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1、(10)申请公布号 CN 102600510 A (43)申请公布日 2012.07.25 CN 102600510 A *CN102600510A* (21)申请号 201110021536.8 (22)申请日 2011.01.19 A61L 27/50(2006.01) A61L 27/54(2006.01) A61L 27/58(2006.01) A61L 27/20(2006.01) (71)申请人 北京博恩康生物科技有限公司 地址 100085 北京市海淀区上地信息路 26 号中关村创业大厦 1007 室 (72)发明人 甘少磊 (54) 发明名称 一种可吸收的载骨诱导多肽微球及其制。
2、备方 法 (57) 摘要 本发明一种可吸收的载骨诱导多肽微球， 包 括水溶性壳聚糖载体和 BMP-2 活性多肽， 水溶性 壳聚糖载体和 BMP-2 活性多肽的重量比为 0.1 1000 1。在 24 个小时内， 即可制备， 方法简单， 生物相容性好， 并具有低温、 低真空、 低能耗、 低污 染的特点， 符合 “软加工” （SoftProcessing） 方式 进行材料的合成要求。本发明方法制备的微球形 态上呈规则球形， 粒径分布在 10 100m， 体外 降解实验发现生长因子呈持续缓慢释放， 制备工 艺对活性肽的生物学功能没有显著影响。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 。
3、页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1 页 2 1. 一种可吸收的载骨诱导多肽微球， 其特征在于 ： 包括水溶性壳聚糖载体和 BMP-2 活 性多肽， 水溶性壳聚糖载体和 BMP-2 活性多肽的重量比为 0.1 1000 ： 1。 2. 如权利要求 1 所述可吸收的载骨诱导多肽微球， 其特征在于 ： 所述的水溶性壳聚糖 为羧甲基壳聚糖、 山梨酰壳聚糖、 对氨基苯甲酰壳聚糖等的一种。 3. 一种可吸收的载骨诱导多肽微球的制备工艺， 其特征在于 ： 本发明采用如下技术 方案 ： 步骤一 ： 将 0.1g 10g 水溶性壳聚糖溶于 。
4、20ml 水中至完全溶解得到溶液 A ； 步骤二 ： 将 0.01g 5g BMP-2 活性多肽加入溶液 A 中， 机械搅拌至混合均匀得到混合 溶液 B ； 步骤三 ： 将 5ml20ml 混合溶液 B 加入含 2（质量分数） 乳化剂 斯盘 -80（Span80） 的液体石蜡溶液 100mL 中， 室温下机械搅拌 110h， 然后向其中滴加 5ml50mL 5（质量分 数） 的三聚磷酸钠 （TPP） 水溶液， 使羧甲基壳聚糖发生交联， 滴加完毕， 继续搅拌 110h， 沉 淀， 用石油醚、 异丙醇反复漂洗， 最后将沉淀物冷冻干燥至恒重即得到所需的可吸收载骨诱 导多肽 （BMP-2 活性多肽） 。
5、微球。 权 利 要 求 书 CN 102600510 A 2 1/3 页 3 一种可吸收的载骨诱导多肽微球及其制备方法 技术领域 0001 本发明属于生物医用材料技术领域， 尤其是涉及一种制备简单， 生物相容性好， 可 吸收的具有骨诱导活性多肽缓释功能的微球及其制备方法。 背景技术 0002 骨缺损一直是骨科面临的一个难题。近年来， 通过在骨修复材料上复合骨生长因 子越来越受到各国学者的关注， 已成为当今生物材料的研究热点之一。 0003 骨形态发生蛋白 （bone morphogenetic proteins， BMP） 属于转化生长因子超家 族成员， 是一种多功能的细胞生长因子， BMP 。
6、具有促进骨折愈合的能力， 缩短了骨折的愈合 周期。目前国内外对 BMP 在临床的骨诱导作用给予了很高的评价。其中 BMP-2 是最主要的 骨形成调控因子之一。但天然 BMP-2 数量有限， 且生活活性难以发挥。按 BMP-2 核心功能 区氨基酸序列合成的含 1 条 24 个核苷酸的短肽BMP-2 活性多肽， 相关研究表明 BMP-2 活性多肽具有良好的诱导成骨能力。然而 BMP-2 活性多肽在体内容易扩散稀释， 利用度低。 0004 为了更好的发挥 BMP-2 活性多肽的生物学功能， 实现其在骨修复部位的持续缓慢 释放， 本发明以水溶性壳聚糖为载体材料， 制备具有 BMP-2 活性肽控释功能的。
