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1、(10)申请公布号 CN 103156189 A (43)申请公布日 2013.06.19 CN 103156189 A *CN103156189A* (21)申请号 201310063766.X (22)申请日 2013.02.28 A23L 1/29(2006.01) C12N 11/10(2006.01) C12N 11/04(2006.01) (71)申请人 东北林业大学 地址 150040 黑龙江省哈尔滨市香坊区和兴 路 26 号 申请人 付玉杰 (72)发明人 付玉杰 罗猛 金爽 王微 牟璠松 魏作富 顾成波 管悦 马卫东 王鹏 (54) 发明名称 应用固定化纳豆菌发酵的木豆种子制。
2、备纳木 豆产品的制剂方法 (57) 摘要 本发明涉及应用固定化纳豆菌发酵的木豆种 子制备纳木豆产品的制剂方法， 并公开了其具体 操作步骤， 采用海藻酸钙凝胶包埋法固定化纳豆 菌发酵木豆种子制备成富含纳豆激酶的发酵液和 发酵木豆种子粉末， 分别加入不同的配料和赋形 剂后制成不同剂型， 液体剂型包括注射剂、 合剂、 溶液剂、 芳香水剂、 酊剂、 酏剂、 胶体溶液剂、 胶浆 剂、 混悬剂和乳浊剂 ； 固体剂型包括片剂、 冲剂、 袋泡剂、 口服液剂、 胶囊剂、 滴丸剂和丸剂， 即为相 应的产品。本发明的生产工艺稳定、 可行， 环保节 能， 所提供的产品不但可调配成不同风味的系列 溶液剂和速溶冲剂， 而。
3、且具有较好的溶血栓、 降脂 减肥功效， 口感良好， 香甜适中， 营养丰富， 安全无 污染， 具有广泛的市场前景和应用价值。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 (10)申请公布号 CN 103156189 A CN 103156189 A *CN103156189A* 1/1 页 2 1. 本发明涉及应用固定化纳豆菌发酵的木豆种子制备纳木豆产品的制剂方法， 其特征 在于制备出的发酵液和发酵豆粉加入不同的配料和赋形剂后可制成不同剂型。 2. 按照权利要求 1 所。
4、述的应用固定化纳豆菌发酵的木豆种子制备纳木豆产品的制剂 方法， 其特征在于所述的配料包括食用调味香精、 安赛蜜、 食用盐、 山梨醇、 麦芽糊精、 木糖 醇、 阿斯巴甜和山梨酸钾。 3. 按照权利要求 1 所述的应用固定化纳豆菌发酵的木豆种子制备纳木豆产品的制剂 方法， 其特征在于所述的发酵液加入不同的赋形剂后可制成注射剂、 合剂、 溶液剂、 芳香水 剂、 酊剂、 酏剂、 胶体溶液剂、 胶浆剂、 混悬剂和乳浊剂等剂型。 4. 按照权利要求 1 所述的应用固定化纳豆菌发酵的木豆种子制备纳木豆产品的制剂 方法， 其特征在于所述的发酵豆粉加入不同的赋形剂后可制成片剂、 冲剂、 袋泡剂、 口服液 剂、 。
5、胶囊剂、 滴丸剂和丸剂等剂型。 权 利 要 求 书 CN 103156189 A 2 1/3 页 3 应用固定化纳豆菌发酵的木豆种子制备纳木豆产品的制剂 方法 技术领域 0001 本发明涉及食品科学技术领域， 具体涉及应用固定化纳豆菌发酵的木豆种子制备 纳木豆产品的制剂方法。 背景技术 0002 血栓性疾病是一类严重危害人类健康和生命的疾病， 可累及全身各个器官及系 统， 具有很高的发病率、 致残率和死亡率。每年全球因血栓引起的心脏病和猝死死亡的人 数， 居致死原因首位。 随着市场上各类溶栓降脂类药物的出现， 血栓疾病却只得到了小范围 的控制， 溶栓和降脂两者不能被同时治疗， 长时间服用还会引。
