机酸的酸加成 盐。 在式 (I) 的化合物中， R1 选自 H、 -CH2-O-R3、 -CH2-S-R3 和 -CH2-NR3R4。在一些实施 方式中， R1 选自 H、 -CH2-O-R3 和 -CH2-S-R3。在一些实施方式中， R1 选自 H 和 -CH2-O-R3。还 在其它的实施方式中， R1 选自 -CH2-O-R3 和 -CH2-S-R3。在一些实施方式中， R1 为 H。
式 (I) 中的 R2 选自 -CH2-O-R3、 -CH2-S-R3 和 -CH2-NR3R4。在一些实施方式中， R2 选 自 -CH2-O-R3 和 -CH2-S-R3。在其它的实施方式中， R2 为 -CH2-O-R3。
在 一 个 实 施 方 式 中， R1 选 自 H、 -CH2-O-R3 和 -CH2-S-R3 ； 且 R2 选 自 -CH2-O-R3 和 -CH2-S-R3。
在一个实施方式中， R1 为 H ； 且 R2 选自 -CH2-O-R3、 -CH2-S-R3 和 -CH2-NR3R4 ； 例如选 3 3 3 自 -CH2-O-R 和 -CH2-S-R ， 特别地为 -CH2-O-R 。
在一个实施方式中， R1 选自 H 和 -CH2-O-R3 ； 且 R2 为 -CH2-O-R3。
在一个实施方式中， R1 和 R2 均为 -CH2-O-R3。
在一个实施方式中， 每一个 R3 独立地选自 H， 取代或非取代的、 无支链或有支链的、 饱和或不饱和的 3-12 个碳的环烷基和 1-10 个碳的烷基， 和苯甲基。例如， 每一个 R3 可独 立地选自 H 和 1-10 个碳的烷基， 例如选自 H 和 1-6 个碳的烷基， 选自 H 和 1-4 个碳的烷基， 或选自 H 和 1-3 个碳的烷基， 特别地， 选自 H 和甲基。 1
在一个实施方式中， R 选自 H 和 -CH2-O-R3， R2 为 -CH2-O-R3， 且每一个 R3 独立地选 自 H， 取代或非取代的、 无支链或有支链的、 饱和或不饱和的 3-12 个碳的环烷基和 1-10 个碳 的烷基， 和苯甲基， 特别地， 选自 H 和 1-10 个碳的烷基， 例如选自 H 和 1-6 个碳的烷基， 选自 H 和 1-4 个碳的烷基， 或选自 H 和 1-3 个碳的烷基， 特别地， 选自 H 和甲基。 1 2 3
在一个实施方式中， R 和 R 均为 -CH2-O-R ， 且每一个 R3 独立地选自 H， 取代或非 取代的、 无支链或有支链的、 饱和或不饱和的 3-12 个碳的环烷基和 1-10 个碳的烷基， 特别 地选自 H 和 1-10 个碳的烷基， 例如选自 H 和 1-6 个碳的烷基， 选自 H 和 1-4 个碳的烷基， 或 选自 H 和 1-3 个碳的烷基， 特别地， 选自 H 和甲基。
在如上文所定义的式 (I) 的化合物中， 任何 1-10 个碳的烷基例如可以是 1-6 个碳
的烷基， 或 1-4 个碳的烷基， 例如甲基、 乙基、 丙基或丁基。任何 3-12 个碳的环烷基可以是 例如 3-8 个碳原子的环烷基， 或 3-6 个碳原子的环烷基。任何单环或双环芳基可以是例如 单环芳基， 例如苯基。任何单环、 双环或三环的 2-10 个碳的杂芳基可以是例如单环或双环 的 2-5 个碳的杂芳基， 例如 5 元或 6 元的单环的 2-5 个碳的杂芳基或 9 元的双环的 2-5 个 碳的杂芳基。任何单环、 双环或三环的非芳族的 2-10 个碳的杂环基可以是例如单环或双环 的 2-5 个碳的杂环基， 例如 5 元或 6 元的单环的 2-5 个碳的杂环基或者 9 元或 10 元的双环 的 2-5 个碳的杂环基。任何卤素可以选自 F、 Cl、 Br 和 I， 优选选自 F 和 Cl。任何含有一个 或数个独立地选自 N、 O 和 S 的杂原子的杂环 ( 芳族或非芳族的 )， 例如可以含有 1-5 个杂 原子， 其例如独立地选自 N 和 O。
