一种制备纳豆激酶环糊精包合物的方法 【技术领域】
本发明涉及一种制备纳豆激酶的环糊精包合物的方法， 属于生物合成领域。背景技术 纳豆激酶是纳豆在发酵过程中由纳豆枯草杆菌 (Bacillus subtilis/natto) 产生 的一种丝氨酸蛋白酶， 可水解纤维蛋白成小肽和氨基酸， 和蚯蚓纤溶酶、 蛇毒纤溶酶一样可 直接溶解血栓， 研究发现， 纳豆激酶具有纤溶活性， 能够预防和抑制血栓产生与扩增， 是治 疗血栓和预防血栓病的具有潜在药用价值的物质。
环糊精系淀粉经酶解环合后得到的由 6 个以上葡萄糖分子连结而成的环状低聚 化合物， 本身基本无毒、 无刺激性， 因具有环状中空圆筒状结构而呈现一系列特殊性质， 具 有疏水性的内腔和亲水性的外表， 是药物制剂、 食品工业、 化妆品工业等方面应用较广的新 型包合材料。药物经环糊精包合后， 由于其 “外壳” 的屏障作用， 可改善环境因素对药物的 降解， 包合后不仅有利于溶液型制剂的制备， 而且可提高口服制剂的生物利用度， 减少服药 剂量， 药物经包合后提高了其亲脂性， 易于通过血脑屏障到达组织， 因此提高了纳豆激酶对 脑血栓的治疗效果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种制备纳豆激酶的环糊精包合物的方法。 该方法工艺简 单， 可提高纳豆激酶的生物利用度、 亲脂性和疗效。
本发明的技术方案为 ：
1) 原 料 的 选 取 ： β- 环 糊 精、 羟 丙 基 -β- 环 糊 精 和 纳 豆 激 酶 ( 酶 活 为 28000-30000IU/mg)
2) 纳豆激酶包合物的制备 ： 分别配制饱和的 β- 环糊精和羟丙基 -β- 环糊精水 溶液和一定浓度的纳豆激酶 ( 酶活为 1000-3000IU/ml)， 常温下超声振荡， 再搅拌 1h， 过滤， 滤液冷冻干燥得纳豆激酶 -β- 环糊精或纳豆激酶 - 羟丙基 -β- 环糊精包合物。
所使用的超声条件是 ： 频率 40hz 和 60hz， 功率是 600w。
3) 通过差示扫描量热法和 X 射线衍射法对包合物进行鉴定， 包合率为 92.15％， 包 合比为 6 ∶ 1。
本发明的益处 ：
1、 有利于溶液型制剂的制备， 而且可提高口服制剂的生物利用度， 减少服药剂 量；
2、 提高了其亲脂性， 易于通过血脑屏障到达组织， 因此提高了纳豆激酶对脑血栓 的治疗
2、 提高了其亲脂性， 易于通过血脑屏障到达组织， 因此提高了纳豆激酶对脑血栓 的治疗效果 ；
3、 提高了纳豆激酶的稳定性 ；4、 提高了纳豆激酶在体内的半衰期， 提高了用药安全性， 延长了纳豆激酶的作用 时间， 控制了溶栓速度以防止缺血再灌注损伤的发生。
本发明制备的包合物经动物实验表明 ： 具有明显的溶栓效果， 效果明显优于相同 剂量的纳豆激酶。 具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明 ：
1、 纳豆激酶包合物的制备 ： 分别配制饱和的 β- 环糊精水溶液和一定浓度的纳 豆激酶 ( 酶活为 1000IU/ml)， 常温下超声振荡， 再搅拌 1h， 过滤， 滤液冷冻干燥得纳豆激 酶 -β- 环糊精或纳豆激酶 - 羟丙基 -β- 环糊精包合物。
所使用的超声条件是 ： 频率 40hz， 功率是 600w。
通过差示扫描量热法和 X 射线衍射法对包合物进行鉴定。
2、 纳豆激酶包合物的制备 ： 分别配制饱和的 β- 环糊精水溶液和一定浓度的纳 豆激酶 ( 酶活为 1000IU/ml)， 常温下超声振荡， 再搅拌 1h， 过滤， 滤液冷冻干燥得纳豆激 酶 -β- 环糊精或纳豆激酶 - 羟丙基 -β- 环糊精包合物。 所使用的超声条件是 ： 频率 60hz， 功率是 600w。
通过差示扫描量热法和 X 射线衍射法对包合物进行鉴定。
3、 纳豆激酶包合物的制备 ： 分别配制饱和的 β- 环糊精水溶液和一定浓度的纳 豆激酶 ( 酶活为 2000IU/ml)， 常温下超声振荡， 再搅拌 1h， 过滤， 滤液冷冻干燥得纳豆激 酶 -β- 环糊精或纳豆激酶 - 羟丙基 -β- 环糊精包合物。
