一种棕色蘑菇菜园土发酵培养基的制作方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103159533 A (43)申请公布日 2013.06.19 CN 103159533 A *CN103159533A* (21)申请号 201110408700.0 (22)申请日 2011.12.09 C05G 3/00(2006.01) A01G 1/04(2006.01) (71)申请人 天津市金三农农业科技开发有限公 司 地址 300385 天津市西青区大寺镇青泊洼农 场西侧 (72)发明人 班立桐 黄亮 王玉 杨丽维 孙茜 周阳 朱枷华 (74)专利代理机构 天津市杰盈专利代理有限公 司 12207 代理人 朱红星 (54) 发明名称 一种棕色蘑菇菜园。

2、土发酵培养基的制作方法 (57) 摘要 本发明提供了用于棕色蘑菇液体菌种的培养 基质的制作方法,具体步骤为 ： 培养基质 ： 菜园土 发酵培养基质为 (g/L) ： 菜园土 700、 麦粒 120、 蛋 白胨4、 葡萄糖15、 七水硫酸镁1.5、 磷酸二氢钾1 ； 转速 100rpm， 装液量 75mL/250mL， 接种量 12%（w/ v） ； 在此条件下， 棕色蘑菇的菌丝量由 1.657g/L 提高到 17.028g/L ； 本发明的方法满足了人们和 市场对新菇种与食用菌新技术的需求， 如能得到 广泛应用必将产生巨大的经济效益与社会效益。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明。

3、书 8 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书8页 (10)申请公布号 CN 103159533 A CN 103159533 A *CN103159533A* 1/1 页 2 1. 一种用于棕色蘑菇液体菌种培养基质的制作方法， 其特征在于它是由菜园土发酵培 养基质 (g/L) 成分组成 ： 菜园土 700、 麦粒 120、 蛋白胨 4、 葡萄糖 15、 七水硫酸镁 1.5、 磷酸 二氢钾 1。 2. 一种采用权利要求 1 所述的培养基质培养棕色蘑菇菌丝方法， 其特征在于 ： （1） 种子液的制备， 取 5 块 0.5 cm2新鲜斜面菌种接种于种。

4、子培养基质 （50mL/250mL 三 角瓶） 中， 25， 150rpm 摇床培养 3 天 ； 其中的斜面培养基质 ： 草炭土培养基质 (g/L) ： 草炭 土 600g， 葡萄糖 20g， 麦粒 100g， 硫酸镁 1.5g， 磷酸二氢钾 1g， 蛋白胨 2g， 水 1000mL ； 种子 培养基质 （g/L） ： 马铃薯 200、 葡萄糖 20、 蛋白胨 2、 磷酸二氢钾 2、 硫酸镁 1、 VB1 0.01， 水 1000mL， pH 自然 ； （2） 液体菌种的制备， 以 10%（v/v） 接种量将种子液移入装 50mL, 发酵培养基质为 (g/ L) ： 菜园土700、 麦粒120。

5、、 蛋白胨4、 葡萄糖15、 七水硫酸镁1.5、 磷酸二氢钾1 ： 麸皮 120， 葡 萄糖 15， 蛋白胨 2 的 250mL 三角瓶中， 25， 150rpm 培养 7 天， 即得棕色蘑菇液体菌种 ； （3） 发酵条件 ： 再以 12%（w/v） 的接种量转到发酵罐培养， 发酵罐容积 7L， 装培养液 4 L， 培养温度 25， 在通风量为 100 L/h， 搅拌转速为 200 r/min， pH 值不调节， 发酵 5 天结 束， 进行测定 ； 其中的发酵培养基质为(g/L) ： 菜园土700、 麦粒120、 蛋白胨4、 葡萄糖15、 七 水硫酸镁 1.5、 磷酸二氢钾 1 ： 麸皮 12。

6、0， 葡萄糖 15， 蛋白胨 2 ； （4） 称重 ： 采用细胞干重法 ： 取 50mL 发酵培养液， 3000r/min 离心 20 min， 收集菌丝球， 并用蒸馏水洗涤 3 次后， 将菌丝体置于 80下烘至恒重， 称量， 测定菌丝干重。 权 利 要 求 书 CN 103159533 A 2 1/8 页 3 一种棕色蘑菇菜园土发酵培养基的制作方法 技术领域 0001 本发明提供了涉及棕色蘑菇的栽培方法， 更具体的说是一种用于棕色蘑菇液体菌 种培养的培养基质及其栽培方法。 背景技术 0002 棕色蘑菇 （Agaricus brunnescens Peck） ， 是蘑菇中的珍稀类品种， 属于担。

7、子菌纲 (Basidiomycotina)、 伞菌目 (Agaritales)、 蘑菇科 (Agaricaceae)、 蘑菇属 (garicus)。棕 色蘑菇俗称棕蘑， 是波希美亚种。该菌株产量高、 菇质优良、 口感鲜嫩， 其菇盖为自然棕褐 色， 菌柄白色， 肉质致密紧实。现在所有的白色双孢蘑菇品种均为棕色蘑菇的白色变种， 也 就是说棕色蘑菇是白色双孢蘑菇的野生祖先。棕色蘑菇 , 别名白蘑菇、 洋菇 , 属于担子菌 纲、 伞菌目、 蘑菇科、 蘑菇属。棕色蘑菇营养丰富、 味道鲜美 , 据报导鲜蘑菇含蛋白质 3% 4%, 脂肪 0.2%0.3%, 碳水化合物 2.4%3.8%, 可消化率达 70%。

8、90%, 享有 “植物肉” 之 称。蘑菇的氨基质酸组成较全面 , 尤其富含人体必需的赖氨酸等。棕色蘑菇还含有丰富的 铁、 钾、 钙等矿质元素。还含有硫氨素、 核黄素、 烟酸、 抗坏血酸等多种维生素及酶类。由于 含有较高的不饱和脂肪酸,故多食用蘑菇对降低血脂有明显作用,用蘑菇罐头加工预煮液 制成的药物对医治迁延性肝炎、 慢性肝炎、 肝肿大、 早期肝硬化等均有显著疗效。随着人们 追求天然、 返璞归直潮流的到来， 棕色蘑菇在市场上受到广大消费者的追捧， 是一个很好的 商业品种。 0003 目前， 棕色蘑菇菌种培养主要采用固体培养方法， 制作周期长， 加上其制作时间正 值高温季节， 导致生产成本上升。。

9、而液体培养是采用液体基质质发酵来进行发酵培养菌种 的生产， 其原理是 ： 在发酵罐或三角瓶中， 采用液体培养基质， 通入无菌空气加以搅拌或振 荡， 增加培养基质中的溶氧含量， 提供菌丝体呼吸代谢所需要的氧气， 并控制适宜的外界条 件， 使得菌体在液体深处繁殖发育， 获得大量的菌丝体或代谢产物。 0004 “液体 - 麦粒菌种” 是以液体菌种为种源制作的麦粒菌种。一般的麦粒菌种要用麦 粒培养物做种源， 制种所需时间较长。 采用现代发酵技术制备液体菌种， 能使蘑菇菌丝体细 胞迅速分裂， 因而制种时间比麦粒菌种要快很多。但是液体菌种不适合直接接种在大批量 的堆肥培养料上， 因为保存和运输均不方便。 。

10、为扬其长而避其短， 采用液体菌种作为种源生 产麦粒菌种， 兼具液体菌种和麦粒菌种的优点， 能缩短制种时间， 菌龄一致， 提高了菌种质 量， 且生产成本低， 接种简便， 放大容易。 发明内容 0005 本发明公开一种用于棕色蘑菇液体菌种培养的培养基质， 其特征在于它是由菜园 土发酵培养基质 (g/L) 成分组成 ： 菜园土 700、 麦粒 120、 蛋白胨 4、 葡萄糖 15、 七水硫酸镁 1.5、 磷酸二氢钾 1。 0006 本发明所述的培养基质培养棕色蘑菇菌丝方法， 其特征在于 ： （1） 种子液的制备， 取 5 块 0.5 cm2新鲜斜面菌种接种于种子培养基质 （50mL/250mL 三 。

11、说 明 书 CN 103159533 A 3 2/8 页 4 角瓶） 中， 25， 150rpm 摇床培养 3 天 ； 其中的斜面培养基质 ： 草炭土培养基质 (g/L) ： 草炭 土 600g， 葡萄糖 20g， 麦粒 100g， 硫酸镁 1.5g， 磷酸二氢钾 1g， 蛋白胨 2g， 水 1000mL ； 种子 培养基质 （g/L） ： 马铃薯 200、 葡萄糖 20、 蛋白胨 2、 磷酸二氢钾 2、 硫酸镁 1、 VB1 0.01， 水 1000mL， pH 自然 ； （2） 液体菌种的制备， 以 10%（v/v） 接种量将种子液移入装 50mL, 发酵培养基质为 (g/ L) ： 菜园。

12、土700、 麦粒120、 蛋白胨4、 葡萄糖15、 七水硫酸镁1.5、 磷酸二氢钾1 ： 麸皮 120， 葡 萄糖 15， 蛋白胨 2 的 250mL 三角瓶中， 25， 150rpm 培养 7 天， 即得棕色蘑菇液体菌种 ； （3） 发酵条件 ： 再以 12%（w/v） 的接种量转到发酵罐培养， 发酵罐容积 7L， 装培养液 4 L， 培养温度 25， 在通风量为 100 L/h， 搅拌转速为 200 r/min， pH 值不调节， 发酵 5 天结 束， 进行测定 ； 其中的发酵培养基质为(g/L) ： 菜园土700、 麦粒120、 蛋白胨4、 葡萄糖15、 七 水硫酸镁 1.5、 磷酸二氢。

13、钾 1 ： 麸皮 120， 葡萄糖 15， 蛋白胨 2 ； （4） 称重 ： 采用细胞干重法 ： 取 50mL 发酵培养液， 3000r/min 离心 20 min， 收集菌丝球， 并用蒸馏水洗涤 3 次后， 将菌丝体置于 80下烘至恒重， 称量， 测定菌丝干重 本发明选用的棕色蘑菇 MC441 菌株主要优特点是 ： 1. 该菌株菇盖表面为自然棕褐色， 菇柄、 菌肉白色 ； 菇质优， 子实体圆整， 菇盖厚、 结 实， 不凹顶 ； 味道鲜美， 口感鲜嫩， 保鲜期长。菌丝生长速度快。产量高， 在相同条件下， 比白 色蘑菇品种提早 2-3 天出菇， 菇潮整齐， 产量达 9-10 公斤 / 平方。 2。

14、. 出菇温度范围 广， 尤其是低温结实能力比常规白色蘑菇强， 在5-8下， 产量比对照2796高70。 栽培 技术简易、 栽培原料来源广。其培养料配方以稻、 麦草为主要原料， 培养料及堆制发酵方法 与常规蘑菇相同。 0007 为了确定最佳的培养基质， 本发明进行了大量的实验性研究工作， 具体如下 ： A、 菜园土培养基质中长势最好， 菌丝干重达到 1.657g/L， 其次为麸皮培养基质， 菌丝干 重为 1.543 g/L， 其余配方中菌丝生长均较少。 0008 B、 棕色蘑菇在菜园土培养基质中长势最好， 菌丝干重达到 1.657g/L， 其次为麸皮 培养基质， 菌丝干重为 1.543 g/L，。

15、 其余配方中菌丝生长均较少。 0009 C、 通过摇瓶发酵培养基质的优化， 使棕色蘑菇的菌丝含量由 1.657g/L 提高到 2.693g/L。 0010 D、 棕色蘑菇生长最适合的生长条件为转速 100rpm， 装液量 75mL/250mL， 接种量 12%。通过极差比较， 各因素对棕色蘑菇菌丝产量影响是 ： 装液量接种量转速。 0011 E、 本发明通过两次交试验设计， 确定出最适发酵培养基质为 (g/L) ： 菜园土 700、 麦粒 120、 蛋白胨 4、 葡萄糖 15、 七水硫酸镁 1.5、 磷酸二氢钾 1， 最适发酵条件为 ： 转速 100rpm， 装液量 75mL/250mL， 接。

16、种量 12%（w/v） 。 0012 F、 以最优化的麸皮培养基质为发酵培养基质进行发酵罐验证试验， 发酵罐容积 7 L， 装培养液 4L， 培养温度 25， 在通风量为 100L/h， 搅拌转速为 200 r/min， pH 值不调节， 发酵 5 天结束， 测定菌丝干重达到 34.486g/L。 0013 I、 本发明对筛选出的基质础发酵培养基质菜园土培养基质， 采用正交试验设计 进行了培养基质配方和培养条件的优化， 菌丝干重均有较大幅度提高。 0014 确定出最适菜园土发酵培养基质为(g/L) ： 菜园土700、 麦粒120、 蛋白胨4、 葡萄糖 15、 七水硫酸镁1.5、 磷酸二氢钾1，。

17、 最适发酵条件为 ： 转速100rpm， 装液量75mL/250mL， 接种 说 明 书 CN 103159533 A 4 3/8 页 5 量 12%（w/v） 。在此条件下， 棕色蘑菇的菌丝量由 1.657 g/L 提高到 17.028 g/L。酵罐验 证试验中菌丝干重达到 20.146g/L。 具体实施方式 0015 下面结合实施例说明本发明， 这里所述实施例的方案， 不限制本发明， 本领域的专 业人员按照本发明的精神可以对其进行改进和变化， 所述的这些改进和变化都应视为在本 发明的范围内， 本发明的范围和实质由权利要求来限定。其中棕色蘑菇 MC441 引自福建省 蘑菇菌种对外有售。 00。

18、16 实施例 1 1. 试验材料与方法 供试菌株 ： 棕色蘑菇 MC441 引自福建省蘑菇菌种研究推广站， 对外有售。 0017 供试培养基质 ： （1） 斜面培养基质 ： 草炭土培养基质 (g/L) ： 草炭土 600g， 葡萄糖 20g， 麦粒 100g， 硫酸 镁 1.5g， 磷酸二氢钾 1g， 蛋白胨 2g， 水 1000mL。 0018 （2） 种子培养基质 （g/L） ： 马铃薯 200、 葡萄糖 20、 蛋白胨 2、 磷酸二氢钾 2、 硫酸镁 1、 VB1 0.01， 水 1000mL， pH 自然。 0019 （3） 基质础发酵培养基质 ： APDA 培养基质 ： 马铃薯 20。

19、0 g， 葡萄糖 20 g， 水 1 000 mL。 0020 B麦粒培养基质 ： 马铃薯 100 g， 七水硫酸镁 1.5 g， 磷酸二氢钾 1 g， 蛋白胨 2 g， 水 1 000 mL。 0021 C麦粒培养基质 ： 麦粒 200 g， 七水硫酸镁 1.5 g， 磷酸二氢钾 1 g， 蛋白胨 2 g， 水 1 000 mL。 0022 D 菜园土培养基质 ： 菜园土 600 g, 麦粒 100 g, 七水硫酸镁 1.5 g, 磷酸二氢 钾 1 g, 蛋白胨 2 g, 葡萄糖 20 g， 七水硫酸镁 1.5 g。 0023 E 草炭土培养基质 ： 草炭土 600 g, 麦粒 100 g,。

20、 七水硫酸镁 1.5 g, 磷酸二氢 钾 1 g, 蛋白胨 2 g, 葡萄糖 20 g， 七水硫酸镁 1.5 g。 0024 F玉米粉培养基质 ： 玉米粉 24 g， 葡萄糖 20 g， 七水硫酸镁 1 g， 磷酸二氢钾 1 g， 蛋白胨 1 g， 水 1 000 mL。 0025 G玉米粉培养基质 ： 玉米粉 40 g， 葡萄糖 20 g， 七水硫酸镁 1 g， 磷酸二氢钾 1 g， 蛋白胨 1 g， 水 1 000 mL。 0026 H 马铃薯玉米粉培养基质 ： 马铃薯 200 g， 玉米粉 20 g， 七水硫酸镁 1.5 g， 磷酸 二氢钾 1.5 g， 蛋白胨 1 g， 葡萄糖 20 。

21、g， 水 1 000 mL。 0027 液体菌种的制备 （1） 种子液的制备， 取 5 块 0.5 cm2新鲜斜面菌种接种于种子培养基质 （50mL/250mL 三 角瓶） 中， 25， 150rpm 摇床培养 3 天。 0028 （2） 液体菌种的制备， 以 10%（v/v） 接种量将种子液移入装 50mL 发酵培养基质的 250mL 三角瓶中， 25， 150rpm 培养 7 天， 即得棕色蘑菇液体菌种。发酵培养基质成分根据 试验方案逐次改变。 0029 菌丝干重的测量 说 明 书 CN 103159533 A 5 4/8 页 6 采用细胞干重法 ： 取50 mL发酵培养液， 3000r/。

22、min离心20 min， 收集菌丝球， 并用蒸馏 水洗涤 3 次后， 将菌丝体置于 80下烘至恒重， 称量。 0030 菜园土培养基质的正交试验设计 以菜园土、 麦粒、 蛋白胨和葡萄糖为试验因素， 设计 L16 (45 ) 正交试验， 以菌体干重为 指标， 每组 2 个重复 表 1 菜园土培养基质的正交试验因素及编码 （g/L） 菜园土培养条件的正交试验设计 以转速、 装液量和蛋白胨为试验因素， 设计L9 (34 )正交试验， 以菌丝体干重为指标， 每 组 2 个重复。 0031 表 2 菜园土培养基质培养条件的正交试验因素及编码 A: 转速 （rpm）B: 装液量 （mL/250mL） C:。

23、 接种量 (%) 1100256 21505010 32007512 3. 试验结果与分析 基质础发酵培养基质的筛选 对 8 种基质础发酵培养基质进行棕色蘑菇菌丝培养， 所得菌丝干重如下表所示。棕色 蘑菇在菜园土培养基质中长势最好， 菌丝干重达到 1.657g/L， 其余配方中菌丝生长均较少。 0032 表 3 初始发酵培养基质菌丝干重 （g/L） 培养基质种类菌丝干重 A ： PDA 培养基质0.794 B ： 麦粒培养基质1.005 C ： 麦粒培养基质0.912 D ： 菜园土培养基质1.657 E ： 草炭土培养基质1.088 F ： 玉米粉培养基质1.138 G ： 玉米粉培养基质1。

24、.070 H ： 马铃薯玉米粉培养基质1.080 由于在菜园土培养基质配置过程中， 先将菜园土用沸水溶解其中有效物质， 然后过滤 后加入到培养基质内， 会有少量土质残存于培养基质中， 发酵结束后的菌丝球较之其他配 方有土的颜色， 判断有土质进入到菌丝球内导致菌丝干重偏大。此外， 由于少量土质的存 在， 在今后的发酵罐放大培养时有可能会对发酵过程有不利影响。 0033 菜园土培养基质的正交试验 说 明 书 CN 103159533 A 6 5/8 页 7 培养基质配比的优化 根据基质础发酵培养基质筛选试验的结果， 对菜园土培养基质的主要成分进行 L16(45) 正交设计， 以确定最适发酵培养基质。

25、。 0034 表 4 最适培养基质正交试验结果 注 ： 为各因素同一水平试验指标的平均数 Rj为各因素的极差 表 5 最适培养基质正交试验方差分析表 因素偏差平方和自由度F 值F0.05显著性 A ： 菜园土0.00432.0009.280 B ： 麦粒0.00432.000 C ： 蛋白胨0.022311.000 * D ： 葡萄糖0.00331.500 由表 5 的极差分析可知， 最优水平组合为 A4B3C4D1， 即 (g/L) ： 菜园土 700、 麦粒 120、 蛋白胨 4、 葡萄糖 15、 七水硫酸镁 1.5、 磷酸二氢钾 1。通过极差比较， 各因素对棕色蘑菇菌 说 明 书 CN 。

26、103159533 A 7 6/8 页 8 丝产量影响是 ： 蛋白胨麦粒菜园土葡萄糖。 0035 对试验结果进行方差分析， 结果表明 ： 在 0.05 的显著水平下， 蛋白胨对棕色蘑菇 菌丝产量有显著影响， 其余因素均不显著。 0036 通过以上的分析， 得出最优水平组合在正交试验中并没有包括， 为此， 进行验证试 验。结果表明 ： 通过摇瓶发酵培养基质的优化， 使棕色蘑菇的菌丝含量由 1.657g/L 提高到 2.693g/L。 0037 最适培养条件的优化 以最优化的配方为培养基质对培养条件进行正交试验设计， 结果如下表所示。 0038 表 6 最适培养条件的正交试验结果 注 ： 为各因素。

27、同一水平试验指标的平均数 Rj为各因素的极差 表 7 最适培养条件的正交试验方差分析表 因素偏差平方和自由度 F 值F0.05显著性 A: 转速 （rpm）0.11621.4159.000 B ： 装液量 （mL/250mL）1.342216.366 * C ： 接种量 （%）0.11621.415 误差0.082 由 表 7 的 极 差 分 析 可 知， 最 优 水 平 组 合 为 A1B3C3， 即 ： 转 速 100rpm， 装 液 量 75mL/250mL， 接种量 12%。通过极差比较， 各因素对棕色蘑菇菌丝产量影响是 ： 装液量接 种量转速。 0039 对试验结果进行方差分析， 结。

28、果表明， 在 0.05 的显著水平下， 各培养条件对棕色 蘑菇菌丝产量均无显著影响， 在 0.01 的显著水平下， 装液量对棕色蘑菇菌丝产量有显著影 响。 0040 由以上分析得出最优水平组合在正交试验中有包括， 确为菌丝产量最高的组合。 进行验证试验， 结果表明， 通过摇瓶发酵培养基质的优化， 使棕色蘑菇的菌丝含量为 17.028 g/L。 说 明 书 CN 103159533 A 8 7/8 页 9 0041 发酵罐验证试验 本试验通过两次正交试验设计， 确定出最适发酵培养基质为 (g/L) ： 菜园土 700、 麦粒 120、 蛋白胨 4、 葡萄糖 15、 七水硫酸镁 1.5、 磷酸二氢。

29、钾 1， 最适发酵条件为 ： 转速 100rpm， 装 液量 75mL/250mL， 接种量 12% （w/v） 。在此条件下， 棕色蘑菇的菌丝量由 1.657 g/L 提高到 17.028 g/L。以最优化的菜园土培养基质为发酵培养基质进行发酵罐验证试验， 发酵罐容 积 7 L， 装培养液 4 L， 培养温度 25， 在通风量为 100 L/h， 搅拌转速为 200 r/min， pH 值 不调节， 发酵 5 天结束， 测定菌丝干重达到 20.146g/L。 0042 6. 结论 本试验对筛选出的较好的基质础发酵培养基质菜园土培养基质， 采用正交试验设计 进行了培养基质配方和培养条件的优化，。

30、 菌丝干重均有较大幅度提高。 0043 确定出最适菜园土发酵培养基质为(g/L) ： 菜园土700、 麦粒120、 蛋白胨4、 葡萄糖 15、 七水硫酸镁1.5、 磷酸二氢钾1， 最适发酵条件为 ： 转速100rpm， 装液量75mL/250mL， 接种 量 12%（w/v） 。在此条件下， 棕色蘑菇的菌丝量由 1.657 g/L 提高到 17.028 g/L。酵罐验 证试验中菌丝干重达到 20.146g/L。 0044 实施例 2 （1） 种子液的制备， 取 5 块 0.5 cm2新鲜斜面菌种接种于种子培养基质 （50mL/250mL 三 角瓶） 中， 25， 150rpm 摇床培养 3 天。

31、 ； 其中的斜面培养基质 ： 草炭土培养基质 (g/L) ： 草炭 土 600g， 葡萄糖 20g， 麦粒 100g， 硫酸镁 1.5g， 磷酸二氢钾 1g， 蛋白胨 2g， 水 1000mL ； 种子 培养基质 （g/L） ： 马铃薯 200、 葡萄糖 20、 蛋白胨 2、 磷酸二氢钾 2、 硫酸镁 1、 VB1 0.01， 水 1000mL， pH 自然 ； （2） 液体菌种的制备， 以 10%（v/v） 接种量将种子液移入装 50mL, 发酵培养基质为 (g/ L) ： 菜园土700、 麦粒120、 蛋白胨4、 葡萄糖15、 七水硫酸镁1.5、 磷酸二氢钾1 ： 麸皮 120， 葡 萄糖。

32、 15， 蛋白胨 2 的 250mL 三角瓶中， 25， 150rpm 培养 7 天， 即得棕色蘑菇液体菌种 ； （3） 发酵条件 ： 再以 12%（w/v） 的接种量转到发酵罐培养， 发酵罐容积 7L， 装培养液 4 L， 培养温度 25， 在通风量为 100 L/h， 搅拌转速为 200 r/min， pH 值不调节， 发酵 5 天结 束， 进行测定 ； 其中的发酵培养基质为(g/L) ： 菜园土700、 麦粒120、 蛋白胨4、 葡萄糖15、 七 水硫酸镁 1.5、 磷酸二氢钾 1 ： 麸皮 120， 葡萄糖 15， 蛋白胨 2 ； （4） 称重 ： 采用细胞干重法 ： 取 50mL 发。

33、酵培养液， 3000r/min 离心 20 min， 收集菌丝球， 并用蒸馏水洗涤 3 次后， 将菌丝体置于 80下烘至恒重， 称量， 测定菌丝干重， 酵罐验证试 验中菌丝干重达到 20.146g/L。 0045 实施例 3 （1） 种子液的制备， 取 5 块 0.5 cm2新鲜斜面菌种接种于种子培养基质 （50mL/250mL 三 角瓶） 中， 25， 150rpm 摇床培养 3 天 ； 其中的斜面培养基质 ： 草炭土培养基质 (g/L) ： 草炭 土 600g， 葡萄糖 20g， 麦粒 100g， 硫酸镁 1.5g， 磷酸二氢钾 1g， 蛋白胨 2g， 水 1000mL ； 种子 培养基质。

34、 （g/L） ： 马铃薯 200、 葡萄糖 20、 蛋白胨 2、 磷酸二氢钾 2、 硫酸镁 1、 VB1 0.01， 水 1000mL， pH 自然 ； （2） 液体菌种的制备， 以 10%（v/v） 接种量将种子液移入装 50mL, 发酵培养基质为 (g/ L) ： 菜园土700、 麦粒120、 蛋白胨4、 葡萄糖15、 七水硫酸镁1.5、 磷酸二氢钾1 ： 麸皮 120， 葡 萄糖 15， 蛋白胨 2 的 250mL 三角瓶中， 25， 150rpm 培养 7 天， 即得棕色蘑菇液体菌种 ； 说 明 书 CN 103159533 A 9 8/8 页 10 （3） 发酵条件 ： 再以 12%。

35、（w/v） 的接种量转到发酵罐培养， 发酵罐容积 7L， 装培养液 4 L， 培养温度 25， 在通风量为 100 L/h， 搅拌转速为 200 r/min， pH 值不调节， 发酵 5 天结 束， 进行测定 ； 其中的发酵培养基质为(g/L) ： 菜园土700、 麦粒120、 蛋白胨4、 葡萄糖15、 七 水硫酸镁 1.5、 磷酸二氢钾 1 ： 麸皮 120， 葡萄糖 15， 蛋白胨 2 ； （4） 称重 ： 采用细胞干重法 ： 取 50mL 发酵培养液， 3000r/min 离心 20 min， 收集菌丝球， 并用蒸馏水洗涤 3 次后， 将菌丝体置于 80下烘至恒重， 称量， 测定菌丝干重。棕色蘑菇的 菌丝量由 1.543 g/L 提高到 32.043g/L。发酵罐验证试验中菌丝干重达到 38.486g/L。 说 明 书 CN 103159533 A 10 。