在一个实施方式中， 在如上文所定义的式 (I) 的化合物中， 任何取代或非取代的 3-12 个碳的环烷基或 1-10 个碳的烷基是非取代的。
在一个实施方式中， 任何取代或非取代的苯甲基是非取代的。
在一个实施方式中， 任何取代或非取代的单环或双环芳基是非取代的。
在一个实施方式中， 任何取代或非取代的单环、 双环或三环的 2-10 个碳的杂芳基 或非芳族的 2-10 个碳的杂环基是非取代的。 在一个实施方式中， 当任何上述基团被取代时， 每一个取代基选自 1-10 个碳的烷 基， 例如 1-6 个碳的烷基、 1-4 个碳的烷基、 或 1-3 个碳的烷基， 例如甲基 ； 卤素， 例如 Cl ； 卤 素取代的 1-10 个碳的烷基， 例如三氟甲基 ； 单环的 2-5 个碳的杂芳基， 例如吡啶基 ； 1-10 个 碳的烷氧基， 例如 1-6 个碳的烷氧基、 1-4 个碳的烷氧基， 或 1-3 个碳的烷氧基， 例如甲氧基 ； 以及氨基。
在一个实施方式中， 当任何上述基团被取代时， 在每一个被取代的基团上的取代 基的数目为 1、 2 或 3。
在另一个实施方式中， 本发明的 3- 奎宁环酮衍生物选自上文所提及的现有技术 文献例如 WO05/090341、 WO04/084893、 WO02/024692 和 WO03/070250 中所例示的那些衍生 物， 例如， 如表 1 所示的那些衍生物 ：
在一个实施方式中， 本发明的 3- 奎宁环酮衍生物， 即式 (I) 的化合物， 选自 2-( 羟甲 基 )-2-( 甲氧基甲基 ) 奎宁环 -3- 酮和 2,2- 双 ( 羟甲基 ) 奎宁环 -3- 酮， 以及这些化合物 的药学上可接受的盐。 在 一 个 实 施 方 式 中， 式 (I) 的 化 合 物 为 2-( 羟 甲 基 )-2-( 甲 氧 基 甲 基 ) 奎 宁 环 -3- 酮或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方式中， 式 (I) 的化合物为 2,2- 双 ( 羟甲基 ) 奎宁环 -3- 酮或其药 学上可接受的盐。
在一个实施方式中， 所述制剂为贮备液且优选为浓缩的贮备液形式的药物制剂。 所述制剂优选为无菌的， 这可通过已知的灭菌方法 ( 例如过滤 ) 来实现， 这就允许在基本没 有本发明化合物的任何变质 ( 例如通过化学降解反应 ) 和基本没有降解产物形成的情况下 长期储存。
按照本发明的制剂可用于例如通过直接注射给予有需要的患者或优先用合适的 可注射的溶液稀释用于静脉输注。
按照本发明的制剂还可照原样或稀释地应用于例如对其中所含的 3- 奎宁环酮衍 生物的进一步研究， 例如通过体外或体内测试， 例如通过给予实验室动物， 例如小鼠、 大鼠、 兔或狗。
在一个实施方式中， 按照本发明的制剂是如本文所定义的式 (I) 的 3- 奎宁环酮衍 生物的水溶液， 其中所述衍生物在制剂中存在的浓度在约 10mg/mL 至约 250mg/mL 的范围 内， 特别地在约 50mg/mL 至约 200mg/mL 的范围内， 尤其是在约 75mg/mL 至约 150mg/mL 的范 围内。
本发明的制剂可在使用 ( 例如给予患者 ) 前被稀释。 稀释因子依赖于制剂中 3- 奎 宁环酮衍生物的浓度以及所需化合物的需要量， 例如以满足治疗有效剂量。在胃肠外给药 的情况下， 最终的经稀释产品的 pH 优选应该在约 pH 4 至约 pH 6 的范围内， 更优选用于胃 肠外给药的最终的经稀释产品的 pH 应该在约 pH 4.2 至约 pH 5.5 的范围内。
所述液体制剂可含有浓度在 0% 和 3% 重量 / 制剂体积之间， 特别是浓度在 0.5% 和 1.5% 重量 / 制剂体积之间， 而尤其是浓度在 0.8% 和 1% 重量 / 制剂体积之间的氯化钠。
