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一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法.pdf

上传人：罗明

文档编号：5331804

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1、(10)申请公布号 CN 103351426 A (43)申请公布日 2013.10.16 CN 103351426 A *CN103351426A* (21)申请号 201310333598.1 (22)申请日 2013.08.02 C07K 7/06(2006.01) C07K 1/06(2006.01) C07K 1/04(2006.01) (71)申请人上海苏豪逸明制药有限公司地址 200333 上海市普陀区千阳路 57 号申请人周逸明崔颀 (72)发明人刘湘艳唐林春崔颀周逸明 (74)专利代理机构上海欣创专利商标事务所 31217 代理人顾大平 (54) 发明名。

2、称一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法 (57) 摘要本发明涉及一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，包括如下步骤：以氯甲基树脂为起始原料，将 Boc-Thr(tBu)-OH 制备成铯盐，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次用 HCl/ 异丙醇脱去 Boc 保护基团，用 DIC、 HOBT 为缩合剂进行接肽反应，用钯碳 / 氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽，在 Ph7.8-9 条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品，再经 C18 柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。本发明方法不采用苏氨醇、 Fmoc- 苏氨醇，。

3、生产成本极低，具备规模化生产能力，工艺稳定，原辅料来源方便，生产周期短，接肽收率高，质量稳定，避免使用氟化氢，三氟乙酸等剧毒试剂，三废污染少。 (51)Int.Cl. 权利要求书 3 页说明书 7 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书3页说明书7页 (10)申请公布号 CN 103351426 A CN 103351426 A *CN103351426A* 1/3 页 2 1. 一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，其特征在于，包括如下步骤：以氯甲基树脂为起始原料，将 Boc-Thr(tBu)-OH 制备成铯盐，按照固相合成。

4、的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，依次为： Boc-Cys(Trt)-OH、 Boc-Thr(tBu)-OH、 Boc-Lys(Fmoc)-OH、 Boc-D-Trp-OH、 Boc-Phe-OH、 Boc-Cys(Trt)-OH、 Fmoc-D-Phe-OH，获得保护八肽树脂，其间依次用 HCl/ 异丙醇脱去 Boc- 保护基团，用 DIC、 HOBT 进行接肽反应，用钯碳 / 氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽，在 pH7.8-9 的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品，再采用独特的流动相经 C18 柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。 2. 根据。

5、权利要求 1 所述的方法，其特征在于，依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次脱去 Boc- 保护基团的方法包括如下步骤：（1） Boc-Thr(tBu)-OCs 的制备 Boc-Thr(tBu)-OH 溶于甲醇与水中，另取碳酸铯加水溶解至澄清，搅拌下加入上述 Boc-Thr(tBu)-OH 溶液，溶液 pH7.5，减压浓缩至干，得糖浆状残留物 Boc-Thr(tBu)-OCs ； Fmoc-Thr(tBu)-OH 的摩尔数为树脂的 13 倍；碳酸铯的摩尔数为树脂的 15 倍；（2） Boc-Thr(tBu)-O- 树脂的制备取氯甲基树脂，用。

6、 DMF 浸泡使树脂溶胀，加上述糖浆状残留物 Boc-Thr(tBu)-OCs， DMF，反应；过滤，树脂用 DMF 洗涤二次，纯化水洗涤，无水乙醇洗涤，减压干燥，得 Boc-Thr(tBu)-O- 树脂；氯甲基树脂与 Boc-Thr(tBu)-OCs 的反应温度： 40-65，反应时间： 36-72 小时；（3） Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂的制备：在步骤（2）的 Boc-Thr(tBu)-O- 树脂中，加入 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液与 DCM，反应，抽干，分别用 DCM、无水甲醇。

7、、 DCM 各洗涤二次，抽干，再加 10% 三乙胺的 DCM 溶液反应，抽干， DCM 洗涤；加入 Boc-Cys(Trt)-OH、 DIC， HOBT， DMF，将混合物反应，抽干，分别用 DMF、无水甲醇、 DMF 洗涤，抽干；脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液， HCl浓度为1 mol/L9 mol/L ； 2mol/L HCl/ 异丙醇用量为树脂重量的 38 倍；（4） Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂的制备在步骤（3）的 Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂中，加入 2mol/。

8、L HCl/ 异丙醇溶液与 DCM，反应，抽干，分别用 DCM、无水甲醇、 DCM 各洗涤二次，抽干，加 10% 三乙胺的 DCM 溶液反应，抽干， DCM 洗涤；加 Boc-Thr(tBu)-OH、 DIC， HOBT， DMF，将混合物反应，抽干，分别用 DMF、无水甲醇、 DMF 各洗涤三次，抽干；脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液， HCl浓度为1 mol/L9 mol/L ； 2mol/L HCl/ 异丙醇用量为树脂重量的 38 倍；（5） Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树。

9、脂的制备在步骤（4）的 Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂中，加入 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液与 DCM，反应，抽干，分别用 DCM、无水甲醇、 DCM 各洗涤，抽干，加 10% 三乙胺的 DCM 溶权利要求书 CN 103351426 A 2 2/3 页 3 液反应，抽干， DCM 洗涤；加 Boc-Lys(Fmoc)-OH、 DIC， HOBT， DMF，将混合物反应，抽干，分别用 DMF、无水甲醇、 DMF 洗涤，抽干；脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液， HCl浓度为1 m。

10、ol/L9 mol/L ； 2mol/L HCl/ 异丙醇用量为树脂重量的 38 倍；（6） Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂的制备在步骤（5）的 Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂中，加入 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液与 DCM，反应，抽干，分别用 DCM、无水甲醇、 DCM 洗涤二抽干，加 10% 三乙胺的 DCM 溶液反应，抽干， DCM 洗涤；加 Boc-D-Trp-OH、 DIC， HOBT， DMF, 将混合物反应，。