7、壳聚糖微球， 从而为骨修复领域提供具有生长因子控释功能的载体系统。 发明内容 0005 本发明的目的在于提供一种制备简单， 生物相容性好， 效果显著的可吸收的载骨 诱导多肽微球。 0006 为实现上述目的， 本发明采用如下技术方案 ： 一种可吸收的载骨诱导多肽微球， 包括水溶性壳聚糖载体和 BMP-2 活性多肽。水溶性 壳聚糖载体和 BMP-2 活性多肽的重量比为 0.1 1000 ： 1。 0007 更优的方案是 ： 所述的水溶性壳聚糖为羧甲基壳聚糖、 山梨酰壳聚糖、 对氨基苯甲 酰壳聚糖等的一种。 0008 本发明的另一目的在于提供一种可吸收的载骨诱导多肽微球的制备工艺。 0009 为实现。
8、上述目的， 本发明采用如下技术方案 ： 步骤一 ： 将 0.1g 10g 水溶性壳聚糖溶于 20ml 水中至完全溶解得到溶液 A ； 步骤二 ： 将 0.01g 5g BMP-2 活性多肽加入溶液 A 中， 机械搅拌至混合均匀得到混合 溶液 B ； 步骤三 ： 将 5ml20ml 混合溶液 B 加入含 2（质量分数） 乳化剂 斯盘 -80（Span80） 的液体石蜡溶液 100mL 中， 室温下机械搅拌 2h， 然后向其中滴加 5ml50mL 5（质量分数） 的三聚磷酸钠 （TPP） 水溶液， 使羧甲基壳聚糖发生交联。滴加完毕， 继续搅拌 2h。沉淀， 石 油醚、 异丙醇反复漂洗， 最后将沉淀。
9、物冷冻干燥至恒重即得到所需的可吸收载骨诱导多肽 （BMP-2 活性多肽） 微球。 0010 本制备方法配方简单， 制备工艺易行。在 24 个小时内， 即可制备， 制备简单， 生物 说 明 书 CN 102600510 A 3 2/3 页 4 相容性好。并具有低温、 低真空、 低能耗、 低污染的特点。符合 “软加工”（Soft Processing） 方式进行材料的合成要求。本发明方法制备的微球形态上呈规则球形， 粒径分布在 10 100m， 体外降解实验发现生长因子呈持续缓慢释放， 制备工艺对活性肽的生物学功能没 有显著影响。 具体实施方式 0011 下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。
10、 ： 实施例 1 步骤一 ： 将 1g 羧甲基壳聚糖溶于 20ml 水中至完全溶解得到溶液 A ； 步骤二 ： 将 0.1g BMP-2 活性多肽加入溶液 A 中， 机械搅拌至混合均匀得到混合溶液 B ； 步骤三 ： 将 20ml 混合溶液 B 加入含 2（质量分数） 乳化剂 斯盘 -80（Span80） 的液 体石蜡溶液 100mL 中， 室温下机械搅拌 2h， 然后向其中滴加 10mL 5（质量分数） 的三聚 磷酸钠 （TPP） 水溶液， 使羧甲基壳聚糖发生交联。滴加完毕， 继续搅拌 2h。沉淀， 石油醚、 异丙醇反复漂洗， 最后将沉淀物冷冻干燥至恒重即得到所需的可吸收载骨诱导多肽 （BM。
11、P-2 活性多肽） 微球。 0012 实施例 2 步骤一 ： 将 2g 羧甲基壳聚糖溶于 20ml 水中至完全溶解得到溶液 A ； 步骤二 ： 将 0.1g BMP-2 活性多肽加入溶液 A 中， 机械搅拌至混合均匀得到混合溶液 B ； 步骤三 ： 将 20ml 混合溶液 B 加入含 2（质量分数） 乳化剂 斯盘 -80（Span80） 的液 体石蜡溶液 100mL 中， 室温下机械搅拌 2h， 然后向其中滴加 25mL 5（质量分数） 的三聚 磷酸钠 （TPP） 水溶液， 使羧甲基壳聚糖发生交联。滴加完毕， 继续搅拌 2h。沉淀， 石油醚、 异丙醇反复漂洗， 最后将沉淀物冷冻干燥至恒重即得到。
12、所需的可吸收载骨诱导多肽 （BMP-2 活性多肽） 微球。 0013 实施例 3 步骤一 ： 将 2g 水溶性壳聚糖溶于 20ml 水中至完全溶解得到溶液 A ； 步骤二 ： 将 0.2g BMP-2 活性多肽加入溶液 A 中， 机械搅拌至混合均匀得到混合溶液 B ； 步骤三 ： 将 10ml 混合溶液 B 加入含 2（质量分数） 乳化剂 斯盘 -80（Span80） 的液 体石蜡溶液 100mL 中， 室温下机械搅拌 2h， 然后向其中滴加 25mL 5（质量分数） 的三聚 磷酸钠 （TPP） 水溶液， 使羧甲基壳聚糖发生交联。滴加完毕， 继续搅拌 2h。沉淀， 石油醚、 异丙醇反复漂洗， 。