在本发明的一个实施方式中， 3- 奎宁环酮以与一种或数种不同的药学上可接受酸 的酸加成盐的形式存在于液体制剂中。所述药学上可接受的酸可以是矿物酸， 例如选自盐 酸、 溴化氢、 碘化氢、 硫酸、 硝酸、 磷酸等。作为备选， 所述药学上可接受的酸可以是有机酸， 例如磺酸或羧酸， 特别是烷基磺酸或芳基磺酸或烷基羧酸或芳基羧酸， 例如选自甲磺酸、 对 甲苯磺酸、 苯磺酸、 乙酸、 酒石酸、 马来酸、 柠檬酸、 苯甲酸、 水杨酸、 抗坏血酸等。
为了处于所需的 pH， 本发明的组合物含有 pH 调节剂。本文使用的术语 “pH 调节 剂” 意指至少一种药学上可接受的有机酸或无机 ( 矿物 ) 酸， 或者至少一种药学上可接受的 酸性缓冲液或任意这些物质的混合物。因此， 该 pH 调节剂可以是任意这样的酸或缓冲液， 或者酸的混合物或缓冲液的混合物， 或者酸和缓冲液的混合物。有用的酸和缓冲液的实例 如本文所示。
举例来说， 按照本发明的组合物可以含有至少一种药学上可接受的酸。所述酸可 以是无机矿物酸， 例如选自盐酸、 氢溴酸、 氢碘酸、 硫酸、 硝酸、 磷酸等， 或者有机酸， 例如选 自乙酸、 琥珀酸、 酒石酸、 马来酸、 抗坏血酸、 柠檬酸、 谷氨酸、 苯甲酸、 抗坏血酸、 甲磺酸、 乙 磺酸等。预期的是， 所述组合物可以含有一种或数种选自无机酸和有机酸的酸。在一个实 施方式中， 制剂的所需 pH 通过加入盐酸来达到。 本发明的组合物也可以含有至少一种药学上可接受的缓冲液， 特别地选自柠檬酸 缓冲液、 乙酸盐缓冲液、 磷酸盐缓冲液等 ( 单独或作为其混合物 )， 以及与如本文所定义的 任意药学上可接受的酸 ( 例如盐酸 ) 的组合。
本发明的液体组合物是水性的， 这意味着其含有水。然而， 预期的是， 用于制备本 发明组合物的水溶液和含水相也可以含有其它药学上可接受的液体作为溶剂相， 例如聚乙 二醇 (PEG) 和醇类， 如乙醇。但优选所述含水相主要含有水作为溶剂。举例来说， 溶剂相含 有 50% 至 100% 的水， 更优选至少 80% 的水， 或至少 90% 的水， 至少 95% 的水， 至少 98% 的水 或 100% 的水。
在一个实施方式中， 将如本文所述的本发明组合物提供为稳定的贮备液， 特别地 提供为浓缩的贮备液， 用于在 2-8℃的温度范围下长期储存于容器内， 特别是密封且无菌的 容器内。 举例来说， 所述组合物可以含有任选地作为酸加成盐、 特别地为盐酸加成盐的本发 明化合物和一定量的 pH 调节剂的稳定的水性 WFI ( 注射用水 ) 溶液， 本发明化合物的浓度 为约 10mg/mL 至约 250mg/mL， 特别地在约 50mg/mL 至约 200mg/mL 的范围内， 而尤其地在约 75mg/mL 至约 150mg/mL 的范围内， 所述 pH 调节剂的量使得提供在 pH 3.0 至 pH 5.0 之间的 范围， 特别地在 pH 3.2 至 pH 4.7 之间的范围 ( 例如在 pH 3.5 至 pH 4.5 之间， 尤其在 pH 3.8 至 pH 4.2 之间的范围， 例如接近 4.0) 的溶液 pH。举例来说， 所述贮备液的 pH 可以具 有选自 pH 为约 3.0 或约 3.2 例如约 3.4 如约 3.6 或约 3.8 的下限， 和约 5.0 或约 4.7 或约 4.5 或约 4.2 例如约 4.0 的上限。
本发明还提供一种制备按照本发明的化合物的制剂的方法。通常， 所述方法包括 将式 (I) 的化合物或其药学上可接受的盐和 pH 调节剂与含水相混合。在该方法中， 将所述 含水相的 pH 通过在加入式 (I) 的化合物之前或之后加入如本文所定义的 pH 调节剂来调节 到所需的范围。举例来说， 在加入式 (I) 的化合物之前， 将所述含水相的 pH 调节到低于 pH 6.0， 例如低于 pH 5 或低于 pH 4.5 的 pH， 然后加入式 (I) 的化合物。然后可再次调节 pH， 以确保组合物处于按照本发明的所需值。然而， 即使较不优选， 但式 (I) 的化合物也可以在