11、抽干，分别用 DMF、无水甲醇、 DMF 洗涤三次，抽干；脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液， HCl浓度为1 mol/L9 mol/L ； 2mol/L HCl/ 异丙醇用量为树脂重量的 38 倍；（7） Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂的制备在步骤（6）的 Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂中，加入 2mol/L HCl/ 异丙醇与 DCM 与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用 DCM、无水。

12、甲醇、 DCM 洗涤，抽干，加 10% 三乙胺的 DCM 溶液反应，抽干， DCM 洗涤；加 Boc-Phe-OH、 DIC， HOBT， DMF，将混合物反应，抽干，分别用 DMF、无水甲醇、 DMF 各洗涤，抽干；脱除 Boc- 基采用 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液， HCl 浓度为 1 mol/ L9 mol/L ； 2mol/L HCl/ 异丙醇用量为树脂重量的 38 倍；（8） Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(tBu)-Thr(tBu)-O- 树脂的制备在步骤（7。

13、）的 Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、 DCM 洗涤，抽干，加 10% 三乙胺的 DCM 溶液反应，抽干， DCM 洗涤；加 Boc-Cys(Trt)-OH、 DIC， HOBT， DMF，将混合物反应，抽干， DMF、无水甲醇、 DMF 洗涤，抽干；脱除 Boc- 基采用 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液， HCl 浓度为 1 mol/ L9 mol/L ；。

14、 2mol/L HCl/ 异丙醇用量为树脂重量的 38 倍；（9） Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂的制备在步骤（8） Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(tBu)-Thr(tBu)-O - 树脂中，加入 2mol/L HCl/ 异丙醇与 DCM 与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用 DCM、无水甲醇、 DCM 洗涤，抽干，加 10% 三乙胺的 DCM 溶液反应，抽干， DCM 洗涤；加 Fmoc-。

15、D-Phe-OH、 DIC， HOBT， DMF，将混合物反应，抽干， DMF、无水甲醇、 DMF 洗涤，抽干；脱除 Boc- 基采用 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液， HCl 浓度为 1 mol/ L9 mol/L ； 2mol/L HCl/ 异丙醇用量为树脂重量的 38 倍；权利要求书 CN 103351426 A 3 3/3 页 4 （10） Fmoc-D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr-Cys(SH)-Thr-O- 树脂的制备在步骤（9）的 Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-。

16、Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Th r(tBu)-O- 树脂中，加入 2mol/L HCl/ 异丙醇与 DCM 与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用 DCM、无水甲醇、 DCM 洗涤，抽干；再用无水甲醇洗涤十次，抽干后，放入真空干燥器中干燥，得八肽树脂；脱除 Boc- 基采用 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液， HCl 浓度为 1mol/ L9 mol/L ； 2mol/L HCl/ 异丙醇用量为树脂重量的 38 倍。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原。

17、型奥曲肽的方法包括如下步骤： D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys(SH)-Thr-ol 的制备取所述八肽树脂加无水甲醇， 5% 钯 / 碳，通入氢气，密闭，搅拌，过滤，除去碳粉和树脂，无水甲醇洗涤，减压浓缩至油状物，加入六氢吡啶的无水甲醇溶液，反应，减压浓缩至油状物， DMF 溶解，加无水乙醚沉淀，过滤收集沉淀得还原型奥曲肽粗品； 5% 钯碳用量为树脂的 1/10 至 5/10。 4. 根据权利要求 1 所述的方法，其特征在于，在 pH7.8-9 的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品的方法具体实现为：将还原型。

18、奥曲肽粗品溶于水，在搅拌下滴加 2mol/ L 氨水至 pH8，室温通空气 24-36 小时使二硫键成环 , 加冰醋酸，加活性碳，过滤。 5. 根据权利要求 1 所述的方法，其特征在于，粗品经 C18 柱分离纯化的方法包括如下步骤：滤液分批经 C18 柱纯化，流动相： 0.25-0.5mol/L 醋酸钾 : 乙腈 =7-8 :3-2 ；流速为： 600-1000ml/min ；检测波长为： 280nm ；样品峰合并后去盐、冻干，得醋酸奥曲肽成品。权利要求书 CN 103351426 A 4 1/7 页 5 一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法技术领域。

19、0001 本发明涉及一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，具体涉及醋酸奥曲肽的固相多肽合成方法。背景技术 0002 0002 奥曲肽，中文名：醋酸奥曲肽；英文名： Octreotide Acetate ；分子式 : C49H66N10010S2XC2H4O2；结构式 : 醋酸奥曲肽能抑制多种胃肠道激素的分泌及其它多种内分泌功能，目前已广泛用于临床治疗各型胰腺炎、胰腺瘘管、肠瘘、肝硬化食道 - 胃底曲张静脉出血、消化道溃疡出血、严重腹泻及肢端肥大症，并有望用于消化系统内分泌肿瘤的治疗。 0003 在国内，肝硬化发病率超过 1%，每年发生食管曲张静脉破裂引起的大出。

20、血的患者，加上消化性溃疡引起的上消化道大出血患者，总数超过 300 万，因此醋酸奥曲肽的市场较大。我们将致力于降低醋酸奥曲肽的生产成本，大大降低患者的治疗成本。 0004 目前文献报导的醋酸奥曲肽的制备方法一般需使用苏氨醇或 Fmoc- 苏氨醇，导致生产成本较高；在并使用氟化氢切肽、三氟醋酸进行纯化，污染环境，收率较低。因此目前的方法限制了醋酸奥曲肽的大规模生产和使用。 0005 不同的多肽产品由于受其自身结构的制约，在合成工艺上存在一些局限性，不能任意选择起始原料和工艺条件完成多肽合成。虽然使用 Boc- 保护的氨基酸可以实现某些多肽产品的合成，但是现有。