13、最后将沉淀物冷冻干燥至恒重即得到所需的可吸收载骨诱导多肽 （BMP-2 活性多肽） 微球。 0014 实施例 4 步骤一 ： 将 2g 羧甲基壳聚糖溶于 20ml 水中至完全溶解得到溶液 A ； 步骤二 ： 将 0.1g BMP-2 活性多肽加入溶液 A 中， 机械搅拌至混合均匀得到混合溶液 B ； 步骤三 ： 将 20ml 混合溶液 B 加入含 2（质量分数） 乳化剂 斯盘 -80（Span80） 的液 体石蜡溶液 100mL 中， 室温下机械搅拌 2h， 然后向其中滴加 25mL 5（质量分数） 的三聚 磷酸钠 （TPP） 水溶液， 使羧甲基壳聚糖发生交联。滴加完毕， 继续搅拌 2h。沉淀。
14、， 石油醚、 异丙醇反复漂洗， 最后将沉淀物冷冻干燥至恒重即得到所需的可吸收载骨诱导多肽 （BMP-2 活性多肽） 微球。 说 明 书 CN 102600510 A 4 3/3 页 5 0015 实施例 5 步骤一 ： 将 1g 山梨酰壳聚糖溶于 20ml 水中至完全溶解得到溶液 A ； 步骤二 ： 将 0.4g BMP-2 活性多肽加入溶液 A 中， 机械搅拌至混合均匀得到混合溶液 B ； 步骤三 ： 将 20ml 混合溶液 B 加入含 2（质量分数） 乳化剂 斯盘 -80（Span80） 的液 体石蜡溶液 100mL 中， 室温下机械搅拌 2h， 然后向其中滴加 25mL 5（质量分数） 。
15、的三聚 磷酸钠 （TPP） 水溶液， 使羧甲基壳聚糖发生交联。滴加完毕， 继续搅拌 2h。沉淀， 石油醚、 异丙醇反复漂洗， 最后将沉淀物冷冻干燥至恒重即得到所需的可吸收载骨诱导多肽 （BMP-2 活性多肽） 微球。 0016 实施例 6 步骤一 ： 将 3g 山梨酰壳聚糖溶于 20ml 水中至完全溶解得到溶液 A ； 步骤二 ： 将 0.4g BMP-2 活性多肽加入溶液 A 中， 机械搅拌至混合均匀得到混合溶液 B ； 步骤三 ： 将 20ml 混合溶液 B 加入含 2（质量分数） 乳化剂 斯盘 -80（Span80） 的液 体石蜡溶液 100mL 中， 室温下机械搅拌 2h， 然后向其中。
16、滴加 25mL 2（质量分数） 的三聚 磷酸钠 （TPP） 水溶液， 使羧甲基壳聚糖发生交联。滴加完毕， 继续搅拌 2h。沉淀， 石油醚、 异丙醇反复漂洗， 最后将沉淀物冷冻干燥至恒重即得到所需的可吸收载骨诱导多肽 （BMP-2 活性多肽） 微球。 0017 实施例 7 步骤一 ： 将 2g 对氨基苯甲酰壳聚糖溶于 20ml 水中至完全溶解得到溶液 A ； 步骤二 ： 将 0.2g BMP-2 活性多肽加入溶液 A 中， 机械搅拌至混合均匀得到混合溶液 B ； 步骤三 ： 将 20ml 混合溶液 B 加入含 2（质量分数） 乳化剂 斯盘 -80（Span80） 的液 体石蜡溶液 100mL 中。
17、， 室温下机械搅拌 2h， 然后向其中滴加 15mL 5（质量分数） 的三聚 磷酸钠 （TPP） 水溶液， 使羧甲基壳聚糖发生交联。滴加完毕， 继续搅拌 2h。沉淀， 石油醚、 异丙醇反复漂洗， 最后将沉淀物冷冻干燥至恒重即得到所需的可吸收载骨诱导多肽 （BMP-2 活性多肽） 微球。 0018 实施例 8 步骤一 ： 将 4g 对氨基苯甲酰壳聚糖溶于 20ml 水中至完全溶解得到溶液 A ； 步骤二 ： 将 0.4g BMP-2 活性多肽加入溶液 A 中， 机械搅拌至混合均匀得到混合溶液 B ； 步骤三 ： 将 20ml 混合溶液 B 加入含 2（质量分数） 乳化剂 斯盘 -80（Span8。
18、0） 的液 体石蜡溶液 100mL 中， 室温下机械搅拌 2h， 然后向其中滴加 25mL 5（质量分数） 的三聚 磷酸钠 （TPP） 水溶液， 使羧甲基壳聚糖发生交联。滴加完毕， 继续搅拌 2h。沉淀， 石油醚、 异丙醇反复漂洗， 最后将沉淀物冷冻干燥至恒重即得到所需的可吸收载骨诱导多肽 （BMP-2 活性多肽） 微球。 0019 以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明， 不能认定 本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说， 在 不脱离本发明构思的前提下， 还可以做出若干简单推演或替换， 都应当视为属于本发明的 保护范围。 说 明 书 CN 102600510 A 5 。