加入任何 pH 调节剂之前加入到含水相中， 然后通过加入 pH 调节剂来调节液体制剂的 pH 到 所需的范围。
优选地， 在制备过程的主要部分期间， 更优选地在制备的整个过程期间， 液相的 pH 维持在低于 6， 例如低于 5.0 或低于 4.5， 例如在 3.0 至 6.0 的范围内。
在一个实施方式中， 本发明的液体制剂的制备方法包括制备 pH 低于 pH 6.0 的含 水相， 和随着加入递增部分的 pH 调节剂 ( 如果必要的话 ) 呈递增部分混合式 (I) 化合物， 以优选地在制备的整个过程期间维持液体制剂的 pH 低于 pH 6.0， 例如低于 pH 5 或低于 pH 4.5。
水性制剂的 pH 在制备过程中可以被连续地或间断地测量。
其它成分也可加入至或存在于含水相中， 例如药学上可接受的无机盐 ( 例如氯化 钠 )、 防腐剂或其它药学上可接受的化合物， 例如其它治疗活性成分， 例如细胞生长抑制剂， 特别地是顺铂、 柔红霉素、 cerubidine、 阿糖胞苷和氟达拉滨。
在一个实施方式中， 将氯化钠以一定量加入到含水相中， 以提供如上文所定义的 最终的液体组合物， 其含有浓度在 0% 和 3% 重量 / 制剂体积之间， 特别地浓度在 0.5% 和 1.5% 重量 / 制剂体积之间， 而尤其是浓度在 0.8% 和 1% 重量 / 制剂体积之间的氯化钠。 在一个实施方式中， 按照本发明的组合物为无菌制剂。 在该情形中， 按照本发明的 组合物的灭菌可通过使制剂 ( 例如配制的贮备液 ) 通过标称孔径为 0.2µm 的无菌过滤器进 入净化且无菌的容器中来实现。
因此， 本发明的方法还可包括对液体制剂进行灭菌的步骤以及将所述制剂填充入 无菌容器并给容器加盖的步骤。
按照本发明的组合物可提供为随时可用的注射溶液， 其中通过加入一种或多种药 学上可接受的溶剂使本发明的液体制剂 ( 例如贮备液 ) 达到所需的体积， 所述药学上可接 受的溶剂例如选自 WFI， 葡萄糖溶液， 含有氨基酸、 脂质、 维生素和其它矿物质的电解质溶 液， 林格氏液， 哈特曼液， 或氯化钠溶液， 其呈等渗、 低渗或高渗溶液的形式。这样的药学上 可接受的溶液的一个实例是 Baxter Viaflo 9mg/ml。
在一个实施方式中， 其它生物活性化合物或物质可存在于或加入至本发明的组合 物中。 举例来说， 在按照本发明的制剂待作为输注液给予的情形中， 其它治疗活性成分可在 给予患者之前加入到所述液体中。这种治疗活性成分的实例是常规的细胞生长抑制剂， 特 别是顺铂、 柔红霉素、 cerubidine、 阿糖胞苷和氟达拉滨。
本发明的组合物可用于治疗选自过度增生性疾病、 自身免疫性疾病和心脏病的病 症中。过度增生性疾病的实例是癌症。对于本发明的目的， 自身免疫性疾病的实例是硬皮 病和类风湿性关节炎， 心脏病的实例是心肌梗死。
在 PCT 申请 WO05/090341、 WO04/084893、 WO02/024692 和 WO03/07025 ( 通过引用 结合于本文 ) 中， 已证实式 (I) 的化合物的治疗活性。
