2- 吡啶 -2- 基 - 吡唑 -3(2H)- 酮的衍生物、 其制备和治疗 用途 本发明涉及新的取代的二氢吡唑啉酮衍生物， 涉及它们的制备以及它们作为转录 因子 HIF 的活化剂的治疗用途。
缺氧诱导因子 (Hypoxia-inducible factor， HIF)(HIF1α) 为在所有组织中组成 性表达的转录因子。 该蛋白由 Gregg Semenza 于 1994 年在研究 EPO 基因的调节序列的过程 中发现。他鉴定了位于 EPO 启动子的非编码 3’ 位的序列， 其具有 “缺氧应答元件 (hypoxia response element)” (HRE) 的名称且其为允许 EPO 转录激活的蛋白 HIF1-α 结合的位点。 之后， HRE 序列还位于超过 70 个其它基因上， 如 VEGF( 血管内皮生长因子 ) 或 Glut1( 葡萄糖 载体 1)。该转录复合物 HIF-1 最小为由蛋白 HIF1-α 或 HIF2-α 和另一转录因子 ARNT( 之 前已知为 HIF1-α) 形成的杂二聚体。 ARNT 组成性且稳定地在细胞中表达， 且转录复合物调 节的主要部分与细胞中存在的 HIF1-α 的量相关， 因此其为限制因子。
在常氧条件下， 蛋白 HIF1-α 快速降解 ( 半衰期为 5 分钟 )。在 HIF 脯氨酰羟化酶 (HIF-PHDs 或 EGLNs) 分别羟化人型的脯氨酸 402 和 563 以及脯氨酸 405 和 531 上的 HIF1-α 或 HIF2-α 后发生该降解。该羟化使得 Von Hippell Lindau 蛋白 (pVHL) 与泛素连接酶结 合， 其导致 HIF1-α 或 HIF2-α 通过泛素蛋白酶体系统降解。当细胞或组织经受高缺氧 / 缺血时， HIF1-α 或 HIF2-α 不再被泛素 - 蛋白酶体系统降解， 然后可与 HIF 复合物的其它 转录因子结合以转移至核中并活化它们的靶基因。
尽管高缺氧是蛋白 HIF1-α 和 HIF2-α 活化的主要原因， 其它诱导剂 ( 如胰岛素 和生长因子 ) 也可在它们的稳定中起作用， 尤其通过在它们的丝氨酸 641 和 643 上的磷酸 化起作用。
因此， 建立涉及测量蛋白 HIF1-α 和 / 或 HIF2-α 的稳定的表型筛选以鉴别本发 明的化合物。
根据本发明的化合物对应于下式 (I) ：
其中
n 等于 0、 1、 2、 3或4；
m 等于 0、 1或2；
o 等于 0 或 1 ；
X 表示基团 -CH2、 -CH(R’ )-、 -N(R’ )- 或选自氧原子和硫原子的杂原子， 且理解 R’ 表示基团 -(C1-C5) 烷基、 -(C1-C5) 烷氧基、 -CH2- 芳基、 -C(O)R5 或 -COOR5 且 R5 如下定义 ；
R1 表示氧代基、 基团 -COOR5、 基团 -W-OH 或基团 -W-NR5R6， 且 W、 R5 和 R6 如下定 义； 且
R2 表示氢原子或选自以下的基团 ： (i) 基团 -(C1-C5) 烷基， (ii) 基团 -(C1-C5) 烷 氧基， (iii) 基团 -COOR5， (iv) 基团 -NR5R6， (v) 基团 -C(O)-NR5R6， (vi) 基团 -SO2-NR3R4， (vii) 任选被基团 -(C1-C5) 烷基取代的杂芳基， (viii) 基团 -W- 芳基， (ix) 基团 -W- 杂芳 基， (x) 基团 -O-W- 芳基， (xi) 基团 -O-W- 杂芳基和 (xii) 基团 -O-W-NR5R6， 且 W、 R3、 R4、 R5 和 R6 如下定义 ；
R3 和 R4，
(i) 其 可 相 同 或 不 同， 彼 此 独 立 地 表 示， 氢 原 子、 基 团 -(C1-C5) 烷 基、 基 团 -(C3-C6) 环 烷 基、 芳 基、 杂 芳 基、 基 团 -CH2- 杂 芳 基、 基 团 -(C1-C5) 烷 基 -NR5R6、 基 团 -W-OH 或基团 -W-NR5R6 ； 或
(ii) 与携带它们的氮原子一起形成任选被一个或多个选自以下的基团取代的杂 环烷基 ： 基团 -(C1-C5) 烷基和基团 -CH2- 芳基 ；
W 为基团 -(C1-C5) 亚烷基， 任选被一个或多个羟基取代 ； 且
R5 和 R6， 其 可 相 同 或 不 同， 彼 此 独 立 地 表 示， 氢原子或选自以下的基团 ： 基 团 -(C1-C5) 烷基和基团 -(C3-C6) 环烷基。
式 (I) 化合物可以以碱或盐的形式存在， 在该情况下， 式 (I) 化合物用酸或碱 ( 特 别是药学上可接受的酸或碱 ) 成盐。它们称为加成盐， 特别是酸或碱加成盐， 其构成本发明 的一部分。所述盐有利地用药学上可接受的酸制备， 但是， 用于例如纯化或分离式 (I) 化合 物的其它酸的盐也构成本发明的一部分。可提及盐酸盐、 三氟乙酸盐和钠盐。 式 (I) 化合物也可以以溶剂化物的形式存在， 即与一个或多个溶剂分子结合或组 合的形式。该溶剂合物也构成本发明的一部分。
当 o 等于 0 时， 则该环仅包含氢原子。
式 (I) 化合物的多种互变异构形式也构成本发明的一部分 ：
而且， 本发明的一个主题还为一种统一测试 (uniform test)， 其用于在用一种或 多种测试化合物处理所述细胞后， 通过 β- 半乳糖苷酶补充直接测量细胞， 优选 HEK 细胞的 核中 HIF1-α 蛋白的量， 其由以下组成 ：
(a) 优选在 384- 孔板中， 将所述细胞接种在合适的培养基中， 优选 1％胎牛血清 ( 缩写为 FCS) ；
(b) 将在合适的溶剂中的测试化合物以合适的浓度添加至之前接种在所述培养基 中的细胞中 ； 优选该测试化合物在 0.1％ FCS 中稀释 ；
(c) 在培养箱在约 37℃孵育如此制备的细胞， 有利地孵育约 6 小时 ；
(d) 用包含 β- 半乳糖苷酶的化学发光底物的溶胞缓冲液溶解细胞 ；
(e) 在读数和测量发光之前， 避光孵育， 该发光是 β- 半乳糖苷酶活性的函数。
根据本发明的化合物按照以上定义的测试接受筛选测试。
在本发明的上下文中， 除非在文中另有所述， 否则适用以下定义 ：
- 卤素原子 ： 氟、 氯、 溴或碘原子 ；
- 烷基 ： 直链或支链的、 饱和脂肪基团， 其可包含 1、 2、 3、 4 或 5 个碳原子 ( 缩写 为 -(C1-C5) 烷基 )。可提及的实例包括， 作为 (i) 基团 -C1 烷基， 甲基， 作为 (ii) 基团 -C2 烷基， 乙基， 作为 (iii) 基团 -C3 烷基， 丙基或异丙基， 作为 (iv) 基团 -C4 烷基， 丁基、 异丁 基或叔丁基， 作为 (v) 基团 -C5 烷基， 戊基或异戊基 ；
- 亚烷基 ： 如上定义的直链或支链的饱和二价烷基， 其可包含 1、 2、 3、 4或5个 碳 原 子 ( 缩 写 为 -(C1-C5) 亚 烷 基 -)。 可 提 及 的 实 例 包 括 亚 甲 基 ( 或 -CH2-)、 亚乙基 ( 或 -CH2-CH2-) 或亚丙基 (-CH2-CH2-CH2-) 基团 ；
- 环烷基 ： 环状烷基， 其可包含 3、 4、 5 或 6 个碳原子， 还缩写为 -(C3-C6) 环烷基。 可提及的实例包括环丙基、 环丁基、 环戊基和环己基 ； - 烷氧基 ： 基 团 -O- 烷 基， 其 中 所 述 烷 基 如 上 定 义。 可 提 及 的 实 例 包 括 基 团 -O-(C1-C5) 烷基或 -(C1-C5) 烷氧基， 且特别是， 作为 (i) 基团 -O-C1 烷基， 基团 -O 甲基， 作为 (ii) 基团 -O-C2 烷基， 基团 -O 乙基， 作为 (iii) 基团 -O-C3 烷基， 基团 -O 丙基或 -O 异 丙基， 作为 (iv) 基团 -O-C4 烷基， 基团 -O 丁基、 -O 异丁基或 -O 叔丁基， 作为 (v) 基团 -O-C5 烷基， 基团 -O 戊基或 -O 异戊基 ；
- 烷氧基 - 烷基 ： 式 - 亚烷基 -O- 烷基的基团， 其中所述烷基和亚烷基 ( 包含相同 数量的碳原子或不包含相同数量的碳原子 ) 如上定义。可提及的实例包括基团 -(C1-C5) 亚烷基 -O-(C1-C5) 烷基， 且 -(C1-C5) 亚烷基 - 和 -(C1-C5) 烷基如上定义 ；
- 卤代烷基 ： 如上定义的烷基， 被 1、 2、 3、 4 或 5 个如上定义的卤素原子取代。可提 及的实例包括基团 - 卤代 (C1-C5) 烷基， 且 (C1-C5) 烷基如上定义， 且特别为三氟甲基 ( 缩 写为 -CF3) ；
- 芳基 ： 含 5 或 6 个碳原子的环状芳香基团。可提及的芳基的实例为苯基 ；
- 杂芳基 ： 含 2、 3、 4 或 5 个碳原子且包含 1 至 3 个可选自氮原子、 氧原子和硫原子 的杂原子的环状芳香基团， 当有两个杂原子时， 它们彼此独立， 且相同或不同， 或当有 3 个 杂原子时， 它们彼此独立， 且相同或不同。可提及吡啶基、 吡咯基和呋喃基 ；
- 杂环烷基 ： 任选桥联的环状烷基， 其包含 5、 6 或 7 个碳原子且包含 1、 2 或 3 个可 选自氮原子、 氧原子和硫原子的杂原子， 当有两个杂原子时， 它们彼此独立， 且相同或不同， 或当有 3 个杂原子时， 它们彼此独立， 且相同或不同。可特别提及哌啶基、 哌嗪基、 吡咯烷 基、 六亚甲基亚胺基 (hexamethyleneimino)、 吗啉基和 1， 1- 二氧代四氢噻吩基 ；
- 围绕式 (I) 化合物的吡啶的字母 α、 β、 γ 和 δ 用来识别各碳原子的位置。在 本发明所述的化合物中， 可提及对应式 (I) 的第一组化合物， 其中 ：
n 等于 0、 1、 2、 3 或 4，
和/或
m 等于 0、 1 或 2，
和/或
o 等于 0 或 1，
和/或
X 表示基团 -CH2-、 -CH(R’ )-、 -N(R’ )- 或选自氧原子和硫原子的杂原子，
和/或
R’ 表示基团 -(C1-C5) 烷基、 基团 -(C1-C5) 烷氧基、 基团 -CH2- 芳基、 基团 -C(O) R5 或基团 -COOR5 ；
和/或
R1 表示氧代基、 基团 -COOR5、 基团 -W-OH 或基团 -W-NR5R6 ；
和/或
R2 表 示 氢 原 子、 基 团 -(C1-C5) 烷 基、 基 团 -(C1-C5) 烷 氧 基、 基 团 -COOR5、 基 团 -NR5R6、 基团 -C(O)-NR5R6 或基团 -SO2-NR3R4 ；
和/或
R3 和 R4
(i) 彼此独立地表示， 氢原子、 基团 -(C1-C5) 烷基、 基团 -(C3-C6) 环烷基、 芳基、 杂 芳基、 基团 -CH2- 杂芳基或基团 -(C1-C5) 烷基 -NR5R6 ； 或
(ii) 与携带它们的氮原子一起形成任选被基团 -(C1-C5) 烷基或芳基取代的杂环烷基， 和/或
W 表示基团 -(C1-C5) 亚烷基， 任选被一个或多个羟基取代 ；
和/或
R5 和 R6 彼此独立地表示， 氢原子或基团 -(C1-C5) 烷基。
本发明化合物的第一小组由式 (I) 化合物 ( 其中 n 等于 0、 1、 2、 3 或 4) 构成。
本发明化合物的第二小组由式 (I) 化合物 ( 其中 m 等于 0、 1 或 2) 构成。
本发明化合物的第三小组由式 (I) 化合物 ( 其中 o 等于 0) 构成。
本发明化合物的第四小组由式 (I) 化合物 ( 其中 R1 表示氧代基、 基团 -CH2- 芳基、 基团 -C(O)R5- 或基团 -COOR5， 所述基团 R1 可连接至碳原子或杂原子 ) 构成。有利地， 所述 芳基表示苯基。
本发明化合物的第五小组由式 (I) 化合物 ( 其中 R2 表示 (i) 氢原子， (ii) 基 团 -(C1-C5) 烷基， (iii) 基团 -(C1-C5) 烷氧基， (iv) 基团 -COOR5， (v) 基团 -NR5R6， (vi) 基团 -C(O)-NR5R6， (vii) 被基团 -(C1-C5) 烷基取代的杂芳基， (viii) 基团 -O-W- 芳基或 (ix) 基团 -O-W- 杂芳基 ) 构成。
本发明化合物的第六小组由式 (I) 化合物 ( 其中 R2 表示基团 -SO2-NR3R4) 构成。
本发明化合物的第七小组由式 (I) 化合物 ( 其中 R2 为吡啶的 β 位的原子上的取 代基 ) 构成。
本发明化合物的第八小组由式 (I) 化合物 ( 其中 R2 为吡啶的 γ 位的原子上的取 代基 ) 构成。
本发明化合物的第九小组由式 (I) 化合物 ( 其中 R3 和 R4 彼此独立地表示， 氢 原子、 基团 -(C1-C5) 烷基、 基团 -(C3-C6) 环烷基、 芳基、 杂芳基、 基团 -CH2- 杂芳基或基
团 -(C1-C5) 烷基 -NR5R6) 构成。有利地， 所述芳基表示苯基且所述杂芳基表示吡啶基或呋 喃基。
本发明化合物的第十小组由式 (I) 化合物 ( 其中 R3 和 R4 与携带它们的氮原子一 起形成任选被一个或多个 -(C1-C5) 烷基和 / 或芳基取代的杂环烷基 ) 构成。有利地， 所述 杂环烷基表示哌啶基、 吡咯烷基或六亚甲基亚胺基且所述芳基表示苯基。
本发明化合物的第十一小组由式 (I) 化合物 ( 其中 R5 表示基团 -(C1-C5) 烷基或 基团 -(C1-C5) 环烷基 ) 构成。
本发明化合物的第十二小组由式 (I) 化合物 ( 其中 R6 表示氢原子或基团 (C1-C5) 烷基 ) 构成。
以上定义的小组， 单独或组合地， 也构成本发明的一部分。
在本发明所述的化合物中， 还可提及对应式 (I) 化合物的小组， 其中 ：
● n 等于 1、 2、 3或4；
● m 等于 0、 1或2；
● o 等于 0 或 1 ；
● X 表示 -CH2- 基团、 基团 -CH(R’ )-、 基团 -N(R’ )- 或选自氧原子和硫原子的杂 原子 ；
● R’ 表示基团 -(C1-C5) 烷基、 基团 -(C1-C5) 烷氧基、 基团 -CH2- 芳基、 基团 -C(O) R5 或基团 -COOR5 ；