21、技术中尚没有开发出采用 Boc- 苏氨酸制备醋酸奥曲肽的工艺技术，而 Boc- 苏氨酸相较 Fmoc- 苏氨醇，价格低廉，使用 Boc- 苏氨酸来合成醋酸奥曲肽，将极大降低醋酸奥曲肽的生产成本，有益于醋酸奥曲肽的大规模生产和使用。 0006 发明内容 0007 本发明的目的是提供一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，大幅度减少三废和降低原料成本，提高反应收率，以克服现有技术存在的上述缺陷。 0008 为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，包括如下步骤：以氯甲基树脂为起始原料，将 Boc-Thr(tBu)-OH 制备成铯盐，按照固相合。

22、成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，依次为： Boc-Cys(Trt)-OH、 Boc-Thr(tBu)-OH、 Boc-Lys(Fmoc)-OH、 Boc-D-Trp-OH、 Boc-Phe-OH、 Boc-Cys(Trt)-OH、 Fmoc-D-Phe-OH，获得保护八肽树脂，其间依次用 HCl/ 异丙醇脱去 Boc- 保护基团，用 DIC、 HOBT 为缩合剂进行接肽反应，用钯碳 / 氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽，在 pH7.8-9 的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品，再采用独特的流动相经 C18 柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。说。

23、明书 CN 103351426 A 5 2/7 页 6 0009 依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次脱去 Boc- 保护基团的方法包括如下步骤：（1） Boc-Thr(tBu)-OCs 的制备 Boc-Thr(tBu)-OH 溶于甲醇与水中，另取碳酸铯加水溶解至澄清，搅拌下加入上述 Boc-Thr(tBu)-OH 溶液，溶液 pH7.5，减压浓缩至干，得糖浆状残留物 Boc-Thr(tBu)-OCs ； Fmoc-Thr(tBu)-OH 的摩尔数为树脂的 13 倍；碳酸铯的摩尔数为树脂的 15 倍；（2） Boc-Thr(tBu)-O- 树脂。

24、的制备取氯甲基树脂，用 DMF 浸泡使树脂溶胀，加上述糖浆状残留物 Boc-Thr(tBu)-OCs， DMF，反应；过滤，树脂用 DMF 洗涤二次，纯化水洗涤，无水乙醇洗涤，减压干燥，得 Boc-Thr(tBu)-O- 树脂；氯甲基树脂与 Boc-Thr(tBu)-OCs 的反应温度： 40-65，反应时间： 36-72 小时；（3） Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂的制备：在步骤（2）的 Boc-Thr(tBu)-O- 树脂中，加入 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液与 DCM，反应，抽干，。

25、分别用 DCM、无水甲醇、 DCM 各洗涤二次，抽干，再加 10% 三乙胺的 DCM 溶液（体积比）反应，抽干， DCM 洗涤；加入 Boc-Cys(Trt)-OH、 DIC， HOBT， DMF，将混合物反应，抽干，分别用 DMF、无水甲醇、 DMF 洗涤，抽干；脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液， HCl浓度为1 mol/L9 mol/L ； 2mol/L HCl/ 异丙醇用量为树脂重量的 38 倍；（4） Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂的制备在步骤（3）的 Boc-Cys(Trt)-Thr。

26、(tBu)-O- 树脂中，加入 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液与 DCM，反应，抽干，分别用 DCM、无水甲醇、 DCM 各洗涤二次，抽干，加 10% 三乙胺的 DCM 溶液反应，抽干， DCM 洗涤；加 Boc-Thr(tBu)-OH、 DIC， HOBT， DMF，将混合物反应，抽干，分别用 DMF、无水甲醇、 DMF 各洗涤三次，抽干；脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液， HCl浓度为1 mol/L9 mol/L ； 2mol/L HCl/ 异丙醇用量为树脂重量的 38 倍；（5） Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-。

27、Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂的制备在步骤（4）的 Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂中，加入 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液与 DCM，反应，抽干，分别用 DCM、无水甲醇、 DCM 各洗涤，抽干，加 10% 三乙胺的 DCM 溶液反应，抽干， DCM 洗涤；加 Boc-Lys(Fmoc)-OH、 DIC， HOBT， DMF，将混合物反应，抽干，分别用 DMF、无水甲醇、 DMF 洗涤，抽干；脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液， HCl浓度为1 mol/L9 mol/L ；。

28、 2mol/L HCl/ 异丙醇用量为树脂重量的 38 倍；（6） Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂的制备在步骤（5）的 Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂中，加入 2mol/L 说明书 CN 103351426 A 6 3/7 页 7 HCl/ 异丙醇溶液与 DCM，反应，抽干，分别用 DCM、无水甲醇、 DCM 洗涤二抽干，加 10% 三乙胺的 DCM 溶液反应，抽干， DCM 洗涤；加 Boc-D-Trp-OH、 DIC， H。

29、OBT， DMF, 将混合物反应，抽干，分别用 DMF、无水甲醇、 DMF 洗涤三次，抽干；脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液， HCl浓度为1 mol/L9 mol/L ； 2mol/L HCl/ 异丙醇用量为树脂重量的 38 倍；（7） Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂的制备在步骤（6）的 Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂中，加入 2mol/L HCl/ 异丙醇与 DCM 与乙二硫醇的混合溶液，反。

30、应，抽干，分别用 DCM、无水甲醇、 DCM 洗涤，抽干，加 10% 三乙胺的 DCM 溶液反应，抽干， DCM 洗涤；加 Boc-Phe-OH、 DIC， HOBT， DMF，将混合物反应，抽干，分别用 DMF、无水甲醇、 DMF 各洗涤，抽干；脱除 Boc- 基采用 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液， HCl 浓度为 1 mol/ L9 mol/L ； 2mol/L HCl/ 异丙醇用量为树脂重量的 38 倍；（8） Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(tBu)-Thr(tBu。

31、)-O- 树脂的制备在步骤（7）的 Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、 DCM 洗涤，抽干，加 10% 三乙胺的 DCM 溶液反应，抽干， DCM 洗涤；加 Boc-Cys(Trt)-OH、 DIC， HOBT， DMF，将混合物反应，抽干， DMF、无水甲醇、 DMF 洗涤，抽干；脱除 Boc- 基采用 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液， HCl 浓度为。