因此， 在 WO02/024692 和 WO03/07025 中披露了式 (I) 的化合物在治疗例如突变型 p53 介导的癌症中的用途。这类癌症的实例是骨肉瘤、 肺腺癌、 伯基特淋巴瘤 (Burkitt’ s lymphoma)、 卵巢癌和结肠癌。由于其具有恢复 p53 的凋亡诱导功能的能力， 式 (I) 的化合 物也被认为可用于治疗其它的突变型 p53 介导的疾病， 例如自身免疫性疾病， 例如类风湿 性关节炎和斯耶格伦综合征 (Sjogren’ s syndrome)( 例如 ： Yamanishi Y. 等， Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 99(15):10025-30 (2002), Inazuka M. 等， Rheumatology, 39(3):262-6 (2000), Firestein G.S. 等， Proc. Natl. Acad. Sci. USA 30;94(20):10895-900 (1997), 和 Tapinos N.I. 等， Arthritis Rheum.42(7):1466-72 (1999)) 以及心脏病， 例如 遗传性特发性心肌病 ( 例如 ： Gudkova A.Ya. 等， 载于 Identification of the TP53 tumor suppressor mutations in patients with family idiopathic cardiomyopathy (TP53 肿瘤抑制基因突变在家族性特发性心肌病患者中的鉴定 ). the International Congress of the European Society of Pathology 的摘要 , 2002 年 5 月 19-21 日 , Baveno, Lago Maggiore, Italy)。
WO04/084893 披露了式 (I) 的化合物 ( 例如 2,2- 双 ( 羟甲基 ) 奎宁环 -3- 酮 ) 在 治疗恶性黑色素瘤以及涉及不需要的血管发生的病理状态中的用途。
在 WO05/090341 中， 式 (I) 化合物的抗增殖作用和凋亡诱导作用在使用人肺癌细 胞系的体外测定中得到显示。
化合物 2-( 羟甲基 )-2-( 甲氧基甲基 ) 奎宁环 -3- 酮 ( 本文也称为 APR-246) 在 治疗不同癌症中的治疗活性已通过体外测定利用不同癌细胞系得到显示， 参照表 2， 其中显 示了 APR-246 在不同类型癌细胞中的 IC50。
表2： APR-246 对不同癌细胞系的细胞存活力的影响在表 2 中， 结果表示为平均值 ±SD ； IC50 值计算为不同试验中的 IC50 值的平均值。
体内研究还表明式 (I) 化合物具有显著的抗癌活性。因此， 小鼠中的体内异种移 植物试验显示了式 (I) 化合物具有显著的抗癌效果。事实上， 用突变型 p53 骨肉瘤细胞 SaOS-2-His273 进行的体内异种移植物试验 ( 图 1) 证明本发明化合物具有统计学显著的抗 癌效果。
此外， 用 2-( 羟甲基 )-2-( 甲氧基甲基 ) 奎宁环 -3- 酮进行的使用中空纤维小 鼠模型的体内试验表明本发明化合物具有显著的抗白血病效果。这些试验使用中空纤维体内小鼠模型进行 ( 关于该模型的简短描述， 参见因特网网站 http://dtp.nci.nih.gov/ timeline/noflash/milestones/M13_hollow_fiber.htm)。
如图 2 所示， 在试验的最后， 仅用溶媒治疗的小鼠 ( 对照 ) 中白血病细胞 (AML MV-4-11 细胞 ) 的净增长约为 25%( 按数量计 )。另一方面， 到试验末为止， 用本发明化合物 治疗的小鼠中白血病细胞的净增长约为 -25%， 即白血病细胞的数量有效地降低了。
鉴于以上数据， 预期的是， 本发明的组合物在治疗上文提到的不同病症中具有用 途， 所述病症为例如骨肉瘤、 肺腺癌、 伯基特淋巴瘤、 卵巢癌、 结肠癌、 恶性黑色素瘤、 骨肉 瘤、 乳腺导管癌、 前列腺腺癌、 前列腺癌、 结直肠腺癌、 非小细胞肺癌、 白血病、 急性髓细胞单 核性细胞白血病、 自身免疫性疾病， 例如类风湿性关节炎和斯耶格伦综合征， 以及心脏病， 例如遗传性特发性心肌病。 实施例 下文将更详细地说明本发明的具体实施例并且按照本发明提供具体的实施例， 所 述实施例仅用于阐明本发明， 而不应认为是以任何方式对本发明范围进行限制。