● R1 表示氧代基、 基团 COOR5、 基团 -W-OH 或基团 -W-NR5R6 ；
● R2 表示基团 -SO2-NR3R4 ；
● R3 和 R4 彼此独立地表示， 氢原子、 基团 -(C1-C5) 烷基、 基团 -(C3-C6) 环烷基、 芳基、 杂芳基或基团 -CH2- 杂芳基， 或 R3 和 R4 与携带它们的氮原子一起形成杂环烷基 ； 且
● R5 和 R6 表示基团 -(C1-C5) 烷基。
最后， 在本发明所述的化合物中， 可提及对应式 (I) 化合物的小组， 其中 ：
● n 等于 1、 2、 3或4；
● m 等于 0、 1或2；
● o 等于 0 或 1 ；
● X 表示基团 -CH2-、 基团 -CH(R’ )-、 基团 -N(R’ )- 或选自氧原子和硫原子的杂 原子 ；
● R’ 表示基团 -(C1-C5) 烷基、 基团 -(C1-C5) 烷氧基、 基团 -CH2- 芳基、 基团 -C(O) R5 或基团 -COOR5 ；
● R1 表示氧代基 ；
● R2 表示氢原子、 基团 -(C1-C5) 烷基、 基团 -(C1-C5) 烷氧基、 基团 -COOR5、 基 团 -NR5R6 或 -C(O)-NR5R6 ； 且
● R5 和 R6 彼此独立地表示， 氢原子、 基团 -(C1-C5) 烷基或基团 -(C1-C5) 环烷基。
在本发明的主题的式 (I) 化合物中， 尤其可提及以下化合物 ：
○ 2-[5-( 哌啶 -1- 基磺酰基 ) 吡啶 -2- 基 ]-1， 2， 4， 5， 6， 7- 六氢 -3H- 吲唑 -3- 酮 ；
○ 6- 甲基 -2-[5-( 哌啶 -1- 基磺酰基 ) 吡啶 -2- 基 ]-1， 2， 4， 5， 6， 7- 六氢 -3H- 吲 唑 -3- 酮 ；○ 2-[5-( 哌啶 -1- 基磺酰基 ) 吡啶 -2- 基 ]-1， 4， 5， 6， 7， 8- 六氢环庚三烯并 [c] 吡唑 -3(2H)- 酮 ；
○ N- 乙基 -6-(3- 氧代 -1， 3， 4， 5， 6， 7- 六氢 -2H- 吲唑 -2- 基 )-N- 苯基吡啶 -3- 磺 酰胺 ；
○ 6-(5- 苄 基 -3- 氧 代 -1， 3， 4， 5， 6， 7- 六 氢 -2H- 吡 唑 并 [4， 3-c] 吡 啶 -2- 基 )-N- 乙基 -N- 苯基吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ (±)2-(5-{[(3R， 5S)-3， 5- 二甲基哌啶 -1- 基 ] 磺酰基 } 吡啶 -2- 基 )-1， 2， 4， 5， 6， 7- 六氢 -3H- 吲唑 -3- 酮 ；
○ 2-(4- 甲氧基吡啶 -2- 基 )-1， 2， 4， 6- 四氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮 ；
○ 2-( 吡啶 -2- 基 )-1， 4， 5， 6- 四氢环戊二烯并 [c] 吡唑 -3(2H)- 酮 ；
○ (±)5- 苄 基 -2-(5-{[(3R， 5S)-3， 5- 二 甲 基 哌 啶 -1- 基 ] 磺 酰 基 } 吡 啶 -2- 基 )-1， 2， 4， 5， 6， 7- 六氢 -3H- 吡唑并 [4， 3-c] 吡啶 -3- 酮 ；
○ (±)2-(5-{[(3R， 5S)-3， 5- 二甲基哌啶 -1- 基 ] 磺酰基 } 吡啶 -2- 基 )-6- 甲 基 -1， 2， 4， 5， 6， 7- 六氢 -3H- 吲唑 -3- 酮 ；
○ 6-(5- 苄基 -3- 氧代 -1， 3， 4， 5， 6， 7- 六氢 -2H- 吡唑并 [4， 3-c] 吡啶 -2- 基 )-N， N- 二乙基吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ N- 乙 基 -6-(3- 氧 代 -1， 3， 4， 5， 6， 7， 8， 9- 八 氢 -2H- 环 辛 四 烯 并 [c] 吡 唑 -2- 基 )-N- 苯基吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ N- 乙基 -6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 )-N- 苯 基吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ 6-(5- 苄基 -3- 氧代 -1， 3， 4， 5， 6， 7- 六氢 -2H- 吡唑并 [4， 3-c] 吡啶 -2- 基 )-N， N- 二 ( 丙烷 -2- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ 6- 甲氧基 -2-( 吡啶 -2- 基 )-1， 4， 5， 6- 四氢环戊二烯并 [c] 吡唑 -3(2H)- 酮 ；
○ 2-( 吡啶 -2- 基 )-1， 4， 6， 7- 四氢噻喃并 [4， 3-c] 吡唑 -3(2H)- 酮 ；
○ N- 乙基 -6-(3- 氧代 -1， 4， 6， 7- 四氢噻喃并 [4， 3-c] 吡唑 -2(3H)- 基 )-N- 苯 基吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ N- 乙基 -6-(3- 氧代 -3， 5， 6， 7- 四氢噻喃并 [3， 2-c] 吡唑 -2(1H)- 基 )-N- 苯 基吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ N， N- 二乙基 -6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ N， N- 二甲基 -6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ 2-[5-( 吡咯烷 -1- 基磺酰基 ) 吡啶 -2- 基 ]-1， 2， 4， 6- 四氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮 ；
○ N- 环丙基 -6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡 啶 -3- 磺酰胺 ；
○ 6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 )-N-( 丙烷 -2- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ N- 叔丁基 -6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ N-( 呋 喃 -2- 基 甲 基 )-6-(3- 氧 代 -4， 6- 二 氢 -1H- 噻 吩 并 [3， 4-c] 吡 唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ N- 环戊基 -6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡 啶 -3- 磺酰胺 ；
○ N- 甲基 -6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 )-N-( 吡 啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ 2-( 吡啶 -2- 基 )-1， 2， 4， 6- 四氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮 ；
○ 2-[4-( 二 甲 基 氨 基 ) 吡 啶 -2- 基 ]-1， 2， 4， 6- 四 氢 -3H- 噻 吩 并 [3， 4-c] 吡 唑 -3- 酮 ；
○ 2-{5-[(4- 苄基哌啶 -1- 基 ) 磺酰基 ] 吡啶 -2- 基 }-1， 2， 4， 6- 四氢 -3H- 噻吩 并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮 ；
○ 6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 )-N-( 吡啶 -2- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ N- 乙基 -6-(3- 氧代 -1， 4， 6， 7- 四氢吡喃并 [4， 3-c] 吡唑 -2(3H)- 基 )-N- 苯 基吡啶 -3- 磺酰胺 ； ○ 2-(4- 乙基吡啶 -2- 基 )-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠 ；
○ 2-[5-( 氮杂环庚烷 -1- 基磺酰基 ) 吡啶 -2- 基 ]-1， 2， 4， 6- 四氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮 ；
○ 4- 苄基 -2-{5-[ 乙基 ( 苯基 ) 氨基磺酰基 ] 吡啶 -2- 基 }-5- 氧代 -4， 5， 6， 7- 四氢 -2H- 吡唑并 [4， 3-b] 吡啶 -3- 醇钠 ；
○ N- 甲基 -6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 )-N-( 吡 啶 -2- 基甲基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ 2-{5-[ 乙基 ( 苯基 ) 氨基磺酰基 ] 吡啶 -2- 基 }-3- 氧代 -1， 2， 3， 4， 6， 7- 六 氢 -5H- 吡唑并 [4， 3-c] 吡啶 -5- 甲酸叔丁酯 ；
○ 6-(5- 乙 酰 基 -3- 氧 代 -1， 3， 4， 5， 6， 7- 六 氢 -2H- 吡 唑 并 [4， 3-c] 吡 啶 -2- 基 )-N- 乙基 -N- 苯基吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ 6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 甲酸 叔丁酯 ；
○ 2-(4- 甲基吡啶 -2- 基 )-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠 ；
○ 2-{5-[ 叔丁基 ( 甲基 ) 氨基磺酰基 ] 吡啶 -2- 基 }-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠 ；
○ 2-{5-[ 叔丁基 ( 乙基 ) 氨基磺酰基 ] 吡啶 -2- 基 }-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠 ；
○ 2-(5- 甲基吡啶 -2- 基 )-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠 ；
○ 2-[5-( 叔丁基氨基甲酰基 ) 吡啶 -2- 基 ]-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡 唑 -3- 醇钠 ；
○ 2-(5- 甲氧基吡啶 -2- 基 )-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠 ；
○ N- 甲基 -6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 )-N-( 吡
啶 -4- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ 2-{5-[ 环戊基 ( 乙基 ) 氨基磺酰基 ] 吡啶 -2- 基 }-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠 ；
○ 2-[4-( 吡啶 -3- 基甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ]-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡 唑 -3- 醇钠 ；
○ 2-{5-[ 乙基 ( 苯基 ) 氨基磺酰基 ] 吡啶 -2- 基 }-3- 氧代 -1， 2， 3， 4， 6， 7- 六 氢 -5H- 吡唑并 [4， 3-c] 吡啶 -5- 甲酸甲酯 ；
○ 6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 甲酸 环戊基酯 ；
○ 6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 甲酸 2- 甲基丙基酯 ；
○ 2-[4-( 丙 烷 -2- 基 ) 吡 啶 -2- 基 ]-1， 2， 4， 6- 四 氢 -3H- 噻 吩 并 [3， 4-c] 吡 唑 -3- 酮 ；
○ 2-[5-( 丙烷 -2- 基 ) 吡啶 -2- 基 ]-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇 钠； ○ 2-{5-[ 乙基 ( 苯基 ) 氨基磺酰基 ] 吡啶 -2- 基 }-3- 氧代 -2， 3， 4， 6- 四氢 -1H- 噻 吩并 [3， 4-c] 吡唑 -4- 甲酸甲酯 ；
○ 6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 甲酸 丙烷 -2- 基酯 ；
○ 2-{5-[ 乙基 ( 苯基 ) 氨基磺酰基 ] 吡啶 -2- 基 }-6- 甲氧基 -2， 4， 5， 6- 四氢环 戊二烯并 [c] 吡唑 -3- 醇钠 ；