32、 1 mol/ L9 mol/L ； 2mol/L HCl/ 异丙醇用量为树脂重量的 38 倍；（9） Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂的制备在步骤（8） Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(tBu)-Thr(tBu)-O - 树脂中，加入 2mol/L HCl/ 异丙醇与 DCM 与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用 DCM、无水甲醇、 DCM 洗涤，抽干，加 10% 三乙胺的 DCM 溶液反应，抽干。

33、， DCM 洗涤；加 Fmoc-D-Phe-OH、 DIC， HOBT， DMF，将混合物反应，抽干， DMF、无水甲醇、 DMF 洗涤，抽干；脱除 Boc- 基采用 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液， HCl 浓度为 1 mol/ L9 mol/L ； 2mol/L HCl/ 异丙醇用量为树脂重量的 38 倍；（10） Fmoc-D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr-Cys(SH)-Thr-O- 树脂的制备在步骤（9）的 Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr。

34、(tBu)-Cys(Trt)-Th r(tBu)-O- 树脂中，加入 2mol/L HCl/ 异丙醇与 DCM 与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用 DCM、无水甲醇、 DCM 洗涤，抽干；再用无水甲醇洗涤十次，抽干后，放入真空干燥器中干燥，得八肽树脂；脱除 Boc- 基采用 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液， HCl 浓度为 1mol/ L9 mol/L ； 2mol/L HCl/ 异丙醇用量为树脂重量的 38 倍。说明书 CN 103351426 A 7 4/7 页 8 0010 用钯 / 碳 , 氢气还原，同时将肽链切落，获得还原。

35、型奥曲肽的方法包括如下步骤： D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys(SH)-Thr-ol 的制备取所述八肽树脂加无水甲醇， 5% 钯 / 碳，通入氢气，密闭，搅拌，过滤，除去碳粉和树脂，无水甲醇洗涤，减压浓缩至油状物，加入六氢吡啶的无水甲醇溶液，反应，减压浓缩至油状物， DMF 溶解，加无水乙醚沉淀，过滤收集沉淀得还原型奥曲肽粗品； 5% 钯 / 碳用量为树脂的 1/10 至 5/10（质量比）。 0011 在 pH7.8-9 的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品的方法具体实现为：将还原型奥曲肽粗品溶于水，在搅拌。

36、下滴加2mol/L氨水至pH7.8-9，室温通空气24-36小时使二硫键成环 , 加冰醋酸，加活性碳，过滤。 0012 粗品经 C18 柱分离纯化的方法包括如下步骤：滤液分批经 C18 柱纯化，流动相： 0.25-0.5mol/L 醋酸钾 : 乙腈 =7-8 :3-2 ；流速为： 600-1000ml/min ；检测波长为： 280nm ；样品峰合并后去盐、冻干，得醋酸奥曲肽成品。 0013 有益效果与现有技术相比，本发明采用氯甲基树脂为固相载体，将第一个氨基酸 Boc-Thr(tBu)-OH 制备成铯盐，。

37、以 DIC,HOBT 为缩合剂，逐个接上保护的氨基酸，最后一个肽链采用 Fmoc-D-Phe-OH, 获得保护八肽树脂，不采用苏氨醇、 Fmoc- 苏氨醇，生产成本极低，具备规模化生产能力，工艺稳定，原辅料来源方便，生产周期短，接肽收率高，质量稳定，用 HCl/ 异丙醇脱去 Boc- 保护基团，用钯 / 碳加氢还原，同时将肽链切落切肽，条件温和，避免使用氟化氢，三氟乙酸等剧毒试剂，三废污染少。 0014 具体实施方式 0015 实施例 1 实施例和前述过程中所采用的原料列表如下： No 品名生产厂商 1氯甲基树脂（Cl-CH2-C6H4-Resin。

38、）天津南开和成科技有限公司 2Boc-Thr(tBu)-OH吉尔生化（上海）公司 3Boc-Cys(Trt)-OH吉尔生化（上海）公司 4Boc-Thr(tBu)-OH吉尔生化（上海）公司 5Boc-Lys(Fmoc)-OH吉尔生化（上海）公司 6Boc-D-Trp-OH吉尔生化（上海）公司 7Boc-Phe-OH吉尔生化（上海）公司 8Fmoc-D-Phe-OH吉尔生化（上海）公司 9HOBt(N-Hydroxybenzotriazole)吉尔生化（上海）公司 10 DIC（N,N- 二异丙基碳二亚胺）苏州昊帆生物科技有限公司 11 DMF（N,N- 二甲基甲。

39、酰胺）国药集团 12 无水甲醇国药集团 13 盐酸国药集团 14 异丙醇国药集团 15 DCM（二氯甲烷）国药集团 16 乙二硫醇国药集团 17 三乙胺国药集团醋酸奥曲肽的制备方法，包括如下步骤：一、合成肽链（1） Boc-Thr(tBu)-OCs 的制备 Boc-Thr(tBu)-OH（FW ： 275.3， 110mmol)30.3g，溶于 250ml 甲醇与 250ml 水中， pH2.5。说明书 CN 103351426 A 8 5/7 页 9 另取 24g 碳酸铯（147mmol）加水 100ml 溶解至澄清，搅拌下缓缓加入上述 Boc-Thr(tBu)-O。

40、H 溶液，有二氧化碳气体产生。溶液 pH7.5。40-50水溶减压浓缩至干，得糖浆状残留物 Boc-Thr(tBu)-OCs 53.5g。 0016 （2） Boc-Thr(tBu)-O- 树脂的制备取氯甲基树脂 100 克（100-200 目， 1.0mmol/g, 100mmol)，用 DMF 浸泡 30 分钟，使树脂充分溶胀，加上述 107g 糖浆状残留物，及 700ml DMF， 50-55反应 48 小时。 0017 过滤，树脂用 DMF 洗涤二次，纯化水洗涤 20 次，无水乙醇洗涤 6 次。50-55减压干燥，得 125gBoc-Thr(tBu)-O- 。

