提高家蚕产茧产量与质量的饲料添加剂及其制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102626183 A (43)申请公布日 2012.08.08 CN 102626183 A *CN102626183A* (21)申请号 201210094376.4 (22)申请日 2012.04.01 A23K 1/18(2006.01) A23K 1/16(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (71)申请人 浙江大学 地址 310027 浙江省杭州市西湖区浙大路 38 号 (72)发明人 屠振力 (74)专利代理机构 杭州中成专利事务所有限公 司 33212 代理人 金祺 (54) 发明名称 提高家蚕。

2、产茧产量与质量的饲料添加剂及其 制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种提高家蚕产茧产量与 质量的饲料添加剂的制备方法， 包括以下步 骤 ： 将 保 藏 号 为 ATCC 19172 的 抗 辐 射 菌 (D.radiopugnance) 的菌种接种至固体培养基 上培养， 然后挑取单菌落接种至液体培养基上， 得活化后的种子菌液 ； 将活化后的种子菌液按 4.5 6.0的接种量接种至发酵培养基上， 于 28 32条件下培养 60 72h ； 得发酵液 ； 将发酵液进行离心， 所得的抗辐射菌菌体平铺成 0.1cm 1.0cm 厚度， 在频率 600 700MHz， 电场 强度 8000 9000。

3、V/cm 的条件下处理 40 60s ； 再冷风干燥至含水量小于 8， 得提高家蚕产茧 产量与质量的饲料添加剂。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 7 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 7 页 1/1 页 2 1. 提高家蚕产茧产量与质量的饲料添加剂的制备方法， 其特征是包括以下步骤 ： 、 将抗辐射菌 (D.radiopugnance) 的菌种接种至适合抗辐射菌的固体培养基上， 于 28 32培养 34 38h， 然后挑取单菌落接种至适合抗辐射菌的液体培养基上， 于 28 32培养至对数生长期， 得活化后的种子菌液 。

4、； 所述抗辐射菌 (D.radiopugnance) 的保藏号为 ATCC 19172 ； 、 将步骤所得的活化后的种子菌液按体积比 4.5 6.0的接种量接种至适合 抗辐射菌的发酵培养基上， 于 28 32条件下培养 60 72h ； 得发酵液 ； 、 将步骤所得的发酵液进行离心， 得到抗辐射菌菌体 ； 将所述抗辐射菌菌体平铺成 0.1cm1.0cm厚度， 在频率600700MHz， 电场强度80009000V/cm的条件下处理40 60s ； 再于 5 35、 风速 1.5 2.0m/s、 相对湿度 10 20的条件下冷风干燥至含水量 小于 8 ( 质量比 )， 得到提高家蚕产茧产量与质量。

5、的饲料添加剂。 2. 根据权利要求 1 所述的提高家蚕产茧产量与质量的饲料添加剂的制备方法， 其特征 是 ： 所述适合抗辐射菌的固体培养基为 TGY 固体培养基 ； 所述适合抗辐射菌的液体培养基为 TGY 液体培养基 ； 所述适合抗辐射菌的发酵培养基为脱脂大豆培养基或者 TGY 液体培养基 ； 所述每 1000mL 的脱脂大豆培养基由以下成分组成 ： 细度为 60-80 目的脱脂大豆粉 20g， 葡萄糖 2g， 硝酸钠 2g， 酵母膏 1g， 其余为蒸馏水。 3. 根据权利要求 2 所述的提高家蚕产茧产量与质量的饲料添加剂的制备方法， 其特征 是 ： 所述步骤中的离心为 ： 4000 6000。

6、rpm 离心 4 6min。 4.利用如权利要求13任一所述方法制备而得的提高家蚕产茧产量与质量的饲料添 加剂。 权 利 要 求 书 CN 102626183 A 2 1/7 页 3 提高家蚕产茧产量与质量的饲料添加剂及其制备方法 技术领域 0001 本发明属于家蚕饲料添加剂技术领域， 涉及一种提高家蚕茧的产量与质量的饲料 添加剂及其制备方法。 背景技术 0002 蚕业生产是一项见效快， 收益大的产业， 是广大农村经济发展的支柱和农民脱贫 致富的重要手段 ； 蚕丝业也是传统的出口创汇产业， 出口量居世界首位。虽自上个世纪 50 年代以来， 经过蚕品种的更换等， 家蚕茧的产质量取得了一定的发展，。