实施例 1 不同 pH 下 APR-246 在含水系统中的稳定性研究 将数种 APR-246 的含水制剂和 APR-246 的盐酸加成盐的含水制剂制备并测试其稳定 性。APR-246 易溶于水溶液， APR-246 的 pKa 产生 pH 接近 9 至 9.5 的碱性水溶液。
观察到， 与浓度概况无关， APR-246 在水溶液中不但在室温下而且在更低的温度下 都会降解。
在制剂形成期间， 发现溶液中 APR-246 的稳定性依赖于 pH 和温度。随着 pH 下降， 稳定性提高。 为了针对稳定性确立 APR-246 的合适 pH， 进行在不同 pH 下于不同溶液中的药 物的研究。
表 3 中提供了概括的结果。在这些模型系统下， pH 高于 6 的制剂显示了稳定性问 题。HPLC 分析进一步揭示了代表 APR-246 的降解产物的新的峰。
表3： 在 48 小时后在不同 pH 下溶液中的 APR-246 含量 [%]
。实施例 2 APR-246 在缓冲系统中的稳定性研究 为了进一步地阐明在水溶液中的稳定性以及评价对溶液进行缓冲的需要， 对 APR-246 在含有和不含柠檬酸盐缓冲液的盐水进行了研究。概括的结果在表 4 中提供。结果显示了 降解随着 pH 和温度而增加。还显示了并不需要对溶液进行缓冲 ； 在没有缓冲液的情况下，
pH 足够稳定。
表4： APR-246 在含有和不含缓冲液的溶液中的稳定性基 于 这 些 研 究 的 合 并 结 果， 推 论 出 盐 水 浓 度 在 0.5% 和 1.0% 之 间 和 pH 范 围 为 pH 3.5-pH 4.5 ( 例如 pH 4) 的 APR-246 的水性 WFI 贮备液对临床制剂有利。 从所述模型系统中进一步推论出， 该标准制剂对于正常热灭菌是敏感的。作为代 替， 通过使终产物制剂经由标称孔径为 0.2µm 的无菌过滤器过滤进入净化且无菌的容器中 来进行灭菌。 随后可将经如此灭菌的溶液分配到合适大小的清洁无菌的去致热源的玻璃小 瓶中， 然后给小瓶加盖。制备符合现行的生产质量管理规范的规定。
实施例 3 APR-246 在含水系统中的长期稳定性研究 以约 150mg/mL 的浓度、 pH 3.9 制备 APR-246 贮备液。将由 21.5 至 22.0 mL 药品组成 的成品无菌地装填入预先灭菌的 50mL 玻璃小瓶中。制备符合生产质量管理规范。两个批 次的概括结果提供于表 5 中。
表5： APR-246 (150 mg/mL) 在 pH 3.9-4.0 的含水系统中的稳定性测试
按照本文所述配制用于临床应用的 APR-246 的长期稳定性数据显示在本发明制剂中 APR-246 是稳定的， 预期当产品被储存于 2-8℃下时， 在两年时间内不存在明显的降解。实施例 4 浓度为 150 mg/mL、 pH 为 3.9 的稳定 APR-246 贮备液的配制 在室温下搅拌的同时， 将 NaCl (105g) 加入配有用于监测 pH 的 pH 探测器的 25L 无菌 容器中的水性 HCl (1890g,5.03M) 和 WFI (7960g) 的混合物中。当 NaCl 完全溶解时， 将 APR-246 (1747g) 分部分加入经搅拌的溶液中， 得到 4.75 的 pH。以小部分加入水性 HCl (11.1 mL,5.03M)， 导致将 pH 调节到 4.0。最后向混合物中加入 APR-246 (3.0g)， 并且通过 小心加入水性 HCl (3.5mL,5.03M) 将所得 pH 4.4 调节到 pH 3.9。最后将 WFI (484g) 加入 混合物中， 同时再搅拌 5 分钟。