41、树脂。 0018 （3） Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂的制备加入 350ml 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液与 350ml DCM， 25反应 30 分钟。抽干，分别用 DCM、无水甲醇、 DCM 各洗涤二次，抽干。加 700ml 的 10% 三乙胺的 DCM 溶液 25反应 5 分钟，抽干， DCM 洗涤 7 次。 0019 加入 Boc-Cys(Trt)-OH（MW:463.6, 200mmol） 92.7g、 DIC（MW:126.2, 200mmol） 25.2g, HOBT （MW:153， 200mmol） 30.6g， DMF 600ml。

42、, 将混合物 25反应 3 小时。抽干。 DMF、无水甲醇、 DMF 各洗涤三次，抽干。 0020 （4） Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂的制备加入 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液 350ml 与 DCM 350ml， 25反应 30 分钟。抽干，分别用 DCM、无水甲醇、 DCM 各洗涤二次，抽干。加 10% 三乙胺 700ml 的 DCM 溶液， 25反应 5 分钟，抽干， DCM 洗涤 7 次。 0021 加 55.1g（FW ： 275.3, 200mmol） Boc-Thr(tBu)-OH、 DIC（MW:126.2, 20。

43、0mmol） 25.2g, HOBT （MW:153,200mmol） 30.6g， DMF600ml, 将混合物 25反应 3 小时。抽干， DMF、无水甲醇、 DMF 各洗涤三次，抽干。 0022 （5） Fmoc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂的制备加入 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液 350ml 与 DCM 350ml， 25反应 30 分钟。抽干，分别用 DCM、无水甲醇、 DCM 各洗涤二次，抽干。加 10% 三乙胺 700ml 的 DCM 溶液 25反应 5 分钟，抽干， DCM 洗涤 7 次。 0023 加。

44、 93.7g（FW ： 468.6, 200mmol） Boc-Lys(Fmoc)-OH、 DIC（MW:126.2, 200mmol） 25.2g, HOBT （MW:153， 200mmol） 30.6g， 600mlDMF, 将混合物 25反应 l 小时。抽干， DMF、无水甲醇、 DMF 各洗涤三次，抽干。 0024 （6） Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 树脂的制备加入 2mol/L HCl/ 异丙醇溶液 350ml 与 DCM 350ml， 25反应 30 分钟。抽干，分别用 DCM、无水甲醇、 DCM 。

45、各洗涤二次，抽干。加 10% 三乙胺 700ml 的 DCM 溶液 25反应 5 分钟，抽干， DCM 洗涤 7 次。 0025 加 60.9g （FW ： 304.4， 200mmol） Boc-D-Trp-OH、 DIC （MW:126.2, 200mmol） 25.2g， HOBT （MW:153,200mmol） 30.6g， 600mlDMF, 将混合物 25反应 l 小时。抽干， DMF、无水甲醇、 DMF 各洗涤三次，抽干。 0026 （7） Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O- 脂的制备加入 2m。

46、ol/L HCl/ 异丙醇 315ml 与 DCM 315ml 与 70ml 乙二硫醇的混合溶液， 25反应 30 分钟。抽干，分别用 DCM、无水甲醇、 DCM 各洗涤二次，抽干。加 10% 三乙胺 700ml 的说明书 CN 103351426 A 9 6/7 页 10 DCM 溶液 25反应 5 分钟，抽干， DCM 洗涤 7 次。 0027 加 53.1g（FW:265.3， 200mmol） Boc-Phe-OH、 DIC（MW:126.2， 200mmol） 25.2g ， HOBT （MW:153， 200mmol） 30.6g， 600mlDMF, 将混合物 2。

47、5反应 l 小时。抽干， DMF、无水甲醇、 DMF 各洗涤三次，抽干。 0028 （8） Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(tBu)-Thr(tBu)-O- 树脂的制备加入2mol/L HCl/异丙醇 315ml与DCM 315ml与70ml乙二硫醇的混合溶液， 25反应 30 分钟。抽干，分别用 DCM、无水甲醇、 DCM 各洗涤二次，抽干。加 10% 三乙胺 700ml 的 DCM 溶液 25反应 5 分钟，抽干， DCM 洗涤 7 次。 0029 加 92.7g（FW ： 463.6, 200mmol) Boc。

48、-Cys(Trt)-OH、 DIC（MW:126.2, 200mmol） 25.2g， HOBT（MW:153， 200mmol） 30.6g， 600mlDMF，将混合物 25反应 l 小时。抽干， DMF、无水甲醇、 DMF 各洗涤三次，抽干。 0030 （9） Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu) -O- 树脂的制备加入 2mol/L HCl/ 异丙醇 315ml 与 DCM 315ml 与 70ml 乙二硫醇的混合溶液， 25反应 30 分钟。抽干，分别用 DCM、无水甲醇、。

49、DCM 各洗涤二次，抽干。加 10% 三乙胺 700ml 的 DCM 溶液 25反应 5 分钟，抽干， DCM 洗涤 7 次。 0031 加 53.1g （FW:265.3， 200mmol） Fmoc-D-Phe-OH、 DIC （MW:126.2, 200mmol） 25.2g， HOBT（MW:153,200mmol） 30.6g， 600ml DMF，将混合物 25反应 l 小时。抽干， DMF、无水甲醇、 DMF 各洗涤三次，抽干。 0032 （10） Fmoc-D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr-Cys(SH)-Thr-O- 树脂的制备加入 2mol/L HCl/ 异丙醇 630ml 与 70ml 乙二硫醇的混合溶液， 25搅拌 30 分钟。抽干，分别用 DCM、无水甲醇、 DCM 各洗涤二次，抽干。 0033 再用无水。