○ N- 乙基 -6-(3- 氧代 -3， 4， 5， 6- 四氢环戊二烯并 [c] 吡唑 -2(1H)- 基 )-N- 苯 基吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ 2-[4-( 吡啶 -3- 基甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ]-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡 唑 -3- 醇钠 ；
○ 6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 甲酸 2， 2- 二甲基丙基酯 ；
○ 2-[5-(5- 叔丁基 -1， 2， 4-二唑 -3- 基 ) 吡啶 -2- 基 ]-1， 2， 4， 6- 四氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮 ；
○ N- 环 戊 基 -N- 甲 基 -6-(3- 氧 代 -4， 6- 二 氢 -1H- 噻 吩 并 [3， 4-c] 吡 唑 -2(3H)- 基 )- 吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ N- 环 戊 基 -N- 乙 基 -6-(3- 氧 代 -3， 4， 5， 6- 四 氢 环 戊 二 烯 并 [c] 吡 唑 -2(1H)- 基 )- 吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ N- 环戊基 -N-(2， 3- 二羟基丙基 )-6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺 ；
○ 6-[5-( 甲 基 磺 酰 基 )-3- 氧 代 -1， 3， 4， 5， 6， 7- 六 氢 -2H- 吡 唑 并 [4， 3-c] 吡 啶 -2- 基 ] 吡啶 -3- 甲酸 2， 2- 二甲基丙基酯 ；
○ 2-[5-(3- 叔丁基 -1， 2， 4-二唑 -5- 基 ) 吡啶 -2- 基 ]-1， 2， 4， 6- 四氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮。在下文中， 术语 “保护基 (PG)” 是指以下基团 ： 其在合成中首先可保护活性基团 ( 例如醇或胺 )。保护基的实例以及保护和脱保护的方法可参考 “Protective Groups in Organic Synthesis” Greene 等， 3rd Edition(John Wiley &Sons， Inc.， New York)。
在下文中， 术语 “离去基团 (LG)” 是指可通过键异裂 (breaking a heterolytic bond) 和失去电子对容易地从分子中脱除的离核基团。因此， 该基团可例如， 容易地在取代 反应中被另一亲核基团替换。该离去基团为例如， 卤素或活化的羟基， 例如甲磺酰基、 甲苯 磺酰基、 三氟甲磺酰基 (triflate)、 乙酰基等基团。离去基团的实例及其制备的参考文献 可参考 “Advances in Organic Chemistry” ， J.March， 3rd Edition， Wiley Interscience， pp.310-316。
根据本发明， 通式 (I) 化合物可按照以下方案 1 例示的方法制备。
方案 1
通式 (I) 化合物的合成如下进行 ： 起始于式 (II) 化合物， 其中 R1、 X、 n、 m 和 o 如上 所述且 z 表示烷基， 优选甲基或乙基， 其在醇型的质子溶剂， 优选甲醇中， 在 20 至 60℃的温 度， 与式 (III) 化合物 ( 其中 R2 如上定义 ) 缩合， 以得到式 (IV) 中间体， 其为式 (IVa) 或式 (IVb) 化合物的形式， 或二者的混合物， 且其在有机碱， 优选甲醇钠的存在下， 在质子溶剂如 甲醇中， 在 20 至 50℃的温度环化。
所得化合物 (I) 任选用相应酸或碱转化为盐。
当其制备方法未描述时， 式 (II) 化合物可市售获得或被文献公开， 或可根据本领 域技术人员已知的方法制备。
方案 2a、 2b 和 2c 描述式 (III) 化合物的制备。
式 (III) 化合物获自式 (V) 化合物， 其中 LG 和 R2 如上定义， 通过添加水合肼， 优 选在质子溶剂如乙醇中， 在 60 至 80℃的温度进行 ( 方案 2a)。
方案 2a
式 (III) 化合物也可以以两步从式 (V) 化合物获得。然后引入肼官能团， 其通过 在催化量的钯的存在下进行式 (VI) 的二苯甲酮腙和式 (V) 化合物之间的偶合反应， 得到式 (VII) 中间体， 其肼官能团通过以下游离 ： 通过酸处理， 如盐酸， 优选以 6 至 12N 的浓度， 在 不混溶的溶剂如甲苯和水的二元混合物中， 在 100℃的温度进行 ( 方案 2b)。
方案 2b
或者， 式 (III) 化合物可从式 (VIII) 的氨基吡啶 ( 其中 R2 如上定义 ) 合成， 通过 0℃的硝酸和浓硫酸的混合物的作用， 得到 N- 硝基胺 (nitroamine) 中间体， 其在锌的存在 下在 10N 氢氧化钠中还原 ( 方案 2c)。
方案 2c
在之前方案中， 当起始化合物、 中间体和反应物的制备方法未描述时， 它们可市售 获得或被文献公开， 或可根据本领域技术人员已知方法制备。
根据其另一方面， 本发明的主题还为式 (IVa) 和式 (IVb) 化合物。这些化合物可 用作合成式 (I) 化合物的中间体。
实施例 ：
以下实施例例示根据本发明的具体化合物的制备。 作为实施例提供的化合物的编 号是指下文表中的那些编号， 其阐明根据本发明的具体化合物的化学结构和物理性质。
使用以下缩写和半结构式 ：
质子核磁共振 (1H NMR) 谱， 如下所述， 在 400MHz 记录 ( 在 DMSO-d6 中 )， 使用 DMSO-d5 的峰作为参照。化学位移 δ 表示为百万分率 (ppm)。观察到的信号如下表示 ： s＝ 单峰 ； bs ＝宽的单峰 ； d ＝双重峰 ； dd ＝两组双重峰 ； dt ＝两组三重峰 ； t ＝三重峰 ； m ＝多 重峰 ； H ＝质子。
该质谱在以下 LC/MS 联用条件下获得 ：
方法 1 ： 柱： Jsphere33×2mm ； 4μM ；
洗脱液 ： A ＝ H2O+0.05％ TFA ； B ＝ CH3CN+0.05％ TFA。
T0 ： 98％ A ； T1.0 至 T5.0 分钟 ： 95％ B ；
方法 2 ： 柱： Acquity BEH C18(50×2.1mm ； 1.7μM) ； 220nm
洗脱液 ： A ＝ H2O+0.05％ TFA ； B ＝ CH3CN+0.035％ TFA。
T0 ： 98％ A ； T1.6 至 T2.1 分钟 ： 100％ B ； T2.5 至 T3 分钟 ： 98％ A。
流速 1.0mL/ 分钟 -T℃＝ 40℃， 进样 2μL
实施例 1 ： 2- 吡啶 -2- 基 -1， 2， 4， 6- 四氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮 ( 表 I 的化合物 1)
将 7g(64.1mmol)2- 肼基吡啶和 10.3g(64.1mmol)4- 氧代四氢噻吩 -3- 甲酸甲 酯在 130mL MeOH 中的混合物在 80 ℃加热 12 小时。然后在减压下浓缩该介质且将所得 残余物通过色谱法在硅胶柱上纯化， 用 0 至 10 ％ MeOH 的 DCM/MeOH 梯度液洗脱。在减压 下浓缩后， 分离 8.7g(34.5mmol) 腙中间体， 其为黄色粉末形式， 然后在室温分批添加至 0.8g(34.5mmol) 钠在 46mL 无水 MeOH 中的溶液中。将反应介质在室温搅拌 2 小时， 然后滤 出形成的沉淀且连续用 10mL MeOH 和 20mL 戊烷洗涤。将所得残余物溶于 20mL 水且添加 10mL 乙酸。滤出所得沉淀， 用 10mL 水洗涤， 真空干燥且从 EtOH 重结晶。得到 4.2g 的 2- 吡 啶 -2- 基 -1， 2， 4， 6- 四氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮， 其为发白的 (whitish) 粉末形 式。
产率＝ 56％
m.p.(℃ ) ＝ 152
M ＝ C10H9N3OS ＝ 219 ； M+H ＝ 220 ； 方法 2 ： Tr ＝ 0.81 分钟。 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 8.45(d， 1H) ； 8.2(d， 1H) ； 7.95(m， 1H) ； 7.3(t，
1H) ； 4.0(s， 2H) ； 3.8(s， 2H)。
实施例 2 ： 2-[4-( 二甲基氨基 ) 吡啶 -2- 基 ]-1， 2， 4， 6- 四氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮盐酸盐 ( 表 II 的化合物 56)
2.1.2- 溴 -N， N- 二甲基吡啶 -4- 胺
在 氩 气 氛 在 -5 ℃ 经 2 小 时 30 分 钟 向 12.6mL(125mmol)N， N- 二 甲 基 乙 醇 胺 在 160mL 无水己烷中的溶液中添加 100mL(250mmol)2.5M 正丁基锂的己烷溶液， 然后在 0 ℃ 将反应介质搅拌 30 分钟， 然后添加 7.6g(62.5mmol)4- 二甲基氨基吡啶。在 0℃搅拌 1 小 时后， 将反应介质冷却至 -78 ℃且在 -78 ℃经 2 小时 30 分钟添加溶于 250mL 无水己烷的 51.8g(156.2mmol) 四溴化碳。使温度升高至 0℃， 然后持续搅拌 1 小时 30 分钟。
然后将该介质用水 (400mL) 水解， 随后用 Et2O(400mL) 和 DCM(2×400mL) 萃取。 合并的有机相用 Na2SO4 干燥， 过滤且在减压下浓缩。得到 6.4g 的 2- 溴 -N， N- 二甲基吡 啶 -4- 胺， 其为棕色固体形式， 其不用进一步纯化直接用于以下步骤。
产率＝ 51％ 1
H NMR， (CDCl3， 400MHz， δ(ppm) ： 7.9(d， 1H) ； 6.6(s， 1H) ； 6.4(d， 1H) ； 2.9(s， 6H)。
2.2.2-[2-( 二苯基亚甲基 (methylidene)) 肼基 ]-N， N- 二甲基吡啶 -4- 胺
在 氩 气 下 在 室 温 向 40mL 无 水 甲 苯 中 的 3.3g(16.41mmol)2- 溴 -N， N- 二 甲 基 吡啶 -4- 胺、 3.5g(18.05mmol) 二苯甲酮腙、 2.2g(23mmol) 无水叔丁醇钠和 40mL 甲苯中 的 100mg(0.82mmol) 苯硼酸的混合物， 在氩气下脱气后， 添加 74mg(0.33mmol) 乙酸钯和 205mg(0.33mmol)racBINAP。然后将反应介质在 80℃加热 4 小时。将反应介质溶于 200mL EtOAc， 连续用水 (3×30mL)、 饱和 NaHCO3 溶液 (30mL) 和盐水 (30mL) 洗涤， 然后用 Na2SO4 干 燥， 过滤且在减压下浓缩。将所得残余物通过色谱法在硅胶柱上纯化， 用 0 至 10％ MeOH 的 DCM/MeOH 梯度液洗脱。在减压下浓缩后， 得到 4.5g 的 2-[2-( 二苯基亚甲基 ) 肼基 ]-N， N- 二甲基吡啶 -4- 胺， 其为红色固体形式。
产率＝ 87％。
2.3.2- 肼基 -N， N- 二甲基吡啶 -4- 胺
将在 300mL 甲苯中的 4.5g(14.22mmol)2-[2-( 二苯基亚甲基 ) 肼基 ]-N， N- 二甲 基吡啶 -4- 胺和 80mL 37％盐酸水溶液的混合物在 110℃加热 4 小时。冷却至室温后， 将反 应介质用甲苯 (3×300mL) 萃取。水相用 200mL 水稀释， 在 0℃通过添加 12N 氢氧化钠溶液 中和， 然后用 DCM(3×150mL) 萃取。合并有机相， 用盐水 (300mL) 洗涤， 然后用 Na2SO4 干燥， 过滤且在减压下浓缩。得到 1.87g 的 2- 肼基 -N， N- 二甲基吡啶 -4- 胺， 其为棕色固体形 式， 其不用进一步纯化直接用于以下步骤。
产率＝ 87％ 1
H NMR(ppm， d6-DMSO， 400MHz) ： 7.6(d， 1H) ； 6.9(s， 1H) ； 6.1(dd， 1H) ； 5.9(d， 1H) ；
4(bs， 2H) ； 2.9(s， 6H)。
2.4.2-[4-( 二甲基氨基 ) 吡啶 -2- 基 ]-1， 2， 4， 6- 四氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡 唑 -3- 酮盐酸盐
根据实施例 1 所述的方法， 起始于 1.87g 的 2- 肼基 -N， N- 二甲基吡啶 -4- 胺和 1.97g 的 4- 氧代四氢噻吩 -3- 甲酸甲酯， 得到 35mg 的 2-[4-( 二甲基氨基 ) 吡啶 -2- 基 ]-1， 2， 4， 6- 四氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮。通过将之前获得的 35mg 产物冻干并溶于 1mL 0.1N HCl 而制备该盐酸盐。
如此获得 36mg 2-[4-( 二甲基氨基 ) 吡啶 -2- 基 ]-1， 2， 4， 6- 四氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮盐酸盐， 其为白色冻干产物形式。
产率＝ 1％
m.p.(℃ ) ＝ 182