6、起人体耐药性， 副作用明显。 因此市场需要一类能够同时具有溶栓和降脂功能、 安全无副作用、 经济有效的药食同源保 健功能食品的出现。 0003 旨在开发上述保健功能食品， 研究解决血栓疾病的新途径， 我们以木豆为原料， 采 用固定化技术， 制备出具有溶栓降脂功能的发酵型产品。固定化技术是指利用化学或物理 的手段将微生物自然固定或定位于限定的空间区域内， 保持其固有的催化活性， 并能反复 使用。目前， 这项技术在啤酒、 葡萄酒、 果酒等领域的文献报道已经较为多见， 在污泥、 废水 的处理方面应用较多， 其特点是固定化后的细胞能够保持细胞原有的识别、 结合和催化活 性， 同时易于分离、 可重复使用。
7、及稳定性高。 以海藻酸钠作为载体基质的固定化细胞不但具 有价廉易得、 安全无毒、 操作简单、 反应条件温和等优点， 还具有较高的传质性能与生物活 性， 是目前研究应用最广的固定化细胞之一。在此基础上， 选择木豆种子作为发酵基质， 木 豆种子中含有丰富的淀粉和蛋白质， 油脂少， 且含木豆芪酸及黄酮类化合物， 营养丰富， 适 于作为发酵产品进行开发和应用。目前， 黄豆经由纳豆菌发酵后的溶栓降脂功能已被世界 范围认可和接受， 通过固定化纳豆菌高密度快速液体发酵木豆种子， 制备成的纳豆激酶和 木豆种子发酵体系也在我们之前的研究中被证实含有更丰富的激酶和菌代谢物， 溶栓活力 更强。 0004 制备出的具。
8、有溶血栓功效的体系通过加工后可以制备成多种类型产品。 随着人们 生活习惯和饮食结构的改变和提高， 目前市场上的食品和药品通常被制成多种剂型， 以满 足广大人们对食品、 药物多样化的需求。其中， 按物质形态分类剂型包括 ： 液体制剂 （注射 剂、 合剂、 溶液剂、 芳香水剂、 酊剂、 酏剂、 胶体溶液剂、 胶浆剂、 混悬剂和乳浊剂等） 、 气体制 剂 （如气雾剂、 喷雾剂等） 、 固体制剂 （如散剂、 丸剂、 胶囊剂、 片剂、 膜剂） 和半固体制剂 （如软 膏剂、 糊剂等） 。制作以上剂型前通常需要加入一些配料， 食品中常用的添加剂有 ： 食用调 味香精、 安赛蜜、 食用盐、 山梨醇、 麦芽糊精。
9、、 木糖醇、 阿斯巴甜、 硬脂酸镁、 柠檬酸、 苹果酸、 - 环糊精、 - 环糊精、 山梨酸钾等。通过不同配料和赋形剂的加入制备成不同的产品剂 型， 使食品不但具有多样性和丰富性， 而且味道鲜美， 口感良好， 更易被人们所接受和喜爱， 具有十分广阔的开发和应用前景。 0005 综上所述， 采用固定化技术包埋纳豆菌高密度液体发酵木豆种子， 分别制备出溶 说 明 书 CN 103156189 A 3 2/3 页 4 栓活性良好的液体制剂和固体制剂， 可以有效地将固定化技术与功能保健性食品开发和生 产相结合， 为木豆的深加工利用提供了新的途径， 为有效治疗人们的血栓疾病给予了新的 方式， 可实现安全。
10、无毒、 环保节能的可持续工业化生产。 发明内容 0006 本发明的目的在于提供应用固定化纳豆菌发酵的木豆种子制备纳木豆产品的制 剂方法。 0007 本发明采用海藻酸钠 - 氯化钙凝胶微球固定化纳豆菌， 高密度快速液体发酵木豆 种子， 制备成纳豆激酶和木豆种子发酵体系， 具体的操作步骤为 ： 将木豆种子粉碎按照料液 比 10:1 15:1 加入蒸馏水浸泡一夜， 调 pH6.5 7.5， 高温高压灭菌后按接菌量 0.5 1.0%(v/v) 接入固定化菌球， 37 40 C 恒温摇床培养 48 50h， 转速 125 130r/min， 制 备成纳豆激酶和木豆种子发酵体系。 0008 本发明将培养后。
11、的发酵体系抽滤， 分离得到富含纳豆激酶的发酵液和发酵木豆种 子固体， 低温烘干固体， 并利用超微超细粉碎技术将其碎成粉末， 得到液体和固体两种初产 品。 0009 本发明对得到的富含纳豆激酶的发酵液和发酵豆粉进行调味， 发酵液中加入的配 料及比例为 ： 食用香精 (v/v)0.0010 0.0025%、 安赛蜜 0.10 0.25g/L、 木糖醇 0.85 1.25g/L、 山梨醇0.400.50g/L和山梨酸钾0.050.15g/L ； 发酵豆粉中加入的配料及比 例为 ： 阿斯巴甜 (m/m)0.10 0.15%、 木糖醇 (m/m)1.0 2.0%、 食用盐 (m/m)0.50 1.0%、。