摘要
申请专利号：	CN201310333598.1	申请日：	2013.08.02
公开号：	CN103351426A	公开日：	2013.10.16
当前法律状态：	授权	有效性：	有权
法律详情：	授权\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):C07K 7/06申请日:20130802\|\|\|专利申请权的转移IPC(主分类):C07K 7/06变更事项:申请人变更前权利人:上海苏豪逸明制药有限公司变更后权利人:上海苏豪逸明制药有限公司变更事项:地址变更前权利人:200333 上海市普陀区千阳路57号变更后权利人:200333 上海市普陀区千阳路57号变更事项:申请人变更前权利人:周逸明崔颀登记生效日:20140711\|\|\|公开
IPC分类号：	C07K7/06; C07K1/06; C07K1/04	主分类号：	C07K7/06
申请人：	上海苏豪逸明制药有限公司; 周逸明; 崔颀
发明人：	刘湘艳; 唐林春; 崔颀; 周逸明
地址：	200333 上海市普陀区千阳路57号
优先权：
专利代理机构：	上海欣创专利商标事务所 31217	代理人：	顾大平
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内容摘要

本发明涉及一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，包括如下步骤：以氯甲基树脂为起始原料，将Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次用HCl/异丙醇脱去Boc保护基团，用DIC、HOBT为缩合剂进行接肽反应，用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽，在Ph7.8-9条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品，再经C18柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。本发明方法不采用苏氨醇、Fmoc-苏氨醇，生产成本极低，具备规模化生产能力，工艺稳定，原辅料来源方便，生产周期短，接肽收率高，质量稳定，避免使用氟化氢，三氟乙酸等剧毒试剂，三废污染少。

权利要求书

权利要求书
1.  一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，其特征在于，包括如下步骤：以氯甲基树脂为起始原料，将Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，依次为：Boc-Cys(Trt)-OH、Boc-Thr(tBu)-OH、Boc-Lys(Fmoc)-OH、Boc-D-Trp-OH、Boc-Phe-OH、Boc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-D-Phe-OH，获得保护八肽树脂，其间依次用HCl/异丙醇脱去Boc-保护基团，用DIC、HOBT进行接肽反应，用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽，在pH7.8-9的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品，再采用独特的流动相经C18柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。

2.  根据权利要求1所述的方法，其特征在于，依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次脱去Boc-保护基团的方法包括如下步骤：
    （1）Boc-Thr(tBu)-OCs的制备
Boc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇与水中，另取碳酸铯加水溶解至澄清，搅拌下加入上述Boc-Thr(tBu)-OH溶液，溶液pH7.5，减压浓缩至干，得糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs ；
Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔数为树脂的1~3倍；
碳酸铯的摩尔数为树脂的1~5倍；
    （2）Boc-Thr(tBu)-O-树脂的制备
    取氯甲基树脂，用DMF浸泡使树脂溶胀，加上述糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs，DMF，反应；
    过滤，树脂用DMF洗涤二次，纯化水洗涤，无水乙醇洗涤，减压干燥，得Boc-Thr(tBu)-O-树脂；
氯甲基树脂与Boc-Thr(tBu)-OCs的反应温度：40-65℃，反应时间：36-72小时；
（3）Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备：
在步骤（2）的Boc-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，再加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加入Boc-Cys(Trt)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（4）Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（3）的Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-Thr(tBu)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（5）Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（4）的Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-Lys(Fmoc)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（6）Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（5）的Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤二抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-D-Trp-OH、DIC，HOBT，DMF, 将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤三次，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（7）Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（6）的Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-Phe-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（8）Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（7）的Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-Cys(Trt)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（9）Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（8）Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Fmoc-D-Phe-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（10）Fmoc-D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr-Cys(SH)-Thr-O-树脂的制备
在步骤（9）的Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干；
    再用无水甲醇洗涤十次，抽干后，放入真空干燥器中干燥，得八肽树脂；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍。

3.  根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽的方法包括如下步骤：
D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys(SH)-Thr-ol的制备
取所述八肽树脂加无水甲醇，5%钯/碳，通入氢气，密闭，搅拌，过滤，除去碳粉和树脂，无水甲醇洗涤，减压浓缩至油状物，加入六氢吡啶的无水甲醇溶液，反应，减压浓缩至油状物，DMF溶解，加无水乙醚沉淀，过滤收集沉淀得还原型奥曲肽粗品；5%钯碳用量为树脂的1/10至5/10。

4.  根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在pH7.8-9的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品的方法具体实现为：将还原型奥曲肽粗品溶于水，在搅拌下滴加2mol/L氨水至pH8，室温通空气24-36小时使二硫键成环, 加冰醋酸，加活性碳，过滤。

5.  根据权利要求1所述的方法，其特征在于，粗品经C18柱分离纯化的方法包括如下步骤：滤液分批经C18柱纯化，流动相：0.25-0.5mol/L醋酸钾 :乙腈=7-8 :3-2；流速为：600-1000ml/min；检测波长为：280nm；样品峰合并后去盐、冻干，得醋酸奥曲肽成品。

说明书

说明书一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法
技术领域
本发明涉及一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，具体涉及醋酸奥曲肽的固相多肽合成方法。
背景技术
[0002] 奥曲肽，中文名：醋酸奥曲肽；英文名：Octreotide Acetate；分子式: C49H66N10010S2·XC2H4O2；结构式:
醋酸奥曲肽能抑制多种胃肠道激素的分泌及其它多种内分泌功能，目前已广泛用于临床治疗各型胰腺炎、胰腺瘘管、肠瘘、肝硬化食道-胃底曲张静脉出血、消化道溃疡出血、严重腹泻及肢端肥大症，并有望用于消化系统内分泌肿瘤的治疗。
在国内，肝硬化发病率超过1%，每年发生食管曲张静脉破裂引起的大出血的患者，加上消化性溃疡引起的上消化道大出血患者，总数超过300万，因此醋酸奥曲肽的市场较大。我们将致力于降低醋酸奥曲肽的生产成本，大大降低患者的治疗成本。
目前文献报导的醋酸奥曲肽的制备方法一般需使用苏氨醇或Fmoc-苏氨醇，导致生产成本较高；在并使用氟化氢切肽、三氟醋酸进行纯化，污染环境，收率较低。因此目前的方法限制了醋酸奥曲肽的大规模生产和使用。
不同的多肽产品由于受其自身结构的制约，在合成工艺上存在一些局限性，不能任意选择起始原料和工艺条件完成多肽合成。虽然使用Boc-保护的氨基酸可以实现某些多肽产品的合成，但是现有技术中尚没有开发出采用Boc-苏氨酸制备醋酸奥曲肽的工艺技术，而Boc-苏氨酸相较Fmoc-苏氨醇，价格低廉，使用Boc-苏氨酸来合成醋酸奥曲肽，将极大降低醋酸奥曲肽的生产成本，有益于醋酸奥曲肽的大规模生产和使用。

发明内容
本发明的目的是提供一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，大幅度减少三废和降低原料成本，提高反应收率，以克服现有技术存在的上述缺陷。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，包括如下步骤：以氯甲基树脂为起始原料，将Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，依次为：Boc-Cys(Trt)-OH、Boc-Thr(tBu)-OH、Boc-Lys(Fmoc)-OH、Boc-D-Trp-OH、Boc-Phe-OH、Boc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-D-Phe-OH，获得保护八肽树脂，其间依次用HCl/异丙醇脱去Boc-保护基团，用DIC、HOBT为缩合剂进行接肽反应，用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽，在pH7.8-9的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品，再采用独特的流动相经C18柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。
依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次脱去Boc-保护基团的方法包括如下步骤：
    （1）Boc-Thr(tBu)-OCs的制备
Boc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇与水中，另取碳酸铯加水溶解至澄清，搅拌下加入上述Boc-Thr(tBu)-OH溶液，溶液pH7.5，减压浓缩至干，得糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs ；
Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔数为树脂的1~3倍；
碳酸铯的摩尔数为树脂的1~5倍；
    （2）Boc-Thr(tBu)-O-树脂的制备
    取氯甲基树脂，用DMF浸泡使树脂溶胀，加上述糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs，DMF，反应；
    过滤，树脂用DMF洗涤二次，纯化水洗涤，无水乙醇洗涤，减压干燥，得Boc-Thr(tBu)-O-树脂；
氯甲基树脂与Boc-Thr(tBu)-OCs的反应温度：40-65℃，反应时间：36-72小时；
（3）Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备：
在步骤（2）的Boc-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，再加10%三乙胺的DCM溶液（体积比）反应，抽干，DCM洗涤；
加入Boc-Cys(Trt)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（4）Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（3）的Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-Thr(tBu)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（5）Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（4）的Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-Lys(Fmoc)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（6）Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（5）的Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤二抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-D-Trp-OH、DIC，HOBT，DMF, 将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤三次，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（7）Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（6）的Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-Phe-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（8）Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（7）的Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Boc-Cys(Trt)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（9）Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
在步骤（8）Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；
加Fmoc-D-Phe-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1 mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；
（10）Fmoc-D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr-Cys(SH)-Thr-O-树脂的制备
在步骤（9）的Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/L HCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干；
    再用无水甲醇洗涤十次，抽干后，放入真空干燥器中干燥，得八肽树脂；
脱除Boc-基采用2mol/L HCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L~9 mol/L；2mol/L HCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍。
用钯/碳,氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽的方法包括如下步骤：
D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys(SH)-Thr-ol的制备
取所述八肽树脂加无水甲醇，5%钯/碳，通入氢气，密闭，搅拌，过滤，除去碳粉和树脂，无水甲醇洗涤，减压浓缩至油状物，加入六氢吡啶的无水甲醇溶液，反应，减压浓缩至油状物，DMF溶解，加无水乙醚沉淀，过滤收集沉淀得还原型奥曲肽粗品；
5%钯/碳用量为树脂的1/10至5/10（质量比）。
在pH7.8-9的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品的方法具体实现为：将还原型奥曲肽粗品溶于水，在搅拌下滴加2mol/L氨水至pH7.8-9，室温通空气24-36小时使二硫键成环, 加冰醋酸，加活性碳，过滤。
   粗品经C18柱分离纯化的方法包括如下步骤：滤液分批经C18柱纯化，流动相：0.25-0.5mol/L醋酸钾 :乙腈=7-8 :3-2；流速为：600-1000ml/min；检测波长为：280nm；样品峰合并后去盐、冻干，得醋酸奥曲肽成品。
有益效果
与现有技术相比，本发明采用氯甲基树脂为固相载体，将第一个氨基酸Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐，以DIC,HOBT为缩合剂，逐个接上保护的氨基酸，最后一个肽链采用Fmoc-D-Phe-OH,获得保护八肽树脂，不采用苏氨醇、Fmoc-苏氨醇，生产成本极低，具备规模化生产能力，工艺稳定，原辅料来源方便，生产周期短，接肽收率高，质量稳定，用HCl/异丙醇脱去Boc-保护基团，用钯/碳加氢还原，同时将肽链切落切肽，条件温和，避免使用氟化氢，三氟乙酸等剧毒试剂，三废污染少。