M ＝ C12H14N4OS ＝ 262 ； M+H ＝ 263 ； 方法 2 ： Tr ＝ 0.59 分钟。 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 7.7(d， 1H) ； 6.9(s， 1H) ； 6.6(d， 1H) ； 3.2(s， 2H) ； 3.5(s， 2H) ； 2.9(s， 6H)。
实施例 3 ： 2-(4- 甲 氧 基 吡 啶 -2- 基 )-1， 2， 4， 6- 四 氢 -3H- 噻 吩 并 [3， 4-c] 吡 唑 -3- 酮 ( 表 II 的化合物 55)
3.1.2-[2-( 二苯基亚甲基 ) 肼基 ]-4- 甲氧基吡啶
根据实施例 2.2 所述的方法， 起始于 0.5g 的 2- 氯 -4- 甲氧基吡啶和 0.75g 二苯 甲酮腙， 得到 0.76g 的 2-[2-( 二苯基亚甲基 ) 肼基 ]-4- 甲氧基吡啶， 其为黄色固体形式， 其不用进一步纯化直接用于以下步骤。
产率＝ 73％ 1
H NMR ，CDCl 3 ， 400MHz ，δ (ppm) ： 8.2(s ， 1H) ； 7.9(d ， 1H) ； 7.7-7.5(m ， 5H) ； 7.4-7.2(m， 5H) ； 7.1(s， 1H) ； 6.4(d， 1H) ； 3.9(s， 3H)。
3.2.2- 肼基 -4- 甲氧基吡啶
根据实施例 2.3 所述的方法， 起始于 0.76g 的 2-[2-( 二苯基亚甲基 ) 肼基 ]-4- 甲 氧基吡啶， 获得 0.24g 的 2- 肼基甲氧基吡啶， 其为黄色冻干物的形式， 其不用进一步纯化直 接用于以下步骤。
产率＝ 69％ 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 9.7(bs， 1H) ； 7.7(d， 1H) ； 6.5(d， 1H) ； 6.4(s， 1H) ； 4.8(bs， 2H) ； 3.9(s， 3H)。
3.3.2-(4- 甲氧基吡啶 -2- 基 )-1， 2， 4， 6- 四氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮
根据实施例 1 所述的方法， 起始于 243mg 的 2- 肼基 -4- 甲氧基吡啶和 280mg 的 4- 氧 代 四 氢 噻 吩 -3- 甲 酸 甲 酯， 得 到 82mg 的 2-(4- 甲 氧 基 吡 啶 -2- 基 )-1， 2， 4， 6- 四 氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮， 其为白色固体形式。
产率＝ 40％
m.p.(℃ ) ＝ 254
M ＝ C11H11N3O2S ＝ 249 ； M+H ＝ 250 ； 方法 2 ： Tr ＝ 0.8 分钟。 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 8.1(d， 1H) ； 8.05(d， 1H) ； 6.05(d， 1H) ； 3.8(s， 3H) ； 3.7(s， 2H) ； 3.6(s， 2H)。
实 施 例 4： N- 甲 基 -6-(3- 氧 代 -4， 6- 二 氢 -1H- 噻 吩 并 [3， 4-c] 吡 唑 -2(3H)- 基 )-N- 吡啶 -2- 基吡啶 -3- 磺酰胺 ( 表 I 的化合物 21)
4.1.6- 氯 -N- 甲基 -N- 吡啶 -2- 基吡啶 -3- 磺酰胺
在 0 ℃ 向 1.3g(11.8mmol)N- 甲 基 吡 啶 -2- 胺 在 25mL DCM 中 的 溶 液 中 添 加 3.3mL(23.6mmol) 三乙胺， 然后分批添加 2.5g(11.8mmol)6- 氯吡啶 -3- 磺酰氯 ( 根据文献 WO 98/40332 制备 )。在室温搅拌 12 小时后， 将反应介质溶于 100mL DCM， 连续用 100mL 水 过滤且在减压下浓缩。将所得残余物通过色谱法在硅胶 和 30mL 盐水洗涤， 用 Na2SO4 干燥， 柱上纯化， 用 4/1 环己烷 /EtOAc 混合物洗脱。在减压下浓缩后， 得到 2.8g 的 6- 氯 -N- 甲 基 -N- 吡啶 -2- 基吡啶 -3- 磺酰胺， 其为棕色固体形式。
产率＝ 84％ 1
H NMR， CDCl3， 400MHz， δ(ppm) ： 8.5(s， 1H) ； 8.25(d， 1H) ； 7.8(dd， 1H) ； 7.7(t， 1H) ； 7.5(d， 1H) ； 7.3(d， 1H) ； 7.15(t， 1H) ； 3.2(s， 3H)。
4.2.6- 肼基 -N- 甲基 -N- 吡啶 -2- 基吡啶 -3- 磺酰胺
将 1.4g(4.9mmol)6- 氯 -N- 甲 基 -N- 吡 啶 -2- 基 吡 啶 -3- 磺 酰 胺 和 0.96mL(19.7mmol) 肼一水合物在 8mL EtOH 中的溶液在 80℃加热 12 小时。冷却至室温后， 滤出所得沉淀， 用 10mL EtOH 洗涤， 然后真空干燥。得到 0.85g 的 6- 肼基 -N- 甲基 -N- 吡 啶 -2- 基吡啶 -3- 磺酰胺， 其为淡黄色晶体。
产率＝ 62％。 1
H NMR， CDCl3， 400MHz， δ(ppm) ： 8.35(s， 2H) ； 8.7(m， 2H) ； 7.5(d， 1H) ； 7.15(dd， 1H) ； 6.7(d， 1H) ； 6.4(bs， 1H) ； 3.5-4.0(bs， 2H) ； 3.3(s， 3H)。
4.3.N- 甲基 -6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 )-N- 吡 啶 -2- 基吡啶 -3- 磺酰胺
根据实施例 1 所述的方法， 起始于 476mg 的 6- 肼基 -N- 甲基 -N- 吡啶 -2- 基吡 啶 -3- 磺酰胺和 273mg 的 4- 氧代四氢噻吩 -3- 甲酸甲酯， 得到 416mg N- 甲基 -6-(3- 氧 代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 )-N- 吡啶 -2- 基吡啶 -3- 磺酰胺， 其 为白色固体形式。
产率＝ 45％
m.p.(℃ ) ＝ 226
M ＝ C16H15N5O3S2 ＝ 389 ； M+H ＝ 390 ； 方法 2 ： Tr ＝ 0.98 分钟。
23102333776 A CN 102333790
1说明书16/51 页H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 12.0(bs， 1H) ； 8.6(s， 1H) ； 8.5(bs， 1H) ； 8.4(d， 1H) ； 8.2(dd， 1H) ； 7.55(d， 1H) ； 7.3(t， 1H) ； 4.0(s， 2H) ； 3.8(s， 2H) ； 3.3(s， 3H)。
实 施 例 5： N- 乙 基 -6-(3- 氧 代 -3， 5， 6， 7- 四 氢 噻 喃 并 [3， 2-c] 吡 唑 -2(1H)- 基 )-N- 苯基吡啶 -3- 磺酰胺 ( 表 I 的化合物 24)
5.1.3- 氧代四氢 -2H- 噻喃 -2- 甲酸乙酯
在 0℃和在氩气下向 5g(219mmol) 钠在 13mL 无水 EtOH 和 88mL 乙醚的溶液中滴加 20.5g(87.5mmol)4-[(2- 乙氧基 -2- 氧代乙基 ) 硫基 ] 丁酸乙酯。在室温搅拌 18 小时后， 将反应混合物倒入 AcOH(12mL)/ 冰 (70g) 的混合物中。然后在减压下浓缩该介质， 且所得 残余物溶于 100mL 乙醚， 用盐水 (2×50mL) 洗涤， 用 Na2SO4 干燥， 过滤且在减压下浓缩。将 所得残余物通过硅胶色谱法纯化， 用 0 至 10％ EtOAc 的环己烷 /EtOAc 梯度液洗脱。得到 5.64g 的 3- 氧代四氢 -2H- 噻喃 -2- 甲酸乙酯， 其为黄色油状物。
产率＝ 34％ . 1
H NMR， CDCl3， 400MHz， δ(ppm) ： 12.3(s， 1H) ； 4.3(q， 2H) ； 2.80(m， 2H) ； 2.4(t， 2H) ； 2.15(m， 2H) ； 1.4(t， 3H)。
5.2.N- 乙基 -6-(3- 氧代 -3， 5， 6， 7- 四氢噻喃并 [3， 2-c] 吡唑 -2(1H)- 基 )-N- 苯 基吡啶 -3- 磺酰胺
将 1g(5.31mmol)3- 氧代四氢 -2H- 噻喃 -2- 甲酸乙酯和 1.55g 的 6- 肼基 -N- 甲 基 -N- 吡啶 -2- 基吡啶 -3- 磺酰胺在 10mL MeOH 中的混合物在 80 ℃加热 15 小时。冷却 至室温后， 滤出所得沉淀且用 5mL MeOH 洗涤， 然后从 EtOH 重结晶。得到 395mg 的 N- 乙 基 -6-(3- 氧代 -3， 5， 6， 7- 四氢噻喃并 [3， 2-c] 吡唑 -2(1H)- 基 )-N- 苯基吡啶 -3- 磺酰胺， 其为白色粉末形式。
产率＝ 16％
m.p.(℃ ) ＝ 198
M ＝ C19H20N4O3S2 ＝ 416 ； M+H ＝ 417 ； 方法 2 ： Tr ＝ 1.12 分钟 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 11.9(bs， 1H) ； 8.6(bs， 1H) ； 8.5(s， 1H) ； 8.1(d， 1H) ； 7.4(m， 3H) ； 7.1(d， 2H) ； 3.6(q， 2H) ； 3.0(t， 2H) ； 2.6(t， 2H) ； 2.0(q， 2.0) ； 1.0(t， 3H)。
实施例 6 ： 2-[5-[ 乙基 ( 苯基 ) 氨基磺酰基 ] 吡啶 -2- 基 ]-3- 氧代 -1， 2， 3， 4， 6， 7- 六氢 -5H- 吡唑并 [4， 3-c] 吡啶 -5- 甲酸叔丁酯 ( 表 I 的化合物 28)
6.1.1- 叔丁基 -3- 甲基 -4- 氧代哌啶 1， 3- 二甲酸酯
向 10g(51.6mmol)4- 氧代哌啶 -3- 甲酸甲酯和 7.3mL(51.6mmol) 三乙胺在 100mL DCM 中的混合物添加 11.3g(51.6mmol) 焦碳酸二叔丁酯。在室温 2 小时后， 将该介质溶于 300mL DCM， 用 200mL 水洗涤， 用 Na2SO4 干燥， 然后过滤且在减压下浓缩。得到 13g 的 1- 叔 丁基 -3- 甲基 -4- 氧代哌啶 1， 3- 二羧酸酯， 其为白色固体形式， 其不用进一步纯化直接用 于以下步骤。
6.2.2-[5-[ 乙基 ( 苯基 ) 氨基磺酰基 ] 吡啶 -2- 基 ]-3- 氧代 -1， 2， 3， 4， 6， 7- 六 氢 -5H- 吡唑并 [4， 3-c] 吡啶 -5- 甲酸叔丁酯
根据实施例 1 所述的方法， 起始于 1.7g 的 6- 肼基 -N- 甲基 -N- 吡啶 -2- 基吡 3- 二羧酸酯， 得到 190mg 的 啶 -3- 磺酰胺和 1.5g 的 1- 叔丁基 -3- 甲基 -4- 氧代哌啶 1， 2-[5-[ 乙基 ( 苯基 ) 氨基磺酰基 ] 吡啶 -2- 基 ]-3- 氧代 -1， 2， 3， 4， 6， 7- 六氢 -5H- 吡唑并 [4， 3-c] 吡啶 -5- 甲酸叔丁酯， 其为白色固体形式。
产率＝ 16％
m.p.(℃ ) ＝ 192
M ＝ C24H29N5O5S ＝ 499 ； M+H ＝ 500 ； 方法 2 ： Tr ＝ 1.23 分钟 1
H NMR ， d6-DMSO ， 400MHz ， δ (ppm) ： 12.1(bs ， 1H) ； 8.6(bs ， 1H) ； 8.5(s ， 1H) ； 8.1(dd ， 1H) ； 7.4(m ， 3H) ； 7.1(d ， 2H) ； 4.1(s ， 2H) ； 3.6(m ， 4H) ； 2.7(m ， 2H) ； 1.4(s ， 9H) ； 1.0(t， 3H)。
实 施 例 7： N- 乙 基 -6-(3- 氧 代 -1， 4， 6， 7- 四 氢 吡 喃 并 [4， 3-c] 吡 唑 -2(3H)- 基 )-N- 苯基吡啶 -3- 磺酰胺 ( 表 I 的化合物 25)7.1.4- 氧代四氢 -2H- 吡喃 -3- 甲酸丙酯
该化合物根据 JACS Vol.119， No.18， pp.4285-4291 所述的方法制备。
7.2.N- 乙基 -6-(3- 氧代 -1， 4， 6， 7- 四氢吡喃并 [4， 3-c] 吡唑 -2(3H)- 基 )-N- 苯 基吡啶 -3- 磺酰胺
根 据 实 施 例 1 所 述 的 方 法， 起 始 于 0.47g 的 6- 肼 基 -N- 甲 基 -N- 吡 啶 -2- 基
吡 啶 -3- 磺 酰 胺 和 0.3g 的 4- 氧 代 四 氢 -2H- 吡 喃 -3- 甲 酸 丙 酯， 得 到 370mg 的 N- 乙 基 -6-(3- 氧代 -1， 4， 6， 7- 四氢吡喃并 [4， 3-c] 吡唑 -2(3H)- 基 )-N- 苯基吡啶 -3- 磺酰胺， 其为白色粉末形式。
产率＝ 57％
m.p.(℃ ) ＝ 164
M ＝ C19H20N4O4S ＝ 400 ； M+H ＝ 401 ； 方法 2 ： Tr ＝ 1.0 分钟。 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 12.0(bs， 1H) ； 8.6(d， 1H) ； 8.4(s， 1H) ； 8.0(d， 1H) ； 7.4(m， 3H) ； 7.1(m， 2H) ； 4.3(s， 2H) ； 3.85(t， 2H) ； 3.6(q， 2H) ； 2.6(t， 2H) ； 1.0(t， 3H)。
实施例 8 ： 4- 苄基 -2-{5-[ 乙基 ( 苯基 ) 氨基磺酰基 ] 吡啶 -2- 基 }-5- 氧代 -4， 5， 6， 7- 四氢 -2H- 吡唑并 [4， 3-b] 吡啶 -3- 醇钠 ( 表 I 的化合物 35)