12、 蛋白糖 (m/m)0.08 0.12% 和麦芽糊精 (m/m)18 22%。 0010 本发明通过对调味后的发酵液和发酵豆粉加入不同的赋形剂， 完成了各种产品剂 型的制备， 制备成的液体剂型有注射剂、 合剂、 溶液剂、 芳香水剂、 酊剂、 酏剂、 胶体溶液剂、 胶浆剂、 混悬剂和乳浊剂等剂型 ； 制备成的固体剂型有片剂、 冲剂、 袋泡剂、 口服液剂、 胶囊 剂、 滴丸剂和丸剂等剂型。 0011 基于上述的研究结果， 本发明证实了采用固定化纳豆菌发酵木豆种子后得到的富 含纳豆激酶的发酵液和发酵豆粉可以被制备成多种固体制剂和液体制剂， 作为功能性保健 食品被推广。 0012 本发明的优点 ： 0。
13、013 1. 本发明采用固定化技术高密度液体发酵木豆种子得到纳豆激酶与木豆种子发 酵体系， 避免了人体直接摄入纳豆菌， 菌球易于分离且可以重复使用， 提高了产品的营养价 值， 节约能源。 0014 2. 本发明以木豆种子为原料， 为木本食用作物木豆的深加工利用提供了新的途 径， 有利于缓解资源紧缺问题， 对保持水土、 恢复地力、 保护环境有重要意义。 0015 3. 发明中制备的该保健性功能食品具有安全无毒、 不产生耐药性的特点， 且在之 前的研究中被证实具有很好的溶栓活性。 0016 4. 通过该工艺过程制备出的固体制剂和液体制剂具有稳定性能良好、 活性高、 口 感适中、 味道鲜美的特点， 。
14、容易被广大消费者接受和喜爱。 具体实施方式 说 明 书 CN 103156189 A 4 3/3 页 5 0017 实例一发酵液和发酵豆粉的制备 0018 (1) 木豆种子液体培养基的制备 ： 将 30g 木豆种子适当粉碎， 称取装入锥形瓶中， 加入 300mL 蒸馏水浸泡一夜， 调培养基 pH6.5， 121 C 高温高压灭菌 40min 后， 温度恢复到 室温备用 ； 0019 (2) 固定化纳豆菌发酵木豆种子 ： 取纳豆菌菌液 3.0mL 与 6.0mL 浓度为 7.0% 的海 藻酸钠溶液充分混合， 用注射器量取混合液滴入浓度为 3.0% 的氯化钙溶液当中， 边滴边迅 速搅拌， 形成形状。
15、完好的菌球后静置 2.0h， 用蒸馏水冲洗干净得到平均直径为 5.0mm、 平均 重量为 0.025g 的菌球， 装入灭菌后的纱布袋中， 投入到木豆种子液体培养基中进行发酵。 0020 (3) 发酵液和发酵豆粉的制备 ： 将固定化菌球分离， 并对发酵好的纳豆激酶和木 豆种子体系进行抽滤， 得到富含纳豆激酶的发酵液 168.2mL 和发酵木豆种子膏体 18.4g， 将发酵的木豆种子膏体低温烘干， 采用超微超碎技术将其粉碎， 得到发酵木豆种子粉末 15.2g。 0021 实例二液体制剂溶液剂的制备 0022 取发酵液95mL进行调味， 加入的配料包括 ： 食用香精2.5L、 安赛蜜25mg、 木糖。
16、醇 100mg、 山梨醇 20mg 和山梨酸钾 15mg。再向调味后的发酵液中加入不同赋形剂， 主要有 ： 丙 二醇 ( 助溶剂 )5.0mL、 阿拉伯胶 ( 乳化剂 )4.0g 和亚硫酸钠 ( 抗氧化剂 )0.1g。加入赋形 剂后充分搅拌均匀， 即得到富含纳豆激酶的口服溶液剂 100mL。 0023 实例三固体制剂冲剂的制备 0024 取发酵豆粉 5.0g 进行调味， 加入的配料包括 ： 阿斯巴甜 7.0mg、 木糖醇 50mg、 食用 盐 25mg 和蛋白糖 4.0mg。再向调味后的发酵豆粉中加入赋形剂麦芽糊精 ( 增稠剂 )1.0g， 充分搅拌均匀， 即得到富含纳豆激酶的代餐冲剂 6.1g。 附图说明 ： 0025 图 1 ： 纳木豆冲剂 0026 图 2 ： 纳木豆口服液 说 明 书 CN 103156189 A 5 1/1 页 6 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103156189 A 6 。