具体实施方式
实施例1
实施例和前述过程中所采用的原料列表如下：
No品   名生产厂商1氯甲基树脂（Cl-CH2-C6H4-Resin）天津南开和成科技有限公司2Boc-Thr(tBu)-OH吉尔生化（上海）公司3Boc-Cys(Trt)-OH吉尔生化（上海）公司4Boc-Thr(tBu)-OH吉尔生化（上海）公司5Boc-Lys(Fmoc)-OH吉尔生化（上海）公司6Boc-D-Trp-OH吉尔生化（上海）公司7Boc-Phe-OH吉尔生化（上海）公司8Fmoc-D-Phe-OH吉尔生化（上海）公司9HOBt (N-Hydroxybenzotriazole)吉尔生化（上海）公司10DIC（N,N'-二异丙基碳二亚胺）苏州昊帆生物科技有限公司11DMF （N,N-二甲基甲酰胺）国药集团12无水甲醇国药集团13盐酸国药集团14异丙醇国药集团15DCM（二氯甲烷）国药集团16乙二硫醇国药集团17三乙胺国药集团
醋酸奥曲肽的制备方法，包括如下步骤：
一、合成肽链
    （1）Boc-Thr(tBu)-OCs的制备
Boc-Thr(tBu)-OH（FW：275.3，110mmol)30.3g，溶于250ml甲醇与250ml水中，pH2.5。另取24g碳酸铯（147mmol）加水100ml溶解至澄清，搅拌下缓缓加入上述Boc-Thr(tBu)-OH溶液，有二氧化碳气体产生。溶液pH7.5。40-50℃水溶减压浓缩至干，得糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs 53.5g。
    （2）Boc-Thr(tBu)-O-树脂的制备
    取氯甲基树脂100克（100-200目，1.0mmol/g, 100mmol)，用DMF浸泡30分钟，使树脂充分溶胀，加上述107g糖浆状残留物，及700ml DMF，50-55℃反应48小时。
    过滤，树脂用DMF洗涤二次，纯化水洗涤20次，无水乙醇洗涤6次。50-55℃减压干燥，得125gBoc-Thr(tBu)-O-树脂。
（3）Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
加入350ml 2mol/L HCl/异丙醇溶液与350ml DCM，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加700ml的10%三乙胺的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加入Boc-Cys(Trt)-OH（MW:463.6, 200mmol）92.7g、DIC（MW:126.2, 200mmol） 25.2g, HOBT （MW:153，200mmol）30.6g，DMF 600ml, 将混合物25℃反应3小时。抽干。DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干。
（4）Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
加入2mol/L HCl/异丙醇溶液350ml与DCM 350ml，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液，25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加55.1g（FW：275.3, 200mmol）Boc-Thr(tBu)-OH、DIC（MW:126.2, 200mmol）25.2g, HOBT（MW:153,200mmol）30.6g，DMF600ml, 将混合物25℃反应 3小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干。
（5）Fmoc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
加入2mol/L HCl/异丙醇溶液350ml与DCM 350ml，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加93.7g（FW：468.6, 200mmol）Boc-Lys(Fmoc)-OH、DIC（MW:126.2, 200mmol） 25.2g, HOBT（MW:153，200mmol）30.6g，600mlDMF, 将混合物25℃反应 l小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干。
（6）Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
加入2mol/L HCl/异丙醇溶液350ml与DCM 350ml，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加60.9g（FW：304.4，200mmol）Boc-D-Trp-OH、DIC（MW:126.2, 200mmol） 25.2g，HOBT （MW:153,200mmol）30.6g，600mlDMF, 将混合物25℃反应 l小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干。
（7）Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-脂的制备
加入2mol/L HCl/异丙醇 315ml与DCM 315ml与70ml乙二硫醇的混合溶液，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加53.1g（FW:265.3，200mmol） Boc-Phe-OH、DIC（MW:126.2，200mmol） 25.2g ，HOBT （MW:153，200mmol）30.6g，600mlDMF, 将混合物25℃反应 l小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干。
（8）Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
加入2mol/L HCl/异丙醇 315ml与DCM 315ml与70ml乙二硫醇的混合溶液，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加92.7g（FW：463.6, 200mmol) Boc-Cys(Trt)-OH、DIC（MW:126.2, 200mmol）25.2g，HOBT（MW:153，200mmol）30.6g，600mlDMF，将混合物25℃反应 l小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干。
（9）Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备
加入2mol/L HCl/异丙醇 315ml与DCM 315ml与70ml乙二硫醇的混合溶液，25℃反应30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液25℃反应5分钟，抽干，DCM洗涤7次。
加53.1g（FW:265.3，200mmol）Fmoc-D-Phe-OH、DIC（MW:126.2, 200mmol）25.2g，HOBT（MW:153,200mmol）30.6g，600ml DMF，将混合物25℃反应 l小时。抽干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干。
（10）Fmoc-D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr-Cys(SH)-Thr-O-树脂的制备
加入2mol/L HCl/异丙醇 630ml与70ml乙二硫醇的混合溶液，25℃搅拌30分钟。抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干。
    再用无水甲醇洗涤十次。抽干后，放入真空干燥器中干燥，称重，得八肽树脂约190g  （MW=931，84mmol），接肽总收率约为84%。
（11）D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys(SH)-Thr-ol的制备
取190g八肽树脂加无水甲醇，加10克5%钯/碳，通入氢气，密闭，25℃搅拌4小时以上。过滤，除去碳粉和树脂，无水甲醇洗涤三次，减压浓缩至油状物。加入300毫升20%的六氢吡啶的无水甲醇溶液（体积比），25℃反应30分钟。减压浓缩至油状物。DMF溶解，加无水乙醚沉淀，过滤收集沉淀得90g还原型奥曲肽粗品。
二、二硫键成环
将90g还原型奥曲肽粗品溶于90L水，在搅拌下慢慢滴加2M 氨水至pH7.8, 室温通空气使二硫键成环约24-36小时, 加冰醋酸调至pH5.5，加活性碳搅拌30分钟，过滤。
三、分离纯化
滤液分批经C18柱纯化，流动相：0.25mol/L醋酸钾 :乙腈（7.2 :2.8）；流速为：800ml/min；检测波长为：280nm；样品峰合并后，去盐、冻干，约得35g白色疏松块状物为醋酸奥曲肽成品（MW: 1019，343mmol）; 收率34.3% （以树脂的mmol数计）。用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液。
其中，2mol/L HCl/异丙醇（氯化氢/异丙醇）溶液制备方法如下：将工业用的浓硫酸滴入食用粗盐（已烘干）中，产生HCl气体，通过二个硫酸洗气瓶，通至盛有1000毫升（约重1050克）异丙醇吸收瓶中（先称好毛重和净重），待其重量增加至1123克左右即停止，装入试剂瓶内，盖紧内塞放入冰箱。