所使用的超声条件是 ： 频率 40hz， 功率是 600w。
通过差示扫描量热法和 X 射线衍射法对包合物进行鉴定。
4、 纳豆激酶包合物的制备 ： 分别配制饱和的 β- 环糊精水溶液和一定浓度的纳 豆激酶 ( 酶活为 2000IU/ml)， 常温下超声振荡， 再搅拌 1h， 过滤， 滤液冷冻干燥得纳豆激 酶 -β- 环糊精或纳豆激酶 - 羟丙基 -β- 环糊精包合物。
所使用的超声条件是 ： 频率 60hz， 功率是 600w。
通过差示扫描量热法和 X 射线衍射法对包合物进行鉴定。
5、 纳豆激酶包合物的制备 ： 分别配制饱和的 β- 环糊精水溶液和一定浓度的纳 豆激酶 ( 酶活为 3000IU/ml)， 常温下超声振荡， 再搅拌 1h， 过滤， 滤液冷冻干燥得纳豆激 酶 -β- 环糊精或纳豆激酶 - 羟丙基 -β- 环糊精包合物。
所使用的超声条件是 ： 频率 40hz， 功率是 600w。
通过差示扫描量热法和 X 射线衍射法对包合物进行鉴定。
6、 纳豆激酶包合物的制备 ： 分别配制饱和的 β- 环糊精水溶液和一定浓度的纳 豆激酶 ( 酶活为 3000IU/ml)， 常温下超声振荡， 再搅拌 1h， 过滤， 滤液冷冻干燥得纳豆激 酶 -β- 环糊精或纳豆激酶 - 羟丙基 -β- 环糊精包合物。
所使用的超声条件是 ： 频率 60hz， 功率是 600w。
通过差示扫描量热法和 X 射线衍射法对包合物进行鉴定。
7、 纳豆激酶包合物的制备 ： 分别配制饱和的羟丙基 -β- 环糊精水溶液和一定浓 度的纳豆激酶 ( 酶活为 1000IU/ml)， 常温下超声振荡， 再搅拌 1h， 过滤， 滤液冷冻干燥得纳
豆激酶 -β- 环糊精或纳豆激酶 - 羟丙基 -β- 环糊精包合物。
所使用的超声条件是 ： 频率 40hz， 功率是 600w。
通过差示扫描量热法和 X 射线衍射法对包合物进行鉴定。
8、 纳豆激酶包合物的制备 ： 分别配制饱和的羟丙基 -β- 环糊精水溶液和一定浓 度的纳豆激酶 ( 酶活为 1000IU/ml)， 常温下超声振荡， 再搅拌 1h， 过滤， 滤液冷冻干燥得纳 豆激酶 -β- 环糊精或纳豆激酶 - 羟丙基 -β- 环糊精包合物。
所使用的超声条件是 ： 频率 60hz， 功率是 600w。
通过差示扫描量热法和 X 射线衍射法对包合物进行鉴定。
9、 纳豆激酶包合物的制备 ： 分别配制饱和的羟丙基 -β- 环糊精水溶液和一定浓 度的纳豆激酶 ( 酶活为 2000IU/ml)， 常温下超声振荡， 再搅拌 1h， 过滤， 滤液冷冻干燥得纳 豆激酶 -β- 环糊精或纳豆激酶 - 羟丙基 -β- 环糊精包合物。
所使用的超声条件是 ： 频率 40hz， 功率是 600w。
通过差示扫描量热法和 X 射线衍射法对包合物进行鉴定。
10、 纳豆激酶包合物的制备 ： 分别配制饱和的羟丙基 -β- 环糊精水溶液和一定浓 度的纳豆激酶 ( 酶活为 2000IU/ml)， 常温下超声振荡， 再搅拌 1h， 过滤， 滤液冷冻干燥得纳 豆激酶 -β- 环糊精或纳豆激酶 - 羟丙基 -β- 环糊精包合物。
所使用的超声条件是 ： 频率 60hz， 功率是 600w。
通过差示扫描量热法和 X 射线衍射法对包合物进行鉴定。
11、 纳豆激酶包合物的制备 ： 分别配制饱和的羟丙基 -β- 环糊精水溶液和一定浓 度的纳豆激酶 ( 酶活为 3000IU/ml)， 常温下超声振荡， 再搅拌 1h， 过滤， 滤液冷冻干燥得纳 豆激酶 -β- 环糊精或纳豆激酶 - 羟丙基 -β- 环糊精包合物。
所使用的超声条件是 ： 频率 40hz， 功率是 600w。
通过差示扫描量热法和 X 射线衍射法对包合物进行鉴定。
12、 纳豆激酶包合物的制备 ： 分别配制饱和的羟丙基 -β- 环糊精水溶液和一定浓 度的纳豆激酶 ( 酶活为 3000IU/ml)， 常温下超声振荡， 再搅拌 1h， 过滤， 滤液冷冻干燥得纳 豆激酶 -β- 环糊精或纳豆激酶 - 羟丙基 -β- 环糊精包合物。
所使用的超声条件是 ： 频率 60hz， 功率是 600w。
通过差示扫描量热法和 X 射线衍射法对包合物进行鉴定。5