根据实施例 1 所述的方法， 起始于 0.8g 的 6- 肼基 -N- 甲基 -N- 吡啶 -2- 基吡 啶 -3- 磺酰胺和 0.76g 的 1- 苄基 -3， 6- 二氧代哌啶 -2- 甲酸乙酯 ( 其根据 Tetrahedron， Vol.40， No.13p.2505 得到 )， 获得 220mg 预期化合物， 其为白色固体形式， 其溶于 6mL 水 /CH3CN 混合物 (5/1) 和 1 当量的 1N NaOH 中， 然后冷冻干燥。如此得到 225mg 的 4- 苄 基 -2-{5-[ 乙基 ( 苯基 ) 氨基磺酰基 ] 吡啶 -2- 基 }-5- 氧代 -4， 5， 6， 7- 四氢 -2H- 吡唑并 [4， 3-b] 吡啶 -3- 醇钠， 其为白色冻干物形式。
产率＝ 12％
m.p.(℃ ) ＞ 250
M ＝ C26H25N5O4S ＝ 503 ； M+H ＝ 504 ； 方法 2 ： Tr ＝ 1.16 分钟。 1
H NMR ，d6-DMSO ， 400MHz ，δ (ppm) ： 8.7(d ， 1H) ； 8.4(s ， 1H) ； 7.8(d ， 1H) ； 7.5-7.1(m， 10H) ； 4.7(s， 2H) ； 4.2(s， 2H) ； 3.6(q， 2H) ； 3.1(s， 2H) ； 1.0(t， 3H)。
实施例 9 ： 2-(4- 乙基吡啶 -2- 基 )-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠 ( 表 II 的化合物 57)
9.1.4- 乙基 -2- 肼基吡啶
在 0 至 10℃的温度向在 0℃的 5g(40.9mmol)4- 乙基吡啶 -2- 胺在 10mL 浓 H2SO4 中 的溶液中添加 8mL H2SO4/HNO3 混合物 (1/1)， 且在 0℃持续搅拌 1 小时。然后将反应介质倒 在 100g 冰上， 且滤出所得白色沉淀并连续用 10mL 水、 10mL Et2O 和 10mL 戊烷洗涤。在 0℃ 将所得固体溶于 100mL 的 10N NaOH 中， 添加 7.76g(187mmol) 锌粉， 然后将反应介质在 0℃ 搅拌 3 小时。然后将反应介质通过硅藻土过滤， 且滤液用 EtOAc(3×200mL) 萃取。合并有 机相， 用 Na2SO4 干燥， 过滤然后在减压下浓缩。得到 4.3g 的 4- 乙基 -2- 肼基吡啶， 其为红 色油状物形式， 其不用进一步纯化直接用于以下步骤。
产率＝ 77％ 1
H NMR， CDCl3， 400MHz， δ(ppm) ： 7.9(d， 1H) ； 7.2(bs， 1H) ； 6.5(s， 1H) ； 6.4(d， 1H) ； 4.1(s， 2H) ； 2.5(q， 2H) ； 1.1(t， 3H)。
9.2.2-(4- 乙基吡啶 -2- 基 )-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠
根据实施例 8 所述的方法， 起始于 0.88g 的 4- 乙基 -2- 肼基吡啶和 1.0g 的 4- 氧 代四氢噻吩 -3- 甲酸甲酯， 得到 225mg 的 2-(4- 乙基吡啶 -2- 基 )-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠， 其为白色冻干物形式。
产率＝ 15％
m.p.(℃ ) ＞ 260℃
M ＝ C12H13N3OS ＝ 247 ； M+H ＝ 248 ； 方法 2 ： Tr ＝ 1.05 分钟。 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 8.2(s， 1H) ； 8.1(d， 1H) ； 6.7(d， 1H) ； 3.7(s， 2H) ； 3.5(s， 2H) ； 2.5(q， 2H) ； 1.1(t， 3H)。
实施例 10 ： 2-{5-[ 叔丁基 ( 甲基 ) 氨基磺酰基 ] 吡啶 -2- 基 }-2， 6- 二氢 -4H- 噻 吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠 ( 表 I 的化合物 36)
10.1.N- 叔丁基 -6- 氯吡啶 -3- 磺酰胺
根 据 实 施 例 4.1 所 述 的 方 法， 起 始 于 2g(9.43mmol)6- 氯 吡 啶 -3- 磺 酰 氯 和 0.99mL(9.43mmol) 叔丁基胺， 得到 1.91g 的 N- 叔丁基 -6- 氯吡啶 -3- 磺酰胺， 其为白色固
体形式。 产率＝ 82％ 1
H NMR， CDCl3， 400MHz， δ(ppm) ： 8.8(d， 1H) ； 8(dd， 1H) ； 7.4(d， 1H) ； 4.5(bs， 1H) ； 1.2(s， 9H)。
10.2.N- 叔丁基 -6- 氯 -N- 甲基吡啶 -3- 磺酰胺
将 0.97g(3.9mmol)N- 叔丁基 -6- 氯吡啶 -3- 磺酰胺， 2.43mL(39mmol) 碘甲烷和 5.4g(39mmol)K2CO3 在 40mL 丙酮中的混合物回流 12 小时。该反应介质在室温过滤， 且滤液 在减压下浓缩。将所得残余物在硅胶上纯化， 用 0 至 20％ EtOAc 的环己烷 /EtOAc 梯度液洗 脱， 得到 0.66g 的 N- 叔丁基 -6- 氯 -N- 甲基吡啶 -3- 磺酰胺， 其为黄色固体形式。
产率＝ 65％ 1
H NMR， CDCl3， 400MHz， δ(ppm) ： 8.8(d， 1H) ； 8(dd， 1H) ； 7.4(d， 1H) ； 3(s.3H) ； 1.4(s， 9H)。
10.3.N- 叔丁基 -6- 肼基 -N- 甲基吡啶 -3- 磺酰胺
根据实施例 4.2 所述的方法， 起始于 0.66g(2.53mmol)N- 叔丁基 -6- 氯 -N- 甲基吡 啶 -3- 磺酰胺和 0.46mL 肼一水合物， 得到 0.55g 的 N- 叔丁基 -6- 肼基 -N- 甲基吡啶 -3- 磺 酰胺， 其为白色固体形式， 其不用进一步纯化直接用于以下步骤。
产率＝ 84％ 1
H NMR， CDCl3， 400MHz， δ(ppm) ： 8.8(d， 1H) ； 8(dd， 1H) ； 7(d， 1H) ； 6.6(bs， 1H) ； 4.1(bs， 2H) ； 3.1(s， 3H) ； 1.5(s， 9H)。
10.4.2-{5-[ 叔丁基 ( 甲基 ) 氨基磺酰基 ] 吡啶 -2- 基 }-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠
根据实施例 8 所述的方法， 起始于 0.55g 的 N- 叔丁基 -6- 肼基 -N- 甲基吡啶 -3- 磺 酰胺和 0.34g 的 4- 氧代四氢噻吩 -3- 甲酸甲酯， 得到 0.34g 的 2-{5-[ 叔丁基 ( 甲基 ) 氨 基磺酰基 ] 吡啶 -2- 基 }-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠， 其为白色冻干物 形式。
产率＝ 67％
m.p.(℃ ) ＝ 130
M ＝ C15H20N4O3S2 ＝ 368 ； M+H ＝ 369 ； 方法 2 ： Tr ＝ 1.09 分钟。 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 8.6(m， 2H) ； 8.0(s， 1H) ； 3.75(s， 2H) ； 3.6(s， 2H) ； 2.9(s， 3H) ； 1.3(s， 9H)。
实施例 11 ： 2-[5-( 叔丁基氨基甲酰基 ) 吡啶 -2- 基 ]-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠 ( 表 I 的化合物 33)
11.1.6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 甲酸 根据实施例 1 所述的方法， 起始于 1.75g 的 6- 肼基吡啶 -3- 甲酸和 1.8g 的 4- 氧 代四氢噻吩 -3- 甲酸甲酯， 得到 2.5g 的 6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡 唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 甲酸， 其为黄色固体形式。
产率＝ 94％ 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 12.5(bs， 1H) ； 9.0(s， 1H) ； 8.4(d， 1H) ； 8.3(bs， 1H) ； 4.1(s， 2H) ； 3.8(s， 2H)。
11.2.2-[5-( 叔丁基氨基甲酰基 ) 吡啶 -2- 基 ]-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠
向冷却至 0℃的 200mg(0.84mmol)6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡 唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 甲酸， 90μl(0.84mmol) 叔丁基胺和 0.46mL 的 DIEA 在 3mL CH3CN 中的混合物中添加 365mg 的 TBTU。 然后将该反应介质缓慢温热至室温， 且持续搅拌 12 小时。 该反应介质在减压下浓缩， 且将所得残余物溶于 20mL 水， 并用 DCM(3×20mL) 萃取， 用 Na2SO4 干燥， 过滤且在减压下浓缩， 并通过硅胶纯化， 用 0 至 10％ MeOH 的 DCM/MeOH 梯度液洗脱。 得到 66mg 预期化合物， 将其溶于 2mL 水 /CH3CN 混合物 (5 ∶ 1) 和 1 当量的 1N NaOH 中， 然 后冷冻干燥。得到 66mg 的 2-[5-( 叔丁基氨基甲酰基 ) 吡啶 -2- 基 ]-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩 并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠， 其为白色冻干物形式。
产率＝ 25％
m.p.(℃ ) ＞ 260℃
M ＝ C15H17N4O2S ＝ 317 ； M+H ＝ 318 ； 方法 2 ： Tr ＝ 0.94 分钟。 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 8.7(s， 1H) ； 8.5(d， 1H) ； 8.1(d， 1H) ； 7.6(s， 1H) ； 3.75(s， 1H) ； 3.6(s， 2H) ； 1.4(s， 9H)。
实 施 例 12 ： 6-(3- 氧 代 -4， 6- 二 氢 -1H- 噻 吩 并 [3， 4-c] 吡 唑 -2(3H)- 基 ) 吡 啶 -3- 甲酸叔丁酯 ( 表 I 的化合物 30)
12.1.6- 氯吡啶 -3- 甲酸叔丁酯向 1g(6.35mmol)6- 氯 吡 啶 -3- 甲 酸 在 10mL 回 流 甲 苯 中 的 悬 浮 液 中 滴 加 7.6mL(31.75mmol)1， 1- 二 - 叔丁氧基 -N， N- 二甲基甲胺， 且然后将反应介质回流 30 分钟。 冷却至室温后， 将反应介质溶于 200mL 的 EtOAc， 连续用水 (2×100mL)、 饱和 NaHCO3 溶液 (100mL) 和盐水 (100mL) 洗涤， 用 Na2SO4 干燥， 过滤且在减压下浓缩。得到 1.16g 的 6- 氯 吡啶 -3- 甲酸叔丁酯， 其为黄色油状物形式， 其不用进一步纯化直接用于以下步骤。
产率＝ 86％ 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 8.8(s， 1H) ； 8.2(d， 1H) ； 7.3(d， 1H) ； 1.5(s， 9H)。
12.2.6- 肼基吡啶 -3- 甲酸叔丁酯
根据实施例 4.2 所述的方法， 起始于 1.16g 的 6- 氯吡啶 -3- 甲酸叔丁酯和 1mL 水 合肼， 得到 900mg 固体形式的 6- 肼基吡啶 -3- 甲酸叔丁酯， 其不用进一步纯化直接用于以 下步骤。
产率＝ 79％ 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 8.7(s， 1H) ； 8.0(d， 1H) ； 6.6(d， 1H) ； 6.3(bs， 1H) ； 3.2(bs， 2H) ； 1.5(s， 9H)。
12.3.6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 甲 酸叔丁酯
根据实施例 1 所述的方法， 起始于 0.75g 的 6- 肼基吡啶 -3- 甲酸叔丁酯和 0.58g 4- 氧代四氢噻吩 -3- 甲酸甲酯， 得到 0.7g 的 6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 甲酸叔丁酯， 其为白色固体形式。
产率＝ 61％
m.p.(℃ ) ＞ 250℃
M ＝ C15H17N3O3S ＝ 319 ； M+H ＝ 320 ； 方法 2 ： Tr ＝ 1.27 分钟 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 8.9(s， 1H) ； 8.4(d， 1H) ； 8.2(d， 1H) ； 4.0(s， 2H) ； 3.7(s， 2H)， 3.4(bs， 1H) ； 1.6(s， 9H)。
实施例 13 ： 2-[5-( 丙烷 -2- 基 ) 吡啶 -2- 基 ]-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡 唑 -3- 醇钠 ( 表 I 的化合物 44)
13.1.5-( 丙 -1- 烯 -2- 基 ) 吡啶 -2- 胺
将 2g(11.56mmol)5- 溴 吡 啶 -2- 胺、 2.39mL(13.87mmol)4， 4， 5， 5- 四 甲 基 -2-( 丙 -1- 烯 -2- 基 )-1， 3， 2- 二氧杂硼杂环戊烷和 3.83g(27.74mmol)K2CO3 在 30mL DME 和 10mL 水中的混合物在氩气下搅拌 5 分钟， 然后添加 1g(2.1mmol) 二 ( 三 - 叔丁基 膦 ) 合钯。将反应介质在 80℃加热 3 小时。冷却至室温后， 将反应介质溶于 40mL 水且用 EtOAc(3×30mL) 萃取。有机相用 0.5N HCl 溶液 (3×30mL) 洗涤。水相用 1N 氢氧化钠溶 液中和， 然后用 EtOAc(2×50mL) 萃取。合并的有机相用 Na2SO4 干燥， 过滤且在减压下浓缩。 得到 1.10g 的 5-( 丙 -1- 烯 -2- 基 ) 吡啶 -2- 胺， 其为黄色固体形式， 其不用进一步纯化直
接用于以下步骤。
产率＝ 71％ 1
H NMR， CDCl3， 400MHz， δ(ppm) ： 8.0(s， 1H) ； 7.6(d， 1H) ； 6.5(d， 1H) ； 5.3(s， 1H) ； 5.0(s， 1H) ； 4.5(bs， 2H) ； 2.1(s， 3H)。
13.2.5-( 丙烷 -2- 基 ) 吡啶 -2- 胺
在 Parr 烧瓶中， 将在 40mL 的 MeOH 中的 1.1g(8.2mmol)5-( 丙 -1- 烯 -2- 基 ) 吡 啶 -2- 胺和 0.11g 的 10％ Pd/C 的混合物在 7 巴氢化 24 小时。然后通过 Whatman GF/F 纸 过滤反应混合物， 且在减压下浓缩。得到 1.07g 的 5-( 丙烷 -2- 基 ) 吡啶 -2- 胺， 其为黄色 油状物形式， 其不用进一步纯化直接用于以下步骤。
产率＝ 96％。 1
H NMR， CDCl3， 400MHz， δ(ppm) ： 8.0(s， 1H) ； 7.4(dd， 1H) ； 6.5(d， 1H) ； 4.4(bs， 2H) ； 2.8(m， 1H) ； 1.2(s， 6H)。
13.3.2- 肼基 -5-( 丙烷 -2- 基 ) 吡啶
根据实施例 9.1 所述的方法， 起始于 1.07g 的 5-( 丙烷 -2- 基 ) 吡啶 -2- 胺， 得到 0.52g 的 2- 肼基 -5-( 丙烷 -2- 基 ) 吡啶， 其为棕色油状物形式。
产率＝ 44％。
13.4.2-[5-( 丙 烷 -2- 基 ) 吡 啶 -2- 基 ]-2， 6- 二 氢 -4H- 噻 吩 并 [3， 4-c] 吡 唑 -3- 醇钠
根据实施例 8 所述的方法， 起始于 520mg 的 2- 肼基 -5-( 丙烷 -2- 基 ) 吡啶和 251mg 的 4- 氧代四氢噻吩 -3- 甲酸甲酯， 得到 102mg 的 2-[5-( 丙烷 -2- 基 ) 吡啶 -2- 基 ]-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠， 其为冻干物形式。
产率＝ 11％
m.p.(℃ ) ＞ 260℃
M ＝ C13H15N3OS ＝ 261 ； M+H ＝ 262 ； 方法 2 ： Tr ＝ 1.26 分钟 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 8.4(d， 1H) ； 8.1(s， 1H) ； 7.6(dd， 1H) ； 3.7(s， 2H) ； 3.6(s， 2H) ； 2.9(qt， 1H) ； 1.2(s， 6H)。
实施例 14 ： 2-[4-( 吡啶 -3- 基甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ]-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠 ( 表 II 的化合物 60)
14.1.2- 氯 -4-( 吡啶 -3- 基甲氧基 ) 吡啶
将 2g(15.4mmol)2- 氯吡啶 -4- 醇、 3.82g(15.1mmol)3-( 溴甲基 ) 吡啶氢溴化物、 3g(75.6mmol) 氢氧化钠和 1.39g(4.3mmol) 四丁基溴化铵在 90mL 甲苯中的混合物回流 12 小时。冷却至室温后， 将反应介质溶于 300mL EtOAc 中， 连续用水 (2×100mL)、 饱和 NaHCO3 溶液 (100mL) 和盐水 (100mL) 洗涤， 用 Na2SO4 干燥， 过滤， 在减压下浓缩， 然后通过硅胶色谱
法纯化， 用 98/2 的 DCM/MeOH 混合物洗脱。得到 2.5g 的 2- 氯 -4-( 吡啶 -3- 基甲氧基 ) 吡 啶， 其为黄色油状物形式。
产率＝ 73％ 1
H NMR， CDCl3， 400MHz， δ(ppm) ： 8.7(s， 1H) ； 8.6(d， 1H) ； 8.25(d， 1H) ； 7.8(d， 1H) ； 7.4(dd， 1H) ； 7.0(s， 1H) ； 6.8(d， 1H) ； 5.1(s， 2H)。
14.2.2- 肼基 -4-( 吡啶 -3- 基甲氧基 ) 吡啶
将 0.5g(2.27mmol)2- 氯 -4-( 吡啶 -3- 基甲氧基 ) 吡啶和 2mL(40.5mmol) 水合肼 的混合物在 80℃加热 12 小时。然后将反应介质溶于 30mL 水中， 并用 EtOAc(3×30mL) 萃 取。合并有机相， 用盐水 (20mL) 洗涤， 然后用 Na2SO4 干燥， 过滤， 在减压下浓缩且通过硅胶 纯化， 用 95/5 的 DCM/MeOH 混合物洗脱。得到 197mg 的 2- 肼基 -4-( 吡啶 -3- 基甲氧基 ) 吡啶， 其为黄色油状物形式。
产率＝ 37％ 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 8.7(s， 1H) ； 8.5(d， 1H) ； 7.9(d， 1H) ； 7.8(d， 1H) ； 7.4(dd， 1H) ； 7.3(s， 1H) ； 5.2(s， 2H) ； 4.1(s， 2H)。
14.3.2-[4-( 吡啶 -3- 基甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ]-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠 根据实施例 8 所述的方法， 起始于 197mg 的 2- 肼基 -4-( 吡啶 -3- 基甲氧基 ) 吡 啶和 146mg 的 4- 氧代四氢噻吩 -3- 甲酸甲酯， 得到 225mg 的 2-(4- 乙基吡啶 -2- 基 )-2， 6- 二氢 -4H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 醇钠， 其为白色冻干物形式。
产率＝ 48％
m.p.(℃ ) ＞ 260℃
M ＝ C16H14N4O2S ＝ 326 ； M+H ＝ 327 ； 方法 2 ： Tr ＝ 0.71 分钟。 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 8.8(s， 1H) ； 8.6(d， 1H) ； 8.2(s， 1H) ； 8.1(d， 1H) ； 8.0(d， 1H) ； 7.5(t， 1H) ； 6.5(d， 1H) ； 5.2(s， 2H) ； 3.75(s， 2H) ； 3.5(s， 2H)。
实施例 15A ： 2-[5-(3- 叔丁基 -1， 2， 4-二唑 -5- 基 ) 吡啶 -2- 基 ]-1， 2， 4， 6- 四氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮 ( 表 I 的化合物 50A)
15A.1.5-(3- 叔丁基 -1， 2， 4-二唑 -5- 基 )-2- 氯吡啶在 Dean-stark 装置中， 向 3.8g(21.5mmol)6- 氯吡啶 -3- 甲酰氯在 100mL 甲苯中 的溶液分批添加 2.5g(21.5mmol)N- 羟基 -2， 2- 二甲基丙脒 (propanimidamide)， 且反应介 质在室温搅拌 2 小时， 然后加热 2 小时。冷却至室温后， 将该介质在减压下浓缩且通过硅 胶色谱法纯化， 用 0 至 10％ EtOAc 的环己烷 /EtOAc 梯度液洗脱。得到 4.1g 的 5-(3- 叔丁 基 -1， 2， 4
二唑 -5- 基 )-2- 氯吡啶， 其为白色固体形式。产率＝ 81％ 1 H NMR， CDCl3， 400MHz， δ(ppm) ： 9.2(s， 1H) ； 8.4(dd， 1H) ； 7.5(d， 1H) ； 7.8(d， 1H) ；1.4(s， 9H)。
15A.2.5-(3- 叔丁基 -1， 2， 4-二唑 -5- 基 )-2- 肼基吡啶 二根 据 实 施 例 4.2 所 述 的 方 法， 起 始 于 2g 的 5-(3- 叔 丁 基 -1， 2， 4-唑 -5- 基 )-2- 氯吡啶和 3.9mL 水合肼， 得到固体形式的 1.9g 的 5-(3- 叔丁基 -1， 2， 4二唑 -5- 基 )-2- 肼基吡啶， 其不用进一步纯化直接用于以下步骤。
产率＝ 97％ 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 8.7(s， 1H) ； 8.1(d， 1H) ； 6.9(d， 1H) ； 6.5(bs， 1H) ； 3.5(bs， 2H) ； 1.3(s， 9H)。
15A.3.2-[5-(3- 叔 丁 基 -1， 2， 4-二 唑 -5- 基 ) 吡 啶 -2- 基 ]-1， 2， 4， 6- 四 二氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮
根 据 实 施 例 1 所 述 的 方 法， 起 始 于 0.6g 的 5-(3- 叔 丁 基 -1， 2， 4-唑 -5- 基 )-2- 肼 基 吡 啶 和 0.41g 的 4- 氧 代 四 氢 噻 吩 -3- 甲 酸 甲 酯， 得 到 0.32g 的 2-[5-(3- 叔丁基 -1， 2， 4二唑 -5- 基 ) 吡啶 -2- 基 ]-1， 2， 4， 6- 四氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮， 其为白色固体形式。
产率＝ 38％
m.p.(℃ ) ＝ 240℃
M ＝ C16H17N5O2S ＝ 343 ； M+H ＝ 344 ； 方法 2 ： Tr ＝ 1.34 分钟。 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 12.3(bs， 1H) ； 9.1(s， 1H) ； 8.6(d， 1H) ； 8.4(d， 1H) ； 4.0(s， 2H) ； 3.8(s， 2H) ； 1； 4(s， 9H)。
实施例 15B ： 2-[5-(5- 叔丁基 -1， 2， 4-二唑 -3- 基 ) 吡啶 -2- 基 ]-1， 2， 4， 6- 四氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮 ( 表 I 的化合物 50B)
15B.15-(5- 叔丁基 -1， 2， 4-二唑 -3- 基 )-2- 氯吡啶将 1.5g(8.74mmol)6- 氯 -N’ - 羟 基 吡 啶 -3- 甲 脒 (carboximidamide) 和 1.13mL(9.18mmol) 三甲基乙酰氯在 15mL 甲苯中的混合物在室温搅拌 1 小时， 然后回流 4 小 时。过滤该介质。将形成的不溶物质溶于 15mL AcOH， 然后在 60℃加热 5 小时。冷却至室 温后， 将该介质在减压下浓缩， 然后通过硅胶色谱法纯化， 用环己烷 /EtOAc 混合物 (9/1) 洗 脱。得到 0.39g 的 5-(5- 叔丁基 -1， 2， 4
二唑 -3- 基 )-2- 氯吡啶， 其为白色固体形式。 二 唑 -3- 基 ) 吡 啶 -2- 基 ]-1， 2， 4， 6- 四 二产率＝ 21％。 15.B2 2-[5-(5- 叔 丁 基 -1， 2， 4-氢 -3H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -3- 酮 ( 表 I 的化合物 50B)
该 化 合 物 根 据 方 法 15.A2-15.A3 获 得， 起 始 于 5-(5- 叔 丁 基 -1， 2， 4-唑 -3- 基 )-2- 氯吡啶和 4- 氧代四氢噻吩 -3- 甲酸甲酯， 其为白色固体形式。
m.p.(℃ ) ＝ 240℃
M ＝ C16H17N5O2S ＝ 343 ； M+H ＝ 344 ； 方法 2 ： Tr ＝ 1.39 分钟。33102333776 A CN 102333790
1说明书26/51 页H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 12.3(bs， 1H) ； 9.1(s， 1H) ； 8.5(d， 1H) ； 8.4(d， 1H) ； 4.1(s， 2H) ； 3.8(s， 2H) ； 1.5(s， 9H)。
实施例 16 ： N- 环戊基 -N-(2， 3- 二羟基丙基 )-6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺 ( 表 I 的化合物 53)
16.1.6- 氯 -N- 环戊基吡啶 -3- 磺酰胺
根据方法 4.1， 起始于 5g 的 6- 氯吡啶 -3- 磺酰氯和 2g 环戊基胺， 得到 5.1g 的 6- 氯 -N- 环戊基吡啶 -3- 磺酰胺， 其为黄色固体形式。
产率＝ 83％ 1
H NMR， CDCl3， 400MHz， δ(ppm) ： 8.9(s， 1H) ； 8.0(d， 1H) ； 7.4(d， 1H) ； 4.5(d， 1H) ； 3.6(q， 1H) ； 1.8-1.2(m， 8H)。
16.26- 氯 -N- 环戊基 -N-( 丙 -2- 烯 -1- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺
根据方法 10.2， 起始于 1g 的 6- 氯 -N- 环戊基吡啶 -3- 磺酰胺和 0.42mL 烯丙基 溴， 得到 1.2g 的 6- 氯 -N- 苯基 -N-( 丙 -2- 烯 -1- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺， 其为橙色油状物。
产率＝ 94％ 1
H NMR， CDCl3， 400MHz， δ(ppm) ： 8.9(s， 1H) ； 8.0(d， 1H) ； 7.4(d， 1H) ； 5.7(dd， 1H) ； 5.2(dd， 1H) ； 5.1(d， 1H) ； 4.2(m， 1H) ； 3.7(d， 2H) ； 1.8-1.2(m， 8H)。
16.3.6- 氯 -N- 环戊基 -N-(2， 3- 二羟基丙基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺
在 室 温 向 1.1g(3.7mmol)6- 氯 -N- 环 戊 基 -N-( 丙 -2- 烯 -1- 基 ) 吡 啶 -3- 磺 酰胺在 15mL tBuOH 和水的混合物 (1/1) 中的溶液中添加 tBuOH 中的 1.2g(10.3mmol)NMO 和 0.52mL(0.04mmol)2.5 ％ OsO4。持续搅拌 12 小时。然后将介质用 200mL 水稀释， 且用 Et2O(2×100mL) 萃取， 用 Na2SO4 干燥， 过滤且在减压下浓缩。得到 0.92g 的 6- 氯 -N- 环戊 基 -N-(2， 3- 二羟基丙基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺， 其为棕色固体形式， 其不用进一步纯化直接用 于以下步骤。
产率＝ 75％。 1
H NMR， CDCl3， 400MHz， δ(ppm) ： 8.8(s， 1H) ； 8.1(d， 1H) ； 7.5(d， 1H) ； 4.3(m， 1H) ； 4.0(m， 1H) ； 3.6(dd， 2H) ； 3.2(dd， 2H) ； 1.8-1.4(m， 10H)。
16.4.6- 氯 -N- 环戊基 -N-[(2， 2- 二甲基 -1， 3- 二氧杂环戊烷 -4- 基 ) 甲基 ] 吡 啶 -3- 磺酰胺
将 0.83g(2.48mmol)6- 氯 -N- 环戊基 -N-(2， 3- 二羟基丙基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺、 0.67mL(5.45mmol)2， 2- 二甲氧基丙烷和 47mg pTsOH 在 5mL DMF 中的混合物在室温搅拌 3 小时。将该介质溶于 100mL EtOAc， 用 50mL 饱和 NaHCO3 溶液和 50mL 水洗涤， 然后用 Na2SO4 干燥， 过滤且在减压下浓缩。得到 0.92g 的 6- 氯 -N- 环戊基 -N-[(2， 2- 二甲基 -1， 3- 二氧 杂环戊烷 -4- 基 ) 甲基 ] 吡啶 -3- 磺酰胺， 其为棕色油状物形式， 其不用进一步纯化直接用 于以下步骤。
产率＝ 98％ . 1
H NMR， CDCl3， 400MHz， δ(ppm) ： 8.8(s， 1H) ； 8.0(d， 1H) ； 7.3(d， 1H) ； 4.3(m， 1H) ； 4.0(m， 2H) ； 3.7(m， 1H)， 3.3(dd， 1H) ； 3.1(dd， 1H) ； 1.8-1.3(m， 8H) ； 1.3(s， 3H) ； 1.2(s， 3H)。
16.5.N- 环戊基 -N-[(2， 2- 二甲基 -1， 3- 二氧杂环戊烷 -4- 基 ) 甲基 ]-6- 肼基吡 啶 -3- 磺酰胺
根据方法 4.2， 起始于 0.92g 的 6- 氯 -N- 环戊基 -N-[(2， 2- 二甲基 -1， 3- 二氧杂 环戊烷 -4- 基 ) 甲基 ] 吡啶 -3- 磺酰胺和 0.24mL 水合肼， 得到 0.85g 的 N- 环戊基 -N-[(2， 2- 二甲基 -1， 3- 二氧杂环戊烷 -4- 基 ) 甲基 ]-6- 肼基吡啶 -3- 磺酰胺， 其为黄色油状物形 式。
产率＝ 99％。
16.6.N- 环戊基 -N-[(2， 2- 二甲基 -1， 3- 二氧杂环戊烷 -4- 基 ) 甲基 ]-6-(3- 氧 代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺
根 据 方 法 1， 起 始 于 0.4g 的 N- 环 戊 基 -N-[(2， 2- 二 甲 基 -1， 3- 二 氧 杂 环 戊 烷 -4- 基 ) 甲基 ]-6- 肼基吡啶 -3- 磺酰胺和 0.173g 的 4- 氧代四氢噻吩 -3- 甲酸甲酯， 得到 470mg 的 N- 环戊基 -N-[(2， 2- 二甲基 -1， 3- 二氧杂环戊烷 -4- 基 ) 甲基 ]-6-(3- 氧 代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺， 其为棕色固体形式。
产率＝ 97％。
16.7.N- 环戊基 -N-(2， 3- 二羟基丙基 )-6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺
将 470mg(0.54mmol)6N- 环戊基 -N-[(2， 2- 二甲基 -1， 3- 二氧杂环戊烷 -4- 基 ) 甲基 ]-6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺在 1mL AcOH 中的溶液在 80℃加热 4 小时。将该介质在减压下浓缩， 然后通过反相色谱法在 -3 C18 柱上纯化， 用 0 至 100％ CH3CN 的 10 N HCl/CH3CN 梯度液洗脱。得到 48mg 的 N- 环戊 基 -N-(2， 3- 二羟基丙基 )-6-(3- 氧代 -4， 6- 二氢 -1H- 噻吩并 [3， 4-c] 吡唑 -2(3H)- 基 ) 吡啶 -3- 磺酰胺， 其为白色固体形式。
产率＝ 30％
m.p.(℃ ) ＝ 190
M ＝ C18H24N4O5S2 ＝ 440 ； M+H ＝ 441 ； 方法 2 ： Tr ＝ 0.89 分钟。 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 12.1(bs， 1H) ； 8.7(s， 1H) ； 8.3(bs， 1H) ； 8.2(d， 1H) ； 4.7(s， 1H) ； 4.5(t， 1H) ； 4.1(m， 1H) ； 3.9(s， 2H) ； 3.6(m， 3H) ； 3.4-3.2(m， 3H) ； 2.8(dd， 1H) ； 1.7-1.2(m， 8H)。
实施例 17 ： 6-[5-( 甲基磺酰基 )-3- 氧代 -1， 3， 4， 5， 6， 7- 六氢 -2H- 吡唑并 [4， 3-c] 吡啶 -2- 基 ] 吡啶 -3- 甲酸 2， 2- 二甲基丙基酯 ( 表 I 的化合物 54)
17.1.1-( 甲基磺酰基 )-4- 氧代哌啶 -3- 甲酸甲酯在室温向 1g(6.36mmol)4- 氧代哌啶 -3- 甲酸甲酯盐酸盐和 2.2mL Et3N 在 12mL DCM 中的混合物中滴加 0.5mL 甲磺酰氯。将反应介质搅拌 1 小时， 然后溶于 50mL EtOAc 中， 用 20mL 水和 20mL 盐水洗涤， 然后用 Na2SO4 干燥， 过滤且在减压下浓缩。 得到 0.35g 的 1-( 甲 基磺酰基 )-4- 氧代哌啶 -3- 甲酸甲酯。
产率＝ 23％。
17.2.6- 氯吡啶 -3- 甲酸 2， 2- 二甲基丙基酯
在室温在氩气下向 10g(56.8mmol)6- 氯吡啶 -3- 甲酰氯在 100mL 无水甲苯中的溶 液添加 15g(170.4mmol)2， 2- 二甲基丙醇。然后将反应介质在 80℃加热 6 小时。冷却至室 温后， 浓缩介质且所得残余物溶于 800mL EtOAc 中， 连续用水 (2×200mL)、 饱和 NaHHCO3 溶 液 (2×200mL) 和盐水 (100mL) 洗涤， 用 Na2SO4 干燥， 然后在减压下浓缩， 通过色谱法在硅胶 柱上纯化， 用 0 至 5％ EtOAc 的环己烷 /EtOAc 梯度液洗脱。得到 11.9g 的 6- 氯吡啶 -3- 甲 酸 2， 2- 二甲基丙基酯， 为白色粉末形式。
产率＝ 92％。 1
H NMR， CDC13， 400MHz， δ(ppm) ： 7.5(m， 5H) ； 4.2(m， 5H) ； 3.0(dd， 2H ； 1.0(t， 6H)。
17.3.6- 肼基吡啶 -3- 甲酸 2， 2- 二甲基丙基酯
根据实施例 4.2 所述的方法， 起始于 11.9g(52.26mmol)6- 氯吡啶 -3- 甲酸 2， 2- 二 甲基丙基酯， 得到 4.3g 的 6- 肼基吡啶 -3- 甲酸 2， 2- 二甲基丙基酯， 其为白色粉末形式。
产率＝ 37％ 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 8.7(s， 1H) ； 8.15(d， 1H) ； 6.9(d， 1H) ； 4.0(s， 2H) ； 3.5(bs， 1H) ； 1.0(s， 9H)。
17.4.6-[5-( 甲基磺酰基 )-3- 氧代 -1， 3， 4， 5， 6， 7- 六氢 -2H- 吡唑并 [4， 3-c] 吡 啶 -2- 基 ] 吡啶 -3- 甲酸 2， 2- 二甲基丙基酯
根据方法 1， 起始于 0.21g 的 1-( 甲基磺酰基 )-4- 氧代哌啶 -3- 甲酸甲酯和 0.2g 的 6- 肼基吡啶 -3- 甲酸 2， 2- 二甲基丙基酯， 得到 10mg 的 6-[5-( 甲基磺酰基 )-3- 氧代 -1， 3， 4， 5， 6， 7- 六氢 -2H- 吡唑并 [4， 3-c] 吡啶 -2- 基 ] 吡啶 -3- 甲酸 2， 2- 二甲基丙基酯。
产率＝ 3％
m.p.(℃ ) ＝ 230
M ＝ C18H24N4O5S ＝ 408 ； M+H ＝ 409 ； 方法 2 ： Tr ＝ 1.11 分钟。 1
H NMR， d6-DMSO， 400MHz， δ(ppm) ： 12.2(bs， 1H) ； 9.0(s， 1H) ； 8.6(bs， 1H) ； 8.5(d， 1H) ； 4.1(s， 2H) ； 4.0(s， 2H) ； 3.5(t， 2H) ； 3.0(s， 3H) ； 2.8(t， 2H) ； 1.0(s， 9H)。
下表例示了根据本发明的化合物的一些实施例的化学结构和物理性质。
表 I 例示了根据本发明的式 (I) 化合物， 其中 R2 在 β 位。这些化合物在下文称 为式 (I’ ) 化合物。
表 II 例示了根据本发明的式 (I) 化合物， 其中 R2 在 γ 位。这些化合物在下文称 为式 (I” ) 化合物。
以下表 I 和 II 例示了根据本发明的化合物的一些实施例的化学结构和物理性质。
在这些表中 ：
-在 “盐” 栏中， “-” 表示游离碱形式的化合物， 而 “CF3COOH” 、 “HCl” 和 “Na” 分别 表示三氟乙酸盐形式、 盐酸盐形式和钠盐形式的化合物 ；- 在其它栏中， “-” 意指所考虑的取代基不存在于分子上 ；
-Me、 Et、 n-Pr、 i-Pr、 n-Bu 和 i-Bu 分别表示甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基和 异丁基 ；
-Ph 和 Bn 分别表示苯基和苄基 ；
-“m.p.” 栏表明所考虑的化合物的熔点， 以℃计 ； +
- 通过质谱鉴定的峰 MH ， 和在上文使用且详述的高效液相色谱分析方法， 分别在 “LC/MS” 栏和 “方法” 栏中指出。
根据本发明的化合物经受药理试验以测定它们的性质， 且特别是 ：
- 直接测量蛋白 HIF1-α 的稳定的体外测试， 该蛋白 HIF1-α 为在细胞中组成性表 达但在正常氧条件下被泛素 / 蛋白酶体系统降解的转录因子 ；
- 用于在 He3pB 细胞中测量 VEGF 和 EPO 的分泌的功能试验， VEGF 和 EPO 为肝细胞 中 HIF1-α 活化的两个标记。
所述两种测试如下所述。
1. 在 HEKEA 细胞中测量 HIF1-α 的稳定
1.1 目的
HIF 为参与细胞适应缺氧的转录因子。该转录因子最小为由两种蛋白， ARNT 和 HIF1-α 形成的杂二聚体。ARNT 在细胞中组成性且稳定地表达， 且转录复合物调节的主要 部分通过蛋白 HIF1-α 的稳定进行。实际上， 在常氧条件下 (20％， 约等于环境的氧值 )， 该 蛋白尤其在两种脯氨酸 ( 人蛋白的脯氨酸 402 和 564) 上经 HIF 脯氨酰 - 羟化酶羟基化， 导 致 von Hippell Lindau(VHL) 蛋白的结合。然后， VHL 与 HIF1-α 的结合通过泛素 / 蛋白 酶体系统导致 HIF1-α 的降解。在缺氧下 ( 在细胞测试中 O2 ＜ 5％ )， HIF 脯氨酰 - 羟化酶 被抑制， 其反映为细胞中 HIF1-α 蛋白的量的增加。该蛋白然后可与 ARNT 结合以转移至核 中并活化其靶基因。
由于 HIF 活化的基因参与细胞对缺氧和组织对缺血的适应性反应， 因此该目的在 于鉴别和表征在细胞中使 HIF1-α 稳定的化合物， 以放大或模拟其有益作用。
存在许多测试， 其描述了通过报道基因系统 (HRE- 荧光素酶 ) 或通过测量 HIF- 诱 导的蛋白 ( 例如 VEGF 或 EPO) 间接测量 HIF 的活性。 而且， 允许直接测量细胞中 HIF1-α 蛋 白的量的唯一测试为使用抗体的测试， 例如包括消耗细胞和时间的细胞提取相 ( 总溶解产 物或核萃取物 ) 的蛋白印迹， 因此限制化合物筛选能力。因此该目的在于开发一种灵敏的 筛选测试， 适合于 384- 孔板， 用于直接测量细胞核中 HIF1-α 蛋白的量。该测试在 HEK 细 胞 ( 来自肾腺癌的人上皮细胞 ) 中建立。
1.2 测试原理
该测试为基于酶互补原理的细胞测试， 本文使用的酶为 β- 半乳糖苷酶。 HEKEA 细 胞为稳定表达 ( 且在核中受限制 ) 突变体 β- 半乳糖苷酶 (Ω 片段， 也已知为 EA) 的 HEK 细胞 (DiscoverX 销售的系列 )。该构造仅当包含 Prolabel 互补片段的蛋白迁移至核中时 使其可获得 β- 半乳糖苷酶活性。
在该情况下， 包含 Prolabel 片段的感兴趣蛋白为 HIF1-α 或在两个脯氨酸 402 和 564 被丙氨酸替代的突变的 HIF1-α， 其 C- 端通过分子生物学 (Clontech 销售的 DiscoverX 载体 ) 与小互补肽片段 (Prolabel 或 ED， 约 4kDa) 融合。然后将编码嵌合蛋白 HIF1-α_ Prolabel 的载体转染至 HEKEA 细胞以得到稳定的克隆 (HEKEA_HIF1-αPLBL)。
将 细 胞 进 行 缺 氧 处 理 或 用 潜 在 HIF 活 化 剂 的 化 合 物 处 理 后 获 得 的 C- 端 Prolabel-“标记的” HIF1-α 蛋白的量通过向细胞中添加含 β- 半乳糖苷酶的化学发光底 物的溶胞缓冲液测量。
β- 半乳糖苷酶活性的测量与 Prolabel 的量成比例， 从而与迁移至细胞核中的 HIF1-α 的量成比例。
在内部平行地进行实验以证实单独的 Prolabel 片段在细胞中不稳定， 从而不允 许测量任何活性。
1.3 实验方案
1.3.1 实验计划
1) 在 D0 接种细胞
2) 在常氧下粘附 24 小时
3) 在 D+1 制备和添加产物 (Biomek 2000 和 FX)
4) 在常氧培养 6 小时
5) 对板读数 ( 通过发光 )1.3.2 接种细胞
用 Multidrop 在白色不透明底的 384- 孔板 (Greiner ref 3704) 中于 30μl 培养 基 (1％ FCS) 中以 10000 细胞 / 孔 ( 细胞板 ) 接种细胞。
1.3.3 处理
●稀释板 (DL 板 ) 的制备
测试产物以 3×10-2M 在 100％ DMSO 中制备， 然后在含有 0.1％ FCS(10μl 在 990μl -4 的 MEM 中 ) 的培养基中稀释至 3×10 M。 然后手动将其放置在称为稀释板 (dl) 的圆底 96- 孔 板的第 12 列 ( 各个化合物各 200μl)。然后用 Biomek 2000 制备 3×10-4M 至 10-9M 的完整 DL 板 ( 程序 ： 连续 10 点的范围 )。对于参照和对照， 将含有 0.1 ％ FCS 的 100μl 的 DMEM -3 加入至第 1 列， 将 100μl 的去铁胺 10 M 加入至第 2 列的孔 ABCD， 以及将 100μl 的去铁胺 -3 5×10 M 加入至第 2 列的孔 EFGH。
●细胞板中的 DL 板分布
用 Biomek FX 96 从 DL 板移取 3.3μL， 一式两份放入水平的 ( 第 1 至 24 列 ) 各 384- 孔细胞板 (HEKEA_HIF1αPLBL 细胞板 ) 中。
然后在培养箱中在 37℃ ( 环境 O2， 6％ CO2) 将细胞放置 6 小时。
1.3.4β- 半乳糖苷酶活性的测量
所用的试剂盒为 Prolabel 的化学发光试剂盒 (Ref 93-0001 DiscoverX)。
在 37 ℃培养 6 小时后， 加入 15μl 含有 β- 半乳糖苷酶底物 (19 体积的 Path hunter 细 胞 (Path hunter cell) 测 定 缓 冲 液 +5 体 积 的 Emarald II 溶 液 +1 体 积 的 Galacton star) 的溶胞缓冲液溶解细胞， 通过直接将其加入至板中的 30μl 培养基中。将 板在避光环境培养 60 分钟， 然后用 Top Count 仪读取发光。然后用合适的拟合软件计算化 合物的 EC50 值， 其在下表 III 中给出。
化合物对 HIF 的激活活性通过产生 50％最大响应的该化合物的分子浓度给出。
表 III
化合物号 1 7 9 13 15 16 17 EC50(M) 8.8E-06 6.0E-06 1.4E-06 5.2E-06 1.6E-05 8.6E-06 1.0E-054.4E-06 5.5E-06 3.4E-06 8.7E-06 1.2E-05 3.E-06 3.3E-06 1.5E-06 9.5E-06 1.6E-06 2.5E-06 6.5E-07 1.3E-06 9.4E-06 1.0E-05 2.5E-06 1.2E-06 2.2E-06 3.8E-06 2.1E-05 1.9E-06 3.9E-061.4 多样的 1.4.1.HEKEA_HIF1αPLBL 细胞的保持 所述细胞在完全培养基 (whole medium)( 如下 ) 中， 在烧瓶 T225 中在 37℃在 CO2培养箱中培养。
1.4.2.HEKEA_HIF1αPLBL 细胞的培养基
2.Hep3B 肝细胞分泌 VEGF 和 EPO 的测量
2.1. 目的
HIF 是一种参与细胞适应缺氧的转录因子。由于被 HIF 激活的基因参与了细胞对 缺氧和组织对缺血的适应性反应， 本目的在于鉴定和表征在细胞中使 HIF1α 稳定的化合 物， 以放大或模拟其有益效果。HIF1α 在分析 EPO 基因启动子后鉴定， 其使得该蛋白成为 HIF1α 激活的第一标记之一。此外， VEGF 还在文献中识别为 HIF 激活的主要标记之一。因 此选择测量这两种蛋白用于表征 Hep3B 细胞中的 HIF 激活剂的化合物。
因此， 本目的在于开发一种适用于 96- 孔板的灵敏的筛选测试， 用于直接测量 Hep3B 细胞 ( 来源于人肝癌的细胞 ) 上清液中对可能的 HIF 激活剂响应的 VEGF 和 EPO 的 量。
2.2. 测试原理
所述测试为用于测量 Hep3B 细胞上清液中 VEGF 和 EPO 的 ELISA 测试， 所述细胞经 缺氧处理或经去铁胺处理作为对照或经可能的 HIF 激活剂处理。 所述测试适用于 96- 孔板， 使之具有更大的化合物筛选能力。
2.3. 实验方案
2.3.1 实验计划
1) 在 D0 接种细胞
2) 在常氧下粘附 6 小时
3) 制备和加入产物 (Biomek 2000 和 FX)
4) 在常氧下培养 18 小时
5) 在 D+1 在上清液中测定 EPO 和 VEGF
2.3.2 接种细胞
在黑色、 不透明底的 96- 孔板 ( 参考 Costar 3916) 中以 30000 细胞 / 孔， 在 100μl 培养基 (10％ FCS) 中以 Multidrop 次代培养细胞。
2.3.3 处理细胞
●稀释板 (DL 板 ) 的制备
测试产物以 10-2M 在 100％ DMSO 中制备， 然后在含有 0.1％ FCS(6μl 在 194μl 的 4 MEM 中 ) 的培养基中稀释至 3×10 M。将 200μl 各个化合物放置在 96- 孔板的第 12 列。用
Biomek 2000 制备 3×10-4M 至 3×10-8M 的稀释范围 ( 程序 ： 连续 9 点的范围 )。分别加入 -3 100μl 的 MEM 0.1％ FCS 和去铁胺 5×10 M 至第 3 列的孔 A， B， C， D 和孔 E， F， G， H 作为对 照。
●细胞板中的 DL 板分布
将在前一天接种在 96- 孔板的细胞培养基更换为 90μl 含有 0.1％ FCS 的培养基， 并用 FX 96 从 96- 孔 DL 板中分配 10μl 至细胞板中。
将如此处理的细胞板在培养箱中在 37℃ ( 环境 O2， 6％ CO2) 放置 18 小时。
2.3.4EPO 和 VEGF 的测定
在 96- 孔 板 中 用 可 能 的 HIF 激 活 剂 处 理 的 Hep3B 细 胞 的 上 清 液 (80μl) 用 多 通 道 移 液 管 回 收， 用 于 通 过 ELISA 根 据 制 造 商 的 使 用 说 明 书 (Kit EPO Mesoscale(refK15122B-2)) 同时测定 VEGF 和 EPO。然后用合适的拟合软件计算化合物对 EPO 和 VEGF 的 EC50 值， 其在下表 IV 中给出。
2.4. 多样的
Hep3B 细胞的培养基 ：
3. 结果
化合物对 HIF 的激活活性通过产生 50％最大响应的该化合物的分子浓度给出于 表 IV 中。
表 IV
化合物号 1 9 13 15 16 17 18 19 EC50EPO(M) 2.9E-06 7.0E-07 9.0E-07 2.8E-06 3.5E-06 2.9E-06 5.0E-07 2.4E-06 56 EC50VEGF(M) 3E-06 6.6E-07 1.0E-06 3.0E-06 3.0E-06 2.9E-06 4.0E-07 2.4E-06102333776 A CN 102333790 20 21 24 25 26 28 29 30 32 35 36 59 61
说明书9.0E-07 2.4E-06 5E-07 2.5E-06 1.3E-06 1E-06 2.6E-06 1.8E-06 3.2E-06 1.1E-06 2E-06 3.1E-06 2.8E-0649/51 页1.0E-06 1.4E-06 5E-07 2.4E-06 1E-06 1E-06 2.5E-06 1.5E-06 2.6E-06 1.7E-06 1.6E-06 2.6E-06 2.2E-06根据本发明的化合物因此可用于制备药物， 特别是作为 HIF 转录因子的活化剂的药物。 因此， 根据其另一方面， 本发明的一个主题为包含式 (I) 化合物或该式 (I) 化合物 与药学上可接受的酸形成的加成盐的药物。
本发明还涉及药物组合物， 其包含根据本发明的式 (I) 化合物， 或该化合物的药 学上可接受的盐， 以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
发现这些药物具有治疗用途， 尤其用于在人和动物中治疗 / 预防， 特别是心血管 疾病、 下肢缺血、 心功能不全、 源于缺血的冠心病 ( 例如心绞痛或心肌梗塞 )、 动脉硬化、 源 于缺血的中风、 肺动脉高血压和部分或总体血管闭塞引起的任何病理。
这些药物还具有以下治疗用途 ： 治疗 / 预防青光眼、 肾病或神经变性起源或其它 起源的脑疾病、 和贫血， 或作为促进结瘢的药物或缩短手术后恢复期的药物或治疗四肢无 力症状的药物， 或用于在大型外科干预如颅骨或胸外科手术， 或心脏、 颈动脉或主动脉手术 后自体输血所需的情况下获得血液的药物。
这些化合物尤其在治疗 / 预防贫血中具有治疗用途。
这些化合物也可用于在人和动物中在大型外科干预如颅骨或胸外科手术或心脏、 颈动脉或主动脉手术后自体输血所需的情况下获得血液的目的。
这些化合物潜在地可在人和动物中作为促进结瘢的药物或缩短手术后恢复期的 药物。
这些化合物潜在地可在人和动物中用于治疗四肢无力症状， 其归类于 (ranging up to) 特别在老年人中出现的恶病质。
这些化合物潜在地可在人和动物中用于治疗青光眼、 肾病或神经变性起源或其它 起源的脑疾病。
最后， 本发明所述的化合物潜在地可在人和动物中用于治疗源于缺血的心脏或外 周疾病， 其通过在自体和异种的方法中的再生医学 (regenerative medicine)， 使用非胚胎 干细胞或成肌细胞用于治疗目的， 无论在给药前处理这些细胞或在局部给药这些细胞的同 时处理细胞。
而且， 本发明所述的化合物可单独使用， 或如果必要的话， 与一种或多种用于治疗 高血压、 心功能不全、 糖尿病和贫血的其它活性化合物组合使用。
例如， 可提及根据本发明的化合物与一种或多种化合物的组合， 该一种或多种化 合物选自转化酶抑制剂， 血管紧张素 II 受体拮抗剂， β- 阻断剂， 盐皮质激素受体拮抗剂， 利尿剂， 钙拮抗剂， 抑制素和洋地黄苷衍生物。
根据另一方面， 本发明涉及药物组合物， 其包括作为有效成分的本发明化合物。 这 些药物组合物包含有效量的至少一种本发明化合物， 或所述化合物的药学上可接受的盐， 以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
根据药物形式和所需的给药方式， 从本领域技术人员已知的常用赋形剂中选择所 述赋形剂。
在用于口服、 舌下、 皮下、 肌内、 静脉注射、 局部 (topical)、 局部 (local)、 气管内、 鼻内、 经皮或直肠给药的本发明的药物组合物中， 上述式 (I) 的有效成分， 或其盐， 可以以 单位给药形式， 以与标准药学赋形剂的混合物， 给予人或动物用于预防或治疗上述病症或 疾病。
给药的合适单位形式包括口服剂型， 例如片剂、 软或硬凝胶胶囊、 粉剂、 颗粒剂和 口服溶液或悬浮液， 舌下、 含服、 气管内、 眼内、 鼻内和吸入给药形式， 局部、 经皮、 皮下、 肌内 或静脉注射给药形式， 直肠给药形式和埋植剂。对于局部应用， 本发明化合物可以以霜剂、 凝胶剂、 软膏剂或洗剂使用。
通过实例的方式， 以片剂形式的本发明化合物的单位给药形式可包括以下成分 ：
可以存在特殊情况， 其中更高或更低剂量是合适的 ； 该剂量不偏离本发明的范围。 根据通常实践， 合适各患者的剂量通过医生根据给药方式和所述患者的体重和反应而确 定。
根据另一方面， 本发明还涉及用于治疗上述病理的方法， 其包括向患者给药有效
量的本发明化合物， 或其药学上可接受的盐。59