7、 但还远远不能满足当 今时代的发展需要， 提高蚕的生产性能， 增加家蚕茧的产质量是蚕丝业相关人士始终追求 的目标之一。为了提高家蚕茧的产质量， 国内外蚕业工作者已从以下几个方面进行了研究 尝试 ： (1) 通过高压静电场处理、 放射线辐照等物理方法处理家蚕卵或幼虫 ； (2) 通过幼虫 期添食一些营养物质 ： 如糖类 ( 壳寡聚糖、 苏糖、 蔗糖 )、 蛋白质或氨基酸类、 及其他一些特 殊类物质(三十烷醇、 磁处理水、 微量元素等) ； (3)通过幼虫期添食激素(保幼激素或保幼 激素与蜕皮激素的混合物 ) ； (4) 通过改变温湿度及光线等饲养条件， 这些都在一定程度上 提高了家蚕茧的产质量。。

8、但上述方法同时存在以下缺点 ： 通过高压静电场处理、 放射线辐 照等物理方法处理家蚕卵或幼虫时， 使用的仪器设备成本较高 ； 添食糖类、 微量元素、 磁处 理水、 三十烷醇、 尿素等存在成分单一或相似， 效果欠佳， 经济效益不明显 ； 激素添食等需延 长家蚕幼虫龄期经过 ； 而通过改变温湿度及光照等饲养条件来增加蚕茧产质量存在增产的 不确定性， 而且操作比较复杂等， 所以目前在实际生产中均没有得到推广应用。 鉴于上述原 因， 迫切希望有一种来源较广， 成本比较低， 操作简便， 而且效果相对稳定的能提高家蚕茧 产质量的饲料添加剂。 发明内容 0003 本发明要解决的技术问题是提供一种提高家蚕产茧。

9、产量与质量的饲料添加剂及 其制备方法。 0004 为了解决上述技术问题， 本发明提供一种提高家蚕产茧产量与质量的饲料添加剂 的制备方法， 包括以下步骤 ： 0005 、 将抗辐射菌 (D.radiopugnance) 的菌种接种至适合抗辐射菌的固体培养基 上， 于 28 32培养 34 38h， 然后挑取单菌落接种至适合抗辐射菌的液体培养基上， 于 28 32培养至对数生长期， 得活化后的种子菌液 ； 0006 抗辐射菌 (D.radiopugnance) 的保藏号为 ATCC 19172 ； 0007 、 将步骤所得的活化后的种子菌液按体积比 4.5 6.0的接种量接种至 适合抗辐射菌的发酵。

10、培养基上， 于 28 32条件下培养 60 72h ； 得发酵液 ； 0008 、 将步骤所得的发酵液进行离心， 得到抗辐射菌菌体 ； 将抗辐射菌菌体平铺成 0.1cm1.0cm厚度， 在频率600700MHz， 电场强度80009000V/cm的条件下处理40 60s ； 再于 5 35、 风速 1.5 2.0m/s、 相对湿度 10 20的条件下冷风干燥至含水量 说 明 书 CN 102626183 A 3 2/7 页 4 小于 8 ( 质量比 )， 得到提高家蚕产茧产量与质量的饲料添加剂。 0009 作为本发明的提高家蚕产茧产量与质量的饲料添加剂的制备方法的改进 ： 0010 适合抗辐射。

11、菌的固体培养基为 TGY 固体培养基 ； 0011 适合抗辐射菌的液体培养基为 TGY 液体培养基 ； 0012 适合抗辐射菌的发酵培养基为脱脂大豆培养基或者 TGY 液体培养基 ； 0013 每 1000mL 的脱脂大豆培养基由以下成分组成 ： 细度为 60-80 目的脱脂大豆粉 20g， 葡萄糖 2g， 硝酸钠 2g， 酵母膏 1g， 其余为蒸馏水。 0014 作为本发明的提高家蚕产茧产量与质量的饲料添加剂的制备方法的进一步改进 ： 步骤中的离心为 ： 4000 6000rpm 离心 4 6min。 0015 本发明还同时公开了利用上述方法制备而得的提高家蚕产茧产量与质量的饲料 添加剂。 。

12、0016 本发明所提供的提高家蚕茧产量与质量的饲料添加剂， 含有经破碎处理的抗 辐射菌。该抗辐射菌优选为菌株为 Deinococcus radiopugnance(D.radiopugnance) ATCC 19172。上述保藏号为 ATCC 19172 的抗辐射菌 (D.radiopugnance) 在专利号为 200610154663.4 的发明 具荧光素酶活性抗辐射菌的制备方法 ( 已授权 ) 中有明确告知。 0017 本发明所用的 TGY 固体培养基、 TGY 液体培养基均为本行业的常规培养基。 0018 本发明的饲料添加剂经多次饲养试验表明 ： 产品性状稳定， 具有安全高效特性， 且。

13、 操作简便 ； 实际使用时， 在桑叶添食时配制成浓度为 0.2 0.5 ( 质量比 ) 的喷洒溶液喷 洒在桑叶上 ( 用喷雾器均匀喷洒在桑叶叶面叶背两面， 以喷湿而不滴为宜 )， 人工饲料中以 0.30.6(w/w)的添加量进行添食， 可明显提高家蚕的全茧量(提高7.1410.96) 及茧层量 ( 提高 11.13 16.12 )。本发明的添加剂具有较显著的经济效益和社会效 益， 市场前景广阔。 具体实施方式 0019 下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述， 但本发明的保护范围并不仅限于 此 ： 0020 实施例 1、 一种提高家蚕产茧产量与质量的饲料添加剂的制备方法， 包括以下步 骤 ：。

14、 0021 1、 抗辐射菌菌株的获得 0022 所用保藏号为 ATCC N0.19172 的抗辐射菌的菌株 D.radiopugnance， 由美国菌种 保藏中心提供， 。 0023 2、 菌种的活化 0024 将上述抗辐射菌划线接种于 TGY 固体培养基上， 30培养 36h， 挑取单菌落接种于 三角瓶内的 TGY 液体培养基于 30培养至对数生长期 ； 得活化后的种子菌液。 0025 TGY 液体培养基配制 ： 每 1000mL 的 TGY 液体培养基组成为蛋白胨 6g， 酵母膏 3g， 葡萄糖 1g， 加蒸馏水至 1000mL ； 然后进行常规的高温灭菌 (1.1 个大气压， 121下灭。

15、菌 20min)。 0026 TGY 固体培养基配制 ： 每 1000mL 的 TGY 固体培养基组成为 ： 蛋白胨 6g， 酵母膏 3g， 葡萄糖 1g， 琼脂 15g， 加蒸馏水至 1000mL ； 然后进行常规的高温灭菌 (1.1 个大气压， 121 说 明 书 CN 102626183 A 4 3/7 页 5 下灭菌 20min)。 0027 3、 发酵培养 0028 将步骤 2 所得的活化后的种子菌液按体积比为 5的接种量接入以脱脂大豆配制 成的培养基 ( 脱脂大豆培养基 ) 中进行发酵培养， 30培养 60h， 得发酵液 ( 菌体发酵液 ) ； 脱脂大豆培养基的配制 ： 每 100。

16、0mL 的脱脂大豆培养基组成为 ： 细度为 60-80 目的脱脂大 豆粉 20g， 葡萄糖 2g， 硝酸钠 2g， 酵母膏 1g， 加蒸馏水至 1000mL ； 然后进行常规的高温灭菌 (1.1 个大气压， 121下灭菌 20min)。 0029 4、 抗辐射菌的破碎 0030 将步骤 3 培养得到的菌体发酵液， 于 5000rpm 离心 5min， 去掉上清液， 将抗辐射菌 湿菌体均匀地铺成0.5cm的厚度， 在频率600MHz， 电场强度8000V/m的条件下处理40秒， 使 细胞破碎， 得到经破碎的抗辐射菌。 0031 5、 饲料添加剂的制备 0032 将上述经破碎处理得到的抗辐射菌置于。

17、物料盘中， 放进冷风干燥机内进行冷风干 燥， 冷却温度控制在 20-25， 风速 1.5-2.0m/s， 相对湿度 10-15， 干燥至含水量 6-8 ( 质量 )， 得到本发明的用于提高家蚕产茧产量与质量的饲料添加剂。 0033 实验 1-1、 应用效果 0034 对照组采用桑叶饲养， 试验组为 ： 将实施例 1 所得的饲料添加剂配制成浓度为 0.2 ( 质量比 ) 的喷洒溶液， 在桑叶添食时喷洒在桑叶上 ( 用喷雾器均匀喷洒在桑叶叶面 叶背两面， 以喷湿而不滴为宜)， 稍作晾干后即可喂蚕。 添食时间从3龄起蚕开始直至上簇， 试验蚕共 150 头， 每组各 25 头 ( 即， 对照组和试验组。

18、各设置 3 组 )， 供试品种为丰 154A。 对照组与试验组每头蚕的桑叶用量相同。2 组的应用效果的平均值见表 1。 0035 表 1、 本发明饲料添加剂对家蚕茧质的影响 0036 全茧重 (g) 茧层重 (g) 茧层率 ( ) 对照组 2.2970.254B 0.4650.059B 20.2 试验组 2.5180.232A 0.5350.082A 21.3 0037 注 ： 同一例中标注不同大写字母表示差异极显著 (P 0.01)。 0038 实验 1-2、 应用效果 0039 对照组采用桑叶饲养， 试验组为 ： 将实施例 1 所得的饲料添加剂配制成浓度为 0.2 ( 质量比 ) 的喷洒溶。

19、液， 在桑叶添食时喷洒在桑叶上 ( 用喷雾器均匀喷洒在桑叶叶 面叶背两面， 以喷湿而不滴为宜 )， 稍作晾干后即可喂蚕。添食时间从 4 龄起蚕开始直至上 簇， 试验蚕共 148 头， 每组各 24-25 头 ( 即， 对照组和试验组各设置 3 组 )， 供试品种为丰 154A。对照组与试验组每头蚕的桑叶用量相同。2 组的应用效果的平均值见表 2。 0040 表 2、 本发明饲料添加剂对家蚕茧质的影响 0041 说 明 书 CN 102626183 A 5 4/7 页 6 全茧重 (g) 茧层重 (g) 茧层率 ( ) 对照组 2.2970.254B 0.4650.059B 20.2 试验组 2。

20、.4980.227A 0.5270.054A 21.1 0042 注 ： 同一例中标注不同大写字母表示差异极显著 (P 0.01)。 0043 实验 1-3、 应用效果 0044 对照组采用桑叶饲养， 试验组为 ： 将实施例 1 所得的饲料添加剂配制成浓度为 0.2 ( 质量比 ) 的喷洒溶液， 在桑叶添食时喷洒在桑叶上 ( 用喷雾器均匀喷洒在桑叶叶面 叶背两面， 以喷湿而不滴为宜)， 稍作晾干后即可喂蚕。 添食时间从5龄起蚕开始直至上簇， 试验蚕共 150 头， 每组各 25 头 ( 即， 对照组和试验组各设置 3 组 )， 供试品种为丰 154A。 对照组与试验组每头蚕的桑叶用量相同。2 。

21、组的应用效果的平均值见表 3。 0045 表 3、 本发明饲料添加剂对家蚕茧质的影响 0046 全茧重 (g) 茧层重 (g) 茧层率 ( ) 对照组 2.2970.254B 0.4650.059B 20.2 试验组 2.4610.239A 0.5170.051A 21.0 0047 注 ： 同一例中标注不同大写字母表示差异极显著 (P 0.01)。 0048 实验 1-4、 应用效果 0049 对照组采用人工饲料饲养， 试验组为 ： 在人工饲料中添加 0.3 (w/w) 实施例 1 所 得的饲料添加剂。添食时间从 3 龄起蚕开始直至上簇， 试验蚕共 146 头， 每组各 23-25 头 ( 。

22、即， 对照组和试验组各设置 3 组 )， 供试品种为丰 154A。对照组与试验组每头蚕的人工 饲料用量相同。2 组的应用效果的平均值见表 4。 0050 表 4、 本发明饲料添加剂对家蚕茧质的影响 0051 全茧重 (g) 茧层重 (g) 茧层率 ( ) 对照组 2.0110.216B 0.3970.044B 19.7 试验组 2.2170.223A 0.4610.051A 20.8 0052 注 ： 同一例中标注不同大写字母表示差异极显著 (P 0.01)。 0053 实验 1-5、 应用效果 0054 对照组采用人工饲料饲养， 试验组为 ： 在人工饲料中添加 0.3 (w/w) 实施例 1。

23、 所 得的饲料添加剂。添食时间从 4 龄起蚕开始直至上簇， 试验蚕共 150 头， 每组各 25 头 ( 即， 对照组和试验组各设置 3 组 )， 供试品种为丰 154A。对照组与试验组每头蚕的人工饲料 用量相同。2 组的应用效果的平均值见表 5。 0055 表 5、 本发明饲料添加剂对家蚕茧质的影响 说 明 书 CN 102626183 A 6 5/7 页 7 0056 全茧重 (g) 茧层重 (g) 茧层率 ( ) 对照组 2.0110.216B 0.3970.044B 19.7 试验组 2.2130.243A 0.4540.043A 20.5 0057 注 ： 同一例中标注不同大写字母表。

24、示差异极显著 (P 0.01)。 0058 实验 1-6、 应用效果 0059 对照组采用人工饲料饲养， 试验组为 ： 在人工饲料中添加 0.3 (w/w) 实施例 1 所 得的饲料添加剂。添食时间从 5 龄起蚕开始直至上簇， 试验蚕共 147 头， 每组各 24-25 头 ( 即， 对照组和试验组各设置 3 组 )， 供试品种为丰 154A。对照组与试验组每头蚕的人工 饲料用量相同。2 组的应用效果的平均值见表 6。 0060 表 6、 本发明饲料添加剂对家蚕茧质的影响 0061 全茧重 (g) 茧层重 (g) 茧层率 ( ) 对照组 2.0110.216B 0.3970.044B 19.7。

25、 试验组 2.1680.221A 0.4420.050A 20.4 0062 注 ： 同一例中标注不同大写字母表示差异极显著 (P 0.01)。 0063 实施例 2、 一种提高家蚕产茧产量与质量的饲料添加剂的制备方法， 包括以下步 骤 ： 0064 1、 抗辐射菌菌株的获得 0065 同实施例 1。 0066 2、 菌种的活化 0067 将上述抗辐射菌划线接种于 TGY 固体培养基上， 32培养 34h， 挑取单菌落接种于 三角瓶内的 TGY 液体培养基于 32培养至对数生长期 ； 得活化后的种子菌液。 0068 TGY 液体培养基配制、 TGY 固体培养基配制均同实施例 1。 0069 3。

26、、 发酵培养 0070 将步骤 2 所得的活化后的种子菌液按体积比为 6的接种量接入以脱脂大豆配制 成的培养基 ( 脱脂大豆培养基 ) 中进行发酵培养， 32培养 65h， 得发酵液 ( 菌体发酵液 )。 脱脂大豆培养基的配制同实施例 1。 0071 4、 抗辐射菌的破碎 0072 将步骤 3 培养得到的菌体发酵液， 于 6000rpm 离心 4min， 去掉上清液， 将抗辐射菌 湿菌体均匀地铺成1cm的厚度， 在频率700MHz， 电场强度9000V/m的条件下处理60秒， 使细 胞破碎， 得到经破碎的抗辐射菌。 0073 5、 饲料添加剂的制备 0074 将上述经破碎处理得到的抗辐射菌置于。

27、物料盘中， 放进冷风干燥机内进行冷风干 燥， 冷却温度控制在 5-15， 风速 1.5-2.0m/s， 相对湿度 10-20， 干燥至含水量 6-8 ( 质 说 明 书 CN 102626183 A 7 6/7 页 8 量 )， 得到本发明的用于提高家蚕产茧产量与质量的饲料添加剂。 0075 实验 2、 应用效果 0076 以实施例 2 所得的饲料添加剂替代实施例 1 所得的饲料添加剂， 其余同实验 1-1 ； 2 组的应用效果的平均值见表 7。 0077 表 7、 本发明饲料添加剂对家蚕茧质的影响 0078 全茧重 (g) 茧层重 (g) 茧层率 ( ) 对照组 2.2970.254B 0.。

28、4650.059B 20.2 试验组 2.5160.232A 0.5320.082A 21.2 0079 注 ： 同一例中标注不同大写字母表示差异极显著 (P 0.01)。 0080 实施例 3、 一种提高家蚕产茧产量与质量的饲料添加剂的制备方法， 包括以下步 骤 ： 0081 1、 抗辐射菌菌株的获得 0082 同实施例 1。 0083 2、 菌种的活化 0084 将上述抗辐射菌划线接种于 TGY 固体培养基上， 28培养 38h， 挑取单菌落接种于 三角瓶内的 TGY 液体培养基于 28培养至对数生长期 ； 得活化后的种子菌液。 0085 TGY 液体培养基配制、 TGY 固体培养基配制均。

29、同实施例 1。 0086 3、 发酵培养 0087 将步骤 2 所得的活化后的种子菌液按体积比为 4.5的接种量接入脱脂大豆培养 基中进行发酵培养， 32培养 65h， 得发酵液 ( 菌体发酵液 )。脱脂大豆培养基的配制同实 施例 1。 0088 4、 抗辐射菌的破碎 0089 将步骤 3 培养得到的菌体发酵液， 于 4000rpm 离心 6min， 去掉上清液， 将抗辐射菌 湿菌体均匀地铺成0.2cm的厚度， 在频率650MHz， 电场强度8500V/m的条件下处理50秒， 使 细胞破碎， 得到经破碎的抗辐射菌。 0090 5、 饲料添加剂的制备 0091 将上述经破碎处理得到的抗辐射菌置于。

30、物料盘中， 放进冷风干燥机内进行冷风干 燥， 冷却温度控制在 25-30， 风速 1.5-2.0m/s， 相对湿度 10-15， 干燥至含水量 6-8 ( 质量 )， 得到本发明的用于提高家蚕产茧产量与质量的饲料添加剂。 0092 实验 3、 应用效果 0093 以实施例 3 所得的饲料添加剂替代实施例 1 所得的饲料添加剂， 其余同实验 1-1 ； 2 组的应用效果的平均值见表 8。 0094 表 8、 本发明饲料添加剂对家蚕茧质的影响 0095 说 明 书 CN 102626183 A 8 7/7 页 9 全茧重 (g) 茧层重 (g) 茧层率 ( ) 对照组 2.2970.254B 0.。

31、4650.059B 20.2 试验组 2.5150.232A 0.5310.082A 21.1 0096 注 ： 同一例中标注不同大写字母表示差异极显著 (P 0.01)。 0097 实施例4、 将实施例3步骤3)发酵培养中的脱脂大豆培养基改成TGY液体培养基， 其余同实施例 3。 0098 实验 4、 应用效果 0099 以实施例 4 所得的饲料添加剂替代实施例 1 所得的饲料添加剂， 其余同实验 1-1 ； 2 组的应用效果的平均值见表 9。 0100 表 9、 本发明饲料添加剂对家蚕茧质的影响 0101 全茧重 (g) 茧层重 (g) 茧层率 ( ) 对照组 2.2970.254B 0.4650.059B 20.2 试验组 2.5100.232A 0.5120.082A 20.4 0102 注 ： 同一例中标注不同大写字母表示差异极显著 (P 0.01)。 0103 最后， 还需要注意的是， 以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然， 本发 明不限于以上实施例， 还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容 直接导出或联想到的所有变形， 均应认为是本发明的保护范围。 说 明 书 CN 102626183 A 9 。