将贮备液通过 Opticap XL4 过滤器 (1.0/0.5µm) 过滤至清洁玻璃容器中， 然后进 一步通过 Kleenpak KA1 过滤器 (0.22µm) 过滤至无菌容器 (B 级区域 )。在无菌条件下 (A 级区域 ) 进行无菌小瓶的分配和用无菌的塞子 / 盖子进行的加塞 / 盖。检测过滤器的完整 性， 将来自制备的样品 ( 小瓶 ) 拿去用于测定和无菌分析以及稳定性测试。使用本文所述 方案制备数个批次， 其中测定和无菌分析完全在规定限值内。
实施例 5 分析方法 HPLC- 层析在 Agilent 1100/1200 系列 HPLC 系统上在 20 ℃下使用 Purospher Star RP-18e, 5µm (250x4.6) mm 柱进行。样品温度通过恒温器设定在 5℃。通过 UV/VIS DAD 检测器在 210nm 下进行检测。流速被设定在 1.0mL/min 且注射体积为 10µL。使用的流动 相为磷酸盐缓冲液 (A) 在乙腈 (B) 中的梯度 ： 0-5 分钟 ： 90%A， 5-20 分钟 ： 70%A， 20-35 分钟 ： 20%A， 35-45 分钟 ： 90%A。使用在分析之前新鲜制备的纯 APR-246 标准溶液获得校准。用电 子学方法进行数据获取。该方法已经验证。
实施例 6 微生物学属性 APR-246 药品是用于输注溶液的无菌浓缩物。 该溶液按照 Ph Eur 标准方法通过过滤进 行灭菌， 并无菌装填入小瓶中。
研究了对在最终容器中的溶液进行高压灭菌的可能性， 但降解非常明显以至于无 法进行该过程。在 121℃下灭菌的两个批次的概括结果提供在表 6 中 表6： pH 分别为 4.0 和 4.5 的 APR-246 溶液 150 mg/ml 在高压灭菌 (121℃ ,20min) 之 前和之后的 HPLC-UV 结果。实施例 7 输注袋相容性 本实施例概括了对在 6 个输注袋中的 APR-246 药品 (150 mg/mL 的贮备液 ) 的相容性 研究结果， 以确定所述药品在氯化钠溶液中的物理和化学稳定性以及与输注袋和管类设备 材料的相容性。所述药品在给予前应用输注用无菌 0.9% 氯化钠溶液稀释至总体积为 500
ml。 研究的持续时间覆盖了长于最终输注给患者的时间。 针对最低剂量为 0.15 mg/mL 的最坏情况以及最高剂量为 24 mg/mL 的最坏情况设计研究。
药品与输注系统的相互作用的重要因素是输注袋表面与药品量 (mg/cm2) 之间的 关系， 最低药品浓度代表相容性研究的最加速的情形。包括高浓度以覆盖剂量范围和阐明 在该剂量范围内用于输注的最终溶液的 pH。
该研究在室温下使用 Baxter 输注袋 (Viaflo)( 批号为 08F22E1C) 进行。预定的 设计提供在表 7 中。
表 7: 样品设计
对每一个浓度 (“高” 和 “低” ) 都制备了三个输注袋。每天研究一个输注袋， 其自冷藏 的 APR-246 贮备液新鲜制备。
低浓度 结果提供在表 8 中， 在研究范围内显示令人满意的稳定性。
表 8: 低浓度的测定。高浓度 结果提供在表 9 中， 在研究范围内显示令人满意的稳定性。
表 9: 高浓度的测定和 pH
。总之， 这些表表明由 150 mg/mL APR-246 液体制剂制备的低浓度和高浓度的输注 袋溶液在至少 22 小时内是稳定的。
因此， 该实施例表明本发明的液体制剂可用于制备可胃肠外给予的经稀释溶液， 该溶液具有足够的稳定性， 允许以实用且安全的方式对其进行操作和给予。
如上文所示， 本发明提供了一种储存稳定的液体组合物， 该组合物含有如本文定